壳聚糖影响动静脉内瘘模型兔血管重塑及TLR4/NF-κB信号通路改善血流动力学的机制

目的 观察壳聚糖对动静脉内瘘模型兔血管重塑及Toll样受体(TLR)4/核因子(NF)-κB信号通路的影响，初步探讨壳聚糖改善血流动力学的机制。方法 选取48只新西兰兔建立动静脉内瘘模型，术后在血管吻合部位涂以不同剂量(0、1、5、25μg/ml)壳聚糖溶液，分为模型对照组、低剂量壳聚糖组、中剂量壳聚糖组和高剂量壳聚糖组，每组12只，另取12只作为正常对照组，8 w后检测相关指标。苏木素-伊红(HE)染色观察血管组织形态学，Western印迹检测血管组织TLR4、髓样分化因子(MyD88)、NF-κB、增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达量，实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测血清TLR4、MyD88、NF-κB、PCNA蛋白及mRNA表达。测定各组平均动脉压(MAP)和中心静脉压(CVP)。结果 各组TLR4、MyD88、NF-κB、PCNA蛋白及mRNA表达量均有明显差异(P<0.05)。TLR4蛋白及mRNA表达量中，建模的各组明显高于正常对照组，模型对照组高于中、高剂量壳聚糖组(P<0.05)。MyD88、NF-κB、PCNA蛋白及其mRNA表达量中，低、高...     

姜黄素抑制肝星状细胞MyD88及信号通路细胞因子表达的研究

目的探讨姜黄素在肝星状细胞MyD88依赖性途径中的作用机制。方法体外培养大鼠肝星状细胞株HSC-T6,将HSCT6分为空白对照组、Control siRNA组、MyD88 siRNA干扰组、姜黄素组、姜黄素+Control siRNA组、姜黄素+MyD88 siRNA干扰组,siRNA处理组给予siRNA干扰48 h后,姜黄素组加入姜黄素作用24 h,各组均在收集细胞前12 h给予LPS诱导,收集各组细胞,Western blotting法检测MyD88蛋白表达;RT-PCR术检测细胞因子mRNA的表达。结果 MyD88 siRNA干扰、姜黄素均可降低MyD88蛋白的表达(P0.05),同时给予MyD88 siRNA干扰和姜黄素作用时,MyD88蛋白下降更明显(P0.05)。MyD88 siRNA干扰后TLR2、TLR4 mRNA表达差异无统计学意义(P0.05),姜黄素作用后TLR2、TLR4的mRNA表达降低,二者同时作用其下降更显著(P0.05);MyD88 siRNA干扰、姜黄素处理后NF-κB、TNF-α、IL-1βmRNA表达均降低,二者同时作用后其下降更明显(P0.05)。结论姜黄素可能通过抑制MyD88蛋白表达和MyD88依赖途径上的多种细胞因子的mRNA表达而阻断MyD88依赖性信号通路的转导,促进活化的HSCs凋亡,从而发挥其抗肝纤维化的作用。     

肠炎清对免疫复合溃疡型结肠炎模型大鼠结肠组织NF-κB蛋白表达和TLR4、MyD88基因表达的影响

[目的]观察肠炎清对免疫复合溃疡型结肠炎模型(ICUC)大鼠结肠组织核因子-κB(NF-κB)蛋白表达及Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)基因表达的影响,探讨其治疗IBD的作用机制。[方法]采用三硝基苯磺酸(TNBS)加免疫复合法造模。将大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、肠炎清低、中、高剂量组(8.33、16.67、33.33ml/kg)、柳氮磺吡啶(SASP)组(0.5g/kg)。造模后第2天,用药组分别给予相应药物灌胃,7d后,麻醉处死大鼠,取新鲜结肠标本。采用免疫组化法检测NF-κBp65的蛋白表达,实时定量PCR法(qRT-PCR)检测TLR4mRNA、MyD88mRNA的表达。[结果]免疫组化结果 NF-κBp65在各组各只动物均可见阳性表达,其中肠炎清高剂量组及SASP组可显著下调NF-κBp65的表达,差异有统计学意义(P0.05)。PCR结果:造模后动物结肠组织TLR4mRNA、MyD88mRNA的表达量均有升高。与模型对照组比较,各给药组TLR4 mRNA、MyD88mRNA表达均有不同程度的下调,但差异无统计学意义。[结论]肠炎清能下调NF-κBp65蛋白表达、TLR4、MyD88基因表达,其作用机制可能与调控TLR4/MyD88/NF-κB信号转导通路有关。     

Hp感染性胃癌患者外周血单核细胞TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的变化及其临床意义

背景幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, H. pylori)与胃癌的相关性已经得到了世界范围内的普遍认可,而TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关因子在胃癌患者中明显存在异常表达,因此与胃癌的发生及发展存在密切关系,但其是否与胃癌患者H. pylori感染之间也存在相关性,临床相关研究较少,值得进一步研究.目的探究H. pylori感染性胃癌患者外周血单核细胞TLR4/MyD 88/NF-κB信号通路的变化及其临床意义.方法选取2017-10/2020-10于湖州市第三人民医院收治的80例胃癌患者作为研究组,另外选择同期来我院进行体检且体检结果合格的50例健康者作为对照组.比较两组受试者、不同病理特征胃癌患者以及胃癌H.pylori感染患者外周血单核细胞中TLR-4、核因子κB (NF-κB)和髓样分化因子(MyD88)蛋白表达水平,并分析胃癌患者TLR-4、NF-κB和MyD88蛋白水平与H. pylori感染的相关性.结果与对照组相比较,研究组TLR-4、NF-κB、MyD88表达均明显偏高,差异均有统计学意义(P0.05);胃癌患者不同临床分期、是否出现淋巴结转移和不同浸润深度的TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关分子表达比较,差异均有统计学意义(P0.05);而不同性别、年龄的TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关分子表达比较,差异无统计学意义(P0.05);与H. pylori感染阴性相比较, H. pylori感染阳性TLR-4、NF-κB、MyD88表达均明显偏高,差异均有统计学意义(P 0.05);Pearson检验发现, H.pylori感染与TLR-4、NF-κB、MyD88表达之间有正相关(r=0.726、0.684、0.631,P 0.01).结论胃癌患者外周血单核细胞中的TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关分子表达水平均显著升高,且不同病理特征及参数分组下的TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关分子表达水平存在显著差异,推测H. pylori感染可能通过诱发TLR4/MyD88/NF-κB信号通路异常表达参与了胃癌的发生及发展.     

白蛋白治疗对小鼠脑缺血早期脑组织Toll样受体4和骨髓分化因子88 mRNA表达的影响

目的研究人血白蛋白治疗对局灶性脑缺血再灌注小鼠脑组织Toll样受体4(TLR4)和骨髓分化因子88(MyD88)mRNA表达的影响。方法健康雄性成年昆明小鼠54只,随机分为假手术组(14只)、生理盐水组(20只)和白蛋白组(20只),每组又均分为再灌后6、24 h 2个时间点。采用左侧大脑中动脉线栓法制备小鼠局灶性脑缺血再灌注模型,RT-PCR法检测左侧脑组织TLR4、MyD88 mRNA的表达水平,并进行神经功能缺损评分。结果生理盐水组和白蛋白组脑缺血再灌注后6、24 h TLR4、MyD88 mRNA表达水平明显高于假手术组,且24 h表达水平升高更明显(P<0.05);但白蛋白组6、24 h TLR4、MyD88 mRNA表达量明显低于生理盐水组(P<0.05);24 h白蛋白组小鼠的神经功能缺损评分与生理盐水组比较有明显改善(P<0.05);24 h TLR4、MyD88 mRNA表达水平与神经功能缺损评分呈正相关(r=0.92,r=0.85,P<0.05)。结论白蛋白治疗可以下调脑缺血早期脑组织高表达的TLR4、MyD88 mRNA的水平,改善脑缺血后小鼠神经功能缺损。     

溃疡性结肠炎患者外周血单核细胞中Toll样受体4、NF-κB的表达及其临床意义

目的 分析溃疡性结肠炎(UC)患者外周血单核细胞中Toll样受体4(TLR4)、核因子-κ,B(NF-κB)水平的变化,探讨两者在UC发病中作用.方法 根据结肠镜检和病理活检结果,106例UC患者分为活动期组(57例)和缓解期组(49例),另同期健康体检患者50例作为对照组,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)技术,测定所有对象外周血单核细胞中TLR4和NF-κB的表达情况.结果 与对照组比较,UC患者外周血单核细胞TLR4、NF-κBmRNA表达水平显著升高,且活动期组与缓解期组间比较差异有统计学意义(P＜0.05):按病理分级与Ⅰ级比较,Ⅱ级、Ⅲ级患者外周血单核细胞TLR4、NF-κB mRNA表达水平显著升高,且随着病理分级升高,TLR4 、NF-κB mRNA表达依次增加(P ＜0.05).UC患者TLR4与NF-κB mRNA表达均呈线性正相关,相关系数r=0.753(P ＜005).结论 UC患者外周血单核细胞中TLR4及NF-κB呈高表达状态,且TLR4的表达与NF-κB的表达密切相关.     

肾衰饮对CRF大鼠TLR4/MyD88/NF-κB信号通路及炎症状态的影响

目的基于toll样受体(TLR)4/髓样细胞分化因子(MyD)88/核转录因子(NF)-κB信号通路探讨肾衰饮对慢性肾衰竭(CRF)大鼠炎症状态的干预机制。方法将60只SD大鼠,随机分成四组,分别为正常组、模型组、尿毒清组和肾衰饮组。进行4 w的干预治疗后,苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠肾脏组织病理形态改变,检测血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN),酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,分别采用免疫组化法和Western印迹检测大鼠肾脏组织TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达。结果与正常组比较,模型组HE染色显示大鼠肾脏组织发生明显病理改变,血Scr、BUN、IL-1β、IL-6、TNF-α水平均显著升高(P<0.01),肾脏组织中TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达均显著升高(P<0.01);与模型组比较,尿毒清组和肾衰饮组肾脏组织病理改变明显改善,血清Scr、BUN、IL-1β、IL-6、TNF-α水平均显著降低(P<0.01),肾脏组织中TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达均显著降低(P<0.01)。结论肾衰饮能有效改善CRF大鼠的肾功能,其机制可能是抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路从而抑制炎症反应发生,达到治疗CRF的目的。     

高血压合并慢性阻塞性肺病患者外周血微小RNA-155与Toll样受体4-核转录因子κB通路的相关性

目的探讨高血压合并慢性阻塞性肺病(COPD)患者外周血微小RNA-155(miR-155)水平与Toll样受体4-核转录因子κB(TLR4-NF-κB)通路的相关性。方法选择2017年10月-2019年10月收治的高血压合并COPD患者200例作为高血压+COPD组,单纯高血压患者200例和单纯COPD患者200例分别设为高血压组和COPD组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测两组患者外周血单核细胞miR-155表达情况,并采用Western blot检测两组TLR4-NF-κB通路相关蛋白表达情况,分析miR-155与TLR4-NF-κB通路相关蛋白表达的相关性,并采用受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-155对老年高血压合并COPD的诊断价值。结果高血压+COPD组患者外周血miR-155相对表达量高于高血压组和COPD组,且高血压组明显高于COPD组(P<0.05)。高血压+COPD组患者TLR4-NF-κB信号通路相关蛋白TLR4、髓样分化因子(Myd88)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)以及NF-κBp65相对表达量高于高血压组和COPD组,且高血压组明显高于COPD组(P<0.05)。高血压+COPD患者miR-155水平与TLR4(r=0.332)、Myd88(r=0.372)、TRAF6(r=0.286)以及NF-κBp65(r=0.357)蛋白表达水平呈正相关(均P<0.05)。ROC曲线分析显示,外周血miR-155诊断高血压+COPD的ROC曲线下面积为0.903。结论高血压合并COPD患者外周血miR-155表达水平异常升高,其表达异常与患者TLR4-NF-κB信号通路激活有关。     

TLR4介导小鼠小胶质细胞自噬在脑出血后炎症反应的作用机制研究

目的研究TLR4介导小胶质细胞自噬在脑出血后炎症反应的作用机制。方法从C57BL/6J小鼠中提取分离原代小胶质细胞,分组1中,A组:小胶质细胞;B组:小胶质细胞+阴性siRNA转染;应用C组:小胶质细胞+TLR4-siRNA转染。应用Q-PCR和Western Blot检测分组1中TLR4的表达。分组2中,D组:小胶质细胞+等量的对照溶剂(0.9%NaCl);E组:小胶质细胞+自噬抑制剂(3-MA);F组:小胶质细胞+control-siRNA+3-MA;G组:小胶质细胞+TLR4-siRNA+等量的对照溶剂(0.9%NaCl);H组:小胶质细胞+TLR4-siRNA+3-MA。Western Blot检测LC3-Ⅱ/Ⅰ比值、TLR4、MyD88和核转录因子(NF-κB)蛋白表达。ELISA检测细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)水平。结果 (1)A组和B组TLR4 mRNA和蛋白表达水平无明显变化(P>0.05);与B组相比,C组TLR4 mRNA和蛋白表达水平下调(P <0.05)。(2)D组、E组和F组TLR4、MyD88和NF-κB p65蛋白水平无明显变化(P>0.05);与D组相比,G组TLR4、MyD88和NF-κB p65蛋白水平下调(P <0.05);与F组相比,H组TLR4、MyD88和NF-κB p65蛋白水平下调(P <0.05)。E组和F组LC3-Ⅱ/Ⅰ比值、TNF-α、IL-1β、IL-6水平无明显变化(P>0.05);与F组相比,H组LC3-Ⅱ/Ⅰ比值、TNF-α、IL-1β、IL-6水平下降(P <0.05);与G组相比,H组LC3-Ⅱ/Ⅰ比值、TNF-α、IL-1β、IL-6水平下降(P <0.05)。结论 TLR4-siRNA可抑制TLR4介导的小胶质细胞自噬,从而减轻自噬引起的脑出血炎症损伤。     

基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路探讨毒消肝清丸对肝硬化内毒素血症大鼠肝组织炎症反应的影响

目的通过CCl4复合造模制备肝硬化内毒素血症模型,探讨毒消肝清丸对大鼠肝脏炎性损伤的保护机制。方法:66只大鼠造模过程中有17只死亡,取3只大鼠检测内毒素和观察肝脏结构,确定造模成功,剩余随机分成正常组(n=6),模型组(n=8)、乳果糖组(n=8)、毒消肝清丸高、中、低剂量组(223. 4 mg/kg、111. 7 mg/kg、58. 9 mg/kg,n=8)。采用CCl4复合造模法造模8周,制备肝硬化内毒素血症动物模型。正常组和模型组给予蒸馏水,乳果糖组予乳果糖,毒消肝清丸药物组按上述剂量每天给药1次,连续8周。测定内毒素含量变化、HE染色观察肝脏组织变化情况、采用ELISA检测肝脏组织TNFα、IL-1β、IL-6的含量;Western Blot和RT-PCR技术检测TLR4、MyD88、NF-κB蛋白及其mRNA的表达。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t法。结果各组间大鼠血浆内毒素水平差异有统计学意义(F=26. 011,P 0. 001);模型组内毒素水平较正常组显著升高(P 0. 01);给药后乳果糖组、毒消肝清丸不同剂量组大鼠血清内毒素含量较模型组均显著降低(P值均0. 01)。各组间大鼠血清IL-6、IL-1β以及TNFα水平差异均有统计学意义(F值分别为35. 390、38. 271、40. 241,P值分别为0. 002、0. 001、0. 001);与正常组比较,模型组大鼠血清IL-1β、IL-6以及TNFα显著升高(P值均0. 01);给药后乳果糖组及毒消肝清丸不同剂量药物组大鼠血清IL-1β、IL-6以及TNFα水平较模型组均显著降低(P值均0. 01)。各组间大鼠肝组织TLR4、MyD88、NF-κB mRNA及其蛋白表达差异均有统计学意义(F值分别为24. 483、29. 547、19. 242、18. 752、22. 146、15. 834,P值均0. 01);与正常组大鼠相比,模型组大鼠肝脏TLR4、MyD88、NF-κB mRNA及其蛋白相对表达量均显著升高(P值均0. 01);乳果糖和毒消肝清丸不同剂量治疗后大鼠肝组织TLR4、MyD88、NF-κB mRNA及其蛋白相对表达量较模型组均显著下降(P值均0. 01)。与低剂量治疗组比较,中高剂量组大鼠肝脏TLR4、MyD88、NF-κB mRNA及其蛋白相对表达量下降尤为显著(P值均0. 01)。结论药物组可能通过下调肝脏组织TLR4/MyD88/NF-κB信号通路来抑制炎症信号的转导,减少了细胞因子TNFα、IL-1β、IL-6的表达,进而缓解内毒素血症并对肝脏组织起到保护作用。     

Toll样受体4和核因子-κB在颅内动脉瘤组织中的表达及作用机制

目的探讨Toll样受体(TLR)4和核因子(NF)-κB在颅内动脉瘤组织中的表达及作用机制。方法在开颅动脉瘤夹闭术中收集18例动脉瘤标本,根据Hunt-hess标准分为破裂组10例、未破裂组8例;取开颅夹闭术中获取入路同侧血管10份为正常对照组。分别行光镜和电镜观察标本病理学改变,α-actin染色结合电镜观察计算出血管平滑肌细胞密度;免疫组化法检测标本中TLR4、NF-κB、CD68、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3表达水平;RT-PCR和Western印迹检测标本中TLR4、NF-κB mRNA和蛋白的相对表达量。结果动脉瘤血管壁分布有少量阳性平滑肌细胞,而正常血管壁平滑肌细胞α-actin染色几乎均为阳性,其中破裂组、未破裂组的血管平滑肌细胞密度明显低于正常对照组(P<0.01);破裂组血管平滑肌细胞密度明显低于未破裂组(P<0.05)。破裂组、未破裂组TLR4、NF-κB、CD68、Caspase-3表达水平明显高于正常对照组,破裂组明显高于未破裂组(P<0.05)。破裂组、未破裂组TLR4和NF-κB mRNA和蛋白的相对表达量均明显高于正常对照组,破裂组明显高于未破裂组(P<0.05)。结论 TLR4/NF-κB信号通路在血管内皮损伤介导的颅内动脉瘤血管壁炎性反应和平滑肌细胞介导的退行性病变过程中发挥重要作用。     

Toll样受体4和核因子-κB信号通路在溶血磷脂酸致动脉粥样硬化中的作用

目的探讨Toll样受体4(TLR4)/NF-κB信号通路在溶血磷脂酸(LPA)致动脉粥样硬化中的作用。方法以不同浓度LPA(0¹0μmol/L)刺激人单核细胞株THP-1细胞4h,以及LPA 1μmol/L处理THP-1细胞不同时间(010μmol/L)刺激人单核细胞株THP-1细胞4h,以及LPA 1μmol/L处理THP-1细胞不同时间(0⁸h),荧光定量RT-PCR法测定TLR4mRNA表达,Western blot检测TLR4蛋白、细胞核NF-κB p65表达变化,ELISA法测定细胞因子TNF-α,随后在LPA 1μmol/L条件下,TLR4单抗干预THP-1细胞,观察其对LPA诱导的细胞核NF-κB p65表达及TNF-α分泌水平的影响。结果当LPA 1μmol/L时,TLR4mRNA和蛋白及细胞核NF-κB p65表达较0μmol/L、0.1μmol/L、0.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L LPA明显增高,差异有统计学意义(P<0.01)。LPA 1μmol/L处理THP-1细胞4h时,THP-1细胞TLR4mRNA和蛋白及细胞核NF-κB p65表达水平明显高于0、1、2、8h(P<0.01)。与TLR4单抗干预前比较,TLR4干预后LPA诱导的THP-1细胞NF-κB p65表达及TNF-α分泌水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 LPA可显著上调THP-1细胞TLR4表达及促进NF-κB的活化,LPA致动脉粥样硬化作用可能部分是由TLR4/NF-κB信号途径介导的。     

阿那白滞素对病毒性心肌炎小鼠的保护作用及对TLR4/TRAF6通路的影响

目的探究阿那白滞素对病毒性心肌炎小鼠的保护作用及对Toll样受体4(TLR4)与肿瘤坏死因子受体活化因子6(TRAF6)通路的影响。方法将雄性BALB/c小鼠平均分为正常组(A组)、模型组(B组)、阿那白滞素低剂量组(C组)与阿那白滞素高剂量组(D组)4组,每组10只。A组小鼠腹腔注射不含柯萨奇病毒B3(CVB3)稀释液;B组小鼠腹腔注射CVB3病毒悬浮液制备病毒性心肌炎模型;C组、D组均在B组基础上分别注射0.02mL/g、0.2mL/g的阿那白滞素。采用酶联免疫法测定心肌肌钙蛋白T(cTnT)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1(IL-1)、白介素-6(IL-6)水平;制备心肌组织石蜡切片进行苏木素-伊红染色(HE染色)以及马松染色(Masson染色),细胞流式仪检测心肌细胞凋亡;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质印迹(Westernblot)法测定心肌组织中TLR4、TRAF6、核因子-κB(NF-κB)、髓样分化蛋白88(MyD88)、TIR结构域接头分子(TRIF)mRNA表达。结果与A组比较,B组血清cTnT、CK-MB、MDA水平升高,SOD水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);与B组比较,C组、D组cTnT、CK-MB、MDA水平降低,SOD水平升高,且D组较C组变化明显,差异均有统计学意义(P<0.05)。HE染色以及Masson染色显示,与A组比较,B组心肌组织病理评分、心肌纤维比例升高,与B组比较,C组、D组心肌组织病理评分、心肌纤维比例降低,且D组降低程度较C组明显,差异均有统计学意义(P<0.05)。C组、D组心肌组织凋亡率低于B组,D组心肌组织凋亡率低于C组,差异均有统计学意义(P<0.05)。与A组比较,B组TLR4、TRAF6、NF-κB、MyD88、TRIF的mRNA、蛋白表达均升高;与B组比较,C组TLR4、TRAF6、NF-κB、MyD88、TRIF的mRNA、蛋白表达降低,与C组比较,D组TLR4、TRAF6、NF-κB、MyD88、TRIF的mRNA、蛋白表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论阿那白滞素对病毒性心肌炎小鼠心肌组织具有保护作用,可能与抑制TLR4/TRAF6信号通路相关。     

Toll样受体信号转导通路负性调控因子在慢性丙型肝炎患者免疫发病机制中的作用

目的:研究Toll样受体(TLRs)信号转导通路负性调控因子在慢性丙型肝炎患者免疫发病机制中的作用。方法:选择2015年1月-10月我院收治的慢性丙型肝炎患者19例为研究组,正常对照组为17例本院健康志愿者,使用荧光定量PCR检测研究组与对照组外周血单个核细胞TLRs信号通路负性调节因子A20、IRAK-M、MyD88s与TLR2基因的表达;采用ELISA法检测血浆TNF-α水平。结果:研究组TLR2表达水平(17.38±3.45),高于对照组(4.24±1.37)(P0.05);研究组负性调节因子A20相对表达量(10.53±1.16),高于对照组(1.36±0.21)(P0.05);研究组IRAK-M相对表达量(26.22±2.62),高于对照组(9.52±1.34)(P0.05);研究组MyD88s相对表达量(4.51±1.57),高于对照组(P0.05)。研究组血浆TNF-α水平为(58.45±4.36)Pg/ml,明显高于对照组(20.12±2.24)Pg/ml,两组比较差异有统计学意义(P0.05)。研究组TLR2 mRNA和血清总胆红素(TBil)呈正相关(r=0.647,P0.05);研究组TLR2 mRNA和凝血酶原活动度(PTA)呈负相关(r=-0.663,P0.05);研究组TLR2基因表达和同组TNF-α水平呈正相关(r=0.892,P0.01)。结论:TLRs信号通路负性调节因子参与慢性丙型肝炎的发生,A20、IRAK-M、MyD88s等负性调节因子参与了慢性丙型肝炎发病过程中的免疫损伤。     

高迁移率族蛋白1对肝星状细胞Toll样受体4信号途径的激活作用

目的 探讨高迁移率族蛋白1 (HMGB1)对肝星状细胞Toll样受体4(TLR4)信号途径的激活作用及其下游表达产物的影响.方法 培养永生化小鼠肝星状细胞株野生型(JS1)、TLR4基因敲除TLR4-/-(JS2)、MyD88基因敲除MyD88-/- (JS3),用脂质体介导虫荧光酶标记的NF-κB(NF-κB-luc)或AP-1 (AP-1-luc)反应性报告质粒与内参照质粒(R-Luc)共转染JS1、JS2和JS3细胞.每种细胞均分为阴性对照组(NC组)、脂多糖(LPS)处理组、高迁移率族蛋白1(HMGB1)处理组,检测HMGB1、LPS处理后细胞NF-κB及AP-1的活性、各组细胞单核细胞趋化蛋白(MCP-1)mRNA及蛋白的表达.数据经正态性及方差齐性检验,两组间样本均数比较采用t检验.结果 JS1细胞LPS处理组和HMGB1处理组的NF-κB活性分别为(12.72±5.06)、(1.97±0.29)与NC组的(0.85±0.08)相比,t值分别为4.06和6.27,P值均＜0.05,差异均有统计学意义; JS1细胞LPS处理组和HMGB1处理组的AP-1活性分别为(2.01±0.21)、(1.07±0.17)与NC组的(0.61±0.11)相比,t值分别为7.93和3.32,P值均＜0.05,差异均有统计学意义;JS1细胞LPS处理组和HMGB1处理组MCP-1的mRNA相对表达量分别为4.44±0.38、2.42±0.26,与NC组(值为1)相比,t值分别为15.54和9.29,P值均＜0.05,差异均有统计学意义; JS1细胞LPS处理组和HMGB1处理组的MCP-1的蛋白相对表达量分别为(765.57±10.23)、(550.46±15.97)与NC组的(437.14±3.68)相比,t值分别为52.32和11.97,P值均＜0.05,差异均有统计学意义.在JS2和JS3细胞中,LPS和HMGB1处理后上述观测指标与NC组相比,P值均＞0.05,差异无统计学意义.结论 HMGB1作为一种内源性TLR4配体,能激活肝星状细胞株JS1细胞的TLR4信号,促进TLR4介导的炎症表型.     

Toll样受体与炎症性肠病

Toll样受体(TLRs)是天然免疫系统中的细胞跨膜受体,可识别病原相关分子模式(PAMP).不同的PAMP激活不同的TLR,TLR在髓样分化蛋白(MD2)、CD14辅助下,通过MyD88依赖型信号通路或非MyD88依赖型信号通路激活核因子-κB(NF-κB)、干扰素调节因子3/7(IRF3/7)及活化蛋白-1(AP-1),最终诱导下游目的基因表达.TLR对肠黏膜天然免疫反应调节发挥关键作用;而病原微生物在IBD的发生中起重要作用.生理情况下,肠上皮细胞持续表达TLR3和TLR5,而TLR2和TLR4几乎无法检测到;但在IBD患者的肠上皮细胞表面,却可检测到TLR2和TLR4的表达.随着对TLR信号通路研究和认识的不断深入,以TLR为靶点的药物研究也正成为一个热点.     

电针对氯苯丙氨酸致失眠大鼠Toll样受体/核因子-κB信号通路的影响

目的观察电针对氯苯丙氨酸(PCPA)致失眠大鼠脾脏Toll样受体(TLR)/核因子(NF)-κB信号通路关键基因mRNA表达的影响。方法取健康SPF级Wistar雄性大鼠16只,随机分成对照组、模型组、安定组和电针组,每组4只。模型组以腹腔注射PCPA建立大鼠失眠模型,安定组给予腹腔注射安定,电针组给予电针百会、神庭穴位,连续治疗5 d后用实时荧光定量PCR(RT-PCR)测定大鼠脾脏TLR3、TLR4、髓样分化蛋白(My D)88、TAB2及NF-κB mRNA表达。结果与对照组比较,模型组大鼠脾脏TLR3、TLR4、My D88、TAB2及NF-κB mRNA表达水平显著增高(P0.05);与模型组比较,安定组和电针组大鼠脾脏TLR3、TLR4、My D88、TAB2及NF-κB mRNA表达水平显著下降(P0.05),但电针组与安定组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论失眠可以上调TLR/NF-κB信号通路相关基因mRNA表达,TLR/NF-κB信号通路可能参与免疫与睡眠的调节;电针可通过调节TLR/NF-κB信号转导通路调控相关免疫物质的释放而改善睡眠质量。     

抗痨清脑汤联合地塞米松治疗结核性脑膜炎的疗效及对单核细胞TLR4、MyD88表达的影响

目的探讨抗痨清脑汤联合地塞米松治疗结核性脑膜炎(TBM)的疗效及对病人单核细胞Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)表达的影响。方法将我院2015年1月—2017年11月收治的88例TBM病人随机分为治疗组与对照组,各44例。两组均给予常规治疗,对照组给予地塞米松治疗,治疗组在对照组基础上联合抗痨清脑汤治疗。比较两组临床疗效、临床症状消失时间、住院时间、脑脊液生化指标、单核细胞TLR4 mRNA、MyD88 mRNA表达水平及TLR4、MyD88表达水平。结果治疗后,治疗组总有效率为93.18%高于对照组的75.00%(P0.05)。治疗组头痛、发热、恶心呕吐等症状消失时间及住院时间均短于对照组(P0.05)。治疗后,两组脑脊液细胞计数、蛋白较治疗前均降低(P0.05),糖类与氯化物较治疗前均升高(P0.05),且治疗组优于对照组(P0.05)。治疗组单核细胞TLR4 mRNA、MyD88 mRNA、TLR4、MyD88表达明显低于对照组(P0.05)。结论抗痨清脑汤联合地塞米松治疗TBM,临床疗效确切,可缓解病人临床症状,明显改善脑脊液生化指标,并降低单核细胞TLR4、MyD88表达水平。     

积雪草苷通过下调TLR9/MyD88/NF-κB p65减轻大鼠脑动脉瘤壁的炎症反应和瘤体大小

目的研究积雪草苷调控Toll样受体9(TLR9)/髓样分化因子88(MyD88)/核因子κB p65(NF-κB p65)对脑动脉瘤(CA)大鼠动脉瘤壁炎症反应的影响。方法建立CA大鼠模型,随机分为模型组、积雪草苷(50 mg/kg)组、CpG-ODN(TLR9激活剂,4 mg/kg)组、积雪草苷(50 mg/kg)+CpG-ODN(4 mg/kg)组,每组12只,另取12只大鼠设为假手术组。分组处理后,检测大鼠脑血管壁厚度和动脉瘤体积,苏木精-伊红(HE)染色检测脑血管组织形态,酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠脑血管组织和血清中白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,Western blot检测大鼠脑血管组织TLR9、MyD88及核内NF-κB p65蛋白水平。结果与假手术组相比,模型组大鼠血管壁明显变厚,脑动脉血管隆起,呈瘤样改变等CA症状,脑血管壁厚度、动脉瘤体积、脑血管组织和血清中IL-1β及TNF-α水平、脑血管组织TLR9、MyD88及核内NF-κB p65蛋白水平明显升高(P0.05)。与模型组相比,积雪草苷组大鼠CA症状变轻,脑血管壁厚度、动脉瘤体积、脑血管组织和血清中IL-1β及TNF-α水平、脑血管组织TLR9、MyD88及核内NF-κB p65蛋白水平降低(P0.05);而CpG-ODN组大鼠CA症状加重,脑血管壁厚度、动脉瘤体积、脑血管组织和血清中IL-1β及TNF-α水平、脑血管组织TLR9、MyD88及核内NF-κB p65蛋白水平升高(P0.05)。使用积雪草苷和CpG-ODN联合处理,较积雪草苷组大鼠CA症状加重,脑血管壁厚度、动脉瘤体积、脑血管组织和血清中IL-1β及TNF-α水平、脑血管组织TLR9、MyD88及核内NF-κB p65蛋白水平升高(P0.05)。结论积雪草苷可通过下调TLR9/MyD88/NF-κB p65通路蛋白表达减轻CA大鼠脑动脉血管组织的炎症,减小瘤体。     

基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路探讨大蒜素对大鼠冠状动脉微栓塞的影响及作用机制

目的基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路探讨大蒜素对大鼠冠状动脉微栓塞(CME)的影响及作用机制。方法将60只SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、阳性对照组、大蒜素低、中、高剂量组,每组10只,其中空白对照组和模型组给予等体积生理盐水灌胃,阳性对照组给予瑞舒伐他汀[3.0 mg/(kg·d)]灌胃,大蒜素低、中、高剂量组分别给予大蒜素[10、20、40 mg/(kg·d)]灌胃,预处理14天后,模型组、阳性对照组及大蒜素低、中、高剂量组采用左心室注射42μm微栓塞球造模,空白对照组采用左心室注射等体积生理盐水。检测大鼠心功能变化; HBFP染色法检测心肌微梗死面积; TUNEL法检测心肌细胞凋亡情况; ELISA法检测白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;电化学法检测肌钙蛋白I(c Tn I)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平; RT-PCR法检测大鼠心肌组织中Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)和核因子κB p65(NF-κB p65) m RNA水平;Western blot法检测大鼠心肌组织中TLR4、MyD88和NF-κB p65蛋白表达。结果大蒜素可显著改善CME大鼠心功能,明显降低心肌微梗死面积和心肌细胞凋亡率,有效抑制炎症因子IL-1β、TNF-α和心肌损伤指标c Tn I、CK-MB表达,明显下调TLR4、MyD88和NF-κB p65 m RNA和蛋白相对表达量。结论大蒜素可抑制CME大鼠心脏功能障碍和心肌损伤,其作用机制可能与TLR4/MyD88/NF-κB信号通路密切相关。