类风湿关节炎患者关节滑膜滑液中结缔组织生长因子表达及其意义研究

目的检测结缔组织生长因子(connectivetissue growth factor,CTGF)在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者关节滑液及滑膜中的表达,探索CTGF在RA关节病变中可能发挥的作用。方法采用酶联免疫法(enzyme-linked imm-unosorbent assay,ELISA)方法检测中国医科大学附属第一医院2013年1月至12月收治的10例RA患者和8例骨关节炎(osteoar thritis,OA)患者关节滑液CTGF水平;免疫组化法检测3例RA患者和2例OA患者关节滑膜CTGF的表达;Real-time PCR检测向体外培养的成纤维样滑膜细胞(FLS)中加入外源性肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)后对CTGF表达的影响。结果 RA组的关节滑液CTGF水平高于OA组[(21.00±10.20)μg/L对(8.53±7.71)μg/L)],差异有统计学意义(P0.05);CTGF在RA滑膜组织主要表达于滑膜衬里细胞及衬里下层细胞,而OA滑膜组织仅少量CTGF表达;TNF-α可以上调FLS表达CTGF。结论 RA患者滑液CTGF水平升高,滑膜组织CTGF高表达,提示CTGF可能参与了RA关节炎症的发生发展。TNF-α上调FLS的CTGF表达,这可能是导致RA关节病变的重要因素之一。     

成纤维样滑膜细胞在类风湿关节炎发病机制中的研究进展

成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)在关节腔内具有生理状态下的组织赋形以及病理损伤时的基质重塑作用.FLS在类风湿关节炎(RA)滑膜病变中表现为异常活化增殖,是介导关节破坏和滑膜炎症的主要效应细胞.本文将就FLS的生理功能以及病理机制的研究现状予以综述.     

白细胞介素-23刺激的类风湿关节炎成纤维细胞对人破骨样细胞形成的研究

目的 探讨向细胞介素(IL)-23刺激的类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维细胞(FLS)在人破骨样细胞形成中的作用.方法 用不同浓度(1、5和10 ng/ml)的IL-23刺激RA和骨关节炎(OA)患者滑膜FLS 72 h,实时荧光定量聚合酶链反应(real time-PCR)检测RA和OA滑膜FLS核因子κB受体激活剂配体(RANKL)mRNA表达.分离人外周血单核细胞(MN),与IL-23刺激的RA和OA滑膜FLS共培养,通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色观察是否有破骨样细胞形成;同时,real time-PCR法检测破骨样细胞形成的分子标志.结果 不同浓度的IL-23均能上调RA滑膜FLS RANKL的表达;但几乎不诱导OA滑膜细胞RANKL的表达.在IL-23刺激的RA FLS和MN共培养体系中能观察到TRAP染色阳性的破骨样细胞形成;并且破骨样细胞形成的分子标志表达增高.而无IL-23刺激的RA FLS或IL-23刺激的OAFLS和MN共培养体系中未见TRAP染色阳性的破骨样细胞的形成.结论 IL-23通过诱导RA滑膜细胞RANKL的表达促进人MN分化衍生为破骨样细胞.     

类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡研究进展

类风湿关节炎（rheumatiod arthritis,RA）成纤维样滑膜细胞（fibroblast-like synoviocytes,FLS）是关节滑膜细胞中主要的一种,可以释放多种细胞因子,并可因环境变化发生演变,存在异常凋亡与增殖.RA FLS凋亡不足与RA的发病有关.本文就RA FLS凋亡信号传导途径以及凋亡调控作一综述.     

类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞诱导分化的体外研究

目的 研究类风湿关节炎（RA）成纤维样滑膜细胞（FLS）体外培养时的增生分化特点及细胞分化诱导剂全反式维甲酸（ATRA）、骨化三醇[1，25（OH）2D3]地塞米松（DEX）对RA—FLS增殖分化的影响。方法 关节镜、关节活检针取RA患者滑膜组织或抽取RA患者关节积液分离培养鉴定滑膜细胞．四甲基偶氮唑蓝（MTT）法和流式细胞仪法分别观察ATRA、骨化三醇和地塞米松对FLS细胞存活分数（SF）和细胞周期的影响。结果 RA—FLS在体外无诱导剂作用时呈现良性增殖方式。ATRA、骨化三醇和地塞米松对FLS的细胞标记和免疫染色无明显影响。三种诱导剂对RA—FLS的SF值均有不同程度的抑制（P〈0．05），其中地塞米松抑制作用最明显；骨化三醇和地塞米松对RA—FLS的SF抑制作用呈现剂量依赖性曲线（P〈0．01）。三种诱导剂均促使RA—FLS细胞周期改变即凋亡峰出现、S期缩短。结论 体外培养的RA—FLS生长特性为非恶性无限制增生。ATRA、骨化三醇和地塞米松抑制RA—FLS细胞增殖，促进细胞分化，诱导FLS凋亡，其中地塞米松抗增殖作用最明显；但未发现三者将FLS诱导分化为其他类型细胞。     

骨桥蛋白在类风湿关节炎发病机制中的研究进展

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)为慢性炎症性自身免疫病,主要病理特点为滑膜炎、血管翳的形成,以及软骨和骨的破坏.RA病变核心部位在关节滑膜,滑膜主要的组织细胞学改变有:滑膜内膜层细胞[成纤维样滑膜细胞(FLS)和巨噬样细胞]的增生、滑膜内膜下层炎性细胞(巨噬细胞、淋巴细胞等)的浸润,侵蚀关节面的血管翳形成,破骨细胞活化并介导矿化软骨和软骨下骨的侵蚀.病变中涉及到的分子有细胞因子、黏附分子、趋化因子、蛋白酶等.     

NF-κB信号通路的阻断对类风湿关节炎滑膜细胞凋亡与炎症的影响

目的探讨核因子(NF)-κB信号通路的阻断对类风湿关节炎(RA)滑膜细胞凋亡与炎症的影响。方法分离正常滑膜组织及RA滑膜组织中成纤维滑膜细胞(FLS),分为正常FLS组(正常组),RA FLS组(模型组),NF-κB抑制剂(PDTC)低、中、高剂量组(2,5,10μmol/L)(PDTC组)。四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测PDTC对RA FLS细胞活力的影响,Annexin V-FITC流式双染检测各组细胞凋亡情况,酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组细胞上清液中肿瘤坏死因子(TNF)-α,白介素(IL)-1β含量,Western印迹检测各组细胞中环氧化酶(COX)-2,Bax,Bcl-2蛋白的表达。结果与模型组比较,PDTC低、中、高剂量组能显著抑制RA FLS活力,诱导RA FLS凋亡,抑制RA FLS细胞释放TNF-α、IL-1β因子,下调COX-2和Bcl-2表达,上调Bax表达(均P0.05)。结论阻断NF-κB信号通路能够显著抑制RA FLS细胞炎症并诱导细胞凋亡。     

类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞表观遗传学研究进展

RA是一种以免疫功能障碍和慢性炎症为特征的关节疾病。成纤维样滑膜细胞（FLS）是位于关节囊的内层并介导RA关节破坏的主要细胞,其在RA疾病过程中扮演重要角色。而表观遗传因素能够影响FLS的基因表达,从而对RA的发生发展起到重要的调控作用。表观遗传调控机制主要包括DNA修饰、组蛋白翻译后修饰和非编码RNA调控。随着基因测...     

三水白虎汤对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖的蛋白质组学影响

目的 探讨三水白虎汤(SSBH)对类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维细胞(FLS)增殖的蛋白质组学影响.方法 组织块培养法收集RA患者的关节FLS,体外传代培养,取3～6代细胞,分别加入SSBH含药血清培养(SSBH组)及加入生理盐水制备的血清培养(对照组).培养72 h后提取细胞总蛋白,用双向凝胶电泳(2-DE)分离细胞总蛋白,凝胶经银染显色和图像数据分析识别差异蛋白位点;基质辅助激光解析电离飞行时间质谱对差异蛋白位点进行鉴定.结果 两组FLS蛋白2-DE图谱均出现差异蛋白质点.在差异蛋白表达量超过3倍的蛋白质点中,选取27个差异蛋白位点进行质谱分析,共鉴定出包括表达上升的IL-1受体拮抗蛋白等25种蛋白质.结论 SSBH可能通过上调RA患者FLS中IL-1受体拮抗蛋白来抑制滑膜增生,这可能是该方剂治疗RA的药理作用机制之一.     

脂肪因子脂联素及其受体在类风湿关节炎炎性关节中高表达

目的 研究脂肪因子脂联素(AD)及其受体1,2(AdipoR1,R2)在类风湿关节炎(RA)患者关节液和滑膜组织中的表达.方法 酶联免疫吸附试验(ELISA)检测23例RA和23例骨关节炎(OA)患者关节液中AD水平,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和Western-blot法分析AD,AdipoR1,AdipoR2在10例RA和10例OA患者滑膜组织中的表达.结果 RA关节液中AD含量约高于OA的2倍(P<0.05),RA滑膜组织中AD、AdipoR1 mRNA表达明显高于在OA中的表达(P<0.05),但两者AdipoR2表达差异无统计学意义.RA滑膜组织中AD和AdipoR1蛋白表达明显高于在OA中的表达,且AdipoR1表达明显高于AdipoR2(P<0.05);AdipoR2蛋白表达在RA和OA中差异无统计学意义.结论 RA炎性关节液和滑膜组织中AD和AdipoR1高表达,可能参与RA病理过程.     

肿瘤坏死因子样凋亡的微弱诱导剂诱导成纤维样滑膜细胞合成基质金属蛋白酶-1机制的研究

目的 通过研究p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路在肿瘤坏死因子样凋亡的微弱诱导剂(TWEAK)诱导类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)合成基质金属蛋白酶(MMP)-1过程中的作用,探讨TWEAK参与RA发病的机制.方法 将重组TWEAK与FLS共培养,对经或未经SB203580预处理的FLS,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞培养液中MMP-1水平;应用Western-blot法检测FLS中p-p38MAPK和P65的表达.结果 100 ng/ml的TWEAK能够明显诱导RAFLS合成MMP-1;SB203580能够部分抑制TWEAK诱导RA FLS合成的MMP-1;TWEAK作用于RAFLS,能够使D38MAPK磷酸化,并使细胞核内P65蛋白表达增加.结论 TWEAK诱导RA FLS合成MMP-1过程中,p38MAPK信号通路处于激活状态,并诱导核因子(NF)-κB的表达.     

类风湿性关节炎细胞水平建模四种方法比较

目的 比较四种方法 在培养类风湿性关节炎(RA)滑膜细胞(FLS)中的异同,为研究RA提供较好的体外实验模型建模方法 .方法 20例滑膜组织标本均用组织块法、单胶原酶消化法、单胰酶温消化法和双酶消化法四种方法 分离、培养RA FLS,均取培养第7日细胞计数,取第4代细胞鉴定,免疫组化鉴定细胞,测定分离细胞的数量和纯度.结果 四种培养方法 的培养时间比较,单胶原酶法>双酶消化法>组织块法>单胰酶法(P＜0.05).组织块法及双酶消化法所得细胞数较单胶原酶法及双酶消化法少(P＜0.05).第4代细胞均以FLS为主(>95%).结论 四种方法 体外培养可获得生物学特性稳定的RA FLS细胞系,其中组织块法是细胞水平建立RA体外实验模型成功率较高的方法 ,单纯胰酶法是较快速的方法 .     

金雀异黄素对胶原诱导性大鼠成纤维样滑膜细胞分泌的血管新生相关因子的影响

目的 观察金雀异黄素(genistein)对Ⅱ型胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠关节成纤维样滑膜细胞(FLS)分泌的血管内皮生长因子(VEGF)及基质金属蛋白酶(MMP)-1、2、3、9的影响.方法 采用Ⅱ型胶原和完全弗氏佐剂(CFA)建寺CIA大鼠模型;每周进行一次关节炎指数(AI)评分;于造模第6周摄取关节X线片,选取大鼠关节进行关节滑膜组织病理检测:取出关节滑膜组织,用胶原酶消化法分离培养原代成纤维样滑膜细胞;流式法检测滑膜细胞血管细胞黏附分子(VCAM)-1的表达;在FLS培养中加入用不同浓度的金雀异黄素(100,200.400 μmol/L),间接酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测FLS培养上清中VEGF及MMP-1、2、3、9的表达.结果 Ⅱ型胶原和CFA共同致敏后3 d,大鼠开始出现关节肿胀,AI逐渐增高,于第3周时最明显,观察AI评分、关节X线以及关节滑膜组织病理发现,造模组与空白对照组比较差异有统计学意义.大鼠滑膜细胞培养至第4代,检测其VCAM-1的表达高达85.5%,提示所培养的细胞即为FLS.不同浓度的金雀异黄素(100,200,400μmol/L)和甲氨蝶呤(MTX,1 mg/L)作用于FLS后,FLS培养上清中VEGF和MMP-1、2、3、9的分泌受到抑制,且抑制作用强度与药物的浓度有关.结论 本实验使用Ⅱ型胶原和完全弗氏佐剂成功构建了CIA大鼠模型,用胶原酶消化法成功地分离并培养了原代大鼠成纤维样滑膜细胞.一定浓度的金雀异黄素能抑制CIA大鼠FLS分泌的VEGF和MMP-1、2、3、9,且抑制作用呈浓度依赖性.     

类风湿关节炎患者血清和滑膜骨桥蛋白的测定

目的 研究骨桥蛋白(OPN)在类风湿关节炎(RA)患者外周血中的浓度变化及在滑膜的表达,探讨OPN在RA患者中的发病机制.方法 收集91例RA患者以及29名正常对照人群临床资料和血清,用酶联免疫吸附试验(ELIsA)方法检测OPN在RA患者外周血中的浓度,分析其变化和RA临床及实验室指标的关系.收集7例RA患者和1名正常对照的滑膜组织,用免疫组织化学的方法观察OPN的表达情况.结果 与正常对照组相比,活动组和非活动组的RA患者外周血中OPN水平均明显升高(p＜0.01),且与RA患者的部分临床指标有相关性:与压痛关节数(r=0.435,P=0.005)、关节的X线分期(r=-0.415,P=0.007)、关节功能(r=0.394,P=0.012)显著相关.OPN在RA滑膜组织大量表达,而在正常对照仅见OPN的少量表达.结论 OPN在RA患者外周血中浓度显著升高,且在滑膜表达明显,OPN可能与RA滑膜增生、骨侵蚀有关.     

血清淀粉样蛋白A在类风湿关节炎患者体内表达的研究

目的 通过检测血清淀粉样蛋白A(SAA)在类风湿关节炎(RA)患者血清、关节液及滑膜中的表达,探讨其在RA发病机制中的作用.方法 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测RA、骨关节炎患者和健康对照人群血清以及RA与骨关节炎患者关节液中SAA的水平;蛋白印迹法测定SAA在血清中的表达;免疫组织化学技术检测RA和骨关节炎滑膜中SAA的表达.应用t检验或Kruska-Wallis秩和检验进行统计分析.结果 RA血清中SAA含量[(318±132) μg/L]显著高于骨关节炎[(127±47) μg/L]和健康对照组[(127±41) μg/L,P均＜0.01].RA关节液中SAA含量[(571±473) μg/L]显著高于骨关节炎[(129±33) μg/L,t=2.46,P=0.04].蛋白印迹法结果显示各组血清样品中均有SAA条带;RA的SAA表达明显高于其他2组.病理结果显示SAA在RA关节滑膜高表达,位于血管内皮细胞、滑膜成纤维细胞、巨噬细胞以及血管周围;在骨关节炎,SAA仅见于关节血管周围和成纤维细胞.结论 RA血清和关节液中SAA的含量显著增高;SAA在RA滑膜组织中高表达,且表达位置与骨关节炎有明显差别,提示SAA可能参与了RA的炎症反应和关节损害.     

趋化因子CXCL16/CXCR6及其在类风湿关节炎发病中的作用及意义

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种主要累及滑膜关节的自身免疫性疾病,其病理改变包括慢性滑膜炎、血管翳形成及大量炎细胞浸润等.滑膜中大量聚集的炎细胞可产生和释放大量炎性介质,破坏关节软骨和骨,最终导致关节破坏和畸形.趋化因子在炎细胞向滑膜组织迁移及活化过程中发挥了关键作用,尤其是白发现CXCL16在RA滑膜中高表达以来,其在RA发病机制中的作用越来越受到重视,且可能成为RA治疗的新靶点.以下就CXCL16/CXCR6及其在RA发病中的作用和意义进行综述.     

护骨素在强直性脊柱炎外周关节骨质破坏病理机制中的作用

目的检测护骨素(OPG)在强直性脊柱炎(AS)外周关节滑膜组织中的表达,并以类风湿关节炎(RA)、骨关节炎(OA)患者和健康志愿者外周关节滑膜组织为对照,了解OPG表达与AS患者外周关节骨质破坏病理改变的相关性。方法应用单克隆抗体,通过免疫组织化学方法检测13例AS、16例RA、17例OA及6名健康对照关节滑膜组织中OPG的表达及分布状况,并通过计算机辅助图像分析系统和半定量分析方法确定OPG在各滑膜组织中表达水平之间的差异,分析OPG表达与炎性指标及关节X线分期之间的相关性。结果OPG蛋白在所有13例AS滑膜组织中均有阳性表达,阳性细胞主要分布于滑膜衬里层、衬里下层区域,滑膜软骨交界区OPG表达明显低于滑膜衬里层和衬里下层;2名健康对照滑膜组织中有阳性表达,但明显低于AS患者组。RA及OA患者组未见OPG阳性表达。结论譹AS组滑膜组织中OPG表达水平明显高于健康对照组(P<0.01),而RA、OA滑膜组织中未见OPG表达,说明OPG的高水平表达是滑膜组织对炎症反应/关节破坏所特有的表现,OPG的局部表达是维持AS关节骨代谢稳定的重要因素,这可能是大多数AS患者外周关节受累预后好于RA的原因之一。譺AS患者组滑膜软骨交界区中OPG表达量显著减少可能是导致关节骨质破坏的重要原因,提示关节局部应用OPG治疗有可能改善受累关节的骨     

雷公藤多甙对胶原诱导关节炎大鼠的治疗作用及其作用机制

目的探讨雷公藤多甙对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)动物模型,胶原诱导关节炎(collagen induced arthritis,CIA)大鼠血清炎症因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumornecrosis factor-α,TNF-α)、血管内皮生长因子(vascuoar endothelial cell growth factor,VEGF)、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMP)-1、2、9表达的影响,及对成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)ERK信号转导通路的影响,研究雷公藤多甙治疗RA的可能机制。方法采用Ⅱ型胶原建立CIA大鼠模型;观察雷公藤多甙治疗后模型大鼠关节肿胀情况,用免疫组化法观察大鼠关节炎症及滑膜微血管密度;用Western blot法检测CIA大鼠血清IL-1β、TNF-α、VEGF、MMP-1、2、9的表达,并用胶原酶消化法分离培养正常大鼠及CIA大鼠原代FLS;用Western blot法检测不同浓度雷公藤多甙治疗后CIA大鼠FLS中ERK和p-ERK的表达。结果 CIA大鼠造模成功,雷公藤多甙治疗能降低CIA大鼠血清炎症因子及血管新生相关因子表达(P0.05);免疫组化结果显示雷公藤多甙能抑制CIA大鼠关节滑膜血管新生(P0.05);不同浓度雷公藤多甙对FLS中ERK蛋白表达无明显影响,但可降低FLS的p-ERK表达(P0.05)。结论雷公藤多甙对CIA大鼠抗炎及抑制血管新生的作用可能与调节ERK信号转导通路有关。     

Wnt/β-catenin抑制剂DKK1调控类风湿关节炎的研究进展

正类风湿关节炎(RA)是一种自身免疫炎症性疾病~([1])。Wnt通路通过调节细胞的各个功能,如生长、发育、增殖、分化和凋亡,同时参与调控成骨、软骨、滑膜和关节生理学等多方面的代谢调节。随着对Wnt信号通路的深入研究,发现此信号途径在RA患者成纤维样滑膜细胞(FLS)异常激活和增殖、成骨/破骨细胞平衡失调、软骨破坏和骨钙流失中发挥着及其重要的作用~([2])。近年来,内源性Wnt通路的负调控蛋白如     

α1抗胰蛋白酶在强直性脊柱炎患者滑膜组织中表达的研究

目的 观察α1抗胰蛋白酶(ATA1)在强直性脊柱炎(AS)滑膜组织中的表达分布,并探讨编码该蛋白的基因对AS的遗传效应.方法 选用8例AS,9例类风湿关节炎(RA)和9例骨关节炎患者关节滑膜样本,用蛋白免疫印迹定量分析ATA1的表达水平,用免疫组织化学法定位ATA1在滑膜组织中表达分布.分别选用32例AS、RA、骨关节炎滑液样本分析ATAl在滑液中的表达水平.选用56例AS血液样本,260例RA和160名健康者样本作对照,用水解探针法对标签单核苷酸多态性位点(SNP)(rs2753934,rs2749531和rs6575424)进行基因分型.采用单因素方差分析、LSD检验和x2检验进行统计分析.结果 与RA、骨关节炎滑膜比较,ATA1在AS滑膜中呈高表达,表达率为100％.同样,ATA1在AS滑液中表达量(1.6±0.6)也高于RA(1.4±0.5)和骨关节炎(1.2±0.5)的表达量(P＜0.05).基因分型发现ATAl SNP与AS和RA无明显关联(P＞0.05).单体型分析没有检测到与AS相关的或与RA相关的单体型.结论 ATA1在AS滑膜组织中高表达,提示ATA1及关节滑膜在AS发病过程中起重要作用.