辣椒素对高盐诱导大鼠肾小球损害及转化生长因子β_1/Smads通路的影响

目的探讨膳食辣椒素对高盐诱导肾小球损害的作用和机制。方法雄性Wistar大鼠36只,随机分为普食组(n=12,0.5%正常盐饲料)、高盐组(n=12,4%高盐饲料)、辣椒素组(n=12,4%高盐+0.02%辣椒素饲料)。用智能无创鼠尾动脉血压仪监测尾动脉压1次/4周;生化方法测定24h尿微量白蛋白、血尿肌酐;HE、Masson染色观察肾小球形态及胶原纤维;real-time聚合酶链反应法检测肾脏皮质区转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad2、Smad3、Smad7的mRNA表达,Western-blot法检测皮质区瞬时受体电位通道香草醛亚型1(TRPV1)、TGF-β1、磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3)、Smad7、Ⅰ型胶原的蛋白表达。结果与普食组相比,高盐组的大鼠颈动脉收缩压升高[(145.8±5.8)比(118.1±8.3)mm Hg,P0.05],肾小球纤维化指数明显增高(23.2±2.4比13.6±1.1,P0.05),24h尿微量白蛋白明显增高,肌酐清除率(Ccr)降低;肾脏皮质区TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7的mRNA和蛋白表达升高,Ⅰ型胶原蛋白表达增高、TRPV1蛋白表达降低。辣椒素干预后,大鼠颈动脉收缩压较高盐组明显降低[(125.5±6.8)比(145.8±5.8)mm Hg,P0.05],肾小球纤维化指数明显降低(16.5±1.4比23.2±2.4,P0.05),24hMAU明显降低,TRPV1蛋白表达增高,Ⅰ型胶原蛋白表达下降,上述TGF-β1/Smads通路各基因和蛋白表达也显著降低(均P0.05)。结论辣椒素能改善高盐诱导肾小球损害,其机制可能与激活TRPV1、抑制TGF-β1/Smads通路有关。     

高盐饮食对自发性高血压大鼠肾脏的影响及左旋氨氯地平的作用

目的观察高盐饮食对自发性高血压大鼠肾脏的影响及左旋氨氯地平的干预作用。方法自发性高血压大鼠30只,随机分为3组:正常盐组(含0.4%Na Cl饲料喂养,n=10)、高盐组(含4%Na Cl饲料喂养,n=10)、高盐+左旋氨氯地平干预组(含4%Na Cl饲料喂养+左旋氨氯地平灌胃,n=10),喂养14周。尾动脉测压仪测量尾动脉收缩压。14周时摘取双层肾脏计算双肾肥大指数,HE、Masson染色观察肾脏形态学改变,免疫组化法检测肾脏组织转化生长因子-β1(TGF-β1)表达。结果与正常盐组相比,高盐组大鼠收缩压第6周时明显升高(P0.05),高盐+左旋氨氯地平干预组收缩压低于正常盐组和高盐组(P0.05)。与正常盐组相比,高盐组、高盐+左旋氨氯地平组的双肾肥大指数显著增高(P0.05)。高盐组肾小球球囊黏连、肾小管间质纤维化。免疫组化结果显示,高盐组肾脏组织TGF-β1的表达高于正常盐组,而高盐+氨氯地平组肾脏组织TGF-β1表达较另外两组低。结论长期高盐饮食可引起自发性高血压大鼠血压升高、肾小球球囊黏连、肾小管间质纤维化。高盐饮食所致自发性高血压大鼠肾纤维化可能与TGF-β1的过表达有关。左旋氨氯地平能有效降压、减少肾纤维化,可能与降低TGF-β1的过表达有关。     

辣椒素通过抑制肾小管间质纤维化改善高盐诱导肾脏损害的作用

目的探讨辣椒素对高盐诱导肾小管间质纤维化(RIF)的作用和机制。方法雄性Wistar大鼠36只,随机分为普食组(n=12,0.5%正常盐饲料)、高盐组(n=12,4%高盐饲料)、辣椒素组(n=12,4%高盐+0.02%辣椒素饲料)。每4周用智能无创鼠尾动脉血压仪测大鼠尾动脉收缩压;24周测定血肌酐、24h尿蛋白、尿视黄醇结合蛋白和尿TH-糖蛋白;HE、Masson染色观察肾髓质形态及纤维化;免疫组化法及Western-blot法检测肾髓质区瞬时受体电位通道香草醛亚型1(TRPV1)、转化生长因子β_1(TGF-β_1)、p-Smad2/3、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原蛋白表达。结果与普食组相比,高盐组大鼠血压升高[(138.9±6.8)比(107.8±7.6)mm Hg,P0.05],RIF指数明显增高(23.55±2.23比11.30±1.26,P0.05),24h尿蛋白、视黄醇结合蛋白明显增高,TH-糖蛋白降低;肾脏髓质区TRPV1表达降低,TGF-β_1、α-SMA、p-Smad2/3、波形蛋白、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原蛋白表达增高。辣椒素干预后,大鼠尾动脉收缩压较高盐组明显降低[(119.5±8.3)比(138.9±6.8)mm Hg,P0.05],RIF指数明显降低(15.65±1.72比23.55±2.23,P0.05),24h尿蛋白、视黄醇结合蛋白降低,TH-糖蛋白排泄增高,肾髓质TRPV1表达明显增加,TGF-β_1、α-SMA、p-Smad2/3、波形蛋白、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原蛋白表达显著降低(均P0.05)。结论长期高盐摄入可诱导Wistar大鼠RIF,辣椒素可能通过激活TRPV1,抑制RIF,改善高盐诱导的高血压肾脏损伤。     

高盐饮食诱导Wistar大鼠颈动脉重塑的机制及替米沙坦的干预

目的　探讨高盐饮食对Wistar大鼠颈动脉重塑的影响及替米沙坦的干预作用。方法　Wistar大鼠60只随机分为对照组（0.5%NaCl颗粒饲料）、高盐组（8%NaCl颗粒饲料）和干预组（8%NaCl颗粒饲料＋替米沙坦）。实验结束后,根据尾动脉血压将高盐组分为高盐高血压组和高盐血压正常组。采用HE染色、Masson染色及免疫组织化学染色检测颈动脉中膜形态结构变化及颈动脉中膜α-平滑肌肌动蛋白（α-actin）、增殖细胞核抗原（PCNA）、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、血管紧张素Ⅱ　1型受体（AT1）、血管紧张素Ⅱ　2型受体（AT2）、转化生长因子β1（TGF-β1）、p-Smad2/3、Smad7的表达水平。放射免疫法测定颈动脉醛固酮（ALD）含量。结果　高盐高血压组和高盐血压正常组颈动脉中膜厚度（MT）、颈动脉中膜厚度与腔径比（MT/LD）、颈动脉中膜平滑肌细胞增殖指数（PI）、胶原纤维面积百分比、TGF-β1和p-Smad2/3表达均增高（P＜0.05）,干预组上述指标均降低（P＜0.05）,Smad7在高盐高血压组、高盐血压正常组颈动脉表达减少,在干预组颈动脉表达增加（P＜0.05）。高盐高血压组、高盐血压正常组和干预组颈动脉中膜AngⅡ表达均较对照组增多（P＜0.05）,此三组之间无明显差异（P＞0.05）。高盐高血压组和高盐血压正常组颈动脉中膜AT1表达较对照组增多,干预组颈动脉中膜AT1表达减少（P＜0.05）,高盐高血压组与高盐血压正常组相比无明显差异（P＞0.05）。干预组颈动脉中膜AT2表达较对照组、高盐高血压组、高盐血压正常组增多（P＜0.05）,对照组、高盐高血压组和高盐血压正常组之间无明显差异（P＞0.05）。高盐高血压组颈动脉中膜醛固酮含量高于对照组、高盐血压正常组和干预组（P＜0.05或P＜0.01）。结论　8%NaCl盐饮食可诱导Wistar大鼠颈动脉重塑,其机制可能与局部RAS和TGF-β1/Smads通路中多个组分的表达异常有关,替米沙坦能抑制高盐诱导的颈动脉重构。     

积雪草苷抑制TGF-β1/Smad信号通路 对乙型肝炎模型大鼠肝纤维化的影响

[摘要]?目的?探讨积雪草苷（asiaticoside, AS）对乙型肝炎模型大鼠肝纤维化及转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1, TGF-β1）/Smad信号通路的影响。方法?将造模成功的48只SD大鼠随机分为模型（Model）组、AS组（50 mg/kg）、Smad激活剂SRI-011381组（30 mg/kg Smad激活剂SRI-011381）、AS+SRI-011381组（50 mg/kg AS+30 mg/kg SRI-011381），另取12只健康大鼠为健康对照（normal control, NC）组，检测其AST、ALT、透明质酸（hyaluronic acid, HA）、层粘蛋白（laminin, LN）、Ⅲ型前胶原（procollagen type III, PCⅢ）、HBsAg、HBeAg水平，肝组织形态及纤维化程度以及、肝组织TGF-β1/Smad通路信号蛋白表达。结果?NC组肝组织形态正常、无纤维增生；Model组肝组织坏死、水肿、细胞排列紊乱、纤维结缔组织增生。与Model组相比，AS组肝病变减轻。SRI-011381组肝病变最重。AS+SRI-011381组肝损伤和纤维化程度较AS组加重。与NC组相比，Model组ALT、AST、HBsAg、HBeAg、HA、LN和PCⅢ水平及TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad1/5/9/Smad1/5/9蛋白水平均显著升高（P均＜0.05）；与Model组比较，AS组ALT、AST、HBsAg、HBeAg、HA、LN和PCⅢ水平及TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad1/5/9/Smad1/5/9蛋白水平均显著下降（P均＜0.05）；而SRI-011381组呈现相反的趋势（P均＜0.05）。与AS组相比，AS+SRI-011381组ALT、AST、HBsAg、HBeAg、HA、LN、PCⅢ水平及TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad1/5/9/Smad1/5/9蛋白水平均显著升高（P均＜0.05）。结论?AS可能通过抑制TGF-β1/Smad通路信号改善乙型肝炎大鼠的肝纤维化程度。     

高盐诱导Wistar大鼠肾损害的机制及替米沙坦的干预效果

目的探讨长期高盐饮食导致Wistar大鼠肾脏损害的机制及替米沙坦干预效果。方法雄性Wistar大鼠49只,随机分为对照组(NS组,n=13,用含0.5%Na Cl颗粒饲料喂养)、高盐组(n=24,用含8%Na Cl颗粒饲料喂养)、干预组(GY组,n=12,用含8%Na Cl颗粒饲料喂养+替米沙坦灌胃),均自由饮水,饲养24 w。实验结束时用尾动脉测压仪测血压,用代谢笼收集24 h尿液测定尿蛋白量,HE染色观察肾皮质形态学的改变,生化方法测定肾组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、钠泵(Na+-K+-ATPase)和钙泵(Ca2+-ATPase)活性;Western印迹法检测肾组织过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)蛋白的表达。结果与NS组比较,24 w时高盐组部分大鼠血压增高,将血压升高大鼠,分为高盐高血压组(HH组,n=13)其余大鼠分为高盐正常血压组(HN组,n=11);HH组和HN组大鼠肾组织均有大量炎症细胞浸润,尿蛋白排泄增多,总SOD活力、Ca2+-ATPase活性降低(P0.05),PPAR-γ蛋白表达增高(P0.05),而GY组大鼠肾组织炎症细胞浸润程度、尿蛋白排泄量均较高盐组低。结论长期高盐饮食饲养可导致Wistar大鼠的肾损害,其可能与炎症和氧化应激有关,PPAR-γ蛋白表达的增高可能对肾损害有拮抗作用。替米沙坦可能通过降低尿蛋白的排泄和抑制炎症反应对肾脏起保护作用。     

脂氧素A4对链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠肾小管上皮细胞Smad7/3、转化生长因子β1及Notch-1表达的调节

目的通过观察脂氧素A4(LXA4)对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠肾小管上皮细胞Smad7/3、转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白水平,及其对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞Smad7/3、Notch-1蛋白水平的影响,探讨LXA4对糖尿病大鼠肾小管上皮细胞纤维化的潜在保护作用。方法雄性SD大鼠随机分为对照组(Con,n=10)、糖尿病组(DM,n=10)、糖尿病+LXA4组(DM+LXA4,n=10),DM+LXA4组以1mg/kg体质量的LXA4隔日1次尾静脉注射,连续8周;肾小管上皮细胞分为Con组、TGF-β1诱导组、LXA4组以及TGF-β1+LXA4组。免疫组织化学法及Western blot法观察STZ诱导的糖尿病大鼠肾小管上皮细胞Smad7/磷酸化Smad3(p-Smad3)及TGF-β1的蛋白水平,并观察LXA4对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞Smad7、p-Smad3及Notch-1的蛋白水平。结果DM+LXA4组Smad7阳性面积率高于DM组及Con组[(24.18±1.38)%vs(18.56±1.13)%,(24.18±1.38)%vs(21.80±1.82)%,P0.001]。p-Smad3及TGF-β1阳性面积率率低于DM组[(14.17±1.18)%vs(17.89±2.62)%,(20.53±0.83)%vs(24.91±1.82)%,P0.05或P0.001],但高于Con组[(14.17±1.18)%vs(12.68±1.33)%,(20.53±0.83)%vs(18.14±1.48)%,P0.001]。LXA4组尿白蛋白、Ⅳ型胶原(TⅣC)及TGF-β1排泄率低于DM组[(46.90±17.65)vs(70.60±14.99)mg/g,(87.40±16.25)vs(149.30±15.13)μg/ml,(53.60±14.74)vs(125.70±32.22)pg/ml,P0.001],但高于Con组[(46.90±17.65)vs(16.70±3.34)mg/g,(87.40±16.25)vs(32.00±10.58)μg/ml,(53.60±14.74)vs(27.10±3.38)pg/ml,P0.001]。LXA4抑制TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞p-Smad3、和Notch-1的蛋白水平,上调Smad7的表达(P0.01)。结论LXA4可以通过上调Smad7、下调p-Smad3、TGF-β1及Notch-1的蛋白水平,预防肾小管上皮细胞纤维化,具有潜在防治TIDM肾病的作用。     

回回甘松饮含药血清调控高糖诱导的肾小球系膜细胞TGF-β1/Smads信号通路的研究

目的探讨回回甘松饮(HGY)含药血清对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞(MCs)TGF-β1/Smads信号通路的影响。方法体外培养大鼠MCs,分为正常对照组、高糖组、格列喹酮(阳性)组、HGY高、低剂量组。除正常对照组给外,其余各组分别给予30 mmol/L葡萄糖+10%正常大鼠血清、格列喹酮(10 mg/kg)组大鼠血清、HGY(5、10 g/kg)组大鼠血清干预。细胞培养结束后,采用实时荧光定量PCR方法检测TGF-β1、Smad3、Smad7的基因表达水平。结果高糖(30 mmol/L)使MCs中TGF-β1、Smad3基因表达量升高(P0.01或P0.05),使Smad7基因表达量下降(P0.01);HGY含药血清可下调高糖诱导的MCs中TGF-β1、Smad3的基因表达量(P0.01),上调Smad7基因表达量下降(P0.01),且与格列喹酮含药血清的调控结果接近,无显著差异。结论 HGY含药血清可调控MCs在高糖环境下的TGF-β1、Smad3、Smad7的基因表达水平,这可能是其延缓糖尿病肾病进程的机制之一。     

低密度脂蛋白诱导大鼠肾小管上皮细胞转分化的作用机制研究

目的探讨低密度脂蛋白(LDL)对大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK-52E)转分化的影响及其作用机制。方法将体外培养的NRK-52E细胞分为4组:正常对照组、洛伐他汀(Lov,1μmol/L)组、LDL(250 mg/L)刺激组、LDL(250mg/L)+Lov(1μmol/L)组。应用倒置显微镜观察细胞形态学改变;RT-PCR检测NRK-52E细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙粘蛋白(E-cadherin)、转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad2、Smad3和整合素链接酶(ILK)mRNA表达;West-ern blot检测α-SMA、E-cadherin及磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3)蛋白表达;ELISA检测上清液TGF-β1。结果加入LDL培养24 h后,NRK-52E细胞由立方形或多角形变为长梭形,α-SMA、TGF-β1、Smad2、Smad3和ILK mRNA的表达上调,E-cadherin mRNA的表达下调,与对照组比较差异均有统计学意义(P0.01);α-SMA和p-Smad2/3蛋白表达量显著高于对照组(P0.01),E-cadherin蛋白表达量显著低于对照组(P0.01);细胞上清液TGF-β1浓度显著高于对照组(P0.01)。LDL+Lov组与LDL组比较,NRK-52E细胞α-SMA、TGF-β1、Smad2、Smad3、ILK mRNA的表达及α-SMA、p-Smad2/3的蛋白表达均明显降低,E-cadherin mRNA和蛋白表达明显增强。结论LDL可诱导肾小管上皮细胞转分化,其机制可能是激活TGF-β1/Smads/ILK信号通路,而Lov能部分阻断LDL诱导的小管上皮细胞转分化。     

替米沙坦和氨氯地平对乳鼠心肌成纤维细胞增殖的影响

目的探讨替米沙坦联合氨氯地平对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的乳鼠心肌成纤维细胞增殖及细胞中转化生长因子-β1(TGF-β1)及ROS的影响。方法对Wistar乳鼠心肌成纤维细胞行体外原代及传代培养,将培养好的细胞分为5组:对照组(加入15%小牛血清DEME培养液)、AngⅡ组(15%小牛血清DEME培养液+1×10-6 mol/L AngⅡ),替米沙坦组(TE组,在AngⅡ组基础上加入10μmol/L替米沙坦),氨氯地平组(AM组,AngⅡ组基础上加入1μmol/L氨氯地平)及替米沙坦+氨氯地平组(TE+AM组,在AngⅡ组基础上加入10μmol/L替米沙坦+1μmol/L氨氯地平)。倒置显微镜下观察各组细胞不同时期增殖情况及TGF-β1(免疫荧光法测定)、ROS(荧光探针DCFH-DA分析)情况。结果与对照组相比,AngⅡ组心肌成纤维细胞在S期时增殖率较高,而在G0/G1期、G2/M期时增殖率下降(P0.05),TGF-β1、ROS水平显著升高(P0.05)。与AngⅡ组相比,TE组、AM组及TE+AM组心肌成纤维细胞在S期时增殖率显著下降,而在G0/G1期、G2/M期时增殖率升高(P0.05),TGF-β1、ROS水平下降(P0.05)。TE+AM组与TE组、AM组相比心肌成纤维细胞在S期时增殖率下降,在G0/G1期、G2/M期时增殖率升高更明显(P0.05),心肌成纤维细胞中TGF-β1水平低于TE组、AM组(P0.05)。结论替米沙坦联合氨氯地平能有效抑制AngⅡ诱导心肌成纤维细胞增殖,其可能机制与抑制TGF-β1过度表达及ROS过度生成有关。