高压氧对人脐带华通胶间充质干细胞移植心肌梗死大鼠炎性因子的作用

目的探讨高压氧对移植干细胞在梗死心肌组织局部的炎性状况。方法选择SD大鼠65只,随机分为假手术组5只,心肌梗死组15只,干细胞移植组15只,高压氧组15只,高压氧+干细胞移植组(联合组)15只。建立心肌梗死大鼠模型,模型建立后第1天进行高压氧治疗30d。心肌梗死后第7天进行人脐带华通胶间充质干细胞移植,分别于心肌梗死前、心肌梗死后1、7、14、28d采集血清,ELISA法检测血清TNF-a、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6水平,采用EdU染色法,标记人脐带华通胶间充质干细胞,免疫荧光法检测移植细胞存活及增殖率。结果除外联合组14d时IL-6,联合组3、14、28d时TNF-a、IL-6和IL-1β较心肌梗死组、高压氧组、干细胞移植组明显降低(P<0.05);与干细胞移植组比较,联合组干细胞移植后7、21d心肌组织局部干细胞数量及增殖率明显增高(80.6%vs 55.0%,79.1%vs 34.3%,P<0.05)。结论高压氧能够显著降低梗死心肌组织中的炎性因子水平,有效改善移植干细胞生存的微环境,提高移植干细胞在受损心肌局部的生存及增殖率。     

人脐带间充质干细胞对ALI治疗作用的研究

目的探讨输入人脐带间充质干细胞（human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUMscs）对脂多糖（LPS）诱导的大鼠ALI的治疗作用。方法将30只Wistar大鼠随机分为3组：正常对照组、ALI模型组和HUMSCs移植组,每组10只。健康大鼠LPS气管滴入方法建立ALI模型,尾静脉输入HUMSCs。输入7h后,处死各组大鼠,取肺组织行病理学观察,测定肺湿／干重比（W／D）,ELISA法测定肺组织匀浆中肿瘤坏死因子α（TNF-α）和IL-1β的含量。结果肺组织病理学显示：ALI模型组大鼠肺组织呈现典型的炎症病理变化,包括肺泡充血、水肿、出血,肺泡腔和血管壁中性粒细胞浸润,肺泡壁增厚等肺损伤性病变;HUMSCs移植组大鼠肺组织损伤程度明显减轻。与正常对照组比较,ALI模型组W／D、TNF-α和IL-1β含量明显升高（P〈0．05）。与Au模型组比较,HUMSCs移植组W／D、TNF-α和IL-1β含量明显降低（P〈0．05）。结论输入HUMSCs能减轻ALI,并能降低肺W／D和肺组织TNF-α及IL-1β含量。     

骨髓间充质干细胞移植对大鼠脑缺血损伤和IL-10、TGF-β1表达的影响

目的观察骨髓间充质干细胞(BMSC)移植治疗缺血性脑卒中大鼠神经功能恢复情况,同时检测血清和脑组织中白细胞介素10(IL-10)和转化生长因子β1(TGF-β1)表达以探讨神经修复的可能机制。方法 36只SD雄性大鼠,随机分为3组:空白组、模型组和实验组。采用改良线栓法制备大脑中动脉闭塞模型(MCAO),实验组缺血24小时后予以BMSC移植干预,模型组给予等量生理盐水,空白组不做处理。分别于移植后第1、3、7、14天不同时间点观察神经行为学评分,通过TTC染色测量脑梗死体积,ELISA及Western blot的方法检测大鼠血清及脑组织中炎症因子IL-10、TGF-β1的变化情况。结果空白组低表达IL-10、TGF-β1;与空白组比较,模型组大鼠神经行为学评分明显升高,脑梗死体积增大(P0.01),血清及脑组织中IL-10、TGF-β1的表达明显升高(P0.05);与模型组比较,实验组大鼠脑梗死体积减小(P0.05),3天、7天及14天中神经行为学评分明显降低(P0.05),血清及脑组织中IL-10、TGF-β1的表达明显升高(P0.01),且随着1、3、7、14天的时间的推移,IL-10、TGF-β1表达逐渐下调。结论骨髓间充质干细胞对缺血性脑损伤有修复作用,其机制可能与促进抗炎因子IL-10、TGF-β1的分泌有关。     

人脐带血间充质干细胞改善大鼠脑梗死免疫炎性反应的研究

目的研究人脐带血间充质干细胞(MSC)移植对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤炎性因子表达和调节性T细胞(Treg)数量及神经功能缺损的影响。方法选择健康雄性SD大鼠40只,随机分为假手术组、缺血再灌注组、MSC组、生理盐水组,每组10只。于缺血前、缺血后30min、缺血再灌注2、3、6h测定血清白细胞介素(IL)-6、干扰素γ(IFNγ)、IL-10、转化生长因子β(TGF-β)水平变化,于1、3、7、14d对大鼠神经功能进行评分,并检测外周血中Treg表达。结果 MSC组缺血后IL-6、IFNγ水平升高,分别在缺血再灌注2h、缺血后30min达高峰,显著小于缺血再灌注组和生理盐水组;缺血后缺血再灌注组和生理盐水组IL-10、TGF-β水平降低,MSC组升高。MSC组缺血再灌注3、7、14d神经功能缺损评分明显低于缺血再灌注组和生理盐水组(P0.05)。结论人脐带血MSC移植可促进缺血再灌注大鼠神经功能恢复,诱导CD4CD25Treg细胞增殖,促炎性因子IL-6、IFNγ水平下降,抗炎性因子IL-10、TGF-β水平升高,从而减轻缺血性脑损伤。     

脑出血大鼠脑内胚胎神经干细胞移植的运动神经功能改变和形态学研究

目的研究脑出血大鼠脑内胚胎神经干细胞移植对运动神经功能改善作用以及移植细胞分化后形态学改变。方法通过大鼠尾状核注射胶原酶IV制作脑出血模型大鼠,分离培养胚胎神经干细胞移植入脑出血大鼠脑内。对脑出血大鼠移植前后运动神经功能进行评价,并通过组织免疫荧光检测移植神经干细胞脑内分化后形态学改变情况。结果Hoechst标记的神经干细胞移植入脑出血大鼠后可见其在脑内存活,主要分布于血肿腔周边,免疫荧光检测显示移植细胞能进一步分化为神经元及星形胶质细胞;从移植术后第21天到第28天,神经干细胞移植组大鼠的神经功能改善显著好于培养液移植组和单纯脑出血组,有统计学意义(P<0.001)。结论胚胎神经干细胞脑出血大鼠脑内移植能促进偏瘫肢体功能恢复;胚胎神经干细胞脑出血大鼠脑内移植后能存活并进一步分化为神经元及星形胶质细胞。     

大鼠脑出血后神经干细胞移植的实验研究

目的探讨脑出血后大鼠胚胎神经干细胞移植治疗的可行性.方法从14d胚龄的大鼠胚胎脑组织中分离、培养神经干细胞,通过荧光免疫组化技术研究其特性.制作大鼠脑出血模型,分别于3d和7 d时将未分化的神经干细胞注入血同侧的尾状核内.分别记录模型制作后2 h和移植后2 h、4周的大鼠运动功能.移植4周后处死大鼠,观察移植后干细胞在体内生长情况.结果实验中分离、培养的神经干细胞体外能够被诱导分化成神经元、少突胶质细胞和星形胶质细胞.出血后7 d干细胞移植组的大鼠运动功能的改善显著好于3 d组和对照组.结论神经干细胞移植治疗能够显著改善脑出血动物的运动功能,是一种很有发展前途的方法,值得进行更深入的研究.     

人脐带间充质干细胞对大鼠坐骨神经损伤的修复效果观察

目的观察人脐带间充质干细胞（HUMSC）对大鼠坐骨神经损伤的修复效果。方法氨水消化法处理羊膜。纯化的HUMSC传代培养。制作坐骨神经缺损套管模型,分为实验组和对照组;实验组移植HUMSC,术后4、8、12、16、20周观察腓肠肌肌细胞直径。结果术后8、12、16、20周,两组腓肠肌肌细胞直径相比,P均〈0.05。结论置入HUMSC对坐骨神经损伤有一定的修复作用。     

门脉移植骨髓间充质干细胞后肝内定居的实验研究

目的探讨同种异体大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)门脉移植后在受体大鼠模型肝内定居分布情况。方法利用密度梯度法和贴壁法纯化大鼠骨髓间充质干细胞。取第3代MSCs经CFSE标记后从门静脉植入同种异体正常组和肝损伤组大鼠体内,10d后取出受体大鼠肝脏,通过冰冻切片行荧光计数法,比较MSCs在大鼠肝脏内定居分布情况。结果门静脉移植后的MSCs均能在正常组和肝损伤组的肝脏内定居；在细胞数量上,肝损伤组明显多于正常组。结论经门静脉移植的MSCs可以定居于肝脏内,定于肝脏的细胞数量与肝脏是否损伤密切相关。     

多次移植人脐带间充质干细胞对大鼠Th1和Th2比值的影响

目的:观察多次静脉移植人脐带间充质干细胞(human umbilical mesenchymal stem cells,HUMSCs)对大鼠Th1和Th2轴的影响。方法:①体外培养HUMSCs;流式细胞仪鉴定第4代hUMSCs表面抗原的表达;特异性诱导染色并鉴定第4代HUMSCs分化脂肪细胞和成骨细胞的潜能;②雄性SD大鼠30只,体质量182²03g,分为3组:空白对照组;0.9%氯化钠液组;干细胞移植组,每组10只。干细胞移植组:1次/w经尾静脉注射3.5×107/kg的HUMSCs,连续3次。第三次移植HUMSCs后11d,各组经腹主动脉取血,流式细胞仪检测T淋巴细胞的IFN-γ和IL-4阳性率。结果:3次注射干细胞后实验动物全部存活,干细胞组的Th1、Th2阳性率较0.9%氯化钠液组差异无统计学意义(P>0.05);Th1/Th2比值、血清IFN-γ和IL-4水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);干细胞组的心、脑、肺、肝及肾等脏器未发生病理改变。利用红色荧光蛋白转染的HUMSCs示踪,发现移植的HUMSCs大部分归巢于骨髓中。结论:多次尾静脉注射HUMSCs,未引起大鼠Th1、Th2细胞免疫和体液免疫系统的变化,Th1/Th2轴无明显改变。移植的HUMSCs能较长时间的存活于大鼠骨髓内,具有较好的免疫相容性。     

骨髓间充质干细胞移植对心肌缺血/再灌注大鼠心肌胶原与血管新生的影响

目的通过心肌缺血/再灌注模型观察大鼠骨髓间充质干细胞心肌移植对心肌细胞外胶原、小血管新生和心功能变化的影响,并探讨其机制。方法分离、原代培养Wistar大鼠骨髓间充质干细胞,建立缺血/再灌注动物模型,分为假手术组、心肌梗死 骨髓间充质干细胞移植组、心肌梗死对照组,观察骨髓间充质干细胞移植后动物模型血流动力学指标、心肌梗死面积和心肌细胞形态、心肌间质、血管密度、心室膨展指数、心肌细胞横截面积和心肌胶原变化。结果(1)骨髓间充质干细胞心肌移植可缩小60min缺血/再灌注大鼠28d心肌梗死面积;(2)骨髓间充质干细胞移植可减轻心肌梗死动物左心室重塑,但心功能改善作用不明显;(3)骨髓间充质干细胞移植发挥细胞外基质抑制、促血管生成作用,心肌间质胶原含量、胶原分数下降,心肌毛细血管、小动脉密度增加。结论骨髓间充质干细胞移植可改善心肌梗死后心室重塑、促进血管新生和降低心肌胶原作用。     

骨髓间充质干细胞对失血性休克大鼠早期炎性反应的影响

目的探讨骨髓间充质干细胞对失血性休克大鼠血清炎性因子及重要脏器的影响。方法体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞。雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、治疗组(n=20)。改良Wiggers法制备大鼠出血性休克模型,休克持续90 min。治疗组在复苏前给予106个第3代骨髓间充质干细胞磷酸盐缓冲液(PBS)悬液1 ml,假手术组和模型组给予相同体积PBS溶液。分别于复苏后6、12、24、48、72 h取血清,酶联免疫试验(ELISA)检测肿瘤坏死因子(TNF)-α,白介素(IL)-1β、IL-6和IL-10水平,苏木素-伊红(HE)染色观察心、肝、肺、肾病理损伤。结果治疗组血清TNF-α和IL-6在复苏后12~72 h内较模型组显著下降(P0.05);治疗组血清IL-1β在复苏后6~12 h内较模型组下降显著(P0.05);治疗组IL-10水平在复苏后6~48 h内均较模型组有显著升高(P0.05)。骨髓间充质干细胞减轻肺、肝、肾、心等器官的炎性细胞浸润。结论骨髓间充质干细胞能调节失血性休克早期重要炎性因子水平,促进机体促炎-抗炎系统平衡。     

神经干细胞移植治疗脑出血大鼠模型时间窗的研究

目的研究神经干细胞移植治疗脑出血的时间窗。方法分离、培养大鼠海马神经干细胞，经Nestin免疫荧光鉴定，Brdu标记；25只SD大鼠制作脑出血模型，随机分为5组（1、2、3、4d移植组、模型组），分别在造模后第1、2、3、4d移植Brdu标记的神经干细胞于脑出血大鼠的患侧侧腔室下区（SVZ），模型组不移植，测试大鼠运动功能，14d时处死，取全脑固定、冰冻切片、Brdu免疫荧光染色，Brdu阳性细胞计数。结果各移植组大鼠神经功能缺损明显改善，2d移植组明显优于其他组（P〈0．01）；2d移植组Brdu阳性细胞数明显高于其它组（P〈0．05）。结论神经干细胞移植治疗脑出血能有效改善脑出血动物运动功能；脑出血后2d可能是神经干细胞移植的最佳时间点。     

作者声明

正发表在我刊2016年第8期第788页《骨髓间充质干细胞移植对大鼠脑缺血损伤和IL-10、TGF-β1表达的影响》一文由湖南省自然科学基金项目(11A106)资助,特此更正。     

骨髓间充质干细胞移植对老年痴呆大鼠的防治作用

目的观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对老年痴呆大鼠的预防治疗作用。方法无菌取Wistar乳鼠骨髓间充质干细胞,培养3代时备用。实验分为正常对照组、模型组、PBS输入组、BMSCs移植组,β-淀粉样蛋白多肽制备动物模型,BMSCs移植组在制备模型前1d静脉回输BMSCs,制备模型8 w后取海马组织,RT-PCR方法检测脑源性神经生长因子(BDNF)的表达,ELISA检测神经生长因子(NGF)的含量。结果 BMSCs经3次传代后,细胞呈单一的长梭形生长。RT-PCR方法检测BDNF的表达,BMSCs移植组的BDNF表达明显高于模型组(P<0.05),接近于正常对照组(P>0.05)。ELISA检测NGF的含量,BMSCs移植组的NGF表达明显高于模型组(P<0.05),略高于正常对照组(P>0.05)。结论 BMSCs移植可防治大鼠老年痴呆。     

人脐带间充质干细胞移植对小型猪急性心肌梗死模型心肌细胞再生的影响

目的观察人脐带间充质干细胞移植治疗心肌梗死的可行性及机制,探讨经心外膜多点注射对小型猪急性心肌梗死模型心肌细胞再生的影响。方法无菌条件下采集足月儿的脐带,体外分离、培养、扩增人脐带间充质干细胞至第5代并以CM-Dil标记。取小型猪18例制作急性心肌梗死模型,并随机分为对照组、PBS组和移植组,每组6只。PBS组和移植组分别在梗死区注射PBS和脐带间充质干细胞。干预6周后行核素心肌灌注显像,观察梗死区灌注情况;通过免疫荧光法、Masson和TUNEL染色法观察梗死心肌中干细胞存活、增殖、分化情况和心肌纤维化、心肌细胞凋亡情况。结果与对照组及PBS组相比,移植组心肌灌注情况明显改善(P<0.01);移植后6周梗死区域可见移植的干细胞存活,其中部分向心肌和血管内皮细胞分化,亦可见固有心肌干细胞的募集与分化。TUNEL染色结果显示,移植组细胞凋亡明显减少(P<0.01)。Masson染色证实移植组的存活心肌明显增多而纤维组织明显减少(P<0.01)。结论人脐带间充质干细胞移植于心肌梗死区域后可部分存活并分化为心肌和血管组织,可促进固有心肌干细胞的募集和分化,减少细胞凋亡和组织纤维化,改善梗死区域的心肌存活情况,抑制心室重构,促进梗死心肌再生。     

舒安注射液对大鼠脑出血的救治作用的机制

目的　观察中药制剂舒安注射液 (SAI)对脑出血的救治作用及其对脑出血后脑内神经生长因子 (NGF)和白细胞介素 - 1β(IL - 1β)表达的影响。方法　采用大鼠自体股动脉血微量注射入内囊造成脑出血模型 ,SAI给药治疗 7d,记录脑出血模型大鼠的神经病学评分 ;通过 Northern杂交与 ELISA方法检测出血后脑内 NGF与 IL - 1βm RNA及其蛋白的表达与含量。结果　 SAI治疗后 ,大鼠神经病学评分明显低于治疗前及生理盐水组 ;大鼠脑组织含水量 ,Na 含量及脑指数均显著低于生理盐水对照组。大鼠脑出血后第 1天 NGF与 IL - 1β m RNA表达增加 ,第 2天 NGF、IL - 1βm RNA下降至正常组水平 ,第 4天 ,7天低于正常组水平 ;IL - 1β m RNA下降缓慢 ,至第 7天始降至正常组水平。 NGF和 IL - 1β蛋白含量在出血后第 1天显著增高 ,至第 7天仍高于正常水平。 SAI治疗组 NGF m RNA与蛋白含量变化同模型组 ,IL - 1β m RNA和蛋白在出血后各时间点均低于模型组。结论　 SAI可明显促进脑出血大鼠的神经功能的恢复 ,其作用机制可能与抑制 IL- 1β表达和上调 NGF表达有关。     

骨髓间充质干细胞移植调节TNF-α和IL-10浓度减轻十八稀酸诱导的大鼠急性肺损伤

目的:探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对十八稀酸诱导大鼠急性肺损伤(ALI)的影响。方法:颈静脉内注射十八稀酸(10μL/kg)建立大鼠ALI模型,实验组给于大鼠骨髓间充质干细胞悬浊液,对照组给于同等剂量磷酸缓冲(PBS)溶液。在不同时间点(8 h,24 h和48 h)处死大鼠,评价肺病理学特点、肺组织和血浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-10(IL-10)的浓度。结果:MSCs移植在不同时间点上均能显著性降低肺组织内中性粒细胞浸润,抑制肺组织和血浆内TNF-α浓度,同时升高IL-10浓度。结论:骨髓间充质干细胞移植,显著降低肺组织和血浆中TNF-α浓度时升高IL-10浓度,减低十八稀酸所致大鼠肺损伤,其可成为ALI和急性呼吸窘迫综合征(ARDS)一种潜在的细胞治疗方法。     

荷负电气溶胶对大鼠烧伤创面表皮干细胞的影响

目的分析大鼠烧伤创面采用荷负电气溶胶对表皮干细胞的影响并分析作用机制。方法选取清洁级健康大鼠,在背部侧分别做烧伤创面,随机分为实验组和对照组,实验组采取荷负电气溶胶治疗,对照组大鼠不做任何治疗,分析两组大鼠创面愈合过程,通过免疫组织化学染色法分析干细胞含量,并分析表皮生长因子(EGF)、β1整合素表达变化。结果烧伤24 h后取创面组织染色观察为深Ⅱ度病理改变,第2天基底层细胞增殖,5 d表皮细胞增殖,排列紧密。对照大鼠第3天局部增殖,第7天增殖明显,分布稀疏。经过治疗,相同时间实验组组织切片内阳性单位含量显著大于对照组(P<0.05)。实验组平均愈合时间[(7.1±1.2)d]显著短于对照组[(9.5±1.2)d]。实验组大鼠在伤后EGF和β1整合素该表达;在伤后第3天表达明显增高,第7天仍然维持较高表达,对照组大鼠EGF和β1整合素在伤后第3天有所表达,第7天表达高峰,两组大鼠EGF和β1整合素随着治疗时间不同存在显著差异(P<0.05)。结论大鼠烧伤创面实施荷负电气溶胶治疗能够促进表皮干细胞的增殖,其机制可能与EGF、β1整合素表达上升有关。     

磁标记大鼠间充质干细胞肝脏移植的磁共振成像活体示踪

目的探讨1.5 T MRI活体示踪磁标记干细胞经门静脉肝脏移植的可行性。方法大鼠间充质干细胞以菲立磁和DAPI标记后,经门静脉注入大鼠肝脏,分别于移植前及移植后1 h、3 d、7 d和14 d行MRI扫描,并与组织荧光显像和铁染色对照。结果移植后1 h、3 d、7 d及14 d肝脏信噪比分别为1.10±0.26、8.18±1.55、11.08±1.30、14.15±1.02,7 d以内肝脏信噪比与移植前比较均有明显降低(P<0.05)。各时相肝组织铁染色与荧光显像的空间分布一致。结论1.5 T MRI活体示踪经门静脉移植的磁标记干细胞是可行的,MRI示踪时间可持续7 d。     

异基因骨髓间充质干细胞移植对类风湿关节炎大鼠血清IL-1、TNF-α、TGF-β1表达的影响

目的探讨异基因骨髓间充质干细胞（BM-MSCs）移植对类风湿关节炎（RA）动物模型（CIA大鼠）血清中白细胞介素-1（IL-1）、肿瘤坏死因子（TNF-α）和转化生长因子（TGF-β1）表达的影响。方法分别选取5只Wistar幼年大鼠和20只Wistar成年雌性大鼠。5只Wistar幼年大鼠用以提取BM-MSCs,20只Wistar成年雌性大鼠经CIA造模成功后随机分为BM-MSCs移植A组和空白对照B组。BM-MSCs分离、传代培养后,通过CIA大鼠尾静脉注射移植于A组动物,BM-MSC移植数目为1.0×107/kg（受者体重）。于移植4周后用ELISA方法分别检测2组动物血清中IL-1、TNF-α和TGF-β1的含量。结果经BM-MSCs移植治疗4周后,BM-MSCs移植组血清中IL-1和TNF-α的浓度明显低于空白对照组,与空白对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。同时血清TGF-β1的浓度明显高于空白对照组,与空白对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论异基因BM-MSCs移植可以影响CIA大鼠血清中IL-1、TNF-α和TGF-β1的表达,对类风湿关节炎的免疫紊乱有调节作用,有可能用于RA的治疗。