远志皂苷调控miR-325-5p/GADD45B对高糖诱导小鼠足细胞损伤的影响及其机制

目的探讨远志皂苷(TEN)对高糖诱导的小鼠肾脏足细胞MPC5损伤的影响及分子作用机制。方法将MPC5细胞分为正常对照(NG)组、高糖刺激(HG)组、TEN低中高3个浓度实验组,NG组用5 mmol/L D-葡萄糖处理,HG组用30 mmol/L D-葡萄糖处理,实验组用低中高(50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L)TEN进行处理,实时荧光定量(qRT)-聚合酶链反应(PCR)检测MPC5细胞中miR-325-3p和GADD45BmRNA的表达,Western印迹检测GADD45B、podocin和nephrin蛋白表达,流式细胞术测定细胞凋亡率,双荧光素酶报告系统验证miR-325-3p与GADD45B的关系。结果TEN可使高糖诱导的小鼠足细胞MPC5中miR-325-3p、podocin、nephrin和B细胞淋巴瘤(Bcl)-2含量显著升高(P<0.05),GADD45B、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达量及细胞凋亡率显著降低(P<0.05),抑制高糖诱导的小鼠足细胞MPC5损伤和凋亡;miR-325-3p靶向负调控GADD45B的表达;过表达miR-325-3p可抑制高糖诱导的MPC5损伤,并抑制细胞凋亡;抑制miR-325-3p表达逆转了TEN对高糖诱导的小鼠足细胞损伤的作用。结论远志皂苷通过调控miR-325-3p/GADD45B减轻高糖诱导的小鼠肾脏足细胞MPC5的损伤,抑制细胞凋亡。     

龙胆苦苷通过调控miR-218表达减轻高糖诱导的小鼠肾脏足细胞损伤

目的 探讨龙胆苦苷(GPS)对高糖诱导的小鼠肾脏足细胞(MPC5)损伤的影响及其可能的作用机制。方法 高糖诱导MPC5细胞建立细胞损伤模型(HG组),正常培养的MPC5细胞记为Con组，用不同剂量(8、40、200μg/μl)GPS处理高糖诱导的MPC5细胞(HG+GPS-L组、HG+GPS-M组、HG+GPS-H组),anti-miR-NC、anti-miR-218转染至MPC5细胞后加入30 mmol/L D-葡萄糖处理24 h(HG+anti-miR-NC组、HG+anti-miR-218组),miR-NC、miR-218 mimics分别转染至MPC5细胞后加入200μg/μl GPS与30 mmol/L D-葡萄糖共同处理24 h(HG+GPS+miR-NC组、HG+GPS+miR-218组);流式细胞术检测细胞凋亡率；qRT-PCR法检测miR-218相对表达量；Western印迹法检测肾素(nephrin)、足突蛋白(podocin)、剪切的胱天蛋白酶(cleaved-caspase)3、cleaved-caspase9蛋白相对表达量。结果 HG组nephrin、podo...     

Nephrin，podocin及α-actinin在小鼠肾小足细胞系的表达与分布

目的：探讨nephrin，podocin及α-actinin在小鼠肾小球足细胞系(MPC5)的表达与分布，为进一步研究上述分子间的相互作用建立稳定的实验平台。方法：培养小鼠MPC5，以γ-干扰素诱导在33℃传代增生，继而在37℃培养两周使细胞分化成熟以用于实验研究。相差显微镜观察足细胞形态；免疫荧光染色观察nephrin，podocin，α-actinin及WTl在足细胞的分布；RT-PCR检测足细胞nephrin，podocin及α-actinin4的mRNA；免疫蛋白印迹检测nephrin，podocin，α-actinin及WTl蛋白。结果：成熟足细胞呈星形且有突起形成。免疫荧光及免疫蛋白印迹显示足细胞特异性的表达WTl分子。免疫荧光染色可见nephrin和podocin在足细胞内均呈线状分布于胞膜表面，α-actinin呈细丝状分布于胞质内及伸出的突起中。在mRNA水平及蛋白水平均检测到nephrin，podocin和α-actinin-4表达，其蛋白大小分别为180KDa，45KDa和100KDa。结论：首次在mRNA水平及蛋白水平证实了小鼠MPC5能够表达nephrin，podocin及α-actinin，为进一步研究这些分子间的相互作用奠定了基础。     

Nephrin,podocin及α-actinin在小鼠肾小球足细胞系的表达与分布

目的 :探讨nephrin ,podocin及α actinin在小鼠肾小球足细胞系 (MPC5)的表达与分布 ,为进一步研究上述分子间的相互作用建立稳定的实验平台。　 方法 :培养小鼠MPC5,以γ 干扰素诱导在 33℃传代增生 ,继而在37℃培养两周使细胞分化成熟以用于实验研究。相差显微镜观察足细胞形态 ;免疫荧光染色观察nephrin ,podocin ,α actinin及WT1在足细胞的分布 ;RT PCR检测足细胞nephrin ,podocin及α actinin 4的mRNA ;免疫蛋白印迹检测nephrin ,podocin ,α actinin及WT1蛋白。　 结果 :成熟足细胞呈星形且有突起形成。免疫荧光及免疫蛋白印迹显示足细胞特异性的表达WT1分子。免疫荧光染色可见nephrin和podocin在足细胞内均呈线状分布于胞膜表面 ,α actinin呈细丝状分布于胞质内及伸出的突起中。在mRNA水平及蛋白水平均检测到nephrin ,podocin和α actinin 4表达 ,其蛋白大小分别为 180KDa,4 5KDa和 10 0KDa。　 结论 :首次在mRNA水平及蛋白水平证实了小鼠MPC5能够表达nephrin ,podocin及α actinin ,为进一步研究这些分子间的相互作用奠定了基础。     

长链非编码生长停滞特异性蛋白6反义RNA1靶向miRNA-374a-3p调控高糖诱导的人肾小管上皮细胞损伤及纤维化分子机制的研究

目的 探讨长链非编码生长停滞特异性蛋白6反义RNA1(LncRNA DLX6-AS1)对高糖诱导的人肾小管上皮细胞HK-2损伤及纤维化的影响及其可能作用机制。方法 高糖诱导HK-2细胞建立细胞损伤模型，实验分为正常对照（Con）组、高糖组（HG）、LncRNA DLX6-AS1小分子干扰RNA阴性对照（si-NC）+HG组（si-NC+HG组）、LncRNA DLX6-AS1小分子干扰RNA(si-LncRNA DLX6-AS1)+HG组（si-LncRNA DLX6-AS1+HG组）、miR-374a-3p寡核苷酸模拟物阴性对照mimic NC序列（miR-NC）+HG组（miR-NC+HG组）、miR-374a-3p寡核苷酸模拟物（miR-374a-3p mimics）+HG组（miR-374a-3p+HG组）、miR-374a-3p特异性寡核苷酸抑制剂阴性对照（anti-miR-NC）+si-LncRNA DLX6-AS1+HG组（anti-miR-NC+si-LncRNA DLX6-AS1+HG组）、miR-374a-3p特异性寡核苷酸抑制剂（anti-miR-374a-3p）...     

LncRNA MIAT靶向miR-361-3p影响内毒素诱导的血管内皮细胞氧化应激损伤的分子机制

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)心肌梗死相关转录本(MIAT)对内毒素(LPS)诱导的血管内皮细胞氧化应激损伤的影响及分子机制。方法 将人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)随机分为control组、LPS组、si-LncRNA MIAT+LPS组、si-NC+LPS组、miR-361-3p+LPS组、miR-NC+LPS组、anti-miR-361-3p+si-LncRNA MIAT+LPS组、anti-miR-NC+si-LncRNA MIAT+LPS组；实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测LncRNA MIAT和miR-361-3p表达水平；流式细胞术实验检测细胞凋亡；Western印迹法检测凋亡相关蛋白表达；酶联免疫吸附试验(ELISA)检测丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性；双荧光素酶报告实验检测LncRNA MIAT和miR-361-3p的靶向关系。结果 LPS处理的血管内皮细胞中LncRNA MIAT表达水平明显升高，miR-361-3p表达水平明显降低，切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved-caspas...     

LncRNA CDKN2BAS通过调控miR-627-3p影响肺癌细胞增殖、凋亡和放射敏感性的机制

目的 探讨LncRNA CDKN2BAS对肺癌细胞NCI-H1299增殖、凋亡和放射敏感性的影响及其分子机制。方法 选取42例肺癌组织及相应癌旁组织;体外培养人正常肺支气管上皮细胞和肺癌细胞系;将NCI-H1299细胞分为NC组、si-NC组、si-LncRNA CDKN2BAS组、miR-NC组、miR-627-3p组、si-LncRNA CDKN2BAS+anti-miR-NC组、si-LncRNA CDKN2BAS+anti-miR-627-3p组;实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测LncRNA CDKN2BAS、miR-627-3p mRNA相对表达水平;噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;克隆形成实验检测放射敏感性;Western印迹检测相关蛋白的表达;双荧光素酶报告实验检测LncRNA CDKN2BAS和miR-627-3p的靶向关系。结果 与癌旁组织比较,肺癌组织中LncRNA CDKN2BAS mRNA表达明显升高,miR-627-3p mRNA表达水平明显降低(P<0.05);与BEAS-2B细胞比较,肺癌细胞NCI-H1299、...     

miR-127-5p靶向IRAK4对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡及炎症因子表达的影响

目的探究miR-127-5p靶向白细胞介素1受体相关激酶4(IRAK4)对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡及炎症因子表达的影响方法首先分为对照组和感染组,感染组用肺炎链球菌感染A549细胞,感染组细胞分别转染miR-127-5p mimic、si-IRAK4及阴性对照质粒,qRT-PCR检测A549细胞中miR-127-5p的表达水平,western blot检测IRAK4、Bax、Bcl-2蛋白水平,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,ELISA检测白介素-10(IL-10)、白介素-6(IL-6)水平,双荧光素酶报告基因检测miR-127-5p与IRAK4的靶向关系。结果与对照组比较,肺炎链球菌感染后A549细胞中miR-127-5p、Bcl-2、IL-10水平显著降低,细胞凋亡率、IRAK4、Bax、IL-6水平显著升高(P<0.05);与感染+miR-NC组比较,过表达miR-127-5p后,A549细胞中miR-127-5p、Bcl-2、IL-10水平显著升高,细胞凋亡率、IRAK4、Bax、IL-6显著降低;与感染+si-NC组比较,抑制IRAK4表达后,A549细胞中细胞凋亡率、IRAK4、Bax、IL-6水平显著降低,Bcl-2、IL-10水平显著升高;双荧光素酶报告基因及Western blot结果显示,miR-127-5p可通过与IRAK4特异性结合负向调控IRAK4的表达;与感染+miR-127-5p+pcDNA组比较,感染+miR-127-5p+pcDNA-IRAK4组A549细胞中凋亡率、IRAK4、Bax、IL-6水平显著升高,Bcl-2、IL-10水平显著降低(P<0.05)。结论miR-127-5p靶向IRAK4调控肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡及炎症因子IL-10、IL-6的表达。     

沉默环状RNA溴域PHD手指转录因子通过靶向miR-15a-5p对高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞损伤影响的研究

目的 探讨沉默环状RNA溴域PHD手指转录因子（circBPTF）对高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞（hRMEC）损伤的影响及其可能作用机制。方法 取对数生长期hRMEC加入浓度为5.5 mmol/L葡萄糖培养基处理24 h为正常对照（Con）组，加入浓度为25 mmol/L葡萄糖培养基处理24 h为HG组。将si-NC、si-circBPTF、miR-NC、miR-15a-5p mimic、si-circBPTF和miR-15a-5p inhibitor（共转染）分别转染至hRMEC，转染成功后加入浓度为25 mmol/L葡萄糖培养基处理24 h，分别为HG+si-NC组、HG+si-circBPTF组、HG+miR-NC组、HG+miR-15a-5p mimic组、HG+si-circBPTF+miR-15a-5p inhibitor组。qRT-PCR法检测circBPTF、miR-15a-5p表达，试剂盒检测丙二醛（MDA）与超氧化物歧化酶（SOD）活性，细胞计数试剂盒8法与流式细胞术分别检测细胞活力及凋亡率，双荧光素酶报告实验检测circBPTF与miR-15a-5p的靶向关系...     

miR-486-5p靶向TRPM2对帕金森病模型细胞自噬和凋亡的影响

目的探讨微小RNA-486-5p(miR-486-5p)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP~+)诱导的帕金森病(PD)模型细胞凋亡及自噬的影响。方法用MPP~+诱导SK-N-SH细胞建立PD细胞模型,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)与Western印迹平行检测PD细胞模型中miR-486-5p、瞬时受体电位(TRP)M2的表达;将miR-486-5p mimics、miR-NC、si-TRPM2、si-NC转染至SK-N-SH细胞,转染后细胞分为Con组、MPP~+组、MPP~++miR-486-5p组、MPP~++miR-NC组、MPP~++si-TRPM2组、MPP~++si-NC组。流式细胞仪分析PD细胞模型凋亡率;Western印迹检测PD细胞模型自噬蛋白标记物微管相关蛋白轻链(LC)3Ⅱ、LC3Ⅰ、线粒体功能相关蛋白线粒体融合蛋白(Mfn)2、核呼吸因子(NRF)1及凋亡蛋白B淋巴细胞瘤(Bcl)-2、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cleaved-caspase)3表达情况;双荧光素酶报告基因检测验证miR-486-5p与TRPM2的靶向调控作用。结果 MPP~+处理后的SK-N-SH细胞凋亡率明显升高(P<0.05),LC3Ⅱ、Bax、cleaved-caspase3蛋白表达水平明显升高(P<0.05),而Mfn2、NRF1、Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05);PD细胞模型中miR-486-5p表达水平降低(P<0.05),TRPM2表达水平升高(P<0.05);PD细胞模型中miR-486-5p过表达与干扰TRPM2的表达可明显降低细胞凋亡率与LC3Ⅱ、Bax、cleaved-caspase3蛋白表达(P<0.05),提高Mfn2、NRF1、Bcl-2蛋白表达(P<0.05);双荧光素酶报告实验证明miR-486-5p可靶向调控TRPM2的表达;TRPM2过表达可逆转miR-486-5p过表达对MPP~+诱导的SK-N-SH细胞中线粒体功能相关蛋白、自噬相关蛋白表达及细胞凋亡的作用。结论 miR-486-5p过表达可通过下调TRPM2的表达而抑制PD模型细胞凋亡及自噬。     

杜仲多糖抑制高糖诱导HK-2细胞损伤的研究

目的 探讨杜仲多糖（EP）对肾小管上皮细胞损伤的影响及分子机制。方法 将人肾小管上皮细胞HK-2随机分为正常对照（NC）组、高糖组（HG）,HG+EP 10组、HG+EP 20组、HG+EP 40组、HG+anti-miR-NC组、HG+anti-miR-1207-5p组、HG+miR-1207-5p组、HG+EP+miR-1207-5p组。细胞计数试剂盒8法检测细胞活性，流式细胞术检测细胞凋亡，ELISA法检测TNF-α、IL-6含量，实时荧光定量PCR检测miR-1207-5p表达。结果 HG+EP 10、HG+EP 20、HG+EP 40组细胞活性依次升高（P<0.05），细胞凋亡率、Cleaved-caspase3蛋白表达、IL-6、TNF-α含量、miR-1207-5p表达依次降低（P<0.05）。与HG组比较，HG+miR-1207-5p组miR-1207-5p、细胞凋亡率及Cleaved-caspase3蛋白表达、IL-6、TNF-α升高（P<0.05），细胞活性降低（P<0.05）。与HG+EP 40组比较，HG+EP+miR-1207-5p组m...     

干扰LINC00265上调miR-485-5p的表达影响缺氧诱导的心肌细胞凋亡、增殖机制研究

目的研究LINC00265对缺氧诱导的心肌细胞凋亡、增殖的影响及分子机制。方法将H9C2细胞分为对照组(未做任何处理)、模型组(缺氧处理3 h)、模型组+si-LINC00265组(转染siLINC00265后缺氧处理)、模型组+si-NC组(转染si-NC后缺氧处理)、模型组+miR-485-5p组(转染miR-485-5p后缺氧处理)、模型组+miR-NC组(转染miR-NC后缺氧处理)。实时荧光定量PCR(RTqPCR)检测LINC00265和miR-485-5p的表达水平;流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡;蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞增殖核抗原Ki67(Ki67)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase3)蛋白表达;双荧光素酶报告实验验证LINC00265和miR-485-5p的靶向关系。比较各组上述指标的差异。结果缺氧诱导的心肌细胞中LINC00265表达水平升高,miR-485-5p表达水平降低,G0-G1期细胞所占比例升高,S期细胞所占比例降低,细胞凋亡率升高,Ki67表达水平降低,Caspase3表达水平升高(P0.05)。干扰LINC00265或过表达miR-485-5p后,G0-G1期细胞所占比例降低,S期细胞所占比例升高,细胞凋亡率降低,Ki67表达水平升高,Caspase3表达水平降低(P0.05)。LINC00265野生型报告载体与miR-485-5p共转染后细胞荧光活性降低(P0.05);而LINC00265突变型报告载体与miR-485-5p共转染后细胞荧光活性无显著变化(P0.05)。结论干扰LINC00265可能通过上调miR-485-5p的表达抑制缺氧诱导的心肌细胞凋亡、促进细胞增殖。     

LncRNA MIR503HG靶向miR-32-5p调控 ITGA6表达对非小细胞肺癌增殖与迁移的影响

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)MIR503HG、微小RNA(miRNAs)-32-5p、整合素α(ITGA)6在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其对NSCLC细胞增殖和迁移的影响。方法 从癌症基因组图谱(TCGA)数据库中提取273例NSCLC患者癌组织及其对应癌旁组织的LncRNA、miRNA及转录组mRNA的芯片数据,R软件中MAX STAT函数包统计分析LncRNA MIR503HG、miR-32-5p、ITGA6在NSCLC中的表达。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测80例NSCLC患者癌组织标本和NSCLC细胞系中LncRNA MIR503HG、miR-32-5p、ITGA6 mRNA表达。双荧光素酶实验证明LncRNA MIR503HG、miR-32-5p、ITGA6的关系。依次以LncRNA MIR503HG-mimic-NC、LncRNA MIR503HG-mimic、miR-32-5p-agomir-NC、miR-32-5p-agomir、LncRNA MIR503HG-mimic+miR-32-5p-agomir、LncRNA MIR50...     

荞麦花叶芦丁对高糖诱导的人晶状体上皮细胞损伤的影响

目的探讨荞麦花叶芦丁对高糖诱导的人晶状体上皮细胞损伤的影响及其对LncRNA FENDRR/miR-146b-3p分子轴的调控作用。方法采用高糖诱导人晶状体上皮细胞建立细胞损伤模型(Model组),分别加入不同剂量的荞麦花叶芦丁处理细胞;实验分组:Con组、Model+si-NC组、Model+si-FENDRR组、Model+miR-NC组、Model+miR-146b-3p组、Model+荞麦花叶芦丁+anti-miR-NC组、Model+荞麦花叶芦丁+anti-miR-146b-3p组;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;根据试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的水平;采用qRT-PCR法检测FENDRR与miR-146b-3p的表达量;双荧光素酶报告基因实验检测FENDRR与miR-146b-3p的靶向关系;采用Western印迹检测B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达量。结果与Con组比较,Model组细胞凋亡率、Bax、MDA、FENDRR表达水平升高(P<0.05),miR-146b-3p、Bcl-2水平与SOD的活性降低(P<0.05);与Model组比较,荞麦花叶芦丁不同剂量组细胞凋亡率、Bax、MDA、FENDRR水平降低(P<0.05),miR-146b-3p、Bcl-2、SOD水平升高(P<0.05);与Model组、Model+si-NC组比较,Model+si-FENDRR组细胞凋亡率与Bax、MDA的水平降低(P<0.05),Bcl-2蛋白水平与SOD的活性及miR-146b-3p表达水平升高(P<0.05);FENDRR可靶向调控miR-146b-3p;与Model组、Model+miR-NC组比较,Model+miR-146b-3p组细胞凋亡率、Bax、MDA水平降低(P<0.05),Bcl-2蛋白水平与SOD的活性升高(P<0.05),而抑制miR-146b-3p可逆转荞麦花叶芦丁对高糖诱导的人晶状体上皮细胞凋亡及氧化应激的作用。结论荞麦花叶芦丁可通过下调FENDRR的表达而上调miR-146b-3p的表达从而抑制细胞凋亡及氧化应激进而减轻高糖诱导的人晶状体上皮细胞损伤。     

环氧合酶-2基因敲低对足细胞凋亡及podocin蛋白表达的影响

目的观察足细胞环氧合酶-2(COX-2)基因敲低对足细胞凋亡及podocin蛋白表达的影响,以进一步探讨足细胞凋亡的分子机制。方法将条件永生性小鼠足细胞株随机分为阴性转染组、5μL siRNA组、10μL siRNA组、15μL siRNA组。经诱导分化成熟,在siRNA干扰48 h后用半定量RT-PCR和Western bolt分别检测足细胞COX-2 mRNA及蛋白表达水平,用流式细胞仪检测足细胞凋亡水平。将10μL siRNA组分别设立足细胞正常对照组、足细胞COX-2基因敲低组和足细胞阴性转染对照组三个亚组,用Western bolt检测podocin蛋白、BAX蛋白及BCL-X1蛋白的表达水平。结果与阴性转染组比较,随着干扰浓度的增加,COX-2 mRNA及蛋白表达逐渐减少,而足细胞的凋亡率逐渐升高,15μL的siRNA组凋亡率明显增高。足细胞COX-2基因敲低组podocin蛋白表达显著低于足细胞阴性转染对照组(P<0.05)。与足细胞阴性转染对照组相比,足细胞COX-2基因敲低组BAX蛋白表达显著上调,而BCL-X1蛋白表达稍有下调。结论敲低COX-2基因表达可以导致足细胞凋亡,且随着siRNA干扰浓度的增加,足细胞凋亡率逐渐增加。在干扰浓度为10μL时,足细胞podocin蛋白的表达下调。BAX蛋白上调及BCL-X1蛋白下调参与了足细胞的凋亡。     

DNA甲基化转移酶1介导体外高糖刺激诱导的小鼠足细胞损伤的实验观察

目的研究高糖刺激对体外培养的小鼠足细胞DNA甲基化转移酶(Dnmts)表达的影响及Dnmt1在高糖刺激诱导的小鼠足细胞损伤中的作用。方法以体外培养的小鼠永生化足细胞为研究对象,分为正常糖对照组、高糖刺激组、甘露醇组及高糖+干预组(DNA甲基化抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷,Dnmt1-siRNA),培养48h,RT-PCR检测其Dnmts mRNA表达;免疫印迹检测Dnmt1、nephrin及podocin蛋白表达;Transwell转板迁移实验观察不同处理后足细胞迁移数目。结果与正常糖对照组比较,高糖刺激组足细胞Dnmt1mRNA及蛋白表达增加(P0.01),Dnmt3a及Dnmt3bmRNA表达未见明显改变。经5-氮杂-2′-脱氧胞苷或Dnmt1-siRNA处理48h后,高糖刺激组导致Dnmt1高表达得到抑制,降低的足细胞裂孔膜蛋白podocin、nephrin表达增加(P0.01)。结论高糖上调足细胞Dnmt1蛋白表达,Dnmt1参与体外高糖诱导的小鼠足细胞损伤。     

miR-92a-3p靶向GPR124调控糖尿病肾病足细胞损伤的机制

目的研究miR-92a-3p对糖尿病肾病足细胞损伤的影响及其机制。方法构建高糖(30 mmol/L)诱导的小鼠足细胞损伤模型;将高糖+anti-miR-92a-3p组(转染anti-miR-92a-3p)、高糖+anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、高糖+pcDNA组(转染pcDNA)、高糖+pcDNA-GPR124组(转染pcDNA-GPR124)、高糖+anti-miR-92a-3p+si-con组(共转染pcDNA-GPR124和si-con)、高糖+anti-miR-92a-3p+si-GPR124组(共转染pcDNA-GPR124和si-GPR124)至小鼠足细胞,用30 mmol/L高糖处理48 h。Western印迹检测各组细胞中结蛋白(Desmin)、G蛋白耦联受体(GPR)124的蛋白表达;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;qRT-PCR检测各组细胞中miR-92a-3p、GPR124的表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞荧光活性。结果与对照组相比,高糖处理组小鼠足细胞中Desmin蛋白表达和细胞凋亡率均显著升高,miR-92a-3p表达明显升高,GPR124表达明显降低(P<0.05);抑制miR-92a-3p、过表达GPR124均可下调Desmin蛋白表达和细胞凋亡率;miR-92a-3p可抑制WT-GPR124足细胞的荧光活性,且负调控GPR124的蛋白表达;敲减GPR124可逆转抑制miR-92a-3p对高糖诱导的小鼠足细胞的保护作用。结论抑制miR-92a-3p可保护高糖诱导的小鼠足细胞损伤,其机制可能与靶向GPR124有关,将可为糖尿病肾病的治疗提供新方向。     

miR-195-5p靶向HMBOX1调控胃癌细胞增殖迁移侵袭及凋亡的机制

目的探讨miR-195-5p在胃癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡中的作用与机制。方法运用qRT-PCR法检测正常胃上皮细胞(GES)-1、胃癌细胞N87、 SGC-7901、HGC-27中miR-195-5p、含有1的同源框(HMBOX1)的表达;将miR-NC组(转染miR-NC)、miR-195-5p组(转染miR-195-5p mimics)、si-NC组(转染si-NC)、si-HMBOX1组(转染si-HMBOX1)、miR-195-5p+pcDNA组(共转染miR-195-5p mimics和pcDNA)、miR-195-5p+pcDNA-HMBOX1组(共转染miR-195-5p mimics和pcDNA-HMBOX1)转染至HGC-27;Western印迹检测细胞中HMBOX1、survivin、基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2的蛋白表达;噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;Transwell法检测细胞迁移侵袭;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞荧光活性。结果相比于正常胃上皮GES-1细胞,胃癌细胞N87、 SGC-7901、HGC-27中miR-195-5p表达显著降低,HMBOX1表达显著升高;过表达miR-195-5p或敲减HMBOX1均可抑制HGC-27细胞增殖、迁移侵袭及促凋亡,下调survivin、MMP2、MMP9、Bcl-2,上调P21、Bcl-2相关X蛋白(Bax);miR-195-5p可靶向HMBOX1;过表达HMBOX1可恢复miR-195-5p对胃癌细胞的作用。结论 miR-195-5p能抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭,并诱导细胞凋亡,机制与靶向HMBOX1相关,将可为胃癌的诊断及治疗提供依据。     

SB431542对高糖环境中小鼠足细胞Cdk5/p35表达的影响

目的应用SB431542及Roscovitine处理高糖培养的足细胞,观察抑制转化生长因子(TGF)-β1通路对高糖培养足细胞中Cdk5/p35表达的影响及抑制Cdk5激酶活性对高糖和TGF-β1诱导足细胞凋亡的影响。方法采用不同浓度SB431542(0.1,1.0,10μmol/L)处理高糖培养的足细胞,Western印迹法及RT-PCR技术检测各处理组Cdk5及p35蛋白和mRNA的表达变化情况。应用流式细胞术检测Roscovitine对高糖及TGF-β1刺激足细胞凋亡的影响。结果高糖(HG组)Cdk5和p35的蛋白及mRNA表达水平明显增高,显著高于正常血糖组(NG)组和甘露醇组(M组)(P0.05),并且呈时间依赖性升高。加入SB431542后,高糖培养导致的足细胞内Smad-2蛋白磷酸化水平明显降低。同时,HG+SB431542组足细胞内Cdk5和p35的蛋白及mRNA表达水平呈浓度依赖性显著降低,明显低于HG组(P0.05)。加入Roscovitine后,高糖及TGF-β1诱导足细胞的足细胞凋亡水平显著下降(P0.05)。结论高糖可能通过活化TGF-β1通路上调Cdk5/p35表达从而诱导足细胞凋亡。     

过表达miR-489-3p通过靶向调控MCM2抑制肺癌细胞增殖、促进细胞凋亡的分子机制

目的探讨miR-489-3p对肺癌细胞增殖和凋亡的影响及潜在的作用机制。方法将miR-NC组(转染miR-NC)、miR-489-3p组(转染miR-489-3p mimics)、si-NC组(转染si-NC)、si-微小染色体维持蛋白(MCM)2组(转染si-MCM2)、anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、anti-miR-489-3p组(转染anti-miR-489-3p)、miR-489-3p+pcDNA组(共转染miR-489-3p和pcDNA)、miR-489-3p+pcDNA-MCM2组(共转染miR-489-3p和pcDNA-MCM2)、miR-NC+WT-MCM2组(共转染miR-NC和WT-MCM2)、miR-NC+MUT-MCM2组(共转染miR-NC和MUT-MCM2)、miR-489-3p+WT-MCM2组(共转染miR-489-3p和WT-MCM2)、miR-489-3p+MUT-MCM2组(共转染miR-489-3p和MUT-MCM2),均用脂质体法转染至肺癌A549细胞;运用qRT-PCR检测miR-489-3p和MCM2 mRNA的表达水平;CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western印迹检测蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光活性。结果相较于正常肺上皮细胞BEAS-2B,肺癌细胞A549、H1299、SPC-A1中miR-489-3p表达水平均显著降低,MCM2 mRNA和蛋白表达水平显著升高(P0.05)。miR-489-3p过表达、MCM2抑制表达均可抑制A549细胞增殖活力,促进细胞凋亡;抑制细胞周期蛋白(Cyclin)D1、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2蛋白表达水平,促进p21、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(cleaved caspase)-3、Bcl-2相关x蛋白(Bax)蛋白表达。miR-489-3p可靶向调控MCM2表达;MCM2过表达逆转了miR-489-3p过表达对肺癌A549细胞增殖抑制和凋亡促进的作用。结论 miR-489-3p可抑制肺癌A549细胞的增殖、促进其凋亡,其机制可能与靶向MCM2有关,将可为肺癌的预防和治疗提供新靶点。