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目的探讨miR-423-5p对过氧化氢(H2O2)诱导的人晶状体上皮细胞损伤的影响及作用机制。方法采用H2O2诱导人晶状体上皮细胞,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测细胞中miR-423-5p和泛素羧基末端水解酶(UCH)L1 mRNA表达水平,Western印迹检测UCHL1、B淋巴细胞瘤(Bcl)-2和Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达水平,酶联免疫吸附试验检测细胞培养上清液中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽还原酶(GSH-Px)水平,流式细胞仪检测细胞凋亡。转染miR-423-5p抑制剂或UCHL1过表达载体至人晶状体上皮细胞,上述相同方法检测干扰miR-423-5p表达或UCHL1过表达对H2O2诱导的人晶状体上皮细胞氧化应激及凋亡的影响。双荧光素酶报告基因实验验证miR-423-5p与UCHL1靶向关系。结果H2O2诱导可促进人晶状体上皮细胞凋亡、MDA和miR-423-5p表达及Bax蛋白表达(P<0.05),抑制细胞SOD和GSH-Px表达、UCHL1 mRNA和蛋白表达及Bcl-2蛋白表达(P<0.05)。干扰miR-423-5p或过表达UCHL1均可抑制人晶状体上皮细胞凋亡、MDA和Bax表达(P<0.05),促进细胞SOD和GSH-Px表达及Bcl-2蛋白表达(P<0.05)。miR-423-5p靶向负调控UCHL1表达,抑制UCHL1表达逆转了干扰miR-423-5p表达对人晶状体上皮细胞凋亡、MDA和Bax表达的抑制作用及对SOD、GSH-Px和Bcl-2蛋白表达的促进作用。结论miR-423-5p可能通过抑制UCHL1表达促进H2O2诱导的人晶状体上皮细胞氧化应激和凋亡,保护人晶状体上皮细胞免受H2O2损伤。 相似文献
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目的探讨羊栖菜多糖(SFPS)对过氧化氢(H2O2)引起星形胶质细胞氧化损伤的影响及作用机制。方法用200μmol/L H2O2处理细胞24 h作为H2O2组,以正常培养细胞作为对照(Con)组;分别用15 mg/L、30 mg/L、60 mg/L的SFPS培养液预处理24 h后用200μmol/L H2O2诱导处理24 h,分别记为H2O2+SFPS-L组、H2O2+SFPS-M组、H2O2+SFPS-H组。将miR-NC、miR-29b-5p转染至星形胶质细胞后用200μmol/L H2O2再诱导处理24 h,记为H2O2+miR-NC组、H2O2+miR-29b-5p组;将anti-miR-NC、anti-miR-29b-5p转染至星形胶质细胞后用60 mg/L的SFPS培养液处理24 h后再用200μmol/L H2O2诱导处理24 h,分别记为H2O2+SFPS+anti-miR-NC组、H2O2+SFPS+anti-miR-29b-5p组。丙二醛(MDA)试剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)活性检测试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)试剂盒分别检测MDA含量、SOD、GSH-Px活性;Western印迹检测水通道蛋白(AQP)9水平;流式细胞术检测细胞凋亡;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-29b-5p和AQP9 mRNA表达水平;荧光素酶报告实验检测miR-29b-5p和AQP9的靶向关系。结果与Con组相比,H2O2组星形胶质细胞中MDA水平显著升高,SOD、GSH-Px活性显著降低(均P<0.05);与H2O2组相比,不同浓度SFPS组星形胶质细胞中MDA含量逐渐降低,SOD、GSH-Px活性显著升高,呈浓度依赖性(均P<0.05)。与Con组相比,H2O2组星形胶质细胞中Bcl-2表达水平显著降低,Bax、酶切caspase-3表达水平及细胞凋亡率均显著升高(均P<0.05);与H2O2组相比,不同浓度SFPS组星形胶质细胞中Bcl-2表达水平显著升高,Bax、酶切caspase-3表达水平及细胞凋亡率均显著降低,且均呈浓度依赖性(均P<0.05),与Con组相比,H2O2组星形胶质细胞中miR-29b-5p表达水平显著降低,AQP9 mRNA和蛋白表达水平均显著升高(均P<0.05);与H2O2组相比,不同浓度SFPS糖组星形胶质细胞中miR-29b-5p表达水平显著升高,AQP9 mRNA和蛋白表达水平均显著降低,且均呈浓度依赖性(均P<0.05)。miR-29b-5p组荧光素酶活性显著低于miR-NC组(P<0.05)。相较于miR-NC组AQP9蛋白表达水平,miR-29b-5p组显著降低;相较于anti-miR-NC组AQP9蛋白表达水平,anti-miR-29b-5p组显著升高(均P<0.05)。与H2O2+miR-NC组相比,H2O2+miR-29b-5p组星形胶质细胞中miR-29b-5p表达水平显著升高,AQP9表达水平显著降低,MDA水平显著降低,SOD、GSH-Px活性显著升高,Bcl-2水平显著升高,Bax水平和细胞凋亡率显著降低(均P<0.05),与H2O2组相比,H2O2+SFPS组星形胶质细胞中miR-29b-5p水平显著升高,AQP9水平显著降低,MDA水平显著降低,SOD、GSH-Px活性显著升高,Bcl-2水平显著升高,Bax水平及细胞凋亡率显著降低(P<0.05);与H2O2+SFPS+anti-miR-NC组相比,H2O2+SFPS+anti-miR-29b-5p组星形胶质细胞中miR-29b-5p水平显著降低,AQP9水平显著升高,MDA水平显著升高,SOD、GSH-Px活性显著降低,Bcl-2水平显著降低,Bax水平及细胞凋亡率显著升高(均P<0.05)。结论SFPS可抑制H2O2诱导的星形胶质细胞氧化应激和凋亡,保护H2O2引起的星形胶质细胞氧化损伤,其机制可能与miR-29b-5p和AQP9有关。 相似文献
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目的 研究支链氨基酸转移酶(branched-chain amino acid aminotransferase 1,BCAT1)调节心肌细胞铁死亡和缺氧/复氧损伤的作用及机制。方法 分离Sprague Dawley乳鼠心室肌细胞(neonatal rat ventricular myocytes,NRVMs)并培养。利用腺病毒载体转染NRVMs分别敲低或过表达BCAT1后给予NRVMs缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤或给予Erastin诱导其铁死亡。给予核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor-2,NRF2)特异性抑制剂ML385探讨NRF2在BCAT1调节NRVMs铁死亡中的作用。结果 敲低BCAT1表达加重H/R诱导的NRVMs死亡和脂质过氧化,而敲低BCAT1加重损伤的现象可被铁死亡抑制剂Ferr-1基本消除。过表达BCAT1可以减轻H/R和Erastin诱导的心肌细胞死亡和脂质过氧化。过表达BCAT1显著上调NRF2蛋白表达和下游抗氧化应激基因Ho-1、Nqo-1和Trx-1 ... 相似文献
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目的 研究大黄素对过氧化氢(H2O2)诱导损伤的血管内皮细胞(HUVEC)保护作用及作用机制。方法 MTT法筛选H2O2造模浓度及大黄素给药浓度。取HUVEC细胞,分为正常对照组、H2O2模型组(终浓度100μmol/L H2O2)和大黄素4个不同剂量(终浓度15.0、7.5、5.0、2.5μmol/L)组,置于37℃、5%CO2培养箱中培养24 h。电镜和荧光显微镜观察细胞形态和结构,Hoechst法观察细胞凋亡,化学法检测各组细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)含量;Western印迹检测各组细胞中P53、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3和P21蛋白的表达。结果 与正常对照组比较,模型组HUVEC细胞增殖活力显著下降;细胞形态与结构改变;SOD、NO、NOS含量显著降低;P53、caspase-3和P21蛋白表达显著提高;... 相似文献
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目的探究阿托伐他汀通过调节ERK/MAPK信号通路改善H2O2诱导的血管内皮细胞损伤的作用机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),分为空白对照组、模型组(H2O2处理)、阿托伐他汀组(阿托伐他汀+H2O2)、U0126组(ERK/MAPK信号通路抑制剂U0126+H2O2)、阿托伐他汀+LM22B-10组(阿托伐他汀和ERK/MAPK信号通路激活剂LM22B-10+H2O2)。采用MTT法、AO/EB染色法分别检测各组细胞活性、凋亡率;用酶联免疫吸附法检测各组细胞乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量;荧光法检测活性氧簇(ROS)水平;Western blot法检测各组细胞中ERK1/2、p-ERK1/2、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白表达。结果与空白对照组比较,模型组细胞增殖活性、SOD和GSH-Px含量降低,细胞凋亡率、LDH、MDA和ROS水平增加,p-ERK1/2/ERK1/2、p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白表达比值上调(P均<0.05)。与模型组比较,阿托伐他汀组细胞增殖活性、SOD和GSH-Px含量升高,细胞凋亡率、LDH、MDA和ROS水平降低,且p-ERK1/2/ERK1/2、p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白表达比值下调(P均<0.05)。与阿托伐他汀组比较,阿托伐他汀+LM22B-10组细胞增殖活性、SOD和GSH-Px含量降低,凋亡率、LDH、MDA和ROS水平升高,同时p-ERK1/2/ERK1/2、p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白表达比值上调(P均<0.05)。结论阿托伐他汀能够改善H2O2诱导的血管内皮细胞损伤,其机制与抑制ERK/MAPK信号通路进而降低ROS介导的血管内皮细胞凋亡和氧化应激损伤有关。 相似文献
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目的 探讨p53、Fas在外源性神经酰胺(C2-ceramide)诱导内皮细胞凋亡中的作用。方法 体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),以不同浓度的C2-ceramide处理后,用TUNEL染色法检测细胞的凋亡。用p53 的抑制剂PFT-α和Fas的抑制剂Fas相关磷酸酶-1(FAP-1)预处理细胞后,加入C2-ceramide,与对照组比较观察Fas的表达和细胞凋亡指数的变化。结果 C2-ceramide可剂量依赖性地诱导内皮细胞凋亡。FAP-1可抑制C2-ceramide诱导的内皮细胞凋亡;PFT-α不能抑制C2-ceramide诱导的内皮细胞凋亡。结论 神经酰胺能够诱导内皮细胞凋亡,其作用机制可能是通过Fas途径而非通过p53途径。 相似文献
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目的:探讨p53在外源性神经酰胺(C2-ceramide)诱导人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用。方法:体外培养脐静脉内皮细胞,用不同浓度的C2-ceramide进行处理,Tunel检测细胞凋亡;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测p53的表达;并用p53的抑制剂PFT-α(pifithrin alpha,PFT-α)预处理细胞,再加入C2-ceramide与对照组比较观察细胞凋亡指数。结果:C2-ceramide呈剂量依赖性诱导内皮细胞凋亡;p53的表达随着C2-ceramide浓度的增加呈现降低的趋势;PFT-α不能抑制C2-ceramide诱导的凋亡。结论:神经酰胺能诱导内皮细胞的凋亡,可能不依赖于p53途径。 相似文献
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BackgroundWe aimed to determine the role of the LINC00370/miR-222-3p/RGS4 axis in modulating the process of adipose-derived stem cell (ADSC) osteogenic differentiation.MethodsWe first evaluated the differential expression of LINC00370, miR-222-3p and RGS4 between normal and osteogenically induced ADSCs. Moreover, we transfected ADSCs with LINC00370 siRNA and an miR-222-3p inhibitor to determine the role of LINC00370 in modulating the process of ADSC osteogenic differentiation. Finally, we analyzed the dual-luciferase reporter gene to identify the relationship between LINC00370 and miR-222-3p. We first created osteoporotic rat models by ovariectomy (OVX) and treated with pcDNA-LINC00370. HE and immunohistochemical staining of OCN were performed to assess the changes in bone microarchitecture.ResultsLINC00370 and RGS4 expression was remarkably upregulated in the osteogenic ADSC group compared with the normal medium group. On the other hand, miR-222-3p expression was remarkably decreased in the osteogenic group compared with the normal medium group. Knockdown of LINC00370 reduced the osteogenic differentiation of ADSCs. Moreover, the inhibitor of miR-222-3p partially reversed the reduction of osteogenic differentiation by LINC00370 knockdown. Knockdown of LINC00370 reduced the expression of p-Akt and p-PI3K. The inhibitor of miR-222-3p partially reversed the reduction of the expression of p-Akt and p-PI3K by LINC00370 knockdown. A dual luciferase reporter assay indicated that LINC00370 can directly bind miR-222-3p. LINC00370 suppressed OP progression in OVX and partially upregulated OCN protein expression.ConclusionCollectively, the above results confirm that LINC00370 promotes the process of ADSC osteogenic differentiation via the miR-222-3p/RGS4 axis. Moreover, LINC00370 could protect against OVX-induced OP. 相似文献
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