H2S拮抗HUVEC衰老与促进SIRT1巯基化和减少FOXO1乙酰化有关

目的]探讨沉默信息调节因子1(SIRT1)/叉头转录因子O1(FOXO1)在H₂S拮抗H₂O₂诱导内皮细胞衰老过程中的作用。 [方法]建立内皮细胞衰老模型,通过衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色在光学显微镜下观察到的蓝染细胞数(即衰老细胞)计算阳性细胞率。采用Western blot检测细胞P21、P53、纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)、叉头转录因子O1(FOXO1)、乙酰化FOXO1(ac-FOXO1)、锰超氧化物歧化酶(MnSOD)及过氧化氢酶的蛋白表达水平,采用生物素转换法测定S-巯基化SIRT1的表达,采用活性氧(ROS)检测定量评估细胞内ROS水平。 [结果]经100 μmol/L H₂O₂处理可显著提高SA-β-gal染色阳性细胞率和P21、P53、PAI-1的蛋白表达,提示衰老细胞模型成功建立,而100 μmol/L NaHS可明显拮抗这一作用,SA-β-gal染色阳性细胞数明显下降(P＜0.01),P21、P53、PAI-1的蛋白表达显著降低(P＜0.01)。与对照组相比,H₂O₂组SIRT1、FOXO1、ac-FOXO1、MnSOD及过氧化氢酶的蛋白表达显著降低(P＜0.05或P＜0.01),ac-FOXO1/FOXO1比值显著增加(P＜0.01),ROS水平明显升高(P＜0.01)。与H₂O₂组相比,NaHS＋H₂O₂组SIRT1、S-巯基化SIRT1、FOXO1、ac-FOXO1、MnSOD及过氧化氢酶的蛋白表达显著升高((P＜0.05或P＜0.01),ac-FOXO1/FOXO1比值显著下降(P＜0.01),ROS水平明显降低(P＜0.05)。 [结论]H₂S可拮抗H₂O₂诱导的HUVEC衰老,其机制与促进SIRT1巯基化和减少FOXO1乙酰化有关。     

妊娠高血压综合征大鼠血清硫化氢浓度的变化及意义

目的　探讨妊娠高血压综合征大鼠血清硫化氢（H₂S）的浓度变化及其意义。方法　成年雌性Wistar大鼠32只,随机分为正常对照组、正常妊娠组、妊娠高血压综合征组和妊娠高血压综合征+硫氢化钠组,采用腹腔注射一氧化氮合酶抑制剂L-NAME［250　mg/（kg·d）］建立妊娠高血压综合征大鼠模型。采用套尾法测量大鼠收缩压,分光光度法测量血清H₂S浓度,自动生化分析仪测定尿蛋白、血肌酐和血尿素氮。测量胎鼠身长及胎鼠、胎盘和胎头重量。结果　与正常妊娠组比较,妊娠高血压综合征组大鼠收缩压、尿蛋白、血肌酐和血尿素氮水平显著增加（P<0.05）;胎鼠宫内发育迟缓,胎鼠重量、胎盘重量、胎头重量和胎鼠身长显著减小（P<0.05）;血清H₂S水平从妊娠第10天开始显著降低（P<0.05）,直到分娩实验结束。外源性H₂S逆转了上述改变。结论　妊娠高血压的发生可能与内源性H₂S的减少有关,外源性H₂S可抑制妊娠高血压综合征的发生。     

紫花牡荆素抑制氧化应激诱导的HUVEC细胞凋亡

目的　研究紫花牡荆素（CAS）对H₂O₂　氧化应激诱导的HUVEC细胞凋亡的影响及其可能机制。方法　体外培养HUVEC细胞,在添加H₂O₂　氧化应激诱导之前先加入不同浓度的CAS　（5、10和20　μmoL/L）　预孵30　min,用MTT法观察各组细胞生长活性;用AO/EB染色和FCM法检测HUVEC细胞凋亡情况及其凋亡率;用Western　blot检测细胞凋亡相关蛋白表达活性。结果　MTT提示与H₂O₂组相比较,CAS呈浓度和时间依赖性增加H₂O₂氧化应激诱导的HUVEC细胞的生长活性（P<0.05）,降低HUVEC细胞的凋亡数量及凋亡率（P<0.05）;同时下调Cytochrome　C、Caspase-9和Caspase-3蛋白表达降低（P<0.05）,激活Bcl-2蛋白表达（P<0.05）,而Bax蛋白表达不变（P>0.05）,Bcl-2/Bax上升（P<0.05）。结论　CAS拮抗H₂O₂氧化应激诱导的HUVEC细胞凋亡可能与其调节内源性线粒体凋亡途径有关。     

水杨酸钠增强氧化应激介导耳蜗螺旋神经节神经元损伤作用的实验观察

［摘要］　目的　观察水杨酸钠（SS）作用大鼠耳蜗螺旋神经节神经元（SGN）后,SGN中氧化应激水平的变化。方法　将6只SD大鼠随机分为对照组和SS组,每组3只。通过耳蜗器官培养48 h后,用5 mM SS处理48 h,对照组不予处理,采用免疫荧光染色技术定位耳蜗器官中活性氧自由基（ROS）的主要生成位置。将15只SD大鼠随机分成5组,即对照组、SS组、SS+N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)组、阳性对照过氧化氢（H₂O₂）组、H₂O₂+NAC组,每组3只。通过急性分离SGN,原代培养48 h后分别用5 mM SS、5 mM SS联合100 μM NAC、300 μM H₂O₂、300 μM H₂O₂联合100 μM NAC处理48 h,对照组不予处理。采用荧光染色法检测并量化各组大鼠SGN中ROS荧光探针DCFH-DA的平均荧光强度;采用CCK8法检测SGN细胞存活率。结果　在耳蜗器官培养中,SS作用后,免疫荧光染色显示ROS荧光增强,并且主要在SGN中表达,而在其他细胞中荧光强度无明显变化。为进一步量化荧光强度,在原代培养SGN中加入5 mM SS处理后,荧光染色法显示ROS平均荧光强度较对照组升高（P<0.001）,与H₂O₂组结果一致（P<0.000 1）。在加入ROS抑制剂NAC之后,ROS平均荧光强度较SS组下降（P<0.01）。CCK8法结果显示,SS作用之后细胞存活率较对照组下降41.34%（P<0.01）;在加入NAC之后,细胞存活率较SS组上升36.05%（P<0.01）,与对照组比较差异无统计学意义（P>0.05）。H₂O₂组细胞存活率较对照组下降52.31%（P<0.001）,在加入NAC之后,细胞存活率较H₂O₂组上升34.73%（P<0.01）。结论　SS增强SGN的氧化应激,并且导致了SGN损伤。氧化应激抑制剂NAC可以降低SGN的氧化应激,并且对SS致SGN损伤具有保护作用。     

槲皮素调控PTEN-Akt通路抑制H2O2诱导的血管内皮细胞凋亡

目的　探讨槲皮素对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）氧化应激损伤的保护作用及机制。方法　通过H₂O₂作用于人脐静脉内皮细胞建立氧化应激模型,采用MTT法测定HUVEC细胞存活率,试剂盒法测定乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）活性,流式细胞术检测细胞周期,Western　Blot法测定PTEN、Akt、磷酸化Akt及Bcl-2蛋白的表达水平。结果　H₂O₂可使HUVEC的存活率下降,而10、20　μmol/L槲皮素处理后细胞存活率显著提高（P<0.05）;SOD活性显著增加,而MDA与LDH水平显著降低（P<0.05）,与H₂O₂处理组相比其细胞凋亡率明显降低,槲皮素能有效增加PTEN并减少p-Akt、Bcl-2的表达。结论　中、高剂量槲皮素能有效保护HUVEC细胞使其免受H₂O₂的损害,该作用可能与其作用PTEN-Akt通路从而抑制内皮细胞凋亡有关。     

橙皮素对H2O2诱导H9c2心肌细胞凋亡的抑制效应研究

目的 探讨橙皮素(HES)对H₂O₂诱导的H9c2心肌细胞凋亡有何影响。方法 采用H₂O₂建立H9c2心肌细胞氧化应激损伤模型,实验分为四组：正常对照组(Control组),H₂O₂损伤组(H₂O₂组),单纯橙皮素处理组(HES组),橙皮素预处理 H₂O₂组(HES H₂O₂组)。H₂O₂(400 μM)处理2 h建立心肌细胞氧化应激损伤模型,HES H₂O₂组于建模前1 h加入40 μM橙皮素。采用CCK-8法确定H9c2细胞活性；DCFH-DA 探针检测细胞活性氧簇(ROS)水平,流式细胞术检测心肌细胞凋亡,分光光度计检测Caspase-3活性。结果 橙皮素预处理可明显改善H₂O₂诱导的H9c2心肌细胞活性降低,并且呈浓度依赖性；给予40 μM橙皮素预处理后ROS的产生明显减少,Caspase-3活性显著下降,心肌细胞凋亡率下降到30%左右。结论 橙皮素对氧化应激诱导的心肌细胞凋亡具有抑制效应。     

miR-152-3p调控硫氧还蛋白结合蛋白表达对过氧化氢诱导的内皮祖细胞凋亡的影响

目的]探讨miR-152-3p靶向硫氧还蛋白结合蛋白(TXNIP)对过氧化氢(H₂O₂)诱导的内皮祖细胞(EPC)凋亡的影响。 [方法]从健康人外周血分离与鉴定EPC,建立H₂O₂诱导的EPC损伤模型(500 μmol/L H₂O₂处理8 h),RT-qPCR检测EPC中miR-152-3p表达;EPC中过表达miR-152-3p或抑制TXNIP表达或同时过表达miR-152-3p和TXNIP,再使用500 μmol/L H₂O₂处理8 h,分别检测miR-152-3p表达水平、细胞凋亡率及TXNIP、Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达水平;双荧光素酶报告基因实验验证miR-152-3p与TXNIP的关系。 [结果]从健康人外周血成功分离EPC,miR-152-3p在H₂O₂诱导的EPC中表达减少65.0%(P＜0.001);与对照组相比,模型组EPC凋亡率及Bax、Caspase-3蛋白表达水平增加895.1%、352.0%、290.3%,Bcl-2蛋白表达水平降低79.4%(均P＜0.001);与miR-NC组相比,miR-152-3p mimic组EPC凋亡率及Bax、Caspase-3蛋白表达水平降低55.7%、60.9%、56.8%(P＜0.001),Bcl-2蛋白表达水平增加389.5%(均P＜0.001);与si-NC组相比,si-TXNIP组EPC凋亡率及TXNIP、Bax、Caspase-3蛋白表达水平降低40.2%、57.5%、59.8%、55.4%(均P＜0.001),Bcl-2蛋白表达水平增加313.0%(P＜0.001);与miR-152-3p mimic＋pcDNA组相比,miR-152-3p mimic＋TXNIP组EPC凋亡率及TXNIP、Bax、Caspase-3蛋白表达水平增加86.8%、184.8%、137.7%、109.2%(P＜0.001),Bcl-2蛋白表达水平降低69.1%(P＜0.001);双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-152-3p可靶向负调控TXNIP表达。 [结论]miR-152-3p在H₂O₂诱导的EPC中低表达,过表达miR-152-3p可通过靶向抑制TXNIP表达抑制H₂O₂诱导的EPC凋亡。     

氮气洗入/洗出法测定急性肺损伤患者肺复张容积的研究

  目的 探讨氮气洗入/洗出法测急性肺损伤(ALI)患者肺复张容积的准确性及可行性。方法 将15例有创机械通气的ALI患者纳入本研究,根据ARDSnet法和跨肺压法滴定2种呼气末正压(PEEP) 水平,分别通气30 min,记录各PEEP水平下潮气量(Vt)、气道平台压等呼吸力学及血流动力学指标,并利用氮气洗入/洗出法测2种PEEP水平的呼气末肺容积(EELV),根据公式推算氮气洗入/洗出法测的肺复张容积,同时根据低流速压力-容积(P-V)曲线法获得肺复张容积,比较2种方法获得的肺复张容积的相关性及一致性。结果 (1)ARDSnet法滴定的PEEP为（7±2） cm H₂O（1 cm H₂O=0.098 kPa）,气道峰压为（23±5） cm H₂O,气道平台压为(17±4） cm H₂O;跨肺压法滴定的PEEP为（14±5 )cm H₂O,气道峰压为（28±6） cm H₂O,气道平台压为（22±6） cm H₂O,2种方法比较差异有统计学意义(P<0.05)。(2) 低流速P-V曲线法测的肺复张容积为100（-25~185）ml,氮气洗入/洗出法测的肺复张容积为180（-19~255）ml,两者具有较好的相关性,R²=0.755,P<0.0001,且测量误差为46（8~80）ml。结论 氮气洗入/洗出法可测定ALI患者的肺复张容积。        

血管过氧化物酶1介导的氧化应激在心血管疾病中的研究进展

血管过氧化物酶1(VPO1)是心血管系统新近发现的血红素过氧化物酶超家族成员,可催化NADPH氧化酶(NOX)来源的过氧化氢(H₂O₂)生成次氯酸(HClO),进而加重氧化应激,在高血压、动脉粥样硬化、心肌梗死和肺动脉高压等多种心血管疾病的发生发展过程中具有重要作用。本文主要就VPO1介导的氧化应激在心血管疾病中的作用及潜在机制进行综述。     

加温加氧超声雾化对急性加重期慢性阻塞性肺疾病的疗效观察

［摘要］　目的　观察加温加氧超声雾化对急性加重期慢性阻塞性肺疾病（AECOPD）的疗效。方法　选取2018年4月至2019年8月广西壮族自治区江滨医院收治的AECOPD患者60例,采用随机数字表法将其分为对照组和观察组,每组30例。对照组予传统氧气雾化吸入治疗,观察组予加温加氧超声雾化吸入治疗。两组疗程均为1周。比较两组治疗前后慢性阻塞性肺疾病评估测试（CAT）评分、动脉血氧分压（PaO₂）、动脉血二氧化碳分压（PaCO₂）、第1秒用力呼气容积占预计值百分比（FEV₁%pred）。结果　治疗前,两组CAT评分、PaO₂、PaCO₂、FEV₁%pred比较差异无统计学意义（P>0.05）。治疗后,观察组CAT评分、PaCO₂低于对照组,PaO₂、FEV₁%pred高于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。结论　与传统氧气雾化相比,加温加氧超声雾化对AECOPD的疗效更佳。