MA120微生物鉴定/药敏分析系统在临床微生物鉴定与药物敏感性测定中的效果评价

目的评价国产微生物鉴定/药敏分析系统(MA120)在临床微生物鉴定和药物敏感性测定的效果。方法收集解放军第三〇二医院2013年1月—2014年12月间的临床分离株1803株,包括革兰阴性菌1205株及革兰阳性菌598株,共28个菌属,107个菌种,菌种经16S r DNA测序(测序)鉴定确认。用MA120进行细菌的鉴定与药敏检测,鉴定结果与测序确认结果比较,计算种的鉴定符合率;药敏结果与VITEK 2全自动细菌鉴定/药敏分析系统(VITEK 2)的药敏检测结果比较,计算耐药的符合率。结果 MA120鉴定革兰阴性菌19个菌属67个菌种1205株,与测序结果总体符合率为91.12%;鉴定革兰阳性菌9个菌属40个菌种598株,与测序结果总体符合率为94.31%。MA120药敏卡涵盖常见的抗生素,耐药率与VITEK2的符合率分别为:肠杆菌科89.54%,非发酵菌86.11%,葡萄球菌属94.74%,肠球菌属与链球菌属82.61%。结论 MA120在常见临床微生物的鉴定与药敏中的应用具有较好的效果,鉴定细菌种类涵盖临床常见的致病菌,且具有的药敏抗生素种类齐全,并可根据美国临床和实验室标准协会的建议及临床需求及时完善,应用灵活。     

自创微需氧罐优选幽门螺杆菌培养与保存条件

目的:简化幽门螺杆菌(Hpylori)培养操作,优选Hpylori养与保存条件.方法:自创微需氧罐,采用正交设计优选H pylori培养条件,并对-20℃保存的不同浓度两种保存液Hpylori复苏对照观察.结果:自创微需氧罐成功培养出Hpylori;哥伦比亚琼脂和脑心浸液琼脂中分别添加53 mL/L浓度小牛/绵羊血清和26 mL/L浓度混合抗生素,pH值7.5时,Hpylori生长良好;-20℃条件下:300 mL/L甘油/布氏肉汤和200mL/L甘油/脑心浸液菌种保存时间分别为7d和20d.结论:自创微需氧罐操作简便、效果可靠,H pylori培养与保存条件得到优化.     

空肠/结肠弯曲菌抵抗力的实验研究

<正> 空肠/结肠弯曲菌是儿童急性腹泻的重要病原菌,其传染性较强,亦有实验室感染的事例发生。了解其对理化因素的抵抗力有一定的实际意义,为此我们采用常用的理化消毒方法,对其进行了杀菌及抑菌实验。 方法与结果 一、菌种: H_(18)及P_(10)均为本室保存的地方菌株,前者来自急性腹泻患儿的粪便标本;后者取自健康猪的粪便标本。经生物学及血清学(Penner法)鉴定,H_(18)为空肠弯曲菌(血清学未能分型);P_(10)为结肠弯曲菌(属28型),实验前均保存于20％甘油布氏肉汤-43℃保存备用。实验时将菌种接种于Campy-BAP培     

空肠弯曲菌冻存保护剂的研究

<正> 作者自1984年开始试用七种不同保护剂,在零下22～28℃低温冰箱保存空肠弯曲菌。这七种保护剂为:(1)10％兔血清和10％二甲基亚砜布氏肉汤;(2)脱脂牛乳;(3)24％蔗糖布氏肉汤;(4)硫乙醇酸钠半固体;(5)0.05％FBP肉汤;(6)25％甘油蛋白陈水;(7)15％甘油、15％蔗糖及0.025％FBP布氏肉汤,即取85mlpH7.2布氏肉汤,加入中性甘油15ml,蔗糖15g及FBP各0.025g(硫酸亚铁、焦性亚硫酸钠、丙酮酸钠各0.025g),将各成     

一种低温保存体外连续培养疟原虫的简易方法

本文报告了一种简易的冻存方法。该方法系以含10%甘油或10%二甲基亚砜的RPMI 1640培养液作为保护剂,将体外连续培养的恶性疟原虫保存于-185℃液氮或-70℃冰箱中,以复苏后原虫率上升到5%并能按常规稀释2至3倍连续传代培养作为冰冻复苏成功的指标。其具体操作步骤是:1)冰冻材料的制备:经3至4天培养,原虫率达到5%(或更高)的培养物即可用于冰冻。冰冻前,吸去培养物上层液体,加入含保护剂的营养液,使其成为1%悬液,混匀后,分装3ml于无菌小瓶内,密封瓶盖。2)冰冻保存:将小瓶迅速投入液氮或冰箱内。3)复苏:取出小瓶置于37℃水浴中速融,然后将融化的     

冷冻干燥24年后的布鲁氏菌的培养特性

在布鲁氏菌细菌工作中,菌种的保存是一项很繁琐和十分重要的工作。菌种保存的不好,细菌不但容易丧失生活能力,而且易于变异。 本实验选用1961年从新疆塔城地区种羊场羊流产胎儿分离的3株布氏菌,菌株号为61—9、16—10和61—11,经分型鉴定为羊种布氏菌第三生物型。这些菌株从野外分离后,最初在普通斜面培基上定期传代保存,     

中药改良培养基用于血标本增菌的实验观察

将单味红枣液加入营养肉汤（简称红枣肉汤）做10种细菌90瓶模拟菌血标本的增菌培养,并与营养肉汤进行比较。结果红枣肉汤增菌阳性率为94.44%,营养肉汤为81.11%,经McNemarχ2检验,差异有统计学意义（P〈0.01）。表明使用红枣肉汤作为血液标本的增菌培养基,可提高细菌检出率。     

尿C肽/肌酐比测定方法的开展和评价

目的开展并评价尿C-P/肌酐比(UCPCR)的检测方法及影响因素。方法测定尿C-P(UCP)检测试剂盒的批内和批间CV;评估不同温度保存方式、保存时间和干扰物存在情况下,UCP检测结果的变化规律。测定北京地区20名正常人、20例T1DM患者及20例T2DM患者的空腹UCPCR,比较其差异。结果 UCP批内CV为0.78%,批间CV为4.02%;T1DM患者空腹UCPCR低于T2DM患者和正常人[0.01(0.00,0.11)vs 0.28(0.20,0.48)vs 0.86(0.54,1.44)nmol/mmol,P0.001];保存于2~8℃时,UCP第3天时衰减10%。保存于-80℃时,第5个月时衰减8%;尿液中蛋白浓度≤6.8g/L时,UCP干扰率为8.3%,尿液中红细胞≤57500个/μl时,UCP干扰率为7.5%。结论 UCPCR能反映胰岛β细胞功能。UCP在-80℃稳定,受一般蛋白尿及肉眼血尿干扰小。     

液氮保种对田鼠巴贝虫标准株存活力的影响

目的探索液氮保种对田鼠巴贝虫标准株存活力的影响。方法液氮保种1、3、6、9个月的田鼠巴贝虫标准株小鼠血室温复苏后感染正常BALB/c小鼠各3只(复苏1代,实验组),100μL/只;同时取3只新感染田鼠巴贝虫活体保藏小鼠为对照组。实验组染虫率达高峰时再接种正常BALB/c小鼠(复苏2代),观察田鼠巴贝虫的形态变化及增殖情况,并观察不同保存时间复苏1代及复苏2代的染虫率情况。结果液氮保种田鼠巴贝虫与活体保种的田鼠巴贝虫相比,形态变化不大,都会出现小滋养体、环状滋养体、裂殖体及未成熟和成熟裂殖子等多种形态。液氮复苏1代首次查见虫体及达到染虫率高峰的时间比动物保种延迟1~2d,但复苏2代即恢复一致。田鼠巴贝虫染虫全血经液氮保存1、3、6、9个月,仅达到高峰期时间延迟,其存活力未见明显下降。结论液氮保种对田鼠巴贝虫形态及存活力影响小,可成为一种较好的保存方式。     

114株耐碳氢酶烯肺炎克雷伯杆菌耐药表型及基因分析

目的:分析114株耐碳氢酶烯肺炎克雷伯杆菌（CRKP）的耐药表型与基因型，为控制耐碳氢酶烯肺炎克雷伯杆菌传播及临床治疗提供依据。方法： 选取住院患者痰样本分离的114株CRKP，采用VITECK2全自动细菌鉴定仪进行菌种鉴定并验证其对碳青霉烯的药敏性。采用改良碳青霉烯灭活法（mCIM法）检测CRKP的耐药表型；采用PCR法检测碳氢酶烯酶blaKPC、blaNDM、blaIMP、blaVIM、blaOXA 4耐药基因。结果： 114株CRKP经mCIM法检测阳性率为95.61%，耐药表型均为KPC型。耐药菌对青霉素类、头孢菌素类和碳青霉烯类药物的耐药率均在95%~100%；对氨基糖苷类、喹诺酮类、四环素类和氯霉素类药物的耐药率分别为70%~75%、82%~87%、90%~95%和80%~84%（均P<0.05）。经PCR检测，blaKPC基因阳性检出率为100%。脉冲凝胶电泳（PFGE）分子分型共分为13个谱型，优势型别为KPN01.005型（35株），各菌株间相似性系数达92.0％以上。结论：宁乡市人民医院CRKP的耐药十分严重，与其携带blaKPC耐药基因密切相关。应加强细菌耐药性监测和医院感染的监控。     

奶粉中混合菌种检验方法的比较研究

目的研究奶粉中混合菌种的检测方法。方法用直接平板分离法和增菌培养法对奶粉中质控菌株进行增菌、分纯,依据细菌生长特性、菌落平板特征、涂片革兰染色镜检结果、生化试验和血清学鉴定结果综合判断。结果奶粉中质控菌株为混合菌种,分别是金黄葡萄球菌、大肠埃希菌O157∶H7。结论做混合菌种样品检测时,平板直接分离法效果较好;BHI肉汤培养诱导鞭毛抗原的方法值得推广使用。     

280枚人类细胞期胚胎冷冻、复苏及移植结果分析

目的　探讨人类 4～ 6细胞期胚胎冷冻、复苏及移植后的妊娠情况。方法　对人类 4～ 6细胞期胚胎进行慢速冷冻、快速复苏 ,比较冷冻前后优质胚胎率及移植后的妊娠情况。结果　 5 8例患者共 2 80枚胚胎实施冷冻并复苏。冷冻前后平均优质胚胎率分别为 5 9.2 %(16 6 / 2 80 )与 40 .3%(113/ 2 80 ) ,两者相比差异有显著性 (P <0 .0 5 )。冻胚复苏移植后临床妊娠率为 37.9%(2 2 / 5 8) ,与同期新鲜胚胎移植临床妊娠率 41.5 %(42 / 10 1)相比差异无显著性 (P >0 .0 5 )。患者累积临床妊娠率为 5 6 .6 %(5 7/ 10 1)。结论　冷冻、复苏可降低优质胚胎率 ,但有较满意的临床妊娠率。     

卡提素联用短化治疗80例复治涂阳肺结核疗效观察

为提高复治涂阳肺结核治愈率,采用卡提素联用2HRZE/6H₃R₃E₃方案治疗80例复治涂阳肺结核。卡提素应用方法为前2个月0.5mg,qod,i.m,后6个月0.5mg,q2w,i.m,并以同期应用2SHRZE/6H₃R₃E₃方案治疗71例复治涂阳肺结核作为对照。结果:8个月完成疗程时痰菌阴转者卡提素组和对照组分别为70例和53例,痰菌阴转率分别为87.5%和74.6%,两组有显著性差异(χ²=4.11,P<0.05)。     

外伤感染伤口细菌检测及抗生素耐药性分析

1997～2001年,我们对98例外伤患者感染伤口的分泌物进行了菌株检测及抗生素耐药试验.现将结果分析如下. 资料与方法:将98例患者感染伤口的脓液标本及引流标本接种于血平板和伊红美兰平板,35℃培养.按<全国临床检验操作规程>中的方法进行细菌鉴定.3天无细菌生长为培养阴性,对培养出的菌株行药敏试验.质控菌株购自山东省临检中心.药敏试验采用K-B法,MH培养基和药敏纸片购自浙江微生物试剂有限公司. 结果:共检出细菌79株,其中革兰氏阳性菌33株(金黄色葡萄球菌21株,表皮葡萄球菌12株),革兰氏阴性菌46株(大肠埃希氏菌24株,铜绿假单胞菌7株,奇异变形杆菌6株,阴沟肠杆菌4株,施氏假单胞菌3株,枸橼酸杆菌2株).细菌耐药情况为黄金色葡萄球菌及表皮葡萄球对青霉素耐药率为100% ,对庆大霉素、红霉素、阿奇霉素耐药率为80%,对万古霉素耐药率为0%;大肠埃希氏菌对氨苄青霉素和SMZ耐药率为80%,对哌拉西林和头孢菌素三代耐药率为20%;铜绿假单胞菌对氨苄青霉素和SMZ耐药率为90%,对头孢菌素三代耐药率为15%.     

低温保存阴道毛滴虫的实验观察

利用5%、10%、15%、20%、25%、30%浓度的二甲基亚砜和甘油肝浸汤培养液对临床分离的阴道毛滴虫进行4℃保存观察。二甲基亚砜和甘油两实验组最适保种浓度分别为15%和10%,50%虫体存活率天数分别为29和27 d,最长保存天数分别为31和29 d;而空白对照组仅为5和7 d。结果表明,15%二甲基亚砜或10%甘油肝浸汤培养液4℃冷藏保存阴道毛滴虫可显著延长其保存期。     

猪囊虫病疫苗生产用工程菌菌种的稳定性观察

目的　探讨猪囊虫病疫苗生产用工程菌菌种在传代过程中及不同保存条件下的稳定性。方法　对工程菌菌种按规程进行了 5 2代传代及不同条件下保存 ,检测菌种的质粒、表达量、免疫学活性等方面的变化。结果　经 5 2代传代 ,工程菌及其菌落形态结构及质粒DNA电泳与原始菌种一致 ,SDS -PAGE电泳显示分子量为 6 0kD ,其表达量约占菌体总蛋白的 19%～ 2 4% ,免疫学活性为 4 0× 10 3 ～ 1 6× 10 4 /mg ,与原代菌种基本一致。菌种在 4℃、 - 2 0℃、 - 30℃、 - 70℃下保存 ,菌种稳定性不一致 ,- 70℃最稳定 ,- 2 0℃最差。结论　猪囊虫病基因工程疫苗生产用工程菌菌种经 5 2次人工传代和- 70℃保存 ,其各种特性是稳定的。     

培养温度对冻干分枝杆菌菌种复苏的影响

由于全球范围内肺结核及非结核分枝杆菌病的发病呈逐年上升趋势[1],对分枝杆菌的收集、培养和研究是结核病与非结核分枝杆菌病预防、诊断和治疗以及医学科研和教学事业的基础条件[2],中国药品生物质品检定所2007年1月于德国菌种保藏中心引进分枝杆菌菌种229株,均使用改良L-J培养基按其背景资料中记载的温度做原代培养复苏。其中57株未能得到一次性复苏(51株国外原定培养温度为37℃,7株国外原定培养温度为28℃)。分枝杆菌的生长发育与培养温度关系甚为密切[3],为使所有分枝杆菌均能得到及时有效的复苏,今将未得到复苏的菌种37℃,30℃再次培养观察。材料与方法1.菌株来源:57株未能得到一次性复苏的分枝杆菌菌种冻干制剂来源于德国菌种保藏中心(DSMZ)2.培养基:(1)改良L-J培养基的配制(参考中国药品生物制品检定所配置记录):2%孔雀绿20ml,天冬素(味精),4.5g(9.0g),KH2PO43.0g,柠檬酸镁0.75g,MgSO40.3g,马铃薯淀粉37.6g,丙三醇(甘油)15ml,蒸馏水750ml,新鲜鸡蛋液1250ml。共2000ml。(2)7H10培养基为美国BD公司生产的DifcoTMMiddleb...     

幽门螺杆菌的固体培养与液体保存

[目的]探索高效的幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)培养和保存方法。[方法]固体培养基采用空肠弯曲菌琼脂加混合抗生素的马血清,利用固体培养基,在微需氧条件下,37℃培养2~3 d,培养出Hp;菌株采用保存液保存于低温液氮条件下,复苏。[结果]成功培养出Hp,且增菌迅速;菌珠保存可成功复苏。[结论]采用固体培养和保存液低温液氮保存,能够较好培养出细菌,且保存后复苏率高。     

丙酸氟替卡松治疗哮喘预测指数阳性喘息婴幼儿的疗效观察

目的观察丙酸氟替卡松治疗哮喘预测指数阳性喘息婴幼儿的疗效。方法选择该院儿科门诊及住院诊断为哮喘预测指数阳性的喘息婴幼儿作为研究对象,共100例。按随机号码表法分为研究组50例和对照组50例,两组急性期均接受沙丁胺醇气雾剂吸入治疗。缓解期研究组接受丙酸氟替卡松预防治疗,对照组不接受丙酸氟替卡松治疗干预。对研究组和对照组3个月、6个月、9个月时喘息发生率、急诊/住院率进行比较。在两组患儿5岁时回访,计算两组患儿哮喘诊断率。结果 (1)研究组3个月、6个月、9个月喘息发生率、急诊/住院率分别为22%、12%、4%、6%,对照组分别为30%、20%、18%、24%,两组比较差异有统计学意义。研究组和对照组哮喘诊断率分别为16%和44%,差异有统计学意义。结论丙酸氟替卡松能明显减轻婴幼儿喘息发作程度,减少喘息发作次数。     

严重肝病患者血、腹水病原菌分布及药敏分析

目的分析严重肝病患者全血、腹水合并细菌感染的致病菌菌种分布特点及药敏试验结果,为合理选用抗菌药物提供依据。方法采用BACTEC 9120细菌培养仪及PHNIX100全自动细菌鉴定仪对血液和腹水进行培养鉴定及药敏试验。结果两类标本共检出255株阳性标本,血培养187株,腹水68株。其中G^-菌占多数,占59.6%,主要是：大肠埃希菌,肺炎克雷伯氏菌。分离出的G^-菌对喹诺酮类、氨基糖甙类、第二、三、四代头孢菌素敏感率大都在50%以上,亚胺培南敏感率在80%以上。G^＋菌占40.4%,主要是：表皮葡萄球菌。G^＋菌对大多数常用抗菌药物严重耐药情况;对庆大霉素、第四代喹诺酮类、吗啉恶酮、奎奴普丁/达福普丁敏感率稍高,对万古霉素敏感率最高。结论随着细菌的种类及耐药性不断发生改变,应根据药敏试验结果合理使用抗生素。