银杏叶提取物对糖尿病大鼠学习、记忆及海马血红素加氧酶1表达的影响

目的探讨银杏叶提取物(EGb)对糖尿病大鼠学习记忆及海马血红素加氧酶1(HO-1)表达的影响。方法大鼠腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病模型,6个月后以Morris水迷宫观察其学习记忆能力,以RT-PCR观察大鼠海马HO-1 mRNA的表达,以免疫组织化学法观察海马HO-1蛋白表达。结果大鼠糖尿病6个月后Morris水迷宫成绩下降,海马的HO-1 mRNA表达和蛋白表达水平升高(分别为1．635±0．326 vs 0．978±0．214,7．2±1．7 vs 1．9±0．5,均P＜0．01)；糖尿病EGb干预组(100、50 mg/kg)大鼠较糖尿病大鼠Morris水迷宫成绩提高,HO-1 mRNA表达和蛋白表达水平降低(100 mg/kg：0．954±0．144,2．0±0．8；50 mg/kg：0．988±0．154,2．5±0．6,均P＜0．01)。结论EGb可抑制海马的HO-1表达,提高糖尿病大鼠的学习记忆能力。     

血红素氧合酶-1在糖尿病大鼠视网膜中的表达及意义

目的探讨血红素氧合酶(HO)-1在糖尿病大鼠视网膜中的表达及意义。方法 30只大鼠根据随机数字法分为对照组(正常大鼠)、糖尿病组(糖尿病模型)、氯高铁血红素(hemin)组(糖尿病模型+hemin治疗)。免疫荧光染色观察视网膜HO-1、核因子相关因子(Nrf) 2、磷酸化细胞外调节蛋白激酶(pERK)表达,RT-PCR检测大鼠视网膜HO-1、Nrf2、pERK mRNA表达,Western印迹测定各组大鼠视网膜HO-1、Nrf2、pERK蛋白表达。结果免疫荧光染色显示:HO-1为绿色荧光,Nrf2、pERK为红色荧光,对照组大鼠只检测到极少量的HO-1、Nrf2、pERK阳性表达。糖尿病组大鼠HO-1、Nrf2、pERK阳性表达均增加,hemin组大鼠视网膜HO-1、Nrf2、pERK阳性表达明显增加。糖尿病组、hemin组大鼠视网膜HO-1 mRNA和HO-1蛋白相对表达量均显著高于对照组(P0. 05),hemin组大鼠视网膜HO-1 mRNA和HO-1蛋白显著高于糖尿病组(P0. 05)。糖尿病组、hemin组大鼠视网膜Nrf2mRNA和Nrf2蛋白相对表达量均显著高于对照组(P0. 05),hemin组大鼠视网膜Nrf2 mRNA和Nrf2蛋白显著高于糖尿病组(P0. 05)。糖尿病组、hemin组大鼠视网膜pERK mRNA和pERK蛋白相对表达量均显著高于对照组(P0. 05),hemin组大鼠视网膜pERK mRNA和pERK蛋白显著高于糖尿病组(P0. 05)。结论糖尿病大鼠视网膜HO-1水平升高,HO-1水平升高可能通过Nrf2/ERK信号通路对糖尿病视网膜发挥保护作用。     

白藜芦醇抑制Wnt通路活性改善糖尿病大鼠认知功能的研究

目的探讨白藜芦醇(RL)对糖尿病大鼠认知和记忆功能的影响及使海马CA1区域神经元细胞形态学的改变,分析Wnt通路的作用。方法 36只Wistar鼠随机分为糖尿病组(DM组)、RL组及正常对照(NC)组,每组各12只。腹腔注射STZ建立糖尿病模型,RL组行8周RL灌胃。通过新物体识别实验和定位实验评估大鼠非空间及空间认知能力;病理切片TUNEL染色观察大鼠海马CA1区域神经元细胞形态学改变;Western blot检测海马组织Wnt通路凋亡相关蛋白表达水平。结果RL干预逆转DM组新物体及新位置分辨指数的下调[(44. 71±11. 21)%vs(1. 57±0. 39)%,(28. 01±5. 37)%vs(3. 73±1. 07)%,P0. 05],降低海马CA1区域TUNEL阳性神经元密度[(20. 4±2. 65)vs(47. 0±4. 58)个/mm2,P0. 05];RL干预逆转DM组海马CA1区域细胞Wnt-3、TGF-1、Bax、caspase-3蛋白表达上调,Bcl-2表达下调;上调脑源性神经营养因子表达(P0. 05)。结论RL具有Wnt通路抑制作用,可促进神经营养因子分泌,减少神经细胞凋亡,改善糖尿病大鼠非空间及空间认知能力。     

Caspase-9和Caspase-3在血管性痴呆大鼠海马CA1区的表达及意义

目的探讨Caspase-9和Caspase-3在血管性痴呆大鼠海马CAl区的表达及意义。方法将100只大鼠按随机数字法分为假手术组及模型组,每组又分为1、2、4、8和12周5个亚组（n=10只）。采用四血管阻断法制备血管性痴呆模型,应用Morris水迷宫试验检测大鼠的学习记忆能力,TUNEL检测细胞凋亡,免疫组化法检测Caspase-3及Caspase-9蛋白的表达。结果（1）与假手术组比较,在相同时间点模型组大鼠海马CAl区凋亡细胞数明显增多,差异有统计学意义（P〈0．05）;（2）与假手术组比较,模型组大鼠海马CAl区Caspase-9、Caspase-3阳性表达在1周开始增多,2周达到高峰,4周开始下降,到12周仍增多,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论Caspase-9及Caspase-3共同参与了血管性痴呆大鼠海马CAl凋亡的调控。     

中药筋脉通胶囊通过增强血红素加氧酶-1/一氧化碳系统活性改善链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠周围神经病变的实验观察

目的观察中药筋脉通胶囊对STZ诱导的糖尿病大鼠坐骨神经血红素加氧酶-1(HO-1)、半胱氨酸天冬氨酸酶3(Caspase-3)的表达,以及对血浆一氧化碳(CO)含量的影响。方法腹腔内注射STZ诱导建立糖尿病大鼠模型,随机分为模型(DM)组,筋脉通低(JMT-L)、中(JMT-M)和高剂量(JMTH)组,以及硫辛酸(TAC)组,另设立正常对照(NC)组。成模后1次/d灌胃给药,共12周。电子Von Frey仪检测机械痛阈值,免疫组织化学法检测坐骨神经HO-1和Caspase-3蛋白表达,RT-PCR检测相应mRNA表达,并检测血浆一氧化碳血红蛋白(COHb)含量。结果与NC组比较,其他各组机械痛阈值、COHb含量,以及坐骨神经HO-1蛋白及其mRNA表达水平下降(P0.01),Caspase-3蛋白及其mRNA表达水平升高(P0.01)。与DM组比较,筋脉通各组机械痛阈值、血浆COHb含量,以及坐骨神经HO-1蛋白及其mRNA表达水平升高(P0.01),Caspase-3蛋白及其mRNA表达水平降低(P0.01);JMT-M组提高机械痛阈值、坐骨神经HO-1蛋白表达及降低坐骨神经Caspase-3蛋白表达优于TAC组(P0.05或P0.01)。结论筋脉通胶囊可通过增强HO-1/CO系统活性,降低Caspase-3水平,改善大鼠糖尿病周围神经病变。     

硫化氢通过调控Bcl-2/Caspase-3的表达减轻糖尿病大鼠心肌细胞凋亡和纤维化

目的观察气体信号分子硫化氢(H_2S)通过调控Bcl-2/Caspase-3的表达对糖尿病大鼠心肌细胞凋亡和纤维化的影响。方法 50只成年雄性SD大鼠被随机分成5组(每组10只):正常对照组(Control组)、糖尿病组(模型组)、低浓度保护组(c1组)、高浓度保护组(c2组)、H_2S对照组(H_2S组)。通过腹腔注射链脲佐菌素(STZ)(40 mg/kg)的方法建成糖尿病大鼠实验模型;Control组每天通过腹腔注射同等剂量的生理盐水;硫氢化钠(NaHS)作为H_2S的供体,c1组每天注射30μmol/kg的Na HS溶液,c2组与H_2S组每天注射100μmol/kg的Na HS溶液。建模8 w后处死大鼠,免疫组化法检测心肌Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白的表达;通过Masson染色的方法观察心肌组织病理学发生的变化;用TUNEL染色的方法观察各组大鼠心肌细胞凋亡;Western印迹检测大鼠心肌组织Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达水平。结果与Control组相比,模型组大鼠心肌细胞排列紊乱,存在明显胶原沉积和心肌纤维化,心肌组织中凋亡细胞数量明显增加,心肌组织中Caspase-3蛋白表达明显升高(P0. 01),Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P0. 01);与模型组相比,c1和c2组大鼠心肌纤维有所改善,凋亡细胞数量明显减少,c1组和c2组Caspase-3蛋白明显降低(P0. 05);c1组和c2组Bcl-2蛋白明显升高(P0. 01)。结论 H_2S可改善糖尿病大鼠心肌纤维化,其机制可能与调控凋亡相关蛋白Bcl-2和Caspase-3的表达并减轻细胞凋亡有关。     

参麻益智方对酒精性痴呆大鼠认知功能及海马氧化应激水平的影响

目的探讨参麻益智方对酒精性痴呆大鼠认知功能及氧化应激水平的影响。方法以30只Wistar大鼠为研究对象,随机分为空白组、模型组、中药低剂量组(3.3 g/kg)、中药中剂量组(6.6 g/kg)、中药高剂量组(16.5 g/kg),各6只,分别灌胃蒸馏水及相应剂量中药,3个月后模型组、中药组分别灌胃25%酒精5 g/(kg·d),连续灌胃10 d,空白组仍灌胃等量蒸馏水。观察大鼠行为学变化和海马CA1区椎体细胞形态结构,同时比色法检测大鼠海马组织还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活力的变化,免疫印迹法检测Nrf2、血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白表达。结果中药高剂量组潜伏期较模型组显著缩短(P0.05),穿台次数及目标象限停留时间百分比较模型组均上升(P0.05),海马CA1区形态较模型组趋于正常,海马组织中Nrf2及HO-1蛋白表达、GSH含量、SOD活力较模型组均显著升高(P0.05),MDA含量显著降低(P0.05)。结论参麻益智方能通过抗氧化应激进而保护神经细胞,改善慢性酒精中毒大鼠的学习记忆功能。     

大剂量氨溴索对机械通气大鼠肺组织激活蛋白-1、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶的影响

目的 通过观察不同剂量氨溴索对机械通气大鼠肺组织激活蛋白-1(AP-1)和γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)表达的影响,探讨大剂量氨溴索对呼吸机所致肺损伤(VILI)的干预作用.方法 32只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、机械通气(MV)组、常规剂量氨溴索(CDAMB)组和大剂量氨溴索(HDAMB)组,分别采用原位分子杂交技术和免疫组织化学染色法检测肺组织AP-1和γ-GCS Mrna及其蛋白表达水平.结果 MV组和CDAMB组大鼠肺组织AP-1 Mrna及其蛋白表达水平明显高于对照组,而γ-GCS Mrna及其蛋白表达水平则明显低于对照组(P<0.01).HDAMB组AP-1 Mrna及其蛋白表达水平明显低于MV组和CDAMB组,而γ-GCS Mrna及其蛋白表达水平高于MV组和CDAMB组(P<0.01).MV组和CDAMB组各项指标比较差异无统计学意义.结论 氧化/抗氧化失衡参与了VILI的发病过程.大剂量氨溴索可通过抑制机械通气大鼠肺组织AP-1的表达和上调γ-GCS的表达而发挥抗氧化作用,对VILI有一定保护作用.     

及ERK/Nrf2/HO-1通路的影响

目的:探讨红芪多糖对急性心肌梗死(AMI)大鼠心肌氧化损伤及细胞外信号调节激酶/核因子E2相关因子2/血红素氧合酶-1(ERK/Nrf2/HO-1)通路的影响。方法:采用冠状动脉左前降支结扎法建立AMI大鼠模型,根据随机数字表法将72只雄性大鼠随机分为假手术组(只开胸不结扎)、模型组、阳性对照组(12 mg/kg倍他乐克)、低、中、高剂量[50、100、200 mg/(kg·d)]红芪多糖组,每组12只,连续给药31 d。给药结束后,采用全自动生化分析仪检测大鼠血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白T(c Tn T)和心肌肌钙蛋白I(c Tn I)水平,酶联免疫法检测心肌组织丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSP-Px)活性,Western blot法检测磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)、核因子E2相关性因子2(Nrf2)、血红素氧合酶1(HO-1)、谷胱甘肽半胱氨酸连接酶催化亚基(GCLC)表达水平。结果:与假手术组相比,模型组大鼠血清CK-MB、c Tn I和c Tn T水平均显著升高(均P 0. 05),心肌组织MDA含量显著升高(P 0. 05),SOD和GSP-Px活力显著降低(均P 0. 05),p-ERK、Nrf2、HO-1、GCLC蛋白表达显著降低(均P 0. 05)。与模型组相比,中、高剂量红芪多糖组大鼠血清CK-MB、c Tn I和c Tn T水平均显著降低(均P 0. 05),心肌组织MDA含量显著降低(P 0. 05),SOD和GSP-Px活力显著升高(均P 0. 05),p-ERK、Nrf2、HO-1、GCLC蛋白表达显著升高(均P 0. 05)。结论:红芪多糖可能通过激活ERK/Nrf2/HO-1信号传导通路改善AMI大鼠心肌氧化损伤。     

慢性阻塞性肺疾病大鼠磷脂酰肌醇-3激酶、蛋白激酶B及γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶表达研究

目的通过观察COPD大鼠中磷脂酰肌醇-3激酶（phosphoinositide-3 kinases,P13K）、蛋白激酶B（protein kinaseB,PKB）与γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（gamma glutamylcysteine synthetase,γ-GCS）的表达,研究P13K、PKB通路和rGCS的关系及其在COPD中可能的参与机制。方法30只健康雄性Wistar大鼠随机分COPD组和对照组。采用每日熏香烟和两次气管内注入脂多糖法制作COPD大鼠模型。检测大鼠肺组织中7-GCS活性,原位杂交检测肺组织中rGCSmRNA的表达,免疫组织化学分析肺组织中P13K、PKB与γ-GCS蛋白水平。结果COPD组大鼠肺组织中γ-GCS差异（P〈0．01）。P13K、PKB与γ-GCS免疫组织化学在COPD组可见肺泡、支气管活性明显高于对照组,组间差异有统计学意义（P〈0．01）。原位杂交示COPD组大鼠支气管,肺泡上皮细胞与小动脉平滑肌细胞7-GCSmRNA广泛表达,与对照组有显著性壁细胞及小血管平滑肌细胞胞浆中皆有蛋白阳性信号表达;图象定量分析示大鼠COPD组P13K、PKB与γ-GCS蛋白表达显著高于对照组（P〈0．01）。直线相关分析得出P13K、p—PKB蛋白表达与γ-GCS活性、mRNA及蛋白表达呈正相关。结论COPD大鼠肺组织7-GCS蛋白和mRNA表达增高,P13K、p-PKB蛋白也有相应高表达,提示P13K、PKB和γ-GCS可能在COPD的发病机制中发挥作用,且可能参与了γ-GCS的信号转导通路。     

人参总皂苷防治原发性骨质疏松

目的观察人参总皂苷对碱性磷酸酶(ALP)、骨形成蛋白(BMP)和Smad1的调控作用,探讨人参总皂苷在原发性骨质疏松疾病中的作用机制。方法建立大鼠老年性骨质疏松模型,分别给予人参总皂苷高(60 mg/kg)、中(40 mg/kg)和低剂量(20 mg/kg)治疗;利用X-射线扫描技术检大鼠骨密度(BMD);应用qRT-PCR技术和Western印迹技术检测、分析ALP、BMP、Smad1mRNA和蛋白表达情况。结果治疗90 d后与空白组比较,模型组BMD显著降低(P0. 01),造模成功;与模型组比较,阳性组、人参总皂苷高、中剂量组BMD均显著升高(P0. 01,P0. 05)。与空白组比较,模型组ALP、BMP、Smad1 mRNA表达均显著降低(均P0. 01);与模型组比较,阳性组及人参总皂苷高剂量组ALP、BMP、Smad1 mRNA及中剂量组BMP mRNA表达明显升高(P0. 01,P0. 05)。与空白组比较,模型组ALP、BMP、Smad1蛋白表达显著降低(P0. 01);与模型组比较,阳性组、人参总皂苷高、中剂量组ALP、BMP、Smad1蛋白表达显著升高(P 0. 01,P 0. 05)。结论人参总皂苷能上调ALP、BMP、Smad1三者的表达,可能是通过BMP/Smad1信号通路发挥调节骨代谢的作用,对原发性骨质疏松有一定的防治作用。     

银杏叶提取物对阿尔茨海默病大鼠的神经保护作用及其机制探讨

目的 观察银杏叶提取物(EGB)对阿尔茨海默病(AD)大鼠的神经保护作用,并探讨其机制.方法 40只大鼠随机分为5组各8只,模型组腹腔注射半乳糖60 mg/kg、EGB低剂量(EGB-L)组、EGB中剂量(EGB-M)组和EGB高剂量(EGB-H)组分别腹腔注射EGB 0.437 5、0.875、1.75 mg/kg和半乳糖60 mg/kg,对照组腹腔注射等量生理盐水.Y迷宫测定大鼠学习、记忆能力,TUNEL法检测其海马区神经细胞凋亡;免疫组化法检测海马区神经细胞半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3(Caspase-3) P20抗体表达.结果 模型组较对照组大鼠学习尝试次数明显增加,记忆正确次数明显减少,P均＜0.05;模型组海马区可见到较多TUNEL阳性神经元,Caspase-3 P20的表达明显增加,P均＜0.05;上述变化在银杏叶各剂量组均有不同程度的改善,P＜0.05或P＜0.01.结论 EGB对AD大鼠具有神经保护作用,可改善AD大鼠学习记忆能力;该作用与其减少大鼠海马区神经细胞凋亡及抑制Caspase-3的活性有关.     

涤痰汤对血管性痴呆大鼠海马NOX2/ROS通路、GSH、HO-1表达的影响

目的观察涤痰汤对血管性痴呆(VD)大鼠海马还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(NOX)2/活性氧(ROS)通路、血红素氧合酶(HO)-1、谷胱甘肽(GSH)的影响,探讨涤痰汤治疗VD的作用机制。方法 40只大鼠随机分为假手术组、模型组、涤痰汤高剂量组、涤痰汤低剂量组,每组10只,采用改良双侧颈总动脉永久阻断法(2-VO)制备VD大鼠模型,涤痰汤高剂量组、涤痰汤低剂量组分别以9.71 g/kg、4.85 g/kg涤痰汤灌胃,假手术组、模型组给予等量生理盐水,每日1次,给药4 w后,Morris水迷宫实验进行大鼠行为学检测,HE染色观察大鼠海马组织病理学变化,Western印迹法检测海马组织HO-1蛋白的表达,免疫组织化学法检测NOX2表达的变化,生化试剂盒测定海马组织ROS、GSH的含量。结果与假手术组比较,模型组大鼠空间学习记忆能力显著下降(P0.01);海马区神经元数量减少,可见坏死的神经元,细胞形态不规则,染色不均匀,细胞边界模糊,细胞膜、核膜不清晰,细胞核固缩;NOX2、HO-1表达量及ROS含量明显增高(P0.01),GSH含量明显降低(P0.01)。与模型组比较,涤痰汤高剂量组、涤痰汤低剂量组大鼠空间学习记忆能力改善(P0.01,P0.05);海马神经元数量增多,细胞形态较规则,染色较均匀,细胞边界较清晰;NOX2表达量及ROS含量显著降低(P0.01,P0.05),HO-1表达量及GSH含量显著升高(P0.01,P0.05);与涤痰汤高剂量组比较,涤痰汤低剂量组大鼠空间学习记忆能力显著下降(P0.05);NOX2表达量及ROS含量显著升高(P0.05),HO-1表达量及GSH含量显著降低(P0.05)。结论涤痰汤可能通过调节VD大鼠海马区氧化应激,保护海马神经元,改善大鼠空间学习记忆能力。     

米诺环素抑制大鼠脑缺血再灌注后海马CA1区神经元凋亡及Caspase-12的表达

目的 探讨米诺环素对大鼠局灶性脑缺血再灌注后海马CA1区神经元凋亡及半胱天冬酶-12(Caspase-12)表达的影响.方法 用大脑中动脉栓塞(线栓)法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型.18只健康雄性Wistar大鼠,随机分为假手术组、缺血再灌注组和米诺环素干预组.应用DNA原位末端缺口标记(TUNEL)法检测神经元凋亡,免疫组化法检测组织Caspase-12蛋白的表达.结果 与假手术组相比,缺血再灌注组海马CA1区凋亡神经元数增加(P<0.05),Caspase-12表达增加(P<0.05);米诺环素处理后显著缓解凋亡神经元数的增加,抑制Caspase-12的表达(P<0.05),但仍高于假手术组(P<0.05).结论 抑制Caspase-12介导的Caspase介导的级联反应凋亡途径的激活是米诺环素减少缺血再灌注损伤神经元凋亡的机制之一.     

糖尿病脑缺血再灌注大鼠海马CA1区Fas蛋白表达及细胞凋亡的研究

目的观察Fas蛋白在糖尿病脑缺血再灌注大鼠海马CA1区神经元损伤中的表达。方法采用链脲佐菌素(STZ)诱导和线栓法制备糖尿病大脑中动脉闭塞模型(MCAO),应用免疫组化方法和流式细胞术观察糖尿病脑缺血再灌注组与缺血再灌注组海马CA1区Fas表达变化和细胞凋亡情况。结果缺血再灌注组及糖尿病脑缺血再灌注组大鼠海马CA1区Fas阳性染色阳性细胞分别为(21·3±3·1)个/100μm、(51·9±4·2)个/100μm,较正常对照组〔(1·1±1·7)个/100μm〕及假手术组〔(10·3±2·4)个/100μm〕增多(P<0·05);而糖尿病脑缺血再灌注组比缺血再灌注组增加得更明显(P<0·05);糖尿病脑缺血再灌注组海马CA1区Fas蛋白表达上调,细胞凋亡百分数〔(29·34±8·45)%〕明显高于缺血再灌注组〔(17·59±6·38)%〕(P<0·05)。结论糖尿病大鼠脑缺血再灌注损伤后海马细胞发生凋亡,Fas介导的细胞凋亡机制可能是糖尿病加重脑缺血再灌注海马神经元损伤机制之一。     

吡格列酮对脑缺血大鼠海马CA1区胶质纤维酸性蛋白和周期蛋白D1表达的影响

目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptor-γ,PPARγ)激动剂吡格列酮对脑缺血大鼠海马CA1区胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)和周期蛋白D1表达的影响.方法 54只Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组和吡格列酮干预组,每组18只.采用改良线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞再灌注模型.吡格列酮干预组在模型制作前连续5d吡格列酮灌胃(0.65 mg/kg,1次/d).在模型制作后1d、3d和7d时(每个时间点6只)处死大鼠取脑.HE染色观察海马CA1区神经元病理学变化.免疫组化染色法检测海马CA1区GFAP和周期蛋白D1表达.结果 缺血再灌注组海马CA1区神经元存活数量在缺血再灌注3d和7d时均较假手术组显著减少(P均＜0.01),GFAP和周期蛋白D1在各个时间点表达均较假手术组显著上调(P均＜0.01).吡格列酮干预组海马CA1区神经元存活数量在缺血再灌注3d和7d时均较缺血再灌注组显著增多(P均＜0.01),GFAP和周期蛋白D1在各个时间点表达均较缺血再灌注组显著下调(P均＜0.01).结论 PPARγ激动剂吡格列酮对脑缺血再灌注大鼠海马CA1区神经元具有明显的保护作用,其机制可能与抑制GFAP和周期蛋白D1表达有关.     

基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路探讨毒消肝清丸对肝硬化内毒素血症大鼠肝组织炎症反应的影响

目的通过CCl4复合造模制备肝硬化内毒素血症模型,探讨毒消肝清丸对大鼠肝脏炎性损伤的保护机制。方法:66只大鼠造模过程中有17只死亡,取3只大鼠检测内毒素和观察肝脏结构,确定造模成功,剩余随机分成正常组(n=6),模型组(n=8)、乳果糖组(n=8)、毒消肝清丸高、中、低剂量组(223. 4 mg/kg、111. 7 mg/kg、58. 9 mg/kg,n=8)。采用CCl4复合造模法造模8周,制备肝硬化内毒素血症动物模型。正常组和模型组给予蒸馏水,乳果糖组予乳果糖,毒消肝清丸药物组按上述剂量每天给药1次,连续8周。测定内毒素含量变化、HE染色观察肝脏组织变化情况、采用ELISA检测肝脏组织TNFα、IL-1β、IL-6的含量;Western Blot和RT-PCR技术检测TLR4、MyD88、NF-κB蛋白及其mRNA的表达。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t法。结果各组间大鼠血浆内毒素水平差异有统计学意义(F=26. 011,P 0. 001);模型组内毒素水平较正常组显著升高(P 0. 01);给药后乳果糖组、毒消肝清丸不同剂量组大鼠血清内毒素含量较模型组均显著降低(P值均0. 01)。各组间大鼠血清IL-6、IL-1β以及TNFα水平差异均有统计学意义(F值分别为35. 390、38. 271、40. 241,P值分别为0. 002、0. 001、0. 001);与正常组比较,模型组大鼠血清IL-1β、IL-6以及TNFα显著升高(P值均0. 01);给药后乳果糖组及毒消肝清丸不同剂量药物组大鼠血清IL-1β、IL-6以及TNFα水平较模型组均显著降低(P值均0. 01)。各组间大鼠肝组织TLR4、MyD88、NF-κB mRNA及其蛋白表达差异均有统计学意义(F值分别为24. 483、29. 547、19. 242、18. 752、22. 146、15. 834,P值均0. 01);与正常组大鼠相比,模型组大鼠肝脏TLR4、MyD88、NF-κB mRNA及其蛋白相对表达量均显著升高(P值均0. 01);乳果糖和毒消肝清丸不同剂量治疗后大鼠肝组织TLR4、MyD88、NF-κB mRNA及其蛋白相对表达量较模型组均显著下降(P值均0. 01)。与低剂量治疗组比较,中高剂量组大鼠肝脏TLR4、MyD88、NF-κB mRNA及其蛋白相对表达量下降尤为显著(P值均0. 01)。结论药物组可能通过下调肝脏组织TLR4/MyD88/NF-κB信号通路来抑制炎症信号的转导,减少了细胞因子TNFα、IL-1β、IL-6的表达,进而缓解内毒素血症并对肝脏组织起到保护作用。     

反式白藜芦醇对血管性痴呆模型大鼠海马神经元的保护作用

目的观察反式白藜芦醇对血管性痴呆大鼠海马神经元的保护作用及机制。方法选择SPF级雄性健康大鼠54只,随机抽取10只作为空白对照组;其他44只建立血管性痴呆大鼠模型,成功建立40只,随机将40只模型分为4组,各10只,分别为模型组、低剂量组[10 mg/(kg·d)]、中剂量组[20 mg/(kg·d)]、高剂量组[40 mg/(kg·d)],反式白藜芦灌胃给药;同时空白对照组与模型组使用等体积氯化钠注射液灌胃。灌胃10 d后取大鼠海马组织,经苏木素-伊红染色观察大鼠海马区病理变化,实时定量PCR测定海马区DNA聚合酶γ、Caspase-3及NMDAR1 mRNA表达,Western印迹法测定海马神经元膜蛋白NMDAR1/β-actin比值,经免疫组化法测定海马NMDAR1表达,以积分吸光度(IA)表示。结果空白对照组海马区神经元形态、结构无变化,均正常;模型组海马区细胞层次清晰度不佳、数量变少、胞体缩小、细胞排列散乱、部分神经元丢失,使用反式白藜芦醇后,海马区细胞层次、形态及排列等问题均有改善;较空白对照组,模型组Caspase-3、DNA聚合酶γmRNA、NMDAR1/β-actin、NMDAR1/IA、NMDAR1 mRNA表达均升高,但在使用反式白藜芦醇后各指标均下降,且随着反式白藜芦醇使用剂量增加,各指标表达逐渐下降,组间比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论反式白藜芦醇可能通过下调血管性痴呆大鼠海马区神经元NMDAR1、Caspase-3及DNA聚合酶γ表达发挥海马神经元保护之效。     

雌激素对去卵巢大鼠不同脑区APPβ位点裂解酶表达的影响

目的观察内外源雌激素对卵巢切除大鼠大脑皮层、海马CA1区APPβ位点裂解酶（BACE）表达的影响。方法21只雌性Wistar大鼠随机分为假手术对照组、卵巢切除组（OVX组）、卵巢切除后补充外源性雌激素组（E2组）。放免法测量大鼠血中雌激素含量。免疫荧光标记细胞化学法计数皮层区、海马CA1区BACE蛋白表达阳性细胞。结果与对照组和E2组比较，OVX组大鼠皮层区、海马CA1区BACE阳性细胞数显著增加（P均〈0．01），血液雌激素含量显著降低（P均〈0．01）。E2组与对照组比较，两组之间各观察部位BACE表达阳性细胞数和血液雌激素含量无显著差异（P均〉0．05）。结论体内外雌激素含量的变化可影响大鼠皮质和海马区域BACE表达。     

人参皂苷Rg1对脑缺血再灌注损伤大鼠神经细胞凋亡及FZD1、PIWIL1、FOXM1表达的影响

目的探讨人参皂苷Rg1(GsRg1)对脑缺血再灌注损伤模型大鼠神经功能的改善作用,并探讨其作用机制。方法缺血再灌注损伤Wistar大鼠随机分为假手术组、模型对照组、依达拉奉组(3. 2 mg/kg)、GsRg1低(10mg/kg)、中(20 mg/kg)、高(50 mg/kg)剂量组6组。给药后1 d、7 d和14 d采用改良m-NSS法进行神经功能缺损评分,氯化三苯基四氮唑(TTC)染色测定脑梗死体积;采用原位TUNEL方法检测脑组织神经细胞凋亡;采用免疫组化法检测NF-κB、GAFP蛋白水平;采用RT-PCR法、Western Blot法分别检测FZD1、PIWIL1、FOXM1 mRNA和蛋白表达水平。结果与模型对照组比较,GsRg1低剂量组大鼠神经缺损评分明显降低(P0. 05),GsRg1中、高剂量组大鼠神经缺损评分明显降低(P0. 01); GsRg1低、中、高剂量组神经凋亡细胞明显减少(P0. 01),脑梗死体积显著缩小(P0. 01),大鼠脑组织NF-κB、GAFP表达显著降低(P0. 01),FZD1、FOXM1 mRNA及蛋白表达水平显著增加(P0. 01),PIWIL1 mRNA及蛋白表达水平显著降低(P0. 01),且呈现一定的剂量依赖性。结论 GsRg1能够显著改善脑缺血再灌注损伤大鼠的神经功能,其可能是通过调控FZD1、PIWIL1、FOXM1相关基因及蛋白的表达实现的。