miR-7-5p调控NF-κB/RelA信号通路对Ⅱ型肺泡上皮细胞间质转化的作用机制研究

目的探讨miR-7-5p对Ⅱ型肺泡上皮细胞(A549细胞)间质转化的影响及其作用机制。方法10 ng/mL TGF-β1处理A549细胞12 h、24 h和48h后,利用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,RT-qPCR)检测细胞中miR-7-5p和RelA的表达量,Western blot检测EMT相关蛋白E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的表达量;过表达或下调miR-7-5p后,Transwell实验检测miR-7-5p对A549细胞侵袭的影响;细胞划痕愈合实验检测miR-7-5p对A549细胞迁移的影响;Western blot检测miR-7-5p对A549细胞内E-cadherin、N-cadherin、Vimentin表达和NF-κB通路的影响;TargetScan预测miR-7-5p和RelA的靶向关系,双荧光素酶报告基因实验分析miR-7-5p和RelA之间的关系;RT-qPCR和Western blot检测过表达或下调miR-7-5p对RelA的影响。检测下调RelA表达后,A549细胞的侵袭、迁移和EMT能力。结果10 ng/mL TGF-β1处理A549细胞12 h、24 h和48h后,E-cadherin表达明显下调(P<0.01),N-cadherin和Vimentin表达明显上调(P<0.01),miR-7-5p表达明显降低(P<0.01),RelA表达明显升高(P<0.01)。过表达miR-7-5p抑制了A549细胞侵袭、迁移与EMT,p-TAK1/TAK1和NF-κB p-p65/NF-κB p65比值明显降低,下调miR-7-5p则起到促进作用;miR-7-5p靶向且负调控RelA表达;下调RelA抑制了A549细胞侵袭、迁移与EMT。结论miR-7-5p调控NF-κB/RelA信号通路促进A549细胞的上皮间质转化。     

Nr4a1拮抗剂抑制肺癌细胞的上皮-间质转化的作用机制

目的观察Nr4a1拮抗剂在αVβ6-ERK-ETS1通路中抑制肺癌细胞上皮-间质转化的作用。方法培养传代肺癌A549细胞系,分为实验组及对照组,两组均采用生长因子诱导上皮-间质转化过程,实验组采用Nr4a1拮抗剂阻断αVβ6-ERK-ETS1通路,对照组不采用拮抗剂,采用流式细胞术及Western印迹检测信号通路中相关蛋白表达水平。结果形态学上,实验组组细胞呈梭形或类似于成纤维细胞的形态,而对照组部分细胞呈圆形或卵圆形。Western印迹及流式细胞检测均发现对照组细胞上皮细胞标志物E-cadherin、γ-catenin及αvβ6表达均较处理前显著降低,而间质细胞标记物Nβ-cateinin、Vimentin表达则有不同程度升高(P<0.05)。结论 Nr4a1拮抗剂能够通过αVβ6-ERK-ETS1通路抑制肺癌细胞的上皮-间质转化。     

沙利度胺对肺泡上皮细胞上皮-间质转分化的作用

目的探讨沙利度胺对A549上皮-间质转分化的作用,阐明其抗肺纤维化的机理。方法 A549细胞分为3组,A:对照组;B:TGF-β1+DMSO组;C:TGF-β1+沙利度胺组。通过免疫印迹法检测A549细胞磷酸化p38 MAPK和JNK的蛋白,以及间质表型蛋白和上皮表型蛋白的表达;实时荧光定量PCR方法检测A549细胞p38 MAPK和JNK mRNA的表达。结果沙利度胺显著抑制(P0.05)TGF-β1诱导的A549细胞间质表型蛋白表达增加,可阻止(P0.05)A549细胞上皮表型蛋白表达的减少,显著减少活性MAPK蛋白及mRNA的表达(P0.05)。结论沙利度胺可能通过p38MAPK和JNK信号通道,从而抑制肺泡上皮细胞的上皮-间质转分化过程而发挥抗纤维化作用。     

非诺贝特联合顺铂对A549细胞上皮—间质转化及迁移侵袭能力的影响

目的 探索过氧化物酶体增殖因子激活受体α激动剂非诺贝特联合顺铂对人肺癌A459细胞上皮—间质转化及迁移侵袭能力的影响.方法 在体外分别采取单用非诺贝特,顺铂及两者联合干预A549细胞48h后,MTT比色法检测非诺贝特联合顺铂对A549细胞增殖的影响,细胞划痕实验和侵袭小室法检测对A549细胞迁移及侵袭运动能力的影响,RT-PCR和Westem blot实验检测上皮—间质转化相关因子E-cadherin的表达变化.结果 与阴性对照组相比,非诺贝特和顺铂单用与联合均能抑制A549细胞的增殖,减弱A549细胞的迁移侵袭运动能力,同时上调E-cadherin mRNA及蛋白水平的表达,其联合组的效果优于单用组(P＜0.05).结论 非诺贝特联用顺铂能够抑制A549细胞的生长,降低A549细胞的迁移侵袭运动能力,阻止A549细胞发生上皮—间质转化,其机制可能与增加E-cadherin的水平相关.     

ROCK抑制剂Y-27632对TGF-β1介导的A549细胞上皮—间质转化的抑制作用

目的 探讨Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶（ROCK）抑制剂Y-27632对转化生长因子-β1（TGF-β1）介导的A549细胞上皮一间质转化（EMT）的抑制作用.方法 将常规培养并传代的非小细胞肺癌A549细胞分为3组,分别为对照组、TGF-β1组（用TGF-β1诱导A549细胞发生EMT）、Y-27632组（对发生EMT的A549细胞行Y-27632干预）.采用MTr法检测各组细胞增殖情况;细胞划痕实验检测细胞迁移能力;免疫细胞化学染色法检测波形蛋白、α-平滑肌肌动蛋白（ot-SMA）表达;Western blot法检测E-钙黏蛋白、波形蛋白、α-SMA、ROCK、血清应答因子（SRF）、心肌相关转录因子（MATF-A）表达.结果 与对照组比较,TGF-β1组能诱导A549细胞发生EMT,伴有迁移能力提高、E-钙黏蛋白表达下调,以及波形蛋白、α-SMA、ROCK、SRF、MATF-A表达上调（P均＜0.05）;Y-27632组能显著抑制上述变化（P均＜0.05）.结论 Y-27632能通过阻断ROCK蛋白表达,抑制TGF-β1介导的A549细胞发生EMT,并抑制其迁移能力.     

miR-138-5p对高糖诱导的人肾小管上皮细胞间充质转化的影响

目的研究miR-138-5p对高糖诱导的人肾小管上皮细胞间充质转化(EMT)的影响。方法将HK-2细胞分为正常组(NG,5mmol/L D-葡萄糖)、高糖组(HG,30mmol/L D-葡萄糖)、HG+miR-138-5p抑制剂转染组及HG+抑制剂对照转染组。RT-PCR检测高糖处理对miR-138-5p表达的影响;Western blot检测平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、上皮钙黏素(E-cadherin)、同源盒蛋白A13(HOXA13)、骨形成蛋白7(BMP-7)、转化生长因子β1(TGF-β1)和Smad7等的表达;荧光素酶活性实验检测miR-138-5p与HOXA13的靶向关系。结果高糖刺激后,miR-138-5p表达升高约1.5倍(P0.05),α-SMA表达升高1.8倍,而E-cadherin表达下降;高糖促进TGF-β1的表达,抑制HOXA13、BMP-7和Smad7的表达(P0.05)。miR-138-5p抑制剂转染组α-SMA和E-cadherin的表达均接近NG组,且miR-138-5p抑制剂转染组TGF-β1表达下降约1.1倍,同时HOXA13、BMP-7和Smad7表达升高(P0.05)。结论抑制MiR-138-5p表达可通过靶向调节HOXA13的表达,提高BMP-7和Smad7水平,抑制TGF-β1信号通路,进而抑制高糖诱导的HK-2细胞EMT的发生。     

p38 MAPK和JNK信号通道在TGF-β1诱导的肺泡上皮细胞上皮-间质转化中的意义

目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）和c-Jun氨基端激酶（JNK）信号通道在转化生长因子β1 （TGF-β1）诱导的人肺泡上皮细胞上皮-间质转化（epithelial to mesenchymal transition,EMT）中的意义,从而进一步揭示肺纤维化的发病机制.方法 使用TGF-β1诱导A549细胞EMT,分别在蛋白水平（使用p38 MAPK抑制剂SB203580和JNK抑制剂SP600125）和RNA水平（RNA干扰）抑制p38 MAPK和JNK信号通道,检测抑制后A549细胞的p38 MAPK和JNK的蛋白和mRNA,以及间质细胞表型蛋白包括结蛋白、波形蛋白、α-平滑肌肌动蛋白和上皮细胞表型蛋白包括E-钙黏素、紧密连接蛋白-1、水通道蛋白-5的表达.结果 TGF-β1可以诱导A549细胞EMT,表现为间质细胞表型蛋白表达的增加和上皮细胞表型蛋白表达的减少,这一过程p38 MAPK和JNK通道表达也增加,无论蛋白水平抑制或基因沉默p38 MAPK和JNK均可减轻A549细胞的EMT.结论 p38 MAPK和JNK信号通道在TGF-β1诱导的A549细胞EMT过程中起重要作用.     

TLR2、TLR4在肝细胞EMT现象中的表达

目的 TLR2与TLR4在大鼠肝细胞EMT现象中的表达。方法常规分离大鼠肝细胞后,以TGF-β刺激,诱导肝细胞上皮-间质转化,RT-PCR检测TLR2与TLR4在其中的表达变化。结果 TGF-β刺激细胞后细胞的形态发生了变化,RT-PCR结果显示TGF-β刺激的细胞E-cadherin mRNA表达下降(P0.15),vimentin mRNA表达上升(P0.05)。TLR2mRNA表达升高(P0.05),TLR4mRNA表达变化差异无统计学意义。TLR2mRNA与vimentin mRNA相对表达量呈线性正相关(r=0.804,P0.05),与E-cadherin mRNA相对表达量呈线性负相关(r=-0.879,P0.05)。结论肝细胞EMT现象中TLR2的表达升高,与肝细胞EMT标记物的表达有一定的相关性,提示TLR2可能促进肝细胞的EMT过程。     

Kruppel样因子8通过转化生长因子-β1介导的上皮间质转化促进胃癌细胞的侵袭转移

目的探讨在人胃癌细胞中Kruppel样因子(KLF)8是否参与了转化生长因子(TGF)-β1介导的上皮间质转化(EMT)作用促进胃癌细胞侵袭转移。方法 TGF-β1处理胃癌细胞SGC7901和MKN45后,采用Western印迹和实时定量荧光PCR(qRT-PCR)检测细胞中KLF8、上皮标志蛋白——钙黏附蛋白E(E-cadherin)和间质标志蛋白——波形蛋白(Vimentin)表达水平;采用小干扰RNA(siRNA)技术降低胃癌细胞MKN45中KLF8的表达水平,细胞侵袭试验和划痕试验检测细胞的体外侵袭和迁移能力,并且采用高内涵细胞分析试验检测细胞的运动速度。结果在胃癌细胞株中,TGF-β1刺激后,能够下调E-cadherin和上调Vimentin的表达,进而促进细胞发生EMT;进一步研究发现,在胃癌细胞MKN45中,TGF-β1能够增加KLF8 mRNA和蛋白表达水平(P0.05);Western印迹和qRT-PCR实验发现,siRNA干扰KLF8表达后,能够阻断TGF-β1诱导的EMT,进而部分逆转了E-cadherin的降低和Vimentin的升高;同时,抑制KLF8后,能够降低TGF-β1促进的细胞侵袭、迁移和运动能力。结论在胃癌细胞中,KLF8参与了TGF-β1诱导EMT过程,并且有可能成为胃癌治疗中的新治疗靶标。     

TGF-β1诱导的肺泡上皮细胞间质转化及其机制探讨

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的肺泡上皮细胞-间质细胞转化(EMT)过程及信号传导通路。方法体外培养肺腺癌细胞系A549细胞,以TGF-β1进行干预;采用Western blot免疫印迹法检测干预前后细胞标志物蛋白及信号传导蛋白P-Smad2/3、Snail1、Snail2的表达;采用RT-PCR检测干预前后细胞标志物mRNA表达;采用倒置相差显微镜观察细胞形态学变化。结果 TGF-β1干预后,随着时间的延长,A549细胞上皮细胞标志物E-cad和CK19蛋白及mRNA表达下调(P0.05);间质细胞标志物α-SMA、Vimentin蛋白及mRNA表达上调(P0.05);信号传导蛋白P-Smad2/3、Snail1表达上调(P0.05);倒置相差显微镜观察TGF-β1干预后A549细胞由干预前的鹅卵石状变为梭形,如同肌纤维母细胞。结论 TGF-β1可诱导肺泡上皮细胞向间质细胞转化,其机制可能与P-Smad2/3、Snail1信号传导通路有关;TGF-β1可能是通过诱导肺泡上皮细胞间质转化的细胞效应,最终导致肺泡上皮细胞凋亡和纤维组织形成。     

miR-605-3p/TRIB3/β-catenin信号通路调控肺癌的发展

目的探讨miR-605-3p是否影响肺癌细胞A549的增殖和细胞活力。方法转染合成的miR-605-3p模拟物过表达miR-605-3p为过表达组,转染合成的miR-605-3p抑制剂敲低miR-605-3p为敲低组,通过CCK-8和MTT检测2组肺癌细胞A549的增殖水平和细胞活力。通过miRDB在线分析miR-605-3p潜在底物,并通过荧光素酶报告实验验证并分析潜在底物的作用。结果过表达组肺癌细胞A549的增殖水平和细胞活力较对照组均下降(t=12.45、15.38,P值均<0.05);敲低组肺癌细胞A549的增殖水平和细胞活力较对照组均上升(t=11.54、8.45,P值均<0.05)。miR-605-3p靶向TRIB3的3′端非编码区(t=17.32,P值均<0.05)。过表达TRIB3后,肺癌细胞A549的增殖水平和细胞活力均上升(t=10.45、9.04,P值均<0.05)。敲低TRIB3后,肺癌细胞A549的增殖水平和细胞活力均下降(t=8.43、17.43,P值均<0.05)。过表达miR-605-3p后,TRIB3的表达下降,β-catenin进入细胞核的量减少;敲低miR-605-3p后,TRIB3的表达上升,β-catenin进入细胞核的量增加。同时敲低miR-605-3p和TRIB3或miR-605-3p和β-catenin,发现肺癌细胞A549的增殖水平和细胞活力差异无统计学意义(t=0.42、0.61,P值均>0.05);过表达TRIB3的同时敲低β-catenin,发现肺癌细胞A549的增殖水平和细胞活力差异无统计学意义(t=0.56、0.21,P值均>0.05)。结论miR-605-3p靶向TRIB3抑制β-catenin的入核水平,抑制肺癌细胞A549的增殖水平和细胞活力。     

S-腺苷甲硫氨酸抑制miR-34a依赖的肺癌转移的作用

目的探讨S-腺苷甲硫氨酸抑制miRNA-34a依赖的肺癌转移机制。 方法选取肺癌细胞A549,分别采用0、50、100、200、500 μM的S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine, SAMe)刺激A549细胞并检测miR-34a以及下游STAT3信号通路的表达情况,同时检测不同刺激条件下A549细胞的侵袭转移情况;实时荧光定量(real-time fluorescence quantification, qPCR)检测miR-34a、E-cadherin、α-catenin、N-cadherin、Vimentin的mRNA表达水平;Western Blot实验检测STAT3、p-STAT3、β-actin的表达水平;Transwell实验检测A549细胞的侵袭能力变化。 结果随着SAMe浓度的增加,miR-34a的表达水平呈梯度增加,与对照组相比,经t检验分析,差异有统计学的意义(P<0.05);Western Blot实验显示,与对照组相比,500 μM SAMe刺激后,下游的p-STAT3蛋白水平下降,总STAT3和内参蛋白β-actin水平不变;qPCR结果显示,随着药物浓度的增加,表皮蛋白E-cadherin、α-catenin的mRNA水平上升,间质蛋白N-cadherin、Vimentin的mRNA水平下降;Transwell实验显示经50、100、200、500 μM的SAMe刺激后,A549细胞的侵袭转移抑制率分别为18.70%、31.24%、47.66%、58.46%,与对照组相比,经t检验分析,差异有统计学的意义(P<0.05)。 结论SAMe可通过抑制miR-34a依赖的下游STAT3信号通路抑制肺癌细胞的侵袭转移,提示SAMe在肺癌侵袭转移过程中发挥重要作用。     

EGFR在TGFβ1诱导Ⅱ型肺泡上皮细胞转分化中的作用

目的探讨表皮生长因子受体(EGFR)在转分化因子β1(TGFβ1)体外诱导Ⅱ型肺泡上皮细胞转分化中的作用。方法体外培养Ⅱ型肺泡上皮细胞系细胞-A549细胞,以TGFβ1刺激,倒置相差显微镜观察细胞形态学的变化;收集不同时段的细胞,应用RT-PCR检测TGFβ1干预前后E-钙黏蛋白(E-cadherin)和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA表达变化;Western blot观察E-cad、α-SMA和信号转导蛋白EGFR表达的变化。结果倒置相差显微镜观察到TGFβ1刺激后A549细胞由鹅卵石状变为梭形,形态如同肌成纤维细胞;TGFβ1刺激A549细胞能导致E-cadherin mRNA和蛋白表达下调;α-SMA mRNA和蛋白表达上调;磷酸化EGFR(p-EGFR)表达上调。结论 TGFβ1能在体外诱导肺泡上皮细胞向间质细胞转分化,其机制与EGFR信号通路的活化相关。抑制EGFR的活化可能为临床防治肺纤维化提供新的途径。     

肺泡上皮细胞间质转化及其信号转导途径在肺纤维化中的作用

目的以TGF-β1诱导A549细胞出现上皮细胞-间质细胞转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）,探讨EMT过程及其信号转导途径在肺纤维化中的作用。方法体外培养A549细胞,以TGF-β1进行干预,收集不同时段的细胞,用荧光实时定量PCR检测上皮及间质细胞标志物的mRNA表达,Western blot检测上皮及间质细胞的标志物以及信号转导蛋白P-Smad2/3、Snail1、Snail2的表达,应用倒置相差显微镜观察TGF-β1干预前后细胞形态学的变化。结果 TGF-β1干预后,A549细胞上皮细胞标志物的mRNA和蛋白表达下调（P〈0.05）,间质细胞标志物的mRNA和蛋白表达上调（P〈0.05）;信号转导蛋白P-Smad2/3、Snail1上调（P〈0.05）,snail2弱表达（P〉0.05）;倒置相差显微镜观察到TGF-β1干预后A549细胞由鹅卵石状变为梭形,形态如同肌纤维母细胞。结论 TGF-β1可以在体外诱导肺泡上皮细胞向间质细胞转化,其机制与Smad 2/3、Snail1信号转导途径相关,提示肺泡上皮细胞向间质细胞的转化是肺纤维化发生的直接原因,而Smad 2/3、Snail1信号转导途径很可能是关键环节。通过诱导或促进肺泡上皮细胞向间质细胞转化,可以促使肺纤维化的发病,而通过阻断这一过程及其下游的信号转导通路有望治疗肺纤维化。     

miR-26b-5p靶向VEGF抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的 探讨miR-26b-5p对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法 培养人正常肺上皮细胞BEAS-2B和非小细胞肺癌细胞A549,通过qPCR检测BEAS-2B和A549细胞中miR-26b-5p和VEGF mRNA的表达水平。通过Western Blot检测BEAS-2B和A549细胞中E-cadherin、Vimentin和VEGF蛋白的表达水平。生物信息学预测VEGF与miR-26b-5p的靶向关系。使用脂质体法将NC-mimic和miR-26b-5p-mimic转染A549细胞,通过CCK8法、EDU实验检测miR-26b-5p对细胞生长的影响;通过划痕实验和Transwell侵袭实验检测miR-26b-5p对细胞迁移和侵袭的影响;通过Western Blot检测对E-cadherin、Vimentin和VEGF蛋白表达的影响。结果 与BEAS-2B细胞相比,在A549细胞中,miR-26b-5p表达水平显著下降(P<0.05),VEGF的mRNA和蛋白表达水平显著上升(P<0.05),E-cadherin蛋白的表达水平显著下降(P<0....     

TGF-β1通过HPIP诱导非小细胞肺癌A549细胞增殖和转移

目的研究TGF-β1通过影响HPIP的表达,对非小细胞肺癌细胞系A549的增殖和转移的作用。方法使用CCK-8检测TGF-β1在不同浓度及不同作用时间下对肺癌A549细胞增殖活力的作用;使用Transwell迁移实验检测TGF-β1对肺癌A549细胞迁移能力的影响;使用qRT-PCR检测不同浓度TGF-β1对Homo sapiens pre-B-cell leukemia homeobox interacting protein 1(HPIP/PBXIP1)基因转录的作用;使用western blot检测不同浓度TGF-β1对HPIP蛋白表达的影响;通过siRNA下调HPIP在A549细胞中的表达量,并检测下调表达后对A549细胞增殖活力及迁移能力的影响,并进一步验证对于TGF-β1促进增殖及促进迁移能力的影响。结果随着TGF-β1浓度的增加,其促进肺癌A549细胞增殖活力的作用逐渐增加;随着TGF-β1作用时间的延长,同样逐渐增加其促进肺癌A549细胞增殖活力的作用;Transwell迁移实验结果显示,TGF-β1可促进肺癌A549细胞的迁移能力;qRT-PCR及western blot结果显示,随着TGF-β1浓度的增加,HPIP的转录及翻译水平逐渐增加;通过siRNA敲低A549细胞中HPIP的表达量,可以显著减弱TGF-β1促进肺癌A549细胞增殖及迁移的能力。结论 TGF-β1具有促进非小细胞肺癌A549细胞增殖及迁移的能力,该作用可能与TGF-β1介导的HPIP表达增加相关。本课题为HPIP作为潜在的非小细胞肺癌治疗靶点提供了一定的理论基础。     

瘦素对人肾小管上皮细胞转分化和转化生长因子-β1表达的影响

目的观察瘦素(LP)对人近端肾小管上皮细胞(HK-2)转分化及与转化生长因子-β1(TGF-βl)表达的影响,探讨其诱导转分化的机制。方法不同浓度LP(10、50、100ng/ml)刺激体外培养的HK-2细胞,以及LP作用不同时间(24、48、72h)进行分组,倒置显微镜下观察细胞形态学变化;RTPCR法和Western blot法检测细胞α-SMA、E-cadherin、TGF-βl、FN的表达水平;ELISA法检测上清中TGF-βl蛋白表达量。抗TGF-βl抗体中和实验分析LP对HK-2细胞转分化及与TGF-βl的关系。结果 (1)LP可使HK-2细胞逐渐由椭圆形变成长梭形,类似肌成纤维细胞的形态;(2)LP可下调E-cadherin的表达,同时上调α-SMA、TGF-βl的表达,其作用呈一定的剂量及时间依赖性;(3)抗TGF-βl抗体能够逆转LP诱导的转分化作用。结论 LP通过诱导HK-2细胞发生转分化,参与肾间质纤维化的发生发展,其作用机制与上调TGF-βl的表达有关。     

miR-526b-3p调控TROAP基因介导Wnt信号通路对非小细胞肺癌细胞增殖与侵袭迁移的影响

目的 探究miR-526b-3p调控滋养素相关蛋白(TROAP)基因介导Wnt信号通路对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖与侵袭迁移的影响。方法 测定人肺泡上皮细胞及NSCLC细胞系A549、HCC827、NCI-H1299中miR-526b-3p及TROAP、Wnt基因的表达水平。将体外培养的A549细胞随机分为对照组、miR-526b-3p mimic组、miR-526b-3p mimic阴性对照组、miR-526b-3p mimic+TROAP过表达组、miR-526b-3p mimic+Wnt过表达组，分组转染后，测定各组细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭、细胞增殖相关基因(Cyclin D1)、凋亡相关基因(Bax、Caspase-3)、上皮间质转化相关基因(E-cadherin、Vimentin)、TROAP基因、Wnt基因及miR-526b-3p表达、细胞Cyclin D1、Bax、Caspase-3、E-cadherin、Vimentin、TROAP及Wnt蛋白表达、miR-526b-3p对TROAP的靶向调控作用。结果 与对照组相比，miR-526b-3p mimic组细胞呈...     

促进PPAR-γ表达对TGF-β1诱导人胰腺癌BxPc-3细胞上皮-间质转化的影响

目的通过促进过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator activated receptor-γ,PPAR-γ)的表达,分析其对TGF-β1诱导人胰腺癌BxPc-3细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)过程的影响。方法培养BxPc-3细胞,予TGF-β1诱导BxPc-3细胞,观察BxPc-3细胞形态学改变,Western blotting检测各组细胞EMT相关标志物,Transwell-matrigel实验检测细胞侵袭能力,建立BxPc-3细胞EMT模型。TGF-β1诱导前加入相应终浓度为5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L的PPAR-γ激动剂罗格列酮预处理,观察细胞侵袭能力的变化;选择20μmol/L、40μmol/L的PPAR-γ激动剂罗格列酮预处理组检测相应的PPAR-γ和EMT相关标志物上皮标记基因E-cadherin蛋白,间质标记基因Vimentin、N-cadherin蛋白的表达。结果 BxPc-3细胞在TGF-β1作用下与对照组相比,其细胞形态逐渐变化为长梭形,出现EMT的特征性形态学改变;TGF-β1组穿膜细胞数较对照组差异有统计学意义(P0.05);且TGF-β1组细胞间质标记基因Vimentin、N-cadherin蛋白表达与对照组相比均明显升高(P0.05),上皮标记基因E-cadherin蛋白表达较对照组下降(P0.05)。TGF-β1+20μmol/L、TGF-β1+40μmol/L罗格列酮组穿膜细胞显著低于TGF-β1组(P0.05),而TGF-β1+5μmol/L、TGF-β1+10μmol/L罗格列酮组穿膜细胞与TGF-β1组相比,差异无统计学意义(P0.05)。BxPc-3细胞经TGF-β1作用后PPAR-γ表达较对照组明显下降(P0.05),而TGF-β1+20μmol/L、TGF-β1+40μmol/L罗格列酮组细胞PPAR-γ表达逐渐升高(P0.05);TGF-β1+20μmol/L、TGF-β1+40μmol/L罗格列酮组细胞上皮标记基因E-cadherin蛋白表达较TGF-β1组逐渐升高(P0.05);TGF-β1+20μmol/L、TGF-β1+40μmol/L罗格列酮组细胞间质标记基因Vimentin、N-cadherin蛋白表达与TGF-β1组相比均明显降低(P0.05),而前两组比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论 TGF-β1可以诱导人胰腺癌BxPc-3细胞EMT;促进PPAR-γ表达可以有效抑制人胰腺癌BxPc-3细胞EMT及侵袭性。     

KIM-1在TGF-β1诱导的大鼠肾小管上皮细胞纤维化因子表达中的作用

目的探讨肾脏损伤因子(KIM)-1在转化生长因子(TGF)-β1诱导的肾小管上皮细胞纤维化因子表达中的作用。方法用TGF-β1刺激处理大鼠肾小管上皮细胞NRK52E,qRT-PCR和Western印迹法分别测定细胞中KIM-1 mRNA和蛋白水平。在NRK52E中转染KIM-1 siRNA,给予TGF-β1刺激后,qRT-PCR和Western印迹法分别测定细胞中KIM-1 mR-NA和蛋白水平。Western印迹法检测细胞中上皮间质转化(EMT)标志蛋白上皮钙黏附素(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(SMA)和纤维化因子结缔组织生长因子(CTGF)、1型胶原酶(Col1)、3型胶原酶(Col3)的表达。结果对照组+TGF-β1细胞中KIM-1 mRNA和蛋白水平明显高于对照组(P<0. 05)。干扰组+TGF-β1细胞中KIM-1表达水平显著低于对照组+TGF-β1,差异具有统计学意义(P<0. 05)。干扰组+TGF-β1细胞中E-cadherin蛋白表达水平升高,α-SMA表达水平降低,纤维化因子CTGF、Col1、Col3的表达也降低,与对照组+TGF-β1比较差异具有统计学意义(P<0. 05)。结论敲低KIM-1可以减少TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞纤维化因子表达,抑制肾小管上皮细胞EMT。