L-精氨酸对哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖的影响

目的 观察L-精氨酸（L-Arg）对哮喘气道重构大鼠气道平滑肌细胞（ASMC）的细胞周期分布及细胞周期调节蛋白（CCRP）表达水平的影响，探讨L-Arg体内干预哮喘大鼠ASMC增殖的可能作用机制。方法实验分成对照组、哮喘组、L-Arg组，建立大鼠哮喘气道重构模型，检测血清NO2^-／NO3^-含量、肺内支气管内管壁和平滑肌层厚度及ASMC核数、ASMC的细胞周期分布以及ASMC内细胞周期素E（cyclin E）、cyclinA、cyclinB、蛋白27^kip1（P27^kip1）的表达。结果 哮喘组大鼠支气管内管壁、平滑肌层的厚度和ASMC数目显著大于对照组（P〈0．05）；L-Arg组大鼠支气管内管壁的厚度、平滑肌层的厚度和ASMC数目显著小于哮喘组（P〈0．05）。哮喘组血清一氧化氮（nitricoxide，NO）水平显著低于对照组（P〈0．05）；L-Arg组血清NO水平显著高于哮喘组（P〈0．01）。哮喘组G0／G1期ASMC比例及P27^kip1表达水平显著低于对照组（P〈0．01），G2／M＋S期ASMC比例及cyclinE、cyclinA和cyclinB表达水平显著高于对照组（P〈0．01）；L-Arg组G0／G1期ASMC比例及P27^kip1表达水平显著高于哮喘组（P〈0．05），G2／M＋S期ASMC比例及cyclinE和cyclinA表达水平显著低于哮喘组（P〈0．05）。结论 L-Arg通过调控CCRP的表达水平阻滞细胞从G1期进入S期而抑制哮喘ASMC的增殖。     

支气管哮喘患者T淋巴细胞的细胞周期分布及周期调节蛋白表达的意义

目的通过检测T淋巴细胞的细胞周期分布及其细胞周期调节蛋白(CCRP)的表达,探讨发作期支气管哮喘(简称哮喘)患者T淋巴细胞过度活化、增殖的调控机制.方法采用碘化丙啶DNA染色法应用流式细胞仪分析30例发作期哮喘患者(哮喘组)及20名正常人(正常组)外周血T淋巴细胞的细胞周期分布;采用间接免疫荧光法,应用流式细胞仪同步测定相应T淋巴细胞内CCRP、依赖激酶抑制蛋白(P27kipl)、细胞周期蛋白E(cyclin E)、cyclin A、cyclin B的表达水平.比较哮喘患者和正常人上述指标的差异.结果哮喘组S期、S+G2/M期的T淋巴细胞百分率分别为(18±9)%和(25±10)%,对照组分别为(5±4)%、(11±6)%, 两组比较差异有显著性(P均<0.01);哮喘组G0/G1期的T淋巴细胞百分率为(76±10)%,对照组为(90±6)%,两组比较差异有显著性(P<0.01).哮喘组T淋巴细胞内P27kipl的表达水平为 (4.0±2.4)%,对照组为(6.7±4.8)%,两组比较差异有显著性(P<0.05);哮喘组cyclin E、cyclin A、cyclin B的表达水平分别为(25±24)%、(9±7)%、(6.4±5.9)%,对照组分别为(6±5)%、(4±4)%、(3.4±1.6)%,两组比较差异均有显著性(P均<0.01).结论 T淋巴细胞内CCRP异常表达与发作期哮喘患者T淋巴细胞过度活化、增殖有关,将CCRP作为调控靶点,可望成为治疗哮喘的新途径.     

同型半胱氨酸促进血管平滑肌细胞增殖的机制及辛伐他汀的干预作用

目的:探讨同型半胱氨酸促进大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的机制及辛伐他汀的干预作用。方法:贴壁培养的大鼠原代VSMC随机分为3组。(1)对照组:用含10%胎牛血清的DMEM培养基(完全培养基);(2)同型半胱氨酸组:在完全培养基中加入同型半胱氨酸(0.05 mmol/L);(3)辛伐他汀组:在完全培养基中加入同型半胱氨酸(0.05 mmol/L)和辛伐他汀(10μmol/L)。培养24 h后,光学显微镜下观察各组细胞的形态;采用半定量PCR法检测c-myc、P27kip1的mRNA水平;用Western blot检测细胞周期蛋白(cyclin)D1、cyclin E、cyclin A和核增殖抗原(PCNA)的蛋白表达水平。结果:与对照组相比,同型半胱氨酸组c-myc mRNA水平上调,P27kip1 mRNA水平下调,下游cyclin D1、cyclin E、cyclin A和PCNA蛋白表达增加。与同型半胱氨酸组相比,辛伐他汀组上述检测指标均得到逆转。结论:同型半胱氨酸可促进大鼠VSMC c-myc、cyclin D1、cyclin E、cyclin A等增殖相关基因的表达,抑制P27kip1表达。辛伐他汀可逆转上述效应。     

支气管哮喘大鼠气道重塑中气道平滑肌细胞凋亡及地塞米松的干预作用

目的 观察支气管哮喘(简称哮喘)大鼠气道重塑中气道平滑肌细胞(airway smoothmuscle cells,ASMC)凋亡及地塞米松对ASMC凋亡的影响.方法 将清洁级雄性SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组、哮喘组和地塞米松干预组,每组12只.以卵蛋白致敏和激发的方法制备大鼠慢性哮喘模型.用脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT酶)介导的dUTP切口末端标记法(TUNEL法)检测ASMC凋亡并计算凋亡指数.用免疫组织化学和原位杂交法分别检测气道平滑肌Bcl-2、Bax蛋白及其mRNA的表达情况.经SPSS 11.5软件进行统计学分析,实验数据用x±s表示.多组间比较采用方差分析,多组样本均数两两比较,两变量的相关程度采用直线相关分析.结果 (1)对照组、哮喘组和干预组大鼠ASMC的凋亡指数分别为:0.201±0.022、0.030±0.016和0.118±0.043;(2)对照组、哮喘组和干预组大鼠气道平滑肌层Bcl-2蛋白表达的吸光度值分别为0.060±0.012、0.112±0.028和0.080±0.010,Bcl-2 mRNA表达的吸光度值分别为0.065±0.019、0.157±0.019和0.099±0.029;(3)对照组、哮喘组和干预组大鼠气道平滑肌层Bax蛋白表达的吸光度值为0.120±0.020、0.062±0.012和0.093±0.010,Bax mRNA表达的吸光度值分别为0.155±0.025、0.074±0.019和0.118±0.031;(4)相关分析结果显示,ASMC的凋亡指数与气道平滑肌厚度以及Bcl-2蛋白的相对含量呈显著负相关(r值分别为-0.860、-0.783,P<0.01);ASMC的凋亡指数与气道平滑肌Bax蛋白相对含量呈正相关(r=0.837,P<0.01).结论 ASMC凋亡的减少可能参与了哮喘气道重塑过程;地塞米松可以增加促凋亡蛋白Box的表达,同时减少抑凋亡蛋白Bcl-2的表达,从而增加ASMC的凋亡.     

钙调神经磷酸酶在支气管哮喘大鼠气道重塑中的作用

目的 通过测定支气管哮喘(简称哮喘)大鼠肺组织中钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)蛋白、Mrna的表达及CaN的活性,探讨CaN在哮喘大鼠气道重塑中的作用.方法 将20只Wistar大鼠随机分为哮喘组和对照组,每组10只.鸡卵清白蛋白溶液致敏及激发复制大鼠哮喘模型.HE染色观察气道炎症情况;图像分析观察支气管管壁厚度;实时定量(Real-time)PCR测定肺组织中CaN Mrna水平;免疫组织化学法检测肺组织中CaN蛋白的相对表达量;生物化学法检测大鼠肺组织CaN活性;流式细胞仪测定外周血单个核细胞细胞周期时相分布;ELISA法测定血浆中白介素4(IL-4)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量.结果 ①哮喘组大鼠支气管管壁厚度较对照组明显增加(P＜0.01);②哮喘组大鼠肺组织中CaNmRNA水平的相对表达量、CaN蛋白的相对表达量及CaN的活性均较对照组高(分别P＜0.05、P＜0.01和P＜0.01);③哮喘组大鼠血浆中IL-4和TNF-α含量较对照组明显增加(分别P＜0.01,P＜0.05);④与对照组相比,哮喘组大鼠外周血单个核细胞处于G0/G1期的百分率降低,处于S期、S+G2/M期百分率增加(P值均＜0.01);⑤大鼠肺组织CaN活性分别与大鼠支气管管壁厚度呈正相关(P＜0.01),与处于S期、S+G2/M期的外周血单个核细胞百分率呈正相关(P值均＜0.05),与血浆中IL-4的含量呈正相关(P＜0.05);血浆中IL-4含量与TNF-α含量及大鼠支气管管壁厚度亦呈正相关(P值均＜0.05).结论 哮喘大鼠肺组织CaN的活性增加,其可能通过促进外周血单个核细胞的分裂、增殖及活化产生IL-4和TNF-α而参与哮喘气道重塑的形成.     

肺表面活性物质对哮喘T细胞亚群细胞周期及其调节蛋白的影响

目的观察肺表面活性物质（PS）对发作期哮喘患者T细胞亚群细胞周期及其调节蛋白的影响,揭示PS对CD4＋、CD8＋T细胞增殖周期的具体作用机制及其在哮喘治疗中的意义。方法利用细胞培养技术,通过体外PS干预,流式细胞仪测定经PS干预和未经PS干预的CD4＋、CD8＋T细胞的细胞周期分布和CD4＋、CD8＋T细胞内细胞周期调节蛋白p27kip1、cyclinE、cyclinA、cyclinB的表达水平。结果哮喘患者CD4＋、CD8＋T细胞分别与PS体外共同培养后,加PS组的S期、G2/M期的CD4＋T比例显著低于对照组（P〈0.01）;G0/G1期的CD4＋T细胞比例显著高于对照组（P〈0.01）。加PS组的S期CD8＋T比例显著低于对照组（P〈0.01）;G2期的CD8＋T细胞比例略低于对照组,但差异无统计学意义（P〉0.05）;G0/G1期的CD8＋T细胞比例高于对照组（P〈0.05）。CD4＋T细胞内p27kip1的表达水平高于对照组（P〈0.05）;CD4＋T细胞内cyclinE表达水平显著低于对照组（P〈0.01）;CD4＋T细胞内cyclinA、cyclinB的表达水平低于对照组（P〈0.05）。CD8＋T细胞内p27kip1的表达水平高于对照组（P〈0.05）;CD8＋T细胞内cyclinE、cyclinA表达水平低于对照组（P〈0.01）;CD8＋T细胞内cyclinB的表达水平与对照组差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 PS通过抑制CD4＋T细胞的正性细胞周期调节蛋白cyclinE、cyclinA、cyclinB的表达和上调其负性细胞周期调节蛋白p27kip1的表达,抑制CD4＋T细胞的DNA合成和细胞分裂,进而抑制CD4＋T细胞增殖;通过下调CD8＋T细胞内cyclinE、cyclinA的表达,上调p27kip1的表达,抑制CD8＋T细胞DNA合成。     

支气管哮喘大鼠模型大小气道病理学的动态变化及预防性吸入糖皮质激素的干预作用

目的 探讨支气管哮喘(简称哮喘)大鼠气道重塑的形态学动态变化及吸入糖皮质激素的干预作用.方法 按随机数字表法将72只清洁级雄性Wistar大鼠分为对照组、哮喘组(卵白蛋白)、哮喘干预组(布地奈德+卵白蛋白),每组大鼠24只,分别于雾化激发后第7天、第28天、第35天处死每组大鼠中8只进行气道形态学观察,并采用病理图像分析系统测量大鼠的气道形态学参数.气道被分为大气道和小气道两个等级进行分析.结果 大气道病理学变化:与相应正常对照组相比,28 d、35 d哮喘组内管壁厚度、平滑肌厚度明显增厚(P<0. 05或<0. 01);治疗28 d、35 d后管壁厚度、平滑肌厚度与相应哮喘组相比明显减轻(P<0. 05或<0. 01),接近于正常对照组水平(P值均＞0. 05).小气道病理学变化:与相应正常对照组相比,28 d、35 d哮喘组内管壁厚度、平滑肌厚度、胶原沉积明显增厚(P<0. 05或<0. 01);经治疗后28 d、35 d组平滑肌厚度与相应哮喘组相比差异无统计学意义;而胶原沉积在治疗28 d、35 d组与相应哮喘组相比明显减少(P<0. 01);内管壁厚度治疗35 d组与相应哮喘组相比差异开始下降,但仍高于正常对照组(P值均<0. 05).结论 气道重塑累及整个气道,大气道发生重塑较小气道出现早且较重.早期预防性吸入糖皮质激素治疗可有效的干预哮喘大鼠气道壁胶原的沉积,但对气道平滑肌层的增厚干预作用较弱;吸入激素对大气道重塑的抑制作用较小气道作用明显.     

罗红霉素和地塞米松对支气管哮喘大鼠气道重塑中成肌纤维细胞的影响

目的 探讨成肌纤维细胞(myofibroblast,MF)在支气管哮喘(简称哮喘)气道重塑中的作用.观察罗红霉素对哮喘气道重塑的影响,并与地塞米松作对照.方法 SD大鼠40只,随机分为哮喘组(A组)、生理盐水对照组(C组)、地塞米松治疗组(D组)和罗红霉素治疗组(R组),每组10只.利用卵白蛋白(ovalbumin,OVA)/Al(OH).致敏与OVA雾化吸人激发建立大鼠哮喘模型.免疫组织化学测定肺组织中支气管上皮下MF的一平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)表达含量,并使用图象分析技术进行积分光密度(integral optical density,IOD)定量分析测定.光镜观察肺组织病理结构变化,图像分析软件分析,并测定肺内支气管总管壁厚度、内管壁厚度、平滑肌层厚度等指标.结果 免疫组织化学和图像分析结果:A组与C组相比,总管壁厚度、内管壁厚度、平滑肌层厚度显著增厚(P<0.01).D组和R组中的内管壁厚度、平滑肌层厚度与A组相比.均显著变薄(P<0.01).R组的总管壁厚度、内管壁厚度、平滑肌层厚度与D组相比差异无统计学意义.定量分析测定的IOD值显示A组支气管上皮下MF α-SMA表达含量较C组显著增加(P<0.01),D组和R组表达含量较A组均减少(P<0.05),R组表达含量与D组相比差异无统计学意义.相关分析结果:支气管上皮下MF α-SMA表达含量(用IOD值表示)和内管壁厚度呈正相关(r=0.913,P<0.01,n=40),和平滑肌层厚度也呈正相关(r=0.626.P<0.01,n=40).结论 MF在气道重塑形成中起重要作用.罗红霉索和地塞米松均可能通过抑制MF增殖和表达起到抗哮喘气道重塑作用.     

血管紧张素Ⅱ对哮喘大鼠气道重塑影响的研究

目的 观察哮喘大鼠肺组织局部肾素-血管紧张素系统(renin -angiotensin system,RAS)的活化,探讨血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)特异性血管紧张素1受体拮抗剂Irbesartan对哮喘气道重塑的影响.方法 将30只Wistar大鼠按随机数字表法分成正常对照组(C组)、哮喘模型组(A组)和Irbesartan干预组(I组),以卵白蛋白(OVA)腹腔注射致敏并雾化吸入激发制备大鼠哮喘模型.观察各组大鼠肺功能变化情况;酶联免疫吸附试验(ELISA)定量分析血清和支气管肺泡灌洗液(BALF)上清中AngⅡ水平;半定量分析气道壁厚度(Wat/Pbm,气道壁面积/基底膜周径)和气道平滑肌厚度(Wam/Pbm,平滑肌面积/基底膜周径);免疫组织化学方法观察转化生长因子-β1(TGF-β1)在气道壁的表达,苦味酸天狼猩红染色-偏振光方法观察Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)在气道壁的表达,并对三者的表达水平进行半定量分析.结果 ①Ang水平:血清AngⅡ水平:I组大鼠较A组和C组显著升高(P<0.05),A组和C组间比较差异无显著性(P>0.05).BALF上清中AngⅡ水平:A组较C组显著升高(P<0.05),I组较A组显著升高(P<0.05).②肺功能:吸气阻力(Ri):A组大鼠显著高于C组(P<0.05),I组大鼠与A组、C组比较差异无显著性(P>0.05).呼气阻力(Re):A组大鼠显著高于C组和I组(P<0.05).肺顺应性(CL)A组大鼠较C组明显降低(P<0.05),I组较A组显著提高(P<0.05),但较C组仍有下降(P<0.05).③气道壁厚度:A组大鼠较C组显著增厚(P<0.05),I组较A组显著降低(P<0.05),但仍显著高于C组(P<0.05).气道平滑肌厚度:A组、I组与C组比较均有显著性差异(P<0.05),并且I组较A组显著降低(P<0.05).④TGF-β1表达:I组大鼠气道壁TGF-β1阳性表达:较A组显著降低(P<0.05),较C组仍有显著增加(P<0.05).⑤胶原表达:C组、A组和I组ColⅠ阳性表达:各组间比较差异无显著性(P>0.05).A组ColⅢ阳性表达显著高于I组和C组(P<0.05),I组气道壁ColⅢ表达较C组仍有显著增加(P<0.05).⑥相关性分析:哮喘组大鼠BALF上清中AngⅡ水平与气道壁表达的TGF-β1呈显著正相.结论 哮喘大鼠肺组织局部RAS活化,AngⅡ产生增多.局部增多的AngⅡ可能通过上调TGF-β1的表达,促进ASM增殖肥大和气道壁胶原沉积增加,从而在哮喘气道重塑中发挥重要作用.AngⅡ特异性血管紧张素1受体阻断剂Irbesartan可以减轻气道重塑的发生,并对肺功能有一定程度的改善.     

支气管哮喘大鼠细胞周期蛋白D1与气道重塑关系的研究

目的 观察支气管哮喘(简称哮喘)大鼠模型肺组织中细胞周期蛋白D1的表达变化,以及细胞周期蛋白D1与气道重塑的关系.方法 16只SD大鼠随机分成正常组和哮喘组,每组8只.应用卵清蛋白致敏和激发的方法建立哮喘大鼠动物模型.HE染色观察气道炎症情况,采用马松染色观察气道胶原沉积变化,免疫组织化学和蛋白印迹法观察细胞周期蛋白D1的表达变化,免疫组织化学法观察气道平滑肌肌动蛋白-α表达变化.结果 哮喘组大鼠气道胶原沉积、细胞周期蛋白D1和肌动蛋白-α表达较正常组明显增高(P<0.05),哮喘组肌动蛋白-α与细胞周期蛋白D1表达呈明显正相关(r1=0.2C,P<0.05;r2=0.53,P<0.05).结论 细胞周期蛋白D1参与哮喘气道重塑的调节.     

高血压降压治疗目标的再认识

根据传统的高血压水平的定义,1993年WHO高血压治疗指南提出血压控制目标为<140/90mm Hg(1mm Hg=0.133kPa),但是并非所有患者都必须将血压降至同一水平,而应根据患者情况进行个体化治疗。Framingham进行的一项长达10～12年的心血管事件研究发现,第5年后,正常上限血压[收缩压(SBP     

Inhibition of intimal thickening of the carotid artery of rabbits and of outgrowth of explants of aorta by probucol.

The effect of administration of probucol in preventing intimal thickening of rabbit carotid artery after balloon catheter injury and the mechanism of action of the drug were studied. Groups of 6 male New Zealand-White rabbits were given normal diet (Group I), high cholesterol diet (Group II) or high cholesterol diet plus probucol (Group III) for 4 weeks. Balloon catheter injury was made in week 2 and animals were killed in week 4. No significant differences in the total cholesterol levels in Groups II and III were found in week 4. The medians of areas of the intimal layer in cross-sections of the carotid arteries of Groups I, II and III were 0.237, 0.475 and 0.309 mm2, respectively. Thus high-cholesterol diet increased the thickness of the intimal layer and probucol reduced its effect. There were no significant differences in the areas of the medial layers in these 3 groups. For the examination of the mechanism of the effect of probucol, rabbits were given chow containing 0.5% cholesterol with and without 0.5% probucol (7 rabbits each) and then the numbers of explants from their aortas showing outgrowth were compared. The plasma total cholesterol levels of these two groups were the same. The probucol concentrations in the plasma and aorta of the former group were 18.6 +/- 13.2 micrograms/ml and 7.3 +/- 5.4 micrograms/g wet tissue, respectively. The number of explants showing outgrowth on day 14 was suppressed by 34% in the probucol-treated group.(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)