铜绿假单胞菌耐药性分析及分子流行病学研究

目的分析铜绿假单胞菌(PA)耐药现状及耐药基因情况。方法收集2009~2012年临床分离的PA 305株。K-B法进行药敏试验,并检出产ESBLs菌株及耐碳青霉烯的PA,用聚合酶链反应(PCR)对产ESBLs菌株进行TEM、SHV、CTX-M基因检测,对耐碳青霉烯PA进行VIM、IPM、OXA-23基因检测。结果3年中PA对亚胺培南、美罗培南、头孢他啶、左氧的耐药率呈上升趋势,氨曲南、阿米卡星的耐药率呈下降趋势,305株PA中共检出48株产ESBLs,57株耐碳青霉烯。PCR检测出5株PA含TEM基因,2株含SHV基因。CTX-M、VIM、IPM、OXA-23基因检测均为阴性。结论产ESBLs是我院耐药PA的重要原因,耐碳青霉烯的PA不含VIM、IPM、OXA-23基因。     

临床产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性分析及耐药基因和I类整合子的检测

目的 了解产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性及相关耐药基因之间的关系.方法 采用K-B琼脂扩散法检测临床分离大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对18种抗生素的耐药性,用PCR技术检测相关耐药基因和I类整合子并用DNA序列分析确认其所产生基因型.结果 检测菌株中ESBLs阳性56株,阳性率为44.4%.所有检测菌株对亚胺培南全部敏感;56株ESBLs阳性的菌株有44株扩增到TEM基因(78.6%),SHV型阳性的有2株(3.6%),CTX-M型阳性的有48株(85.7%),OXA型阳性的有1株(1.79%),intI1阳性菌株有35株(62.5%),占未检出PER和VEB型.结论 大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产ESBLs较高,耐药显著,碳青霉烯类抗生素是目前治疗产ESBLs细菌最有效的药物;TEM型和CTX-M型ESBLs为我院临床分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的主要基因型,携带I类整合子基因是导致细菌产ESBLs的重要原因.     

老年患者感染鲍曼不动杆菌耐药性变迁机制

目的通过分析鲍曼不动杆菌的感染特征、耐药性及其产碳青霉烯酶的类型,探讨其对亚胺培南类抗生素的耐药机制。方法收集该院对碳青霉烯类药物敏感、中介或耐药的鲍曼不动杆菌株162株,用琼脂纸片扩散法(K-B法)及肉汤稀释法测定最低抑菌浓度(MIC),用聚合酶链反应(PCR)检测其耐药基因。结果 60株耐药细菌均为多重耐药株,PCR检出47株携带OXA-23基因,3株携带OXA-24基因,85株敏感株均未检出OXA-23及OXA-24基因,各年份与2008年对亚胺培南类药物敏感性以及耐药基因OXA-23基因携带率比较有统计学差异(P0.05)。结论携带OXA-23和OXA-24碳青霉烯酶基因的鲍曼不动杆菌对临床常用亚胺培南类抗生素的耐药率明显增高,且伴随用药时间延长呈逐年上升趋势。     

耐亚胺培南鲍曼不动杆菌OXA-23基因检测及分析

目的了解临床分离的耐亚胺培南鲍曼不动杆菌OXA-23摹因的存在状况。方法收集我院临床分离的非重复耐亚胺培南鲍曼不动杆菌16株,采用纸片扩散法确定其耐药率,以PCR对亚胺培南耐药菌株进行OXA-23基因的检测并测序,序列与基因库比对。结果16株耐亚胺培南鲍曼不动杆菌中,OXA-23基因阳性11株,阳性率为68．8％。随机抽取2株OXA-23基因阳性株进行测序后,经网EGenBank比对,与OXA-23标准株100％同源。结论分离菌株主要来源于痰标本,耐亚胺培南鲍曼不动杆菌OXA-23雄因的携带率较高,分离菌株的耐药性可能与OXA-23型碳青霉烯酶基因有关。     

产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌耐药性和基因分型研究

目的调查重庆地区产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌的耐药性及基因型分布。方法采用纸片扩散法测定10种抗菌药物对产ESBLs肺炎克雷伯菌的敏感性,应用PCR方法检测产酶株的TEM、SHV及CTX-M基因。结果35株产ESBLs菌对亚胺培南全部敏感,对头孢吡肟耐药率为22.9%;但对其他抗菌药物耐药率均>50%,其中对头孢噻肟、头孢他啶和头孢曲松的耐药率分别为82.9%、68.5%和65.7%;基因型分析显示有26株携带CTX-M基因,24株携带TEM基因,15株携带SHV基因。结论产ESBLs的肺炎克雷伯菌耐药严重,重庆地区以CTX-M型ESBLs多见。     

临床产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性分析及耐药基因和Ⅰ类整合子的检测

目的了解产超广谱B．内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性及相关耐药基因之间的关系。方法采用K—B琼脂扩散法检测临床分离大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对18种抗生素的耐药性,用PCR技术检测相关耐药基因和Ⅰ类整合子并用DNA序列分析确认其所产生基因型。结果检测菌株中ESBLs阳性56株,阳性率为44．4％。所有检测菌株对亚胺培南全部敏感;56株ESBLs阳性的菌株有44株扩增到TEM基因（78．6％）,SHV型阳性的有2株（3．6％）,CTX-M型阳性的有48株（85．7％）,OXA型阳性的有1株（1．79％）,intl1阳性菌株有35株（62．5％）,占未检出PER和VEB型。结论大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产ESBLs较高,耐药显著,碳青霉烯类抗生素是目前治疗产ESBLs细菌最有效的药物;TEM型和CTX-M型ESBLs为我院临床分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的主要基因型,携带Ⅰ类整合子基因是导致细菌产ESBLs的重要原因。     

梅州地区临床分离耐碳氢霉烯类鲍曼不动杆菌的耐药机制及分子流行病学研究

目的 了解梅州地区临床分离的耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌的耐药性,探讨其耐药机制及分子流行病学特征。方法 收集梅州地区5所医院2012年1～12月临床分离的非重复耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌210株,采用K-B法检测药敏性,改良Hodge试验筛选耐碳青霉烯表型,PCR扩增IMP、VIM、OXA-23、OXA-24、OXA-51和OXA-58型碳氢霉烯酶基因,并测序。应用ERIC-PCR分型及同源性分析。结果 药敏结果显示,17种药物除多粘菌素B耐药率为0.48%外,其他药敏耐药率都高于60%;改良Hodge试验阳性菌株163株(77.62%)。扩增结果显示Bla-OXA-51的检出率为最高为94.29%(198/210),Bla-OXA-23的检出率次之为78.57%(165/210),Bla-VIM的检出率为4.29%(9/210),Bla-IMP、Bla-OXA-24、Bla-OXA-58均未被检出。210株菌株分为7个ERIC基因型,其中A型97株,B型44株,H型25株,为主要的流行克隆株。结论 梅州地区临床分离的耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌耐药十分严重;产OXA-51、OXA-23和VIM型碳氢霉烯酶是本地区鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类药物耐药的重要机制,且耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌存在克隆的流行。     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌的耐药基因序列分析

目的　了解四川大学华西医院产超广谱 β 内酰胺酶 (ESBLs)肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的TEM及SHV型ESBLs亚型 ,并分析其耐药性。方法　采用聚合酶链反应 (PCR)扩增分离四川大学华西医院住院患者的产ESBLs大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌株的TEM型及SHV型ESBLs基因并测序 ,用琼脂稀释法测定头孢他啶和头孢噻肟等 8种抗菌药物的最小抑菌浓度 (MIC)值。结果　所有产ESBLs株均耐头孢噻肟 ,11株耐氨曲南 ,2株分别耐头孢他啶和头孢吡肟 ,对环丙沙星、阿米卡星及头孢西丁耐药的分别为 11株、5株和 3株。 12株ESBLs菌中 10株产SHV 2 ,2株产TEM 19。结论　本研究中的产ESBLs株以耐头孢噻肟和氨曲南为主 ,其中绝大多数为多重耐药株 ,产SHV 2和TEM 19是其对头孢噻肟及氨曲南等氧亚胺基 β 内酰胺酶类抗生素耐药的原因之一     

江苏省昆山地区耐亚胺培南鲍曼不动杆菌的耐药性及碳青霉烯酶基因型分析

目的调查江苏省昆山地区耐亚胺培南鲍曼不动杆菌（CRAB）的耐药性及碳青霉烯酶基因型,为临床防治此类感染提供依据。方法收集昆山市中医医院患者分离的70株CRAB,采用纸片扩散法进行药敏试验,采用亚胺培南-EDTA纸片增效法和改良Hodge试验进行金属酶及碳青霉烯酶表型初筛;用6种碳青霉烯酶特异性基因引物进行PCR扩增和基因型的测序分析,并通过网上GenBank进行比对以确定编码酶基因的类型。结果70株CRAB对头孢哌酮／舒巴坦和阿米卡星的耐药率分别为61．4％和70％,对其他11种常用抗菌药物的耐药率均〉80％;检出金属酶耐药表型10株、碳青霉烯酶耐药表型68株,PCR扩增出OXA-51基因型70株、IMP-1基因型8株、OXA-23基因型66株,OXA-24、OXA-58及VIM-1基因扩增结果均为阴性。结论本地区CRAB耐药现象严重,临床应加强监测并根据药敏结果合理使用抗菌药物;OXA-51、OXA-23及金属酶基因IMP．1在介导本地区鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药中起重要作用。     

产气肠杆菌连续分离株的耐药性及β-内酰胺类抗生素耐药机制的研究

目的 探讨临床连续分离的产气肠杆菌耐药性及耐碳青霉烯类药物菌株对β-内酰胺类药物耐药的主要机制。方法 用Vitek2-Compact仪对临床连续分离的240株产气肠杆菌进行鉴定和常规药敏试验,并筛选出耐碳青霉烯类药物的菌株;用琼脂稀释法测定其对碳青霉烯类药物的MIC值;用改良的三维试验方法分别检测耐药菌株的ESBLs与AmpC酶;改良Hodge试验法检测碳青霉烯酶;用PCR扩增法检测3种β-内酰胺酶的耐药基因;结果 240株产气肠杆菌对23种常用抗生素的耐药率在3.8%～100%之间,最高为头孢西丁(100%)、最低为亚胺培南(3.8%);筛选出10株耐碳青霉烯类产气肠杆菌;三维试验10株菌ESBLs 及AmpC酶均为阳性,Hodge试验阳性7株。PCR结果示,携带blaKPC基因7株;携带blaCTX-M基因7株,携带blaSHV基因2株;携带blaDHA基因6株,携带blaACT/MIR型ampC基因4株; 16SrRNA基因定量确定ampC基因的表达增加的3株。结论 产气肠杆菌对临床常用抗菌药物具有较高的耐药性,其主要耐药机制为产碳青霉烯酶、ESBLs与AmpC酶。     

宁波市耐三代头孢菌素志贺菌携带β-内酰胺酶与基因分型

目的了解本市耐三代头孢菌素志贺菌携带ESBLs及其基因型,为疾病防控提供依据。方法采用直接和增菌培养法,分离患者标本中志贺菌;药敏采用K-B法,ESBLs志贺菌表型确证采用纸片法;CTX-M、OXA、TEM和SHV耐药基因采用PCR法;耐药基因分型采用核苷酸序列法,用BLAST分析比较确定基因型别。结果药敏筛检出69株耐三代头孢菌素志贺菌,占ESBLs志贺菌的74.19%。检出CTX-M(CTX-M-1群和CTX-M-9群)、OXA和TEM耐药基因,检出率分别为79.71%、79.01%和26.09%,未检出CTX-M-2群和SHV耐药基因。DNA序列比对CTX-M-1群以CTX-M-15型为主,还检出7个其它型;CTX-M-9群则以CTX-M-14型多,其它型检出6个;49株OXA和18株TEM耐药基因测序后均为1型(OXA-1型和TEM-1型)。携带2种以上耐药基因的志贺菌21株,占30.43%。结论本市志贺菌对头孢曲松等三代头孢菌素耐药率较高,检出的ESBLs酶型种类多,CTX-M(CTX-M-1群的CTX-M-15型和CTX-M-9群的CTX-M-14型)是主流酶型,且可同时携带多种耐药基因,给疾病防控带来困难。OXA-1型的高携带率,提示我们应加强分析。B群志贺菌无论是表型的耐药性,还是耐药基因检出率均高于D群志贺菌,该发现有助志贺菌的扩散与流行研究。     

呼吸重症监护病房多重耐药鲍曼不动杆菌耐药基因研究

目的 观察我院呼吸重症监护病房(RICU)临床分离多重耐药鲍曼不动杆菌β-内酰胺酶基因和消毒剂耐药基因qacE△1-sul1存在状况.方法 收集RICU分离多重耐药鲍曼不动杆菌16株,采用PCR方法检测8种β-内酰胺酶基因(TEM、SHV、PER、DHA、IMP、VIM、OXA-23、OXA-24)和消毒剂耐药基因(qacE△1-sul1)共9种基因.采用多基因聚类分析方法进行多重耐药菌株亲缘性分析.结果 16株多重耐药鲍曼不动杆菌中blaOXA-23阳性5株(31.25%),blaTEM阳性2株(12.50%),blaDHA 2株(12.50%),blaOXA-24 1株(6.25%),blaPER 1株(6.25%).blaSHV、blaIMP、blaVIM均未检出,消毒剂耐药基因检测qacE△1-sull阳性16株(100.00%).多基因聚类分析发现存在克隆传播现象.结论 我院RICU多重耐药鲍曼不动杆菌携带多种β-内酰胺酶基因,消毒剂耐药基因携带率高,聚类分析显示存在克隆传播现象,应引起临床重视.     

中国部分地区铜绿假单胞菌耐药性及主要β内酰胺酶基因型分布

目的 了解中国各地区铜绿假单胞菌对常用抗菌药物的耐药情况及其主要β内酰胺酶基因型的分布.方法 收集中国16个城市28家医院2006年7月至2007年7月临床分离的铜绿假单胞菌645株.采用Etest法或Kirby-Bauer纸片扩散法测定其对11种常用抗菌药物的敏感性,应用PCR扩增及序列分析确定所有菌株TEM、SHV、CTX-M、OXA等β内酰胺酶的基因型.统计学处理采用SPSS 11.0软件.结果 645株铜绿假单胞菌对11种抗菌药物的耐药率高,仅对阿米卡星及美罗培南的耐药率＜30%.其中对亚胺培南和(或)美罗培南不敏感的菌株为275株,占42.64%,多重耐药铜绿假单胞菌368株,占57.05%,对所检测抗菌药物全部耐药的铜绿假单胞菌菌株为20株,占3.10%.从基因型分布情况来看,阳性率最高的为OXA-10群共51株,其次CARB型37株,TEM型36株,PER型35株,CTX-M型11株,VEB型9株,SHV型5株,金属酶基因型阳性的24株,GES基因型1株,未检测到质粒介导的AmpC酶及其他碳青霉烯酶基因型.并在铜绿假单胞菌中发现了CTX-M-13、CTX-M-14、CTX-M-15、CTX-M-3基因型的超广谱β内酰胺酶基因.结论 中国28家医院临床分离的铜绿假单胞菌耐药情况比较严重.β内酰胺酶基因型以OXA-10及PSE-1为主.在对碳青霉烯类抗菌药物不敏感的或敏感的铜绿假单胞菌中,β内酰胺酶基因型分布也有所不同.     

呼吸重症监护病房多重耐药铜绿假单胞菌耐药基因研究

目的 观察我院呼吸重症监护病房(RICU)临床分离多重耐药铜绿假单胞菌β-内酰胺酶基因和Ⅰ类整合子标志物(qacE△1-sul1)存在状况.采用多基因聚类分析方法进行多重耐药菌株亲缘性分析.方法 收集RICU分离多重耐药铜绿假单胞菌33株,采用PCR方法检测8种β-内酰胺酶基因(TEM、SHV、PER、DHA、IMP、VIM、OXA-23、OXA-24)和qacE△1-sul1基因共9种.应用多基因聚类分析法分析菌株亲缘性.结果 33株多重耐药铜绿假单胞菌中blaTEM阳性8株(24.24%),blaVIM阳性6株(18.19%),blaIMP阳性3株(9.09%),blaSHV阳性2株(6.06%),blaDHA阳性5株(15.15%),blaOXA-23,blaOXA-24,blaPER均未检出,qacE△1-sul1基因阳性28株(84.85%).多基因聚类分析发现存在克隆传播现象.结论 我院RICU多重耐药铜绿假单胞菌携带多种β-内酰胺酶基因,以携带blaTEM基因为主.qacE△1-sul1携带率高,聚类分析显示存在克隆传播现象,应引起临床重视.     

北京与杭州地区宋内志贺菌的耐药性及其耐药机制对比研究

目的 了解北京地区与杭州地区宋内志贺菌的耐药状况和基因型的特征.方法 用常规方法 培养、分离细菌,经生化反应和血清凝集试验鉴定到种.用Kirby-Bauer纸片法进行药物敏感性试验.超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum β-lactamases,ESBLs)检测采用双纸片确认试验.采用PCR方法 进行...     

96株大肠埃希菌耐药性及其产ESBLs、AmpC酶菌株基因型检测

目的 了解大肠埃希菌耐药现状及其及产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）和AmpCβ-内酰胺酶（AmpC酶）菌株基因型,以指导临床医师合理使用抗菌药物。方法自本院尿路感染患者标本中分离大肠埃希菌96株,采用确证试验和改良三维试验检测其ESBLs、AmpC酶表达情况,用K-B法测定其对亚胺培南等16种抗菌药物的敏感性,用PCR法检测TEM、SHV、PER、CTX-M-1群、CTX-M-2群、CTX—M-3群、DHA和ACT-1基因型分布情况,用接合转移试验了解耐药基因转移方式。结果96株大肠埃希菌单产ESBLs30株,同时产ESBLs和AmpC酶4株,单产AmpC酶2株;产ESBLs大肠埃希菌对氨苄西林、头孢唑啉、头孢呋辛、头孢噻肟四种抗生素耐药率达到100％,而对左氧氟沙星、复方新诺明和呋喃妥因的耐药率亦〉80％,对亚胺培南和美罗培南均敏感;ESBLs基因型以CTX—M和TEM型为主,AmpC酶基因为DHA型,两酶能通过接合转移方式将质粒携带的耐药性传递至受体菌。结论大肠埃希菌所致感染对碳青霉烯类药物较为敏感;临床应及时了解本地区产ESBLs、AmpC酶大肠埃希菌的耐药表型和基因型,以指导临床合理使用抗生素、延缓细菌耐药性产生、控制耐药菌株播散和流行。     

澳门地区鸡源性产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌基因型检测

目的 了解澳门地区鸡源性产超广谱β-内酰胺酶(Extended-spectrum β-lactamases, ESBLs)大肠埃希菌的基因型。方法 采用方便抽样的方法购买澳门地区市售的69个鸡源性产品,从中分离鉴定出103株产ESBLs大肠埃希菌,分别用CTX-M、TEM、OXA和SHV的引物对其进行PCR扩增,以此来判断它们的基因型,并用限制性片段长度多态性(RFLP)的方法对CTX-M型的产ESBLs大肠埃希菌进行初步分群, 并以纸片扩散法进行药敏试验。结果 澳门地区89.8%(62/69)鸡源性产品检测出产ESBLs大肠埃希菌,103株产ESBLs大肠埃希菌,经PCR扩增后,非重复株有84株,结果显示CTX-M型、TEM型、OXA型和SHV型分别占98.8%(83/84)、25.0%(21/84)、3.6%(3/84)和0.0%(0/84);其中23.8%(20/84)同时携带CTX-M型和TEM型,3.6%(3/84)同时携带CTX-M型和OXA型。83株CTX-M型的产ESBLs大肠埃希菌中66.3%(55/83)为CTX-M-G1,31.3%(26/83)为CTX-M-G9,CTX-M-G2和CTX-M-G8的检出率均为1.2%(1/83)。药敏试验中亚胺培南和美罗培南全部菌株敏感, 氨苄西林耐药率最高达98.8%, 其次为四环素83.3%(70/84)和阿米卡星78.6%(66/84)。结论 澳门地区鸡源性产ESBLs大肠埃希菌的检出率较高,其基因型以 CTX-M型为主,其次为TEM型,其中CTX-M型分群中以CTX-M-G1为主, 多重耐药的ESBLs大肠菌株普遍存在。     

猪源大肠杆菌耐药性及超广谱β-内酰胺酶流行性分析

目的 对福建地区分离的猪源大场杆菌进行耐药性测定以及对ESBLs流行性进行分析,以期为临床合理用药科学提供依据。方法 采用琼脂稀释法测定373株菌大肠杆菌对12种抗菌药物的敏感性,并用PCR方法检测ESBLs耐药基因的携带情况以及分析CTX-M阳性菌的种系发育关系。结果 分离株对甲氧苄啶/磺胺甲噁唑、萘啶酸、氟苯尼考及氨苄西林耐药率较高,分别为93.8%、82.8%、73.7%和70.0%;对恩诺沙星、四环素、庆大霉素、多西环素、环丙沙星、卡那霉素、头孢噻呋和头孢噻肟的耐药率依次为54.4%、53.1%、52.0%、46.6%、44.0%、41.0%、35.9%和30.8%。在373株大肠杆菌中,共有122株菌携带有ESBLs耐药基因,检出率为32.7%,其中CTX-M、TEM及OXA的检出率分别是18.0%(67)、12.1%(45)和7.5%(28),其中CTX-M的阳性菌中以CTX-M-14最为流行,其次是CTX-M-65和CTX-M-55;其种系发育显示分离株主要分布在A群。结论 福建地区猪大肠杆菌对抗菌药表现出较强的耐药性,ESBLs在猪源大肠杆菌中广泛流行,CTX-M是其主要流行的基因型,并且多数菌以共生型大肠杆菌为主。