miR-708-5p靶向GAGE12I抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的探讨miR-708-5p靶向GAGE12I对胃癌(gastric cancer,GC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响.方法 qRT-PCR检测miR-708-5p在GC组织和GC细胞AGS和BGC-823中的表达;MTT法、克隆形成实验和Transwell小室法检测miR-708-5p和GAGE12I对GC细胞AGS和BGC-823增殖、迁移和侵袭的影响;双荧光素酶报告基因实验验证miR-708-5p与GAGE12I之间的靶向关系; Western blot检测miR-708-5p对GAGE12I表达的影响;靶标回复实验验证GAGE12I对miR-708-5p抑制GC细胞AGS和BGC-823增殖、迁移和侵袭作用的影响.结果 miR-708-5p在GC组织和GC细胞AGS和BGC-823中低表达;上调miR-708-5p和沉默GAGE12I抑制GC细胞AGS增殖、迁移和侵袭; GAGE12I是miR-708-5p的靶基因,且miR-708-5p负性调节GAGE12I表达,过表达GAGE12I可部分逆转miR-708-5p对GC细胞AGS和BGC-823增殖、迁移和侵袭的抑制作用.结论 miR-708-5p可靶向GAGE12I抑制GC细胞增殖、迁移和侵袭.     

miR-660-3p下调REG4对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其机制研究

目的研究miR-660-3p对胃癌MGC-803细胞增殖、迁移和侵袭的影响及潜在的分子机制。方法 qRT-PCR检测134例胃癌组织和癌旁组织中miR-660-3p的表达,MTT法和Transwell实验测定过表达miR-660-3p和REG4后MGC-803细胞增殖、迁移和侵袭能力,Western blot检测REG4、Cyclin D1、p21、E-cadherin和MPP-2蛋白的表达,双荧光素酶报告系统验证miR-660-3p与REG4的调控关系。结果与正常癌旁组织相比,胃癌组织中的miR-660-3p表达量显著降低(P 0. 05);抑制miR-660-3p可抑制MGC-803细胞增殖、迁移和侵袭,抑制MGC-803中REG4、Cyclin D1和MPP-2表达(P 0. 05),促进p21和E-cadherin表达(P 0. 05); miR-660-3p靶向负调控REG4的表达;过表达REG4可逆转过表达miR-660-3p对MGC-803细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论 miR-660-3p通过靶向REG4抑制MGC-803细胞的增殖、迁移和侵袭。miR-660-3p是胃癌的潜在分子靶点。     

下调MiR-221对胃癌顺铂耐药细胞增殖及顺铂敏感性的影响及其相关机制

背景晚期胃癌(gastric cancer, GC)患者通常接受化疗作为主要治疗方法.然而,化疗的有效性受到GC细胞耐药性的限制.本研究旨在探讨microRNA-221(miR-221)在顺铂(cisplatin, DDP)耐药GC细胞中的生物学作用和潜在机制,以期为临床治疗提供参考.目的研究下调Mi R-221对GC DDP耐药细胞增殖及DDP敏感性的影响及相关机制.方法采用AGS和MGC-803细胞构建出DDP耐药AGS/DDP和MGC-803/DDP细胞. RT-qPCR检测GC及癌旁组织、DDP化疗敏感组织、DDP化疗耐药组织、GC细胞和GC DDP耐药细胞的miR-221表达水平;用LVmiR-221-shRNA慢病毒转染AGS/DDP和MGC-803/DDP细胞后,MTT检测细胞增殖以及对DDP的化学敏感性; Annexin V-FITC/PI染色检测细胞凋亡;进行生物信息学分析以寻找miR-221的潜在靶基因,应用RT-qPCR和Western blotting检测细胞中CCND1的m RNA和蛋白表达.结果在GC组织和GC细胞细中miR-221明显上调,且DDP耐药组织和DDP耐药细胞中miR-221表达更高.下调miR-221抑制了AGS/DDP和MGC-803/DDP细胞增殖,促进了细胞凋亡和细胞对DDP的化学敏感性;CCND1是miR-221的直接靶基因,转染LV-miR-221-sh RNA抑制CCND1 mRNA和蛋白表达水平.结论下调miR-221可以抑制GC DDP耐药细胞增殖,促进其对DDP的化学敏感性,这一作用可能通过抑制靶基因CCND1表达来实现的.     

miR-133靶向JAK2抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的研究miR-133对胃癌(gastric cancer, GC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并探讨其作用机制。方法运用qRT-PCR法检测组织和细胞中miR-133、JAK2的mR NA表达;将miR-133组(转染miR-133 mimics)、miR-NC组(未转染细胞)、miR-133 inhibitors组(转染miR-133 inhibitors)、inhibitors-NC组(转染inhibitors)、JAK2WT(载体psiCHECK2-JAK2-32 MUT(载体pUT和miR-133共转染)、miUTRWT和miR-133共转染)、JAKsiCHECK2-JAK2-3UTR MR-133+JAK2组(miR-133 mimics和JAK2共转染)、miR-133+Vector组(miR-133 mimics和pc-DNA 3。1共转染)均用脂质体法转染至AGS、MGC-803细胞;用Western blot检测细胞中JAK2的蛋白表达; MTT法检测细胞增殖;Transwell法检测细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞荧光素酶活性。结果与人癌旁组织、人正常胃黏膜细胞GES-1相比, GC组织、GC细胞AGS、MGC-803中miR-133均低表达,JAK2均高表达;且过表达miR-133、沉默JAK2均可抑制GC细胞增殖、迁移和侵袭; JAK2为miR-133的靶点,且回补JAK2可逆转miR-133对GC细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论miR-133可抑制GC细胞增殖、迁移和侵袭,其可能与靶向JAK2有关,将可为GC的临床诊断治疗提供新靶点。     

miR-10b通过抑制KLF4表达诱导胃癌细胞对顺铂耐药

背景胃癌(gastric cancer, GC)化疗容易产生获得性化疗耐药.miR-10b能参与调节食管癌和鼻咽癌细胞顺铂(cisplatin,DDP)耐药,而在GC中其与DDP化疗敏感性的关系并不清楚.目的探讨miR-10b是否参与GC细胞对DDP耐药,以及其中的分子机制.方法采用DDP反复刺激SGC-7901和MGC-803细胞并浓度递增法构建SGC-7901/DDP和MGC-803/DDP细胞.检测SGC-7901/DDP和MGC-803/DDP细胞中mi R-10b和KLF4的表达.对SGC-7901和MGC-803细胞转染慢病毒携带的miR-10b过表达载体, MTT法检测miR-10b过表达对DDP敏感性的影响; Annexin V-FITC/PI染色法检测miR-10b过表达对DDP诱导的细胞凋亡的影响; RT-qP CR和Western blot检测miR-10b过表达对KLF4mR NA和蛋白表达的影响.进一步构建异体移植瘤模型,并给予DDP化疗后,宏观观察瘤体形态并称量瘤体质量.对SGC-7901和MGC-803细胞共转染miR-10b和KLF4后,MTT法检测细胞对DDP敏感性变化.结果与SGC-7901和MGC-803细胞比较, SGC-7901/DDP和MGC-803/DDP细胞中miR-10b表达水平显著增加(P 0.01),KLF4mRNA和蛋白水平显著降低(P 0.01).体外实验显示,过表达miR-10b促进GC细胞对DDP耐药,抑制KLF4表达(P0.01);在体实验显示, DDP治疗后, miR-10b组瘤体质量显著高于NC组(P0.01).过表达KLF4能部分逆转过表达miR-10b诱导的GC细胞对DDP耐药.结论miR-10b通过抑制KLF4表达促进GC细胞DDP化疗耐药,而miR-10b高表达产生的DDP耐药性可以被上调KLF4解除.     

长链非编码RNA SNHG16靶向miR-16-5p调控胃癌细胞增殖、凋亡的机制

目的研究小核内RNA宿主基因(SNHG)16对胃癌MGC-803细胞增殖、凋亡的影响和潜在的分子机制。方法 qRT-PCR检测SNHG16和miR-16-5p RNA的表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测MGC-803细胞增殖,流式细胞术测定MGC-803细胞凋亡率,双萤光素酶报告系统验证SNHG16和miR-16-5p的调控关系。结果与人正常胃上皮细胞GES-1组相比,在胃癌细胞MGC-803组中SNHG16的表达量显著升高(P0.05),而miR-16-5p的表达量显著下降(P0.05);抑制SNHG16表达或过表达miR-16-5p均可抑制胃癌MGC-803细胞增殖,促进MGC-803细胞凋亡;双萤光素酶报告系统实验结果表明,SNHG16靶向负调控miR-16-5p的表达;抑制miR-16-5p表达逆转了抑制SNHG16表达对MGC-803细胞增殖、凋亡的影响。结论 SNHG16通过靶向调控miR-16-5p表达影响MGC-803细胞增殖凋亡,可作为胃癌诊断和治疗的分子靶点。     

COPB2表达对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

背景外被体蛋白复合物β2亚基(coatomer protein complex subunitbeta2,COPB2)可参与调节多种肿瘤细胞的恶性生物学行为,而其在胃癌中表达和临床意义仍不完全明确.目的探究COPB2对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响及其机制.方法采用免疫组化法观察COPB2在胃癌组织和癌旁组织中的表达情况.采用Western blot检测胃癌组织和胃癌细胞系(SGC-7901、MKN45和AGS)中COPB2蛋白的表达情况.将COPB2-sh RNA及其相应的阴性对照(Con-sh RNA)、pc DNA-COPB2及其相应的阴性对照(pc DNA-Con)转染到SGC-7901细胞后,采用CCK-8法、细胞集落形成法和Transwell法分析敲低或过表达COPB2对胃癌细胞增殖、集落形成、迁移和侵袭能力的影响;采用Western blot检测敲低或过表达COPB2对胃癌细胞中Akt信号的影响.建立肿瘤异体移植模型,检测敲低COPB2对瘤体生长能力的影响.结果相对于癌旁组织和正常人胃上皮细胞GES-1,胃癌组织和胃癌细胞系(SGC-7901、MKN45和AGS)中COPB2蛋白表达均显著升高.敲低COPB2能抑制SGC-7901增殖、集落形成、迁移与侵袭的能力和p-Akt的蛋白表达,而过表达COPB2则呈现相反作用.另外,肿瘤异体移植模型实验证实敲低COPB2能抑制SGC-7901细胞在体内的生长.结论敲低COPB2表达可抑制胃癌细胞增殖、侵袭转移,且这一作用可能与其抑制Akt信号活性相关.     

LINC00963通过miR-146a-5p/NFE2L1轴调控胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

背景长基因间非编码RNA 00963(long intergene noncodingRNA00963,LINC00963)在肿瘤表达上调,但LINC00963在胃癌中的功能和作用机制并未阐明.Starbase预测显示微小RNA(microRNA,miR)-146a-5p可能是LINC00963的靶基因,核因子类红细胞2相关因子1(nuclear factor erythroid-2 like 1, NFE2L1)可能是miR-146a-5p的靶基因.本研究假设LINC00963可能通过调控miR-146a-5p/NFE2L1轴表达影响胃癌细胞增殖、迁移和侵袭.目的探讨LINC00963对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制.方法选取42例胃癌患者的癌组织及癌旁组织,实时定量PCR(RT-qPCR)检测胃癌组织中LINC00963表达水平;RT-qPCR检测胃癌细胞系SNU-1、AGS、HS-746T中LINC00963、miR-146a-5p和NFE2L1mRNA的表达水平;将胃癌细胞SNU-1分为正常对照(NC)组、siLINC00963组、si-NFE2L1组、si-NC组、miR-146a-5p组、miR-NC组、si-LINC00963+pcDNA-NC组、siLINC00963+pcD NA-NFE2L1组; CCK-8检测细胞活性;Transwell检测细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告实验检测LINC00963、miR-146a-5p、NFE2L1之间的靶向关系.结果胃癌组织及胃癌细胞系SNU-1、AGS、HS-746T中LINC00963表达水平升高,胃癌细胞系中miR-146a-5p表达水平降低, NFE2L1 mRNA表达水平升高(P0.05).LINC00963、NFE2L1低表达或miR-146a-5p高表达,胃癌细胞SNU-1的活性降低,细胞迁移和侵袭数量减少(P0.05).高表达NFE2L1可以逆转LINC00963低表达对SNU-1细胞的作用. LINC00963靶向调控miR-146a-5p; miR-146a-5p靶向调控NFE2L1.结论LINC00963低表达通过调控miR-146a-5p/NFE2L1轴抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭.     

LncRNA LUCAT1通过靶向miR-199a-5p调控宫颈癌细胞活性、侵袭迁移及其分子机制

目的研究长链非编码RNA肺癌相关转录产物(LUCAT)1对宫颈癌细胞的活性、迁移和侵袭的影响,并探讨其机制。方法运用qRT-PCR法检测宫颈癌细胞Hela、正常宫颈细胞Ect1/E6E7中LUCAT1、miR-199a-5p的表达;将si-con组(转染si-con)、si-LUCAT1组(转染si-LUCAT1)、miR-199a-5p组(转染miR-199a-5p模拟物)、miR-NC组(转染miR-NC)、si-con+anti-miR-199a-5p组(共转染si-con和anti-miR-199a-5p)、si-LUCAT1+anti-miR-199a-5p组(共转染si-LUCAT1和anti-miR-199a-5p),均用脂质体法转染至Hela细胞;噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞的活性;Transwell法检测各组细胞的迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果与正常宫颈细胞Ect1/E6E7相比,宫颈癌细胞Hela中LUCAT1表达显著升高,miR-199a-5p表达显著降低;敲减LUCAT1、过表达miR-199a-5p均可明显抑制Hela细胞的活性、迁移和侵袭;miR-199a-5p可抑制野生型LUCAT1细胞的荧光活性,且LUCAT1可负向调控miR-199a-5p的表达;抑制miR-199a-5p可逆转敲减LUCAT1对Hela细胞的活性、迁移、侵袭的抑制作用。结论 LUCAT1可促进宫颈癌细胞的活性、迁移、侵袭,其机制可能与靶向miR-199a-5p有关,将可为宫颈癌的治疗提供靶点。     

miR-1301对胃癌细胞侵袭的影响及分子机制

目的探讨微小核糖核苷酸(miR)-1301在人胃癌(GC)组织内的表达及对MGC-803细胞侵袭的影响。方法选择四川省人民医院收治并行手术切除的60例GC组织与对应癌旁组织。检测miR-1301的相对表达量,分析miR-1301表达的临床病理意义;采用人工合成的miR-1301模拟物转染MGC-803细胞,检测MGC-803细胞过表达miR-1301后迁移、侵袭能力的变化。Western印迹检测miR-1301下游潜在靶点信号传导及转录激活蛋白(STAT)3的表达及侵袭相关分子基质金属蛋白酶(MMP)-2的表达。结果GC组织中的miR-1301表达水平较癌旁组织降低(t=2.419,P=0.026),低表达miR-1301与肿瘤淋巴结转移(χ^2=6.140,P=0.021)、较短的总体生存期(HR=2.140,P=0.021)及无病生存期(HR=3.437,P=0.015)均密切相关;过表达miR-1301能够削弱MGC-803细胞迁移(t=6.423,P=0.021)、侵袭能力(t=3.128,P=0.030)及细胞内STAT3(t=3.781,P=0.028)和MMP-2(t=2.168,P=0.036)的表达水平。结论GC中miR-1301表达降低,miR-1301可能通过下调STAT3/MMP-2轴的表达来削弱GC细胞的侵袭能力。     

miR-515-5p通过靶向Wnt3抑制胃癌细胞增殖和侵袭

目的旨在研究miR-515-5p在调控胃癌进展过程中的作用及机制。方法通过qRT-PCR实验检测胃癌患者标本和胃癌细胞系中miR-515-5p的表达情况。将miR-515-5p模拟物转染至人MGC-803和SGC-7901细胞系。采用CCK-8和transwell实验检测细胞增殖和侵袭能力。qRT-PCR和Western blot实验检测相关mRNA和蛋白表达情况。荧光素酶报告基因实验证实miR-515-5p和Wnt3的靶向关系。结果 miR-515-5p在人胃癌组织和细胞系中的表达水平下调。过表达miR-515-5p可显著抑制胃癌细胞的增殖和侵袭能力。双荧光素报告实验证明Wnt3是miR-515-5p在胃癌细胞中的直接作用靶点。同时,拯救实验证明过表达Wnt3可以逆转miR-515-5p抑制胃癌细胞增殖和侵袭的能力。结论 miR-515-5p可以通过靶向Wnt3抑制胃癌细胞增殖和侵袭。     

干扰FAM201A通过调控miR-146a-5p/GATA6影响直肠癌细胞生物学行为

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)FAM201A对直肠癌细胞生物学行为的影响及其分子机制。方法 选取23例直肠癌患者的癌组织及癌旁组织，用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测序列相似性201家族成员(FAM201)A、miR-146a-5p和人GATA结合蛋白(GATA)6 mRNA的表达水平；将直肠癌细胞SW837分为si-NC组、si-FAM201A组、miR-NC组、miR-146a-5p组、si-FAM201A+anti-miR-NC组、si-FAM201A+anti-miR-146a-5p组；克隆形成实验检测集落形成数；流式细胞术检测细胞凋亡；Western印迹法检测GATA6蛋白的表达；双荧光素酶报告实验检测FAM201A与miR-146a-5p, miR-146a-5p与GATA6的靶向关系。结果 直肠癌组织中FAM201A和GATA6 mRNA表达水平升高，miR-146a-5p表达水平降低，差异有统计学意义(P<0.05)。干扰FAM201A或过表达miR-146a-5p,直肠癌细胞的集落形成数减少，细胞的凋亡率升高，差异有统计学意义(P<0....     

长链非编码RNA ASB16-AS1调控mi R-670-3p/ATXN7L3轴影响胃癌细胞增殖、迁移和侵袭

背景多种长链非编码RNA(longnon-codingRNA,lncRNAs)在胃癌(gastriccancer,GC)进展中被证实发挥抑癌或促癌作用.但lncRNAs数量众多,仍有多种lncRNAs在GC进展中的作用并不明确.因此,筛选具有影响GC细胞增殖、迁移和侵袭的lnc RNAs对GC防治十分必要.目的探讨Lnc RNA ASB16-AS1调控mi R-670-3p/ATXN7L3轴对GC细胞增殖、迁移和侵袭的影响.方法实时荧光定量PCR (real-time quantitative PCR, RTq PCR)和westernblot检测人胃黏膜细胞GES-1、GC细胞HGC-27、AGS、NUGC-4中ASB16-AS1、mi R-670-3p和ATXN7L3的表达水平.将HGC-27细胞分为si-NC、si-ASB16-AS1、mi R-NC、mi R-670-3p、siATXN7L3、si-ASB16-AS1+anti-mi R-NC、si-ASB16-AS1+anti-mi R-670-3p、si-ASB16-AS1+pc DNA-NC、si-ASB16-AS1+pc DNA-ATXN7L3组.采用细胞计数试剂盒、transwell实验分别测定细胞活力、迁移侵袭能力;双荧光素酶报告实验、RT-q PCR、western blot确定ASB16-AS1与mi R-670-3p、mi R-670-3p与ATXN7L3之间的相互作用.结果 GC细胞中ASB16-AS1、ATXN7L3呈高表达,mi R-670-3p呈低表达(P 0.05).抑制ASB16-AS1表达,或过表达mi R-670-3p,或抑制ATXN7L3表达后, HGC-27细胞增殖活力、迁移和侵袭能力均显著降低(P0.05).ASB16-AS1靶向负调控mi R-670-3p表达.mi R-670-3p靶向负调控ATXN7L3表达.抑制mi R-670-3p表达部分逆转抑制ASB16-AS1对HGC-27细胞增殖、迁移和侵袭的影响(P0.05).过表达ATXN7L3部分逆转抑制ASB16-AS1对HGC-27细胞增殖、迁移和侵袭的影响(P 0.05).结论抑制ASB16-AS1通过调控mi R-670-3p/ATXN7L3轴抑制GC细胞增殖、迁移和侵袭.     

miR-219a-5p通过调控NEK6基因表达抑制视网膜母细胞瘤增殖、迁移和侵袭的机制

目的探讨miR-219a-5p对视网膜母细胞瘤(RB)增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法 qRT-PCR检测人RB细胞Y79与正常人视网膜血管内皮细胞ACBRI-181中miR-219a-5p和NEK6 mRNA的表达,Western印迹检测NEK6蛋白表达。分别转染miR-219a-5p mimics和si-NEK6至Y79细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移和侵袭,Western印迹检测周期蛋白依赖性激酶(CDK)1、细胞周期蛋白(Cyclin)D1、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-219a-5p和NEK6的靶向关系。结果 Y79细胞中miR-219a-5p低表达,NEK6 mRNA和蛋白高表达。miR-219a-5p过表达或抑制NEK6表达可抑制Y79细胞增殖、迁移和侵袭,下调Y79细胞CDK1、Cyclin D1、MMP-2和MMP-9蛋白表达。miR-219a-5p在Y79细胞中靶向负调控NEK6表达,NEK6过表达可逆转miR-219a-5p过表达对Y79细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论 miR-219a-5p调控NEK6表达抑制Y79细胞的增殖、迁移和侵袭能力,是治疗RB的新靶点。     

miR-139-5p靶向PAK5基因通过Wnt/β-catenin信号通路对胃癌细胞侵袭和迁移的影响

背景胃癌(Gastric cancer, GC)是人类消化系统最常见的癌症类型,发生局部或全身转移是导致患者预后差的主要原因.微小RNA(micro RNA,miRNA)是胃癌发生发展的重要调控因子.然而, miR-139-5p对胃癌细胞侵袭和转移的影响及机制尚不清楚.目的探究miR-139-5p靶向p21活化的激酶5(PAK5)基因调控Wnt/β-catenin信号通路对胃癌细胞侵袭和迁移的影响.方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot分别检测永生化胃黏膜细胞GES1和不同胃癌细胞SGC-7901、AGS和BGC-823中miR-139-5p和PAK5的表达情况;在胃癌SGC-7901细胞中转染miR-139-5pmimics,qRT-PCR检测转染效果;Transwell侵袭和划痕实验检测过表达miR-139-5p对SGC-7901细胞侵袭和迁移能力的影响;双荧光素酶报告基因实验和Western blot检测miR-139-5p对PAK5的靶向调控关系;Westernblot检测过表达miR-139-5p对Wnt/β-catenin信号通路激活的影响.结果胃癌细胞中miR-139-5p的表达水平明显低于正常胃黏膜细胞(P0.05),而PAK5 m RNA和蛋白表达水平均明显高于正常胃黏膜细胞(P0.05);转染miR-139-5pmimics能够上调SGC-7901细胞中miR-139-5p的表达;过表达miR-139-5p可明显抑制SGC-7901细胞侵袭和迁移能力;双荧光素酶报告基因实验和Westernblot检测结果显示,miR-139-5p可靶向负调控PAK5的表达;过表达miR-139-5p后, SGC-7901细胞中Wnt3a、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)蛋白表达均明显下调.结论miR-139-5p靶向PAK5并通过阻断Wnt/β-catenin信号通路抑制胃癌细胞侵袭和迁移能力.     

MicroRNA-30a-5p对肝癌细胞株SMMC-7721增殖凋亡及侵袭转移的影响

目的 探讨转染miRNA-30a-5p对肝癌细胞生物学行为的影响. 方法 将miRNA-30a-5p模拟物、miRNA-30a-5p抑制物瞬时转染入肝细胞肝癌细胞株SMCC-7721,应用实时荧光定量PCR检测正常肝细胞株L02及肝癌细胞株SMCC-7721转染后的miR-30a-5p的mRNA表达情况,CCK-8法检测细胞增殖能力,克隆形成实验检测集落形成情况,流式细胞术检测细胞凋亡及各组细胞周期分布的差异,Transwell小室检测各组细胞体外侵袭转移能力,建立BALB/c-nu裸小鼠肝癌模型并观察miRNA-30a-5p对肿瘤生长的影响. 结果 实时荧光定量PCR显示,与未转染组及正常肝细胞株L02相比,肝癌细胞株SMCC-7721在转染miRNA-30a-5p模拟物后,mRNA表达明显上调(P＜0.01),而转染miRNA-30a-5p抑制物的mRNA表达明显受抑(P＜0.01),差异有统计学意义.肝细胞肝癌细胞株SMCC-7721在转染miRNA-30a-5p模拟物后,细胞活性、克隆形成能力、迁移和侵袭能力与miRNA-30a-5p抑制物转染组、未转染组及正常肝细胞株L02相比,相对减弱(P＜0.05),miRNA-30a-5p模拟物转染组凋亡率,高于miRNA-30a-5p抑制物转染组、未转染组及正常肝细胞株L02 (P＜0.05),细胞周期出现S期阻滞.裸鼠肝癌模型中,实验组裸鼠瘤体质量及体积明显小于空载体对照组和空白对照组(P＜ 0.05).结论 上调miR-30a-5p表达可明显抑制肝细胞肝癌细胞株SMCC-7721的增殖,促进其凋亡,抑制其迁移、侵袭能力,并且抑制裸小鼠肝癌模型肿瘤的生长.     

普鲁卡因通过miR-15a-5p/PI3K-AKT3途径调控乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制

目的探讨普鲁卡因对乳腺癌细胞MCF-7增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法以不同浓度(0.5、1.0、2.5、5.0、10.0 mmol/L)普鲁卡因处理MCF-7细胞,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;5.0 mmol/L普鲁卡因处理MCF-7细胞48 h后,Transwell法检测迁移和侵袭,实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-15a-5p的表达。转染miR-15a-5p mimic至MCF-7细胞,检测细胞增殖、迁移和侵袭。靶基因预测软件预测miR-15a-5p和AKT3靶向结合位点,双荧光素酶报告基因实验检测二者靶向关系。转染miR-15a-5p inhibitor至MCF-7细胞,并用5.0 mmol/L普鲁卡因处理48 h,检测细胞增殖、迁移和侵袭,Western印迹检测蛋白激酶B(AKT)3的表达。结果与Con组相比,普鲁卡因能明显抑制MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭(P<0.001),促进细胞中miR-15a-5p的表达(P<0.01)。过表达miR-15a-5p可抑制MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭(P<0.001,P<0.01,P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实miR-15a-5p和AKT3的靶向结合有关。抑制miR-15a-5p表达减弱了普鲁卡因对MCF-7细胞增殖、迁移、侵袭及AKT3表达的抑制作用(P<0.05)。结论普鲁卡因能够抑制乳腺癌细胞MCF-7的增殖、迁移和侵袭能力,其机制可能与调控miR-15a-5p/磷脂酰肌激-3-激酶(PI3K)-AKT3途径有关。     

miR-18a-5p调控PSORS1C1对类风湿关节炎成纤维细胞样滑膜细胞迁移、侵袭及炎症反应的影响

目的探讨微小RNA-18a-5p(miR-18a-5p)对类风湿关节炎成纤维细胞(SFs)样滑膜细胞迁移、侵袭及炎症反应的影响及其作用机制。方法体外培养人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞MH7A,分为miR-18a-5p组、miR-NC组、si-PSORS1C1组、si-NC组、miR-18a-5p+pcDNA3.1-PSORS1C1组、miR-18a-5p+pcDNA3.1组。qRT-聚合酶链反应(PCR)检测miR-18a-5p表达;分别采用Transwell小室法检测细胞迁移及侵袭的情况。双荧光素酶报告基因实验检测miR-18a-5p与PSORS1C1的靶向关系;Western印迹检测PSORS1C1、基质金属蛋白酶(MMP)-2、钙黏附蛋白-E(E-cadherin)蛋白表达;测定细胞上清液中白细胞介素(IL)-1、IL-2水平。结果miR-18a-5p在MH7A细胞中的表达水平显著降低(P<0.05),miR-18a-5p过表达可明显抑制MH7A细胞迁移及侵袭能力,IL-1水平与MMP-2表达水平显著降低(P<0.05),而IL-2水平与E-cadherin表达水平均显著升高(P<0.05);miR-18a-5p可靶向结合PSORS1C1;抑制PSORS1C1表达后,与si-NC组相比,MH7A细胞迁移及侵袭能力显著降低(P<0.05),IL-1水平与MMP-2表达水平显著降低(P<0.05),而IL-2水平与E-cadherin表达水平显著升高(P<0.05);过表达PSORS1C1可逆转miR-18a-5p对MH7A细胞迁移、侵袭及炎症因子的作用。结论miR-18a-5p过表达通过抑制PSORS1C1表达而减弱SFs样滑膜细胞迁移、侵袭能力,并可减轻炎症反应。     

白术内酯I抑制胃癌MGC-803细胞增殖的机制

目的探讨白术内酯I对人胃癌MGC-803细胞增殖的抑制作用及其机制。方法 MTT实验和集落形成实验检测白术内酯I对MGC-803细胞增殖的抑制作用;Western印迹检测白术内酯I对人胃癌MGC-803细胞中Notch1、Hey1、Jagged1和Hes1蛋白表达的影响;实时定量PCR分析白术内酯I对人胃癌MGC-803细胞中Notch1、Hey1、Jagged1和Hes1 mRNA水平表达的影响。结果 MTT实验和集落形成实验表明,白术内酯I抑制人胃癌MGC-803细胞增殖,并且呈时间、剂量依赖性(P<0.05);Western印迹实验表明白术内酯I抑制Notch信号通路中Notch1、Hey1、Jagged1和Hes1蛋白表达水平;实时定量PCR结果显示白术内酯I抑制Notch1、Hey1、Jagged1和Hes1 mRNA表达水平(P<0.05)。结论白术内酯I通过抑制Notch信号通路从而抑制人胃癌MGC-803细胞增殖,白术内酯I可能用于治疗胃癌的新型治疗策略。     

白山毛桃根提取物联合miR-135a-5p抑制宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭及迁移的机制

目的 探讨白山毛桃根提取物对宫颈癌细胞HeLa增殖、侵袭及迁移的影响及分子机制。方法 不同浓度的白山毛桃根提取物处理HeLa细胞,将miR-NC、miR-135a-5p mimics、anti-miR-NC、anti-miR-135a-5p分别转染至HeLa细胞,将anti-miR-NC、anti-miR-135a-5p分别转染至HeLa细胞后用40 mg/ml白山毛桃根提取物处理细胞;噻唑蓝(MTT)法、克隆形成实验、Transwell实验分别检测细胞增殖、侵袭及迁移;qRT-聚合酶链反应(PCR)法检测miR-135a-5p的表达量;Western印迹法检测基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9、p-磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)和p-蛋白激酶B(Akt)蛋白表达量。结果 白山毛桃根提取物可显著降低细胞活力、克隆数、侵袭和迁移细胞数、miR-135a-5p表达和MMP2、MMP9、p-PI3K、p-Akt蛋白水平(P<0.05);转染anti-miR-135a-5p可降低细胞活力、克隆数、侵袭和迁移细胞数、MMP2、MMP9、p-PI3K、p-Akt蛋白水平(P<0.05...