小鼠感染弓形虫Prugniaud株后的组织病理学变化

目的观察ICR小鼠感染Prugniaud株弓形虫后的症状和组织病理学动态变化。方法 46只ICR小鼠随机分为感染组(30只)和对照组(16只),感染组小鼠经腹腔注射弓形虫Prugniaud株包囊(10个/鼠,悬于0.5 ml PBS中),对照组小鼠注射等量PBS。每天观察小鼠发病情况,并于感染后第5、10、15、20、25、30、60和90天,分别处死感染组小鼠3只和对照组小鼠2只,取小鼠肝、脾、肺、肾、心和脑组织制作切片,HE染色和免疫组织化学检测。结果感染组小鼠于第6天开始出现食欲减退、耸毛、抖动和腹泻等症状,死亡率为20.0%。HE染色镜检发现第5天至20天,肝组织结构破坏,少数肝细胞水肿,气球样变和小灶性肝细胞坏死,肝窦扩张充血伴有炎症细胞浸润等;脾脏可见脾小体破坏、消失,脾窦扩张充血,红髓增宽白髓萎缩等。肺组织结构破坏,出现间质性肺炎等病理改变。感染第20天后上述组织病理变化逐渐减轻至恢复。脑组织从感染第10天起出现神经元变性、坏死,第15天~90天出现神经胶质结节、血管袖套现象和珠网膜下腔炎症细胞浸润等,并可见弓形虫包囊,第90天珠网膜下腔内见肉芽组织。免疫组织化学法检测结果显示,感染第5天内脏器...     

PRU株弓形虫感染小鼠后脑组织免疫病理的研究

目的了解弓形虫PRU株感染小鼠后脑内局部细胞因子对脑组织的免疫病理作用。方法 51只ICR小鼠分为感染组(33只)和对照组(18只),感染组经腹腔注射弓形虫PRU株10个包囊/鼠,对照组腹腔注射同等量的PBS。于感染后第5d、10d、15d、20d、30d和90d,剖杀感染组小鼠5只和对照组小鼠3只,取脑组织,部分作病理切片;部分提取其RNA,检测IFN-γ、IL-4、IL-6和TNF-αmRNA;部分获取脑组织上清液,用ELISA法测定上述细胞因子。结果相对于正常对照组,感染小鼠脑组织中IFN-γ于感染后第5d开始升高,第10d时下降达到最低,之后开始上升;TNF-α在感染第10d或15d时明显降低,接着上升并于第30d时达到高峰;IL-6在感染第5d时开始升高,感染第10d时降至最低,之后缓慢上升,并于第30d后达到高峰;IL-4未见明显变化。结论弓形虫PRU感染ICR小鼠的过程中,脑组织中IFN-γ、IL-6和TNF-α细胞因子在感染第10d或15d的低表达有利于弓形虫逃避宿主的免疫杀伤作用,导致速殖子在脑组织中存活;同时细胞因子的分泌不平衡,导致小鼠脑组织中出现弓形虫包囊与病理变化共存的隐性感染状态。     

弓形虫慢性感染对小鼠脑内葡萄糖代谢影响的研究

目的探讨弓形虫慢性感染对小鼠脑内葡萄糖代谢的影响。方法将30只SPF级ICR小鼠随机分成弓形虫感染组和正常对照组,感染组每只小鼠口服感染弓形虫PRU株包囊悬液0.3m（l含包囊10个）,对照组口服0.3ml生理盐水。小鼠感染弓形虫6个月后,应用MicroPET扫描脑内葡萄糖代谢,结束后解剖小鼠进行脑组织病理学观察。结果与正常对照组小鼠相比,弓形虫慢性感染6个月后,＂无症状＂的感染小鼠脑内葡萄糖代谢均显著下降,脑组织中可见大小不一、数量不等的包囊,脑膜下有大量淋巴细胞浸润、血管充血、小血管淋巴细胞袖管形成。结论弓形虫慢性感染可造成宿主脑内葡萄糖代谢下降,神经元变性或细胞丢失。     

PRU株弓形虫包囊感染小鼠模型的建立

目的建立一个合理、经济的弓形虫包囊小鼠感染模型,为弓形虫的相关研究提供参考。方法 20个PRU株弓形虫包囊分别感染C57BL/6J、ICR、KM或BALB/c四个品系雌性小鼠10只,感染后42d,统计小鼠存活率、脑组织包囊数和包囊直径。结果 KM小鼠存活率100%(10/10),ICR小鼠存活率70%(7/10),C57BL/6J存活率10%(1/10),BALB/c全部死亡(0/10);ICR小鼠包囊数和包囊直径与KM小鼠相比具有显著性差异(P0.01):ICR鼠脑组织包囊数为1385.71±378.555,直径为4.044±0.187μm;而KM鼠脑组织包囊数为290.00±129.743,直径为3.557±0.271μm。结论与其他3个品系小鼠相比,ICR小鼠对PRU株弓形虫包囊的抗性较强,可以作为弓形虫包囊感染模型。     

PCR法评价泼尼松龙诱导弓形虫隐性感染小鼠的复发及阿奇霉素对复发的疗效

目的探讨PCR方法诊断泼尼松龙诱导弓形虫隐性感染小鼠复发的敏感性及阿奇霉素对其复发的治疗效果。方法36只20g左右的雌性ICR小鼠以每组6只随机分成正常组（C）、泼尼松龙组（P）、感染弓形虫组（I）、感染弓形虫＋阿奇霉素组（IA）、感染弓形虫＋泼尼松龙组（IP）、感染弓形虫＋泼尼松龙组＋阿奇霉素组（IPA）。0周,I组、IA组、IP组和IPA组小鼠分别经腹腔注射感染Prugniaud株弓形虫包囊10个/只;第6～7周,P组、IP组、IPA组小鼠每只每天后肢内侧皮下注射盐酸泼尼松龙1mg,IA组、IPA组小鼠每只每天按250mg/kg剂量腹腔注射阿奇霉素。分别在0、1、2、3、4、5、6、7周对各组小鼠采血,并萃取全血DNA,通过PCR法扩增弓形虫特异性B1基因。第7周剖杀所有小鼠计数其脑组织弓形虫包囊数。结果相比AF14652基因引物,B1基因引物敏感度更高且特异性好;感染弓形虫前5周的小鼠可以通过PCR方法扩增到B1基因特异性产物,5周后PCR法未能扩增出特异性产物;感染弓形虫激素组（IA）小鼠在使用泼尼松龙2周后小鼠全部死亡,感染弓形虫激素治疗组（IP）小鼠死亡率低（P〈0.05）;相比感染组（I）和感染＋阿奇霉素组（IA）和感染＋泼尼松龙＋阿奇霉素组（IPA）,感染＋泼尼松龙组（IP）小鼠脑组织包囊个数显著增加（P〈0.01）。结论在PCR方法诊断中,B1基因是很好的诊断弓形虫病的目的基因;泼尼松龙能诱导弓形虫隐性感染小鼠的复发并导致小鼠的死亡;阿奇霉素对弓形虫病治疗有效,但不能完全治愈弓形虫病。     

CD4^＋CD25^＋T调节细胞参与感染弓形虫小鼠免疫应答调节的研究

目的观察弓形虫Prugniaud成囊株感染ICR小鼠后脾脏单个核细胞中不同T细胞亚群的比例在感染后不同时期的动态变化。方法用10个Prugniaud株弓形虫包囊以腹腔接种方式感染ICR小鼠，在小鼠感染前及感染后的1W，2W，3W，5W随机取6只小鼠，采用流式细胞仪对小鼠脾脏单个核细胞中Th1型和Th2型细胞及CD4^＋CD25^＋调节性T细胞比例变化进行动态检测。结果小鼠感染弓形虫后，Th1型细胞比例在感染后第1W一过性降低，后急剧升高，进入慢性感染期后又有所下降。Th2型细胞整个试验过程中呈现和Th1型细胞大致相反的变化趋势。CD4^＋CD25^＋T细胞在急性感染期，呈现和Th1型细胞相反的比例变化。结论CD4^＋CD25^＋调节性T细胞可能参与了弓形虫急性感染期的免疫抑制。     

弓形虫Chinese 1基因型Wh6弱毒株感染小鼠抗强毒株致死性感染的免疫保护作用

目的 研究我国流行的优势基因型Chinese 1弱毒Wh6株感染抗致死性强毒Wh3株攻击感染的保护力,探讨其潜在的制备减毒活疫苗的价值。方法 将30只BALB/c雌性小鼠随机分为3组(I,II,III组),每组10只。取弱毒株弓形虫保种小鼠脑组织,分离包囊,计数。I组小鼠灌胃包囊25-35个;II组给与PBS对照;III组正常小鼠不予任何干预。35 d后,I组感染小鼠脑组织压片镜检,查见典型弓形虫包囊,表明慢性弓形虫感染BALB/c小鼠模型建立成功。分别取Wh3株速殖子(3 000个),腹腔感染I组和II组小鼠,观察小鼠存活及腹腔虫荷;同时剖杀小鼠,收集脾细胞培养上清,采用流式细胞术、荧光定量PCR、酶联免疫吸附试验等检测脾细胞中的Th1、Th2细胞因子水平。结果 II组对照鼠在感染Wh3株弓形虫速殖子后第7 d内死亡5只,第8 d剩余5只全部死亡,随机取3只死亡小鼠对其腹腔进行计数,计数结果为(1.28±0.035 1)×10⁶/mL;而I组小鼠截止实验结束全部存活(P<0.01)。II组鼠脾细胞培养上清Th1细胞因子IFN-γ、IL-12和Th2细胞因子IL-10水平相比I组显著升高(P<0.001)。其中Th1细胞因子升高程度明显高于Th2细胞因子,巨噬细胞向Th1方向极化。结论 用弱毒株Wh6包囊攻击感染BALB/c鼠,可诱导强力的抵抗Wh3强毒株致死性感染的免疫保护力。Chinese 1基因型Wh6株具有候选减毒活虫疫苗研究的潜在价值。     

刚地弓形虫China 1基因型成囊株在小鼠体内的动态分布

目的观察流行我国的刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)主要基因型China 1成囊株在感染小鼠体内的动态分布和包囊形成。方法采自武汉的猫源性刚地弓形虫株(TgCtwh1,基因型为China 1,即ToxoDB#9)包囊50个(约含1×104个缓殖子)经口感染SPF级CD1雌性小鼠50只,于感染后第2、4、7、10、14、21、35、50和72天,分别大体观察小鼠健康状况并测定体重;颈椎脱臼法处死小鼠,脑组织压片观察弓形虫包囊形成时间,计算成囊率,测量包囊直径;荧光定量PCR和组织接种方法检测弓形虫在血液、心、肝、脑和淋巴结组织中的动态分布。结果实验小鼠感染后第7天体重减轻(3.650±0.252)g;第10天[(1.730±0.017)g]与第14天体重差值[(-0.390±0.554)g]比较,有统计学意义(P<0.05)。感染后第21天,在脑组织中查获包囊,成囊率为80%,直径为20～40μm;至感染后第35天,小鼠成囊率增为100%,包囊直径为50～60μm。感染后第2天,TgCtwh1虫体即出现在血液、心、肝和淋巴结组织中,拷贝数分别为3.510±0.152、4.100±0.198、4.220±0.209和4.960±0.052,感染后第4天见于脑组织(3.800±0.154);血液中的虫体在第7天达峰值(5.240±0.115),随后逐渐下降,至第35天消失;心和脑组织中的虫体分别于第14天和第10天达峰值后(5.640±0.214和5.790±0.060)维持相对稳定的水平;肝和淋巴组织中的虫体分别于第7天和第10天达峰值(5.310±0.038和6.200±0.152),此后虫体逐渐减少,至第50天转阴。结论流行中国的弓形虫China 1基因型成囊株在感染小鼠体内虫血症可持续至少21 d,感染后第21天首次在小鼠脑组织内检测到包囊。     

弓形虫慢性感染小鼠脑内包囊分布的研究

目的观察弓形虫包囊在慢性感染小鼠不同脑组织内的分布情况。方法以AH株弓形虫包囊腹腔感染小鼠20只,饲养3月后取小鼠脑组织,分离出大脑皮层、海马、中脑、小脑和脑干各部分,逐一称重,用PBS液制备成脑组织匀浆(体积均为2 ml)。从每只小鼠的每种脑组织匀浆中各吸取30μl匀浆液,涂片3张,每张10μl,瑞氏染色,显微镜下(10×40)计数弓形虫包囊个数,并用方差分析比较单位浓度(mg/ml)不同脑组织的匀浆液所含包囊的个数有无显著性差异。结果单位浓度(mg/ml)不同脑组织的匀浆液所含包囊的数量有显著性差异(P<0.01),海马和大脑皮层处最多,脑干和小脑处最少。结论弓形虫包囊在慢性感染小鼠不同脑组织内的分布有显著性差异,主要集中于海马和大脑皮层处。     

隐性弓形虫感染小鼠的学习记忆能力障碍研究

目的应用物体识别试验和Morris水迷宫试验检测隐性弓形虫感染小鼠的学习记忆能力。方法 36只昆明小鼠随机分为对照组、低剂量弓形虫包囊感染组(低感染组)和高剂量弓形虫包囊感染组(高感染组),每组12只,低感染组和高感染组每鼠分别经口感染弓形虫Prugniaud(PRU)弱毒株6个和12个包囊。感染后第63天进行物体识别试验,通过第1天的适应期和第2天的熟悉期,于试验第3天记录小鼠对新旧不同物体的探究时间,计算分辨指数(DI)。感染后第66天进行Morris水迷宫试验,分别通过定位航行试验、空间搜索试验和工作记忆试验检测各组小鼠的空间记忆获得能力、空间记忆保持能力和工作记忆能力。于水迷宫试验结束当天,即感染后第74天处死小鼠,取左侧脑组织固定,切片,伊红-苏木素染色后,镜下观察病理改变。右侧脑组织用于检测超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。结果物体识别试验结果显示,高感染组和低感染组小鼠的分辨指数分别为(14.3±5.2)%和(17.5±5.6)%,均显著低于对照组[(28.9±7.1)%](P<0.01)。在定位航行试验中,两个弓形虫感染组小鼠找到平台的逃避潜伏期均长于对照组,其中试验第2天和...     

A protective role for IL-6 during early infection with Toxoplasma gondii

IL-6 deficient mice were found to be signifcantly more susceptible to peroral infection with Toxoplasma gondii than their wild-type counterparts as measured by survival, brain cyst burdens and brain pathology at 28 days post-infection. The physical manifestations of disease, such as weight loss, were not observed in IL-6 deficient animals until at least seven days later than such changes occurred in wild-type mice. During this early stage of infection IL-6+/+ but not IL-6−/− mice mounted a peripheral blood neutrophilia. Furthermore, between 6–8 days post-infection there was a significant increase in plasma IFN-γ levels in wild-type but not IL-6 deficient mice. Not until days 18–23 post-infection, concurrent with the majority of deaths in IL-6−/− mice, were plasma IFN-γ levels substantially and significantly raised in IL-6−/− mice. At this time not only were these plasma IFN-γ levels 20-fold higher than background but eight-fold greater than peak (6–8 days post-infection) IFN-γ levels in IL-6+/+ mice. IFN-γ dependent parasite specific IgG2a levels were also significantly higher in IL-6−/− mice over this period and thereafter. Overall the evidence suggests that in the absence of IL-6 mice are unable to initiate a rapid proinflammatory response against T. gondii , which allows increased parasite growth. Increased mortality in IL-6−/− mice may be directly due to this increased parasite burden and the excessive inflammatory response this induces three weeks post-infection .     

sag5b:一种用于鉴别弓形虫虫株毒力的新基因(英文)

目的本文作者比较了强毒株(RH)弓形虫与弱毒株(Prugniaud)基因组中一种可能成为基因标志物的基因片断——sag5b的差异。PCR扩增出的sag5b片断依次亚克隆进入T-easy载体以及pET28a表达载体。融合基因经过IPTG诱导表达出目的蛋白,并通过SDS-PAGE和Western blotting鉴定正确。证明表达出来的重组蛋白与强毒株弓形虫细胞膜上的天然蛋白有相同的免疫反应性。将感染了Prugniaud的小鼠脑组织取出并匀浆,以该脑组织为模板,分别用sag1和sag5b的引物来引发,结果发现sag1可以扩增出来而sag5b的扩增结果是阴性的。该结果提示sag5b可以作为鉴别弓形虫虫株毒力的基因标志。将该毒力相关基因的表达产物免疫小鼠并没有使小鼠获得明显的可以抵抗强毒株攻击的免疫保护性。     

大蒜素、美浓霉素对小鼠脑内弓形虫包囊形成的影响

目的　观察大蒜素、美浓霉素对小鼠脑内弓形虫包囊形成的影响。方法　将弓形虫Fukaya株包囊腹腔注射感染小鼠 ,分别用大蒜素、美浓霉素治疗 ,设置不治疗对照组 ,45d后处死小鼠 ,观察脑内包囊数 ,以判断药物效果。结果　急性期用大蒜素能明显提高小鼠脑内包囊数 ;美浓霉素可杀灭弓形虫速殖子而使脑内包囊数明显减少 ;包囊形成后大蒜素、美浓霉素均无杀灭包囊的作用。结论　初步认为大蒜素可提高弓形虫包囊的收获量 ;美浓霉素对弓形虫包囊无作用     

Influence of genes within the MHC on mortality and brain cyst development in mice infected with Toxoplasma gondii: kinetics of immune regulation in BALB H-2 congenic mice

Previous work has shown that genes within the major histocompatibility complex (MHC) of the mouse influence resistance and susceptibility to Toxoplasma gondii infection. Initial studies presented here using B10 H-2 congenic and recombinant haplotype mice inoculated via the oral route with the low virulence Beverley strain of T. gondii confirm the D region localization of MHC-linked control of brain cyst number. All B10 mice were, however, exquisitely sensitive to minor changes in virulence of the parasite inoculum resulting in high mortality during the early acute phase of infection. Further experiments examining mortality and brain cyst number in BALB MHC congenic mice inoculated via different routes indicated that the BALB background would provide a more favourable genetic environment in which to analyse kinetics of MHC controlled immune regulation following infection via the natural (oral) route. In studies comparing d and k haplotype mice a dramatic inverse relationship between splenic CD4:CD8 T cell ratios and brain cyst number was observed, particularly in the strain (BALB/K; H-2^k) most susceptible to high brain cyst numbers and subsequent toxoplasmic encephalitis. Of particular interest was the observation that splenomegaly and the relative increase in the splenic CD8 T cell population preceded and accompanied the very dramatic and rapid increase in brain cyst formation. The results suggest that the too rapid development of a potent anti-parasite response in the viscera may drive the parasite to encyst in the brain.     

Kinetics of the nucleoside triphosphate hydrolase of Toxoplasma gondii in mice with acute and chronic toxoplasmosis

The kinetics of the nucleoside triphosphate hydrolase (NTPase) of Toxoplasma gondii was examined using an avidin-biotin sandwich-ELISA (ABS-ELISA) based on an anti-NTPase monoclonal antibody, 6C6. The RH and ME49 strains of the parasite were used to produce acute and chronic infections in mice, respectively. In the acute model, detectable serum concentrations of NTPase were observed from day 1 post-infection and gradually increased until the death of the mice. They were associated with parasitaemia (as estimated by bioassay). No anti-T. gondii antibody could be detected at any time. In the chronic model, in which 20 T. gondii ME49 cysts were given to each mouse per os, the NTPase concentration generally increased from day 3, peaked between days 7 and 14 and then declined. However, one of the four mice used still had a high serum concentration of NTPase on day 35. Again, detectable NTPase concentrations occurred when the mice had parasitaemias. Antibody to T. gondii was detected from day 7 (IgM) or 10 (IgG) and brain cysts were observed from day 14. Since detectable serum concentrations of NTPase appear to be associated with parasitaemia in both acute and chronic toxoplasmosis, the ABS-ELISA of the enzyme may make a useful diagnostic tool.     

不同途径感染弓形虫小鼠在脑内形成包囊的研究

目的用3种不同途径感染Fukaya株弓形虫速殖子,观察弓形虫感染小鼠慢性期病变特点及虫体在脑内的成囊过程,以期寻求一个稳定、易建的慢性感染动物模型,为弓形虫病的病理诊断提供依据,并对弓形虫的致病机理加深理解。方法弓形虫Fukaya株速殖子(5×104个)分别以腹腔、皮下和口服途径感染小鼠,给适量药物使之形成慢性感染,并与不给药组做对照,于感染后第3d、6d1、4d2、1d、28d、42d和90d,取脑进行间接免疫酶染色,统计脑内虫体数量及形成包囊情况。结果不给药组第3d、6d与给药组第6d,3种感染途径的腹腔含虫数比较:均为腹腔感染>皮下感染>经口感染。比较小鼠脑内虫体分布:腹腔感染组,第28d的脑内虫体达到高峰,此时脑内包囊最多。皮下感染组,第21d的脑内虫体最多,脑内包囊也多。经口感染组,第21d脑内虫体最多,但脑内偶见包囊。经口感染Fukaya株速殖子似不易成囊。经腹腔、皮下和口服感染虫体的小鼠存活率在第42d分别为100%、66%、80%。结论弓形虫感染慢性期小鼠脑多被累及。腹腔与皮下感染弓形虫Fukaya株速殖子比口服易成囊,经腹腔感染方式建立弓形虫慢性感染动物模型较稳定。