肝硬化大鼠小肠黏膜形态结构改变与内毒素血症

目的研究药物和胆汁淤积引起的肝硬化大鼠小肠黏膜形态结构改变和血浆内毒素水平。方法分别以硫代乙酰胺(TAA)(n=10)诱导和行胆管结扎术后(BDL)(n=7)的肝硬化大鼠为模型组,另以正常大鼠(n=12)作为正常对照组,分别观察光镜和透射电镜下小肠黏膜的形态,并采用鲎试剂基质显色法测定腹主动脉血浆内毒素含量。结果光镜下观察到模型组肝硬化大鼠小肠肠黏膜绒毛稀疏、萎缩,上皮细胞坏死,黏膜水肿伴有炎性细胞浸润;电镜下观察到模型组大鼠小肠壁超微结构有明显改变,肠黏膜绒毛破坏,减少,变短,倒伏,缺失,肠黏膜紧密间隙增宽,肠黏膜杯状细胞分泌减少,肠黏膜上皮细胞内线粒体和内质网肿胀。正常对照组大鼠的小肠黏膜绒毛形态及超微结构没有明显改变。模型组大鼠的血浆内毒素水平明显高于正常对照组(P<0.01)。结论模型组肝硬化大鼠都存在小肠黏膜结构的改变和内毒素水平的增高,提示肝硬化大鼠小肠黏膜的损伤与肠源性内毒素血症密切相关。     

谷氨酰胺对饥饿大鼠内毒素移位和肠黏膜免疫功能的影响

目的：探讨饥饿后大鼠肠黏膜形态学结构的变化规律,并动态观察GLN肠内补充对饥饿大鼠内毒素移位和肠黏膜免疫功能的影响.方法：采用饥饿大鼠模型,将90只3月龄♂SD大鼠随机分为正常对照组N：(给予正常饮食n =10)、饥饿组A(n=40)、谷氨酰胺组B(n= 40)3个大组,分别于饥饿后3,5,7,9d,取门静脉血测血浆内毒素的变化,在光镜下观察肠组织的组织形态学改变,利用免疫组化技术检测肠黏膜组织中SIgA的表达和CD4~ 、CD8~ T细胞的数量.结果：A组大鼠饥饿后,3d可见小肠黏膜明显萎缩,绒毛变短、变稀.部分黏膜上皮细胞变性、坏死、脱落,绒毛横径增宽,高度缩短；至饥饿后9d上述变化更加明显.B组在饥饿后3d较同时间点A组肠黏膜损伤有明显的改善,小肠的黏膜厚度、绒毛数量、高度增加,至饥饿后5d基本恢复至N组水平.随着饥饿时间的延长小肠黏膜再次出现黏膜萎缩、绒毛变短、变稀,黏膜上皮细胞变性、坏死、脱落.但明显轻于同时间点的A组.饥饿后各时间点血浆内毒素与N组相比明显升高,A,B组均在饥饿后7d达到高峰,B组在饥饿后3,5,7,9d较A组降低且有非常显著性差异(322.4±65.1,389.4±32.6,464.4±76.6,413.7±67.2EU/L vs 527.1±74.9,546.3±65.7,623.9±85.9,587.5±140.8EU/L,均P＜0.01).与N组比较,A组大鼠肠黏膜SIgA及CD4~ ,CD8~ T细胞数量明显减少,差异有显著性性(P＜0.05,P＜0.01).补充GLN后,SIgA及CD4~ ,CD8~ T细胞数量明显升高,B组与A组比较差异非常显著(P＜0.01).结论：大鼠饥饿后早期确有肠黏膜组织结构受损,发生内毒素移位,同时伴有肠黏膜免疫学屏障受损.早期给予GLN可减轻肠黏膜的受损,明显降低内毒素移位,增强肠黏膜的免疫功能发挥肠黏膜的保护作用.     

血管活性肠肽对重症急性胰腺炎肠屏障保护作用的实验研究

目的 探讨血管活性肠肽(VIP)对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肠屏障的保护作用及其机制.方法 54只SD大鼠随机分成3组:假手术组(SO)、SAP组和VIP干预组,采用微泵逆行胰胆管注射4%牛磺胆酸钠制备SAP动物模型,SAP制模后5 min腹腔注射VIP 5×10-9nmol作为VIP干预组.各组在制模后1 h、6 h、12 h检测血浆内毒素水平,逆转录(RT)-PCR法及免疫组化法检测肠黏膜Toll样受体4(TLR4)表达,并对肠黏膜组织行电镜检查.结果 与SO组相比,SAP组血浆内毒素和肠黏膜TLR4表达在制模1 h即开始增高,并随制模时间的延长而进行性增高.两者具有明显的相关性.电镜检查肠黏膜有明显的病理损伤.VIP干预组与SAP组同时点相比,血浆内毒素和肠黏膜TLR4表达降低,病理损伤减轻,制模后6 h尤为明显.SO组肠黏膜未见TLR4表达.结论 VIP能有效保护SAP肠屏障功能,其机制可能与下调肠黏膜TLR4的表达有关.     

冷束缚应激状态下大鼠内源性糖皮质激素与肠屏障功能损害的关系

目的观察冷束缚应激(cold restrain stress,CRS)状态下大鼠血清皮质醇浓度及肠屏障功能的改变情况,以及糖皮质激素受体阻断剂(RU38486)对CRS状态下大鼠肠屏障功能的影响。方法60只成年雄性SD大鼠,随机分为正常对照组、应激组(S组)和糖皮质激素受体阻断剂组(R组)。S组和R组按应激后检测时间又分为S2 h、S4 h、S8 h、S16 h、S24 h组和R2 h、R4 h、R8 h、R16 h、R24 h组。应激动物模型参照Brodie[1]的方法改良制作。动态观察各组大鼠的血皮质醇浓度变化及肠黏膜屏障功能的改变情况。结果应激组各时段大鼠血清皮质醇浓度、D-乳酸浓度、血浆内毒素浓度及肠黏膜损伤指数均高于正常组,而糖皮质激素受体阻断后血清皮质醇浓度、D-乳酸浓度、血浆内毒素浓度及肠黏膜损伤指数均较应激组相应各时段明显增高。结论应激可以造成肠黏膜上皮的损伤,导致肠黏膜屏障通透性增高,糖皮质激素受体阻断剂则进一步加重肠屏障功能的损害,表明应激产生的血清皮质醇对肠屏障功能起着保护性的作用。     

糖皮质激素受体阻断剂对冷束缚应激状态下大鼠肠屏障功能改变的影响及相关研究

目的观察糖皮质激素受体阻断剂(RU38486)对冷束缚应激状态(cold restrain stress,CRS)下大鼠肠屏障功能改变的影响;探讨糖皮质激素受体对CRS状态下大鼠肠屏障功能的影响机制。方法将60只成年雄性SD大鼠,随机分为正常对照组、应激组(S组)和糖皮质激素受体阻断剂组(R组)。S组和R组按应激后检测时间又分为S2h、S4h、S8h、S16h、S24h组和R2h、R4h、R8h、R16h、R24h组。应激动物模型参照Brodie[1]的方法改良制作。动态观察各组大鼠肠黏膜屏障功能的改变情况。结果应激组各时段大鼠血清D-乳酸浓度、血浆内毒素浓度及肠黏膜损伤指数均高于正常组,而糖皮质受体阻断后血清D-乳酸浓度、血浆内毒素浓度及肠黏膜损伤指数均较应激组相应各时段明显增高。结论糖皮质激素受体阻断剂可加重应激引起的肠黏膜上皮的损伤,导致肠黏膜屏障通透性增高,造成肠屏障功能的损害。     

乌司他丁对大鼠重症急性胰腺炎肠黏膜屏障功能的影响

目的探讨乌司他丁(UTI)对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肠黏膜屏障的影响及其作用机制。方法 SD大鼠60只分成对照组、假手术(SO)组、SAP组和UTI组。制模后每隔8 h进行腹腔内注射UTI(浓度1.5万IU/kg)作为UTI组。各治疗组检测制模后8、24、72 h血浆内毒素水平,通过RT-PCR法和免疫组化法对肠黏膜Toll样受体(TLR)4表达进行检测,并在电镜下观察肠黏膜组织。结果对照组肠黏膜未见TLR4表达。与对照组相比,SAP组在制模后8 h血浆内毒素和肠黏膜TLR4表达即出现升高,并随时间的延长而继续进行性增高。血浆内毒素与肠黏膜TLR4二者明显相关。UTI组同时点内毒素、TLR4低于SAP组,电镜下检查发现病理损伤也同时减轻,24 h时最为明显。结论 UTI能有效保护SAP发生时的肠屏障功能,其保护机制可能与肠黏膜TLR4的表达下调有关。     

谷氨酰胺对急性胰腺炎大鼠肠黏膜胰岛素样生长因子表达及肠黏膜屏障的影响

目的 观察急性坏死性胰腺炎（ANP）时肠黏膜屏障的损伤情况,以及谷氨酰胺（Gln）和胰岛素样生长因子（IGF）对肠黏膜屏障的保护作用.方法 成功诱导ANP模型雄性Wistar大鼠48只,随机分为ANP组和Gln组各24只,另取假手术组24只作为对照.Gln组每日以Gln灌胃2次,剂量为1.5g/（kg·d）;ANP组和假手术组以同等量的生理盐水灌胃.分别在模型制作术后3、6、24、48 h时间点杀死大鼠,取胰头和末端回肠3～5 cm放入液氮中保存.观察胰腺和肠黏膜组织形态学改变,测定肠黏膜中IGF-1的表达、血清中二氨氧化酶（DAO）活性和内毒素浓度.结果 ANP组大鼠肠黏膜屏障功能严重破坏,肠道通透性明显增加,肠黏膜损伤评分明显增加;血清内毒素浓度、DAO活性明显升高（P均＜0.01）.与ANP组比较,Gln组动物肠黏膜损伤减轻,损伤评分有所下降,血清内毒素水平、DAO活性下降（P均＜0.05）.ANP组IGF-1表达水平明显下降（P ＜0.05）;Gln组明显升高（P＜0.05）,同时肠黏膜屏障功能得到一定的改善.结论 ANP时肠黏膜屏障结构和功能存在严重破坏;Gln能一定程度上减轻肠黏膜屏障损伤并能维护其功能;IGF-1参与Gln对ANP肠黏膜屏障损伤的修复和维持.     

褪黑素对梗阻性黄疸大鼠小肠黏膜屏障的保护作用

将36只大鼠随机分为假手术对照组(SO)、梗阻性黄疸组(OJ)及褪黑素治疗组(MT),每组12只。观察各组血浆内毒素(LPS)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、小肠组织中细胞间黏附分子(ICAM-1)的表达及小肠组织形态学改变,并测量肠绒毛高度和黏膜厚度。结果为OJ组血浆LPS、TNF-α、IL-6明显增高,小肠组织ICAM-1的表达明显增强,肠绒毛高度、黏膜厚度明显降低,与SO组有显著性差异(P<0.01);MT组与OJ组比较血浆LPS、TNF-α、IL-6降低(P<0.01),小肠组织ICAM-1的表达明显减弱(P<0.01),肠绒毛高度、黏膜厚度增高,肠组织结构损害减轻(P<0.01)。提示褪黑素通过减少肠道细菌内毒素的易位,降低血浆中细胞因子水平,抑制梗阻性黄疸后肠组织ICAM-1的表达,保护小肠黏膜屏障。     

鲜生地汁对大鼠肠缺血再灌注损伤的防护作用

目的:探讨鲜生地汁对大鼠肠缺血再灌注损伤(I/R)的防护作用及其机制。方法:采用肠系膜上动脉(SMA)夹闭方法制作I/R模型。实验大鼠随机分为正常组、I/R模型组、I/R 鲜生地汁大剂量组、I/R 鲜生地汁小剂量组、I/R 乳果糖组。观察肠系膜上动脉夹闭0.5小时再灌注24小时、48小时、72小时后肠黏膜损伤程度,测定血浆内毒素水平。结果:各时点I/R 鲜生地汁大剂量、I/R 小剂量组及I/R 乳果糖组肠黏膜损伤程度、血浆内毒素水平均低于I/R模型组(P<0.05)。结论:鲜生地汁对肠缺血再灌注损伤大鼠肠黏膜具有保护作用。     

丁酸钠在大鼠肠缺血/再灌注小肠损伤中的作用

目的:研究丁酸钠(sodium butyrate,BTR)对大鼠肠缺血/再灌注(ischemia-reperfusion,I/R)后小肠损伤的保护作用.方法:♂SD大鼠50只,随机分为假手术组(sham组),肠I/R 1 h组和4 h组(I/R1组和I/R4组),BTR干预1 h组和4 h组(BTR1组和BTR4组),每组10只.丁酸钠组和肠I/R组夹闭大鼠肠系膜上动脉30 min,恢复灌流后观察4 h,制备肠I/R模型;假手术组仅开腹不夹闭动脉.BTR组于术后立即行皮下注射BTR(400mg/kg),假手术组和肠I/R组皮下注射等量生理盐水.于I/R 1 h和4 h后,测定小肠黏膜血流量,取血浆检测血浆肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平和二胺氧化酶(diamine oxidase,DAO)活性,取小肠组织检测髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)、脂质过氧化物丙二醛(malondialdehyde,M D A)活性和血管内皮生长因子(v a s c u l a r endothelial growth factor,VEGF)含量,检测小肠微血管通透性和含水率,HE染色观察小肠病理变化.结果:肠I/R致小肠损伤组血浆T N F-α、D A O及小肠组织含水率、微血管通透性、M D A、M P O、V E G F明显高于假手术组(P0.05),小肠黏膜血流量明显降低(P0.05),小肠损伤明显.与对应时间点I/R组相比,B T R治疗后血浆T N F-α、D A O及小肠组织含水率、微血管通透性、MDA、MPO、VEGF明显降低(P0.05),小肠黏膜血流量升高(P0.05),小肠损伤减轻.结论:BTR减轻大鼠肠I/R后小肠微血管通透性、组织水肿,增高小肠黏膜血流量,具有一定的小肠保护作用.其保护机制与清除氧自由基,减轻炎症反应和降低小肠VEGF表达有关.     

TGF-β1对大鼠肠黏膜缺血再灌注损伤的保护作用

选择30只SD大鼠,随机分成三组,假手术组(A组)、对照组(B组)和实验组(C组)各10只.B组夹闭肠系膜上动脉(SMA)60 min,再灌注120 min,缺血前10 min经SMA注入生理盐水0.5 ml.C组以TGF-β1代替生理盐水.A组单纯分离肠SMA,不做阻断.采用HE染色及chiu评分法判断小肠黏膜形态学损伤程度,检测门静脉血浆中D-乳酸水平及大肠杆菌易位情况.发现B组与A组相比,肠黏膜组织损伤严重,chiu评分显著升高,门静脉血D-乳酸水平和大肠杆菌易位率显著升高;C组与B组相比,肠黏膜组织损伤较轻,chiu评分显著降低,门静脉血D-乳酸水平和大肠杆菌易位率显著降低;门静脉血浆D-乳酸水平与肠黏膜损伤病理评分有明显的正相关性.认为肠缺血再灌注可引起肠黏膜屏障形态和功能的损伤,使细菌及其代谢产物易位增加;TGF-β1可以显著减轻损伤程度;血D-乳酸水平可以间接反映肠黏膜屏障的通透性,进而评价肠黏膜屏障的损伤程度.     

鲜生地对肝损伤大鼠肠道生物屏障及机械屏障功能的影响

目的 探讨鲜生地对肝损伤大鼠肠道生物屏障及机械屏障功能的影响.方法 取SD大鼠64只,随机均分成假手术组、肝损伤组、肝损伤+鲜生地治疗组(鲜生地组)和肝损伤+乳果糖治疗组(乳果糖组).前两组以生理盐水灌胃,后两组分别以鲜生地和乳果糖灌胃.建立肝缺血再灌注后24、48 h,各组分别行腹腔切开,收集结肠内粪便标本检测粪便细菌球/杆比例、行菌落培养,采集门静脉血检测血浆内毒素(ET)及谷丙转氨酶(ALT),取肠黏膜组织行病理学检查、进行肠黏膜损伤评分.结果 与肝损伤组比较,鲜生地组和乳果糖组粪便细菌球/杆比例失调降低,益生菌增殖明显,大肠杆菌减少,肠黏膜损伤评分降低,血浆ET、ALT明显降低(P＜0.05或＜0.01).结论 鲜生地具有调节肠道菌群、增殖益生菌、保护肠黏膜结构完整性的作用,可降低血浆ET,减少肝细胞损伤.     

血管活性肠肽对急性坏死性胰腺炎大鼠肠黏膜屏障功能的影响

目的 探讨血管活性肠肽(VIP)对ANP大鼠肠黏膜损伤的影响.方法 54只SD大鼠随机分成假手术组(SO)、ANP组和VIP组,每组分制模后1 h、6 h、12 h 3个时间点,各6只.采用4%牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射制备ANP模型,VIP组在制模后5 min腹腔内注射VIP 5 nmol.ELISA法检测血浆及肠组织匀浆VIP水平;MB-80微生物快速动态检测系统检测血浆内毒素水平;RT-PCR法检测肠黏膜组织TNF-α、IL-6、IL-10 mRNA表达;肠黏膜行病理学检查.结果 ANP组肠黏膜结构损害明显,VIP组病变减轻.ANP组血浆及肠黏膜VIP水平在制模后6 h分别为(49.582 ±3.735)pg/ml和(87.731 ±4.601)pg/g pro,均显著低于SO组(P＜0.05),制模后12 h分别为(65.192±5.785)pg/ml和(110.978 ±6.420)pg/g pro,高于SO组;ANP组制模后6 h血浆内毒素水平、肠黏膜TNF-α、IL-6、IL-10mRNA表达量分别为(29.570±5.127)pg/ml、0.861±0.081、1.150±0.187和0.786±0.102,均显著高于SO组(P＜0.05).VIP组制模后6 h血浆内毒素水平、肠黏膜TNF-α、IL-6 mRNA表达分别为(20.486 ±2.811)pg/ml、0.707 ±0.095和0.889 ±0.136,均较ANP组下降(P＜0.05);IL-10 mRNA表达为0.992 ±0.126,较ANP组增高(P＜0.05).结论 VIP对ANP大鼠肠黏膜损伤具有明显的保护作用.     

严重创伤后肠屏障功能损伤及谷氨酰胺的保护

目的探讨严重创伤后肠屏障功能损伤机制及谷氨酰胺(GLN)对肠屏障功能的保护.方法以烧伤、枪伤和缺血再灌流损伤作严重创伤的动物模型,并结合临床病例测定血和组织二胺氧化酶(DAO)活性以及小肠屏障功能的相关指标血乳酸、D-乳酸、肠PHi,LPS,TNF和尿乳果糖/甘露醇(L/M)的变化,以早期口服GLN对肠屏障功能保护.结果严重创伤后血浆DAO活性从损伤早期即显著升高,组织DAO活性降低,血和小肠组织DAO的变化呈负相关(r=-0.937,P＜0.001);血浆DAO的变化与血浆TNF,LPS,D-乳酸、乳酸、PHi和L/M的变化呈高度相关(r=0.817,0.842,0.887,0.872,-0.553和0.951,P＜0.01～0.05);小肠组织病理变化与功能指标变化一致;早期口服GLN可不同程度地改善了肠屏障功能指标.结论严重创伤后肠屏障功能早期即有受损伤;血浆DAO活性的变化是反映小肠机械损伤的敏感指标;GLN对创伤后小肠屏障功能损伤有保护性作用.     

复方血竭对烫伤大鼠肠黏膜屏障的实验研究

[目的]探讨复方血竭对烫伤大鼠肠黏膜屏障的影响。[方法]雄性Wistar大鼠70只,随机分为无烫伤组10只,烫伤组及烫伤后使用复方血竭组(血竭组)各30只。用沸水制成大鼠背部35%Ⅱ度烫伤,血竭组于烫伤后立即、4 h、8 h用复方血竭20 ml/kg灌胃,烫伤组和无烫伤组口服等量0.85%氯化钠。烫伤组、血竭组分别于烫伤后8、12、24 h处死动物,无烫伤组8h全部处死。大鼠FITC-D灌胃测定肠黏膜通透性,穿刺腹主动脉测血浆白细胞介素(IL)-1β、IL-4、IL-6、IL-10的水平。[结果]烫伤后大鼠门静脉FITC-D标记的葡聚糖及血浆IL-1β、IL-6与无烫伤组相比均显著升高(P0.01)。使用复方血竭后,门静脉FITC-D标记的葡聚糖及血浆IL-1β、IL-6均明显下降,血竭组IL-1β、IL-6水平较烫伤组明显降低,IL-4、IL-10水平明显升高(P0.05或P0.01)。[结论]烫伤可导致大鼠肠黏膜应激损伤,肠黏膜通透性增加,血浆IL-1β、IL-6升高;复方血竭可以保护应激状态下的肠黏膜屏障,抑制炎症因子IL-1β、IL-6的产生,上调IL-4和IL-10等抑炎性因子,纠正异常的免疫功能,降低免疫细胞对炎症的反应性,从而有利于炎症的消除及组织的修复,减轻全身炎症反应,保护脏器功能。     

姜黄素对梗阻性黄疸大鼠肠黏膜屏障的保护作用

目的:探讨姜黄素对梗阻性黄疸(obstructive jaundice,OJ)大鼠小肠黏膜屏障的保护作用.方法:将♂SD大鼠随机分为3组:假手术对照(sham operation,SO)组、OJ组、姜黄素治疗(curcumin treatment,Cur)组.光镜下观察小肠组织形态学改变,测量肠绒毛高度和黏膜厚度,采用鲎试剂法检测血浆内毒素水平,采用放射免疫法检测血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,T N F-α)、白介素-6(interleukin-6,I L-6)水平,应用分光光度法测定肠组织二胺氧化酶(diamine oxidase,DAO)活性,采用免疫组织化学方法检测小肠组织中核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)和细胞黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)的表达.结果:OJ组肠黏膜绒毛排列紊乱,绒毛稀疏、断裂,肠黏膜萎缩,绒毛水肿,部分上皮细胞坏死脱落,并可见炎性细胞浸润;Cur组肠黏膜病变较OJ组明显减轻,肠黏膜绒毛排列整齐,肠黏膜增厚,绒毛轻度水肿,未见明显上皮细胞脱落,炎性细胞浸润减少;与S O组比较,O J组内毒素、T N F-α、I L-6明显增高(P0.01),DAO活性、肠绒毛高度及黏膜厚度明显降低(P0.01);Cur组较OJ组内毒素、TNF-α、IL-6明显下降(P0.05或0.01),D A O活性、肠绒毛高度及黏膜厚度明显升高(P0.05).OJ组回肠黏膜NF-κB及ICAM-1表达明显高于SO组(P0.01);Cur组NF-κB及ICAM-1表达明显低于OJ组(P0.05或0.01).结论:姜黄素通过抑制NF-κB、TNF-α、IL-6和ICAM-1等炎症介质,对小肠黏膜屏障具有保护作用.     

大黄清毒汤灌肠改善肝硬化患者肠黏膜屏障功能的研究

[目的]:观察大黄清毒汤灌肠治疗肝硬化合并肠黏膜屏障功能障碍患者临床疗效,探讨大黄清毒汤灌肠对肝硬化患者肠黏膜屏障功能的影响。[方法]将符合研究要求的患者60例按随机数字表分为治疗组30例和对照组30例。观察治疗前后尿乳果糖和甘露醇的比率、血浆内毒素含量、血浆二胺氧化酶(DAO)水平。[结果]治疗后与治疗前相比较,2组LAC/MAN比值和血浆内毒素水平下降,差异有统计学意义(P0.05);治疗组较对照组下降更明显(P0.01)。治疗组血浆二胺氧化酶(DAO)水平无明显下降。[结论]大黄清毒汤灌肠可改善肝硬化患者的肠黏膜屏障功能,并在一定程度上改善肝功能。     

瑞巴派特对大鼠非甾体类抗炎药相关性小肠损伤的保护作用及机制

目的:探讨瑞巴派特对大鼠非甾体类抗炎药(non-steroid anti-inflammatory drugs,NSAIDs)相关性小肠损伤的保护作用及可能的机制.方法:将30只健康♂SD大鼠随机分为阴性对照组、双氯芬酸损伤组、瑞巴派特保护组,每组10只.通过应用双氯芬酸7.5 mg/(kg·d)灌胃,1次/d、连续4 d的方法制作大鼠NSAIDs相关性小肠损伤模型.瑞巴派特保护组在每次造模前1 h用100 mg/(kg·d)瑞巴派特对大鼠进行灌胃预处理,连续4 d.阴性对照组应用等量的生理盐水灌胃,实验第4天,处死所有大鼠,对其小肠损伤情况进行大体及病理观察并评分,采用免疫组织化学方法检测小肠黏膜中Occludin蛋白的表达和分布,采用Western blot方法检测小肠组织中Occludin蛋白、ERK、p38和磷酸化ERK(p-ERK)、磷酸化p38(p-p38)蛋白表达水平.结果:损伤组大鼠小肠大体和病理损伤评分均高于对照组(P0.05),瑞巴派特组大鼠小肠大体和病理损伤评分均低于损伤组(P0.05);Occludin蛋白在损伤组中表达水平较对照组明显降低(P0.05),而在瑞巴派特处理组中的表达水平较损伤组增高(P0.05);与对照组相比,损伤组中p-ERK蛋白和p-p38表达水平增高(P0.05),而瑞巴派特处理中的表达水平较损伤组降低(P0.05).结论:瑞巴派特对大鼠NSAIDs相关性小肠损伤有一定的保护作用,其机制可能通过抑制丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPKs)信号通路中ERK和p38蛋白的磷酸化,上调小肠黏膜中紧密连接Occludin蛋白表达,从而改善小肠黏膜屏障功能.     

谷氨酰胺对非酒精性脂肪肝炎大鼠肠黏膜屏障的保护作用

目的 探讨谷氨酰胺对非酒精性脂肪肝炎肠黏膜屏障功能的保护作用.方法 32只SD大鼠随机分为正常对照组8只,给予普通饮食喂养;高脂饮食组24只,给予高脂饲料喂养,于8周末从高脂饮食组随机抽取8只大鼠处死作为单纯性脂肪肝组,剩余大鼠随机分为谷氨酰胺组、NASH组,谷氨酰胺治疗组在8周末加用谷氨酰胺灌胃.12周末处死所有大鼠,测定大鼠门静脉血浆中内毒素、腹主动脉血浆中D-木糖以及肠粘液中sXgA的水平,测定小肠组织匀浆中SOD的活性和MDA的含量,并测定大鼠血清中TC、TC、ALT、AST,HE染色观察肝脏病理改变.结果 12周模型组大鼠血清ALT、AST明显升高,肝脏病理表现为脂肪性肝炎,谷氨酰胺治疗组大鼠血清ALT、AST明显下降(P＜0.05),肝组织炎症活动计分也明显下降(3.25±1.49 vs.4.38±1.06,P＜0.05),但仍显著高于8周单纯性脂肪肝组大鼠水平(3.25±1.49 vs.2.00±0.76,P＜0.05).谷氨酰胺治疗组肝细胞脂肪变性程度无显著变化.谷氨酰胺治疗组大鼠门静脉血浆中内毒素、腹主动脉血浆中D-木糖、小肠组织匀浆中MDA含量与模型组相比明显降低(P＜0.05).肠黏液中slgA的水平和小肠组织匀浆中SOD与模型组相比明显升高(P＜0.05).结论 谷氨酰胺可以降低高脂饮食诱发的非酒精性脂肪性肝炎大鼠血清中转氨酶水平和肝组织炎症损伤,降低门静脉血中内毒素水平,但不能完全阻止炎症的进展,提示肠黏膜屏障功能的改变是非酒精性脂肪性肝炎发病的重要机制之一.     

实验性肝损伤大鼠肠道屏障功能障碍研究

目的 观察不同程度肝损伤大鼠血浆及肠道组织内毒素、D-乳酸、二胺氧化酶的动态变化,探讨肝损伤时肠道机械屏障功能的损伤情况.方法 15只大鼠作为正常对照组(A组),15只大鼠作为急性肝损伤组(B组),25只大鼠作为急性肝功能衰竭组(C组),采用分光光度法测定血浆内毒素、D-乳酸、二胺氧化酶,回肠组织内毒素及二胺氧化酶水平的动态变化,HE染色及电镜观察肝组织细胞形态和亚细胞的结构变化.组间比较采用单因素方差分析.结果 B、C组大鼠血浆D-乳酸活性均明显高于A组,分别为(4.32±1.13)mg/L和(11.62±5.44)mg/L对比(0.77±0.25)mg/L,P＜0.05;血浆二胺氧化酶活性先升高后降低,但均明显高于A组,分别为(0.81±0.26)U/ml和(0.62±0.22)U/ml对比(0.47±0.11)U/ml,P＜0.05;回肠二胺氧化酶活性逐渐降低,B、C两组与A组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);B组血浆及肠组织内毒素活性与A组相比差异不明显(P＞0.05);c组则明显高于A、B两组(P＜0.05).HE染色发现C组存在大片肝细胞坏死,回肠黏膜明显萎缩,部分绒毛断裂、脱落或相互融合,上皮细胞变性、坏死、脱落.电镜观察可见肠黏膜微绒毛稀疏脱落,细胞内线粒体肿胀.结论 D-乳酸和二胺氧化酶在肝损伤早期即可以明显升高,是检测肠黏膜屏障功能的敏感指标,内毒素血症是肝损伤加重的重要因素.