基于重组优势多表位抗原的梅毒间接酶联免疫吸附试验与梅毒螺旋体血凝试验和甲苯胺红不加热血清试验检测梅毒螺旋体抗体的比较研究

目的：建立操作简便、特异性好、敏感性高的血清梅毒抗体的间接酶联免疫吸附试验（ELISA）。方法：通过计算机分析选择梅毒螺旋体优势抗原表位，构建了梅毒螺旋体多表位优势嵌合抗原(rTpN15-TpN17-TpN42-TpN47)表达载体，转化宿主菌HB101进行表达，纯化获得高纯度融合抗原。在此基础上，以纯化抗原包被酶联板，建立检测血清中梅毒抗体的间接ELISA法。利用该方法与梅毒螺旋体血凝试验（TPHA）和甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）同时检测了126例梅毒可疑血清样本，对检测结果进行了比较研究。结果：梅毒螺旋体多表位优势嵌合抗原（rTpN15-TpN17-TpN42-TpN47)在大肠杆菌中获得了高效表达，并成功建立了检测血清中梅毒抗体的间接ELISA法及试剂。对126例梅毒可疑血清样本的检测结果，ELISA、TRUST、TPHA的检出阳性率分别为75．40％（95／126）、72．22％（91／126）、70．63％（89／126）， 其中TRUST有29例，TPHA有6例为可疑阳性。TPHA检测的6例可疑阳性中，有5例ELISA、TURST均为阳性；而TRUST测出的29例可疑样品中，仅7例ELISA、TPHA阳性。结论：多表位嵌合抗原ELISA试剂在特异性、敏感性与TPHA法相近，但明显优于TRUST法。     

重组布氏杆菌BP26蛋白和OMP31蛋白作为间接ELISA诊断抗原的研究

目的 传统布氏杆菌病血清学方法因其抗原构成复杂，存在较严重的交叉免疫反应性，导致结果判定困难。BP26及OMP31分别为布氏杆菌细胞周质蛋白及外膜蛋白，在感染牛、绵羊、山羊、犬和人类均为优势免疫原，且在抗原性上具有较好的布氏杆菌种属特异性。方法 以大肠杆菌表达、纯化的BP26和OMP31重组蛋白为包被抗原，初步建立了检测血清特异抗体的间接ELISA方法，并以现地牛布氏杆菌普查检测血清100份为样本，与传统的试管凝集试验进行了比较研究。结果 试管凝集试验血清样本阳性率为15％（15／100）；BP26包被抗原ELISA检测判为阳性的12个样本中有11为试管凝集反应阳性，相对阳性率为73．3％，二者阳性符合率为92％（11／12）；而采用OMP31为包被抗原，阳性检出率为0（图5）。结论 被检测区域阳性牛主要感染布氏杆菌为牛种布氏杆菌（B．abortus天然缺失0MP31基因）；BP26作为间接ELISA包被抗原用于牛布氏杆菌血清学检测具有良好的特异性及较好的敏感性。     

综合医院HIV抗体筛查阳性样本的分析

目的分析综合医院艾滋病病毒（HIV）抗体筛查阳性样本的特征。方法分别用中山、梅里埃、丽珠三种酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂和雅培硒标试剂筛查HIV抗体,筛查阳性样本用蛋白印迹法（WB）进行确认。分析确认阳性、不确定、阴性三组样本的特征。结果2004年1月至2009年3月共检测HIV抗体192636例,其中阳性样本349例。确认阳性组174例,流行率0．090％;2006—2008年显著高于2004—2005年（Χ^2=11．35,P=0．001）,以21～50岁的青壮年男性居多。ELISA试剂均为阳性,S／CO值为（12．89±3．14）;雅培试剂均为阳性;WB结果显示,91．38％HIV感染者呈现7条带以上。阳性一不确定组20例,ELISA试剂均为阳性,S／CO值为（4．90±3．40）;雅培试剂7例阳性;呈现p24带者18例（90．00％）,gp160带7例（35．00％）,gp120、p17带各1例（各5．00％）,其余带未呈现。1例随访后转阳性,3例随访转阴性。阳性阴性组155例,心脏病人所占比例最高（26．45％）。ELISA试剂均为阳性,S／CO值为（2．63±2．54）;雅培试剂15例阳性。结论HIV感染人数逐年增加;筛查阳性样本中存在一定的不确定、假阳性结果,应按规定程序进行确认。     

包虫病血清学检测阳性与B超探查肝脏包囊携带综合分析

本文报告新疆阿勒泰市红墩乡，切尔克齐乡及吉木乃县包虫病流行学调查的结果。人群中包虫病的感染率为１７．３６％（９１６／５２７５），间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）和间接血凝试验（ＩＨＡ）检测两项及一项阳性。（两项阳性者必须做Ｂ超，一项阳性可自愿）与Ｂ超检查阳性２．４６％（１７／６９２）；其ＥＬＩＳＡ，ＩＨＡ血清学方法检测结果反居民包虫病的感染水平，而应用Ｂ超腹部扫查和Ｘ线胸透视的结果反映居民包虫病     

广州地区部分人群庚型肝炎病毒感染的流行病学调查

目的 为了解广州地区庚型肝炎病毒（HGV）感染的现状和流行特点，我们对348例住院和门诊的肝病患者进行了HGV RNA、HGV抗体（HGV－Ab)检测，现将结果报道如下。材料和方法，从广东省人民医院门诊和住院肝病患者收集血清标本348份，其中丙型肝炎93份，乙型肝炎120份，肝硬化75份，肝细胞癌60份。采用逆转录套式PCR检测HGV RNA。引物序列为：HGV1（F外）5′-CGCTCAAGCCAGCGAAGTAAGCA－3′，HGV2(R外）5′－CAATACCTCTCACCGACGGG－3′，HGV3（F内）5′－GGACTTCCGGATAGCTGAAAGCT－3′，HGV4（R内）5′－GCGTCCACACAGATGGCGA－3′。两次PCR循环条件相同，均为：94℃ 1min、55℃ 1min、72℃ 1min，35个循环。产物进行琼脂糖凝胶电泳，紫外灯下观察结果。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测HGV－Ab。诊断试剂为北京大学医学院产品。结果 348份标本中，HGV RNA阳性检出率为8．62％（30／348）。其中丙肝标本检出率为6．45％（6／93），乙肝标本检出率为7．50％（9／120），肝硬化标本检出率为8．00％（6／75），肝细胞癌标本检出率为15．00％（9／60）。HGV－Ab阳性检出率为12．93％（45／348）。其中丙肝标本检出率为12．90％（12／93），乙肝标本检出率为10．00％（12／120），肝硬化标本检出率为8．00％（6／75），肝细胞癌标本检出率为25．00％（15／60）。30份HGV RNA阳性标本中HGV－Ab均为阳性。结论 HGV在广州地区多种肝病人群中的感染状况较普遍，与其它肝病重叠感染的情况较严重。应得到足够重视。℃℃℃     

基于核酸扩增方法估计MSM的HIV新发感染的研究

目的采用核酸扩增方法（NAAT）,估计男男性行为人群（MSM）急性艾滋病病毒（HIV）感染（AHI）的新发感染情况。方法采集MSM抗凝和非抗凝全血各10mL,非抗凝血分离血清检测HIV抗体。HIV抗体阴性的MSM抗凝全血分离血浆,进行HIV1核糖核酸（RNA）混合NAAT检测。NAAT检测阳性样本计算新发感染。结果800名调查对象中,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测HIV抗体阳性64人,经蛋白印迹试验（wB）检测均确定为HIV1感染,阳性检出率8．00％E95％可信区间（CI）：6．04-9．96）。ELISA检测HIv抗体阴性的736人,经过HIV-1RANNAAT检测,检出5例阳性。依据公式计算,AHI检出率为0．68％（5／736）。每年新发感染率为8．86％（95％CI：1．07～16．65）。结论NAAT是能有效检测出HIV新发感染的方法,可以减少血清学试验的漏检,对防控艾滋病的扩散具有一定的临床意义。     

蛋白芯片技术对自身免疫性抗体的检测及评价

目的 探讨蛋白芯片技术检测自身抗体的临床价值。方法 用酶联免疫吸附试验（ELISA）、蛋白芯片法检测抗dsDNA、抗Ro-60／SSA、抗Ro-52／SSA、抗SSB、抗Jo-1、抗磷脂IgG抗体．用间接免疫荧光法（IIF）、蛋白芯片法检测抗核抗体（ANA），分别统计两种方法检测均阳性、均阴性和单阳性的标本数目．并进行评价。结果 芯片法检测ANA的灵敏度为89％、特异度为60％．芯片法对其他6种自身抗体检测的灵敏度为70．0%～87．5%、特异度为92．7％～98．9％。结论 蛋白芯片法检测自身抗体与常规方法比较，特异度较高，有待进一步改善技术提高其灵敏度。     

免疫诊断技术用于姜片虫病流行病学调查的研究：Ⅲ.间接血凝…

本研究以姜片虫成虫纯化抗原致敏经醛化和鞣化的人“Ｏ”型血红细胞采，用间接血凝试验检测了６９份姜片虫感染者血清和６０份正常人血清，若以抗体高度≥１：１０者为阳性，则两者的阳性率分别为８１．２％和６．７％；此外还检测了日本血吸虫、肺吸虫、华支睾吸虫和长膜壳绦虫感染者血清，其交反应率分别为１０．０％（４／４０）、１２．５％（１／８）、０（０／８）和０（０／４）。结果表明，该法具有较好的敏感性的特异性。     

单克隆抗体鉴别日本血吸虫感染性钉螺的初步研究

在筛选McAb与受检钉螺样本的基础上，建立了McAb－ELISA，鉴别钉螺体内日本血吸虫抗原。每只受检钉螺．事先镜检作为对照，感染血吸虫钉螺36只，血吸虫抗原阳性检出率97.22％（35／36）。合并感染其他寄生生钉螺7只，其阳性检出率为100％（7／7）。感染其他寄生虫钉螺8只，无感染钉螺22只，血吸虫抗原阴性符合率均为100％。以上结果表明，McAb－ELISA与镜检法所得的结果是一致的，这为现场检测钉螺感染血吸虫与否将提供一种简便、有效的方法。     

ELISA、胶体硒和免疫试鸭验检测HIV抗体结果分析

目的 复检和确认初筛HIV抗体阳性血清，并对比分析试验结果。方法 对初筛阳性血清，用胶体硒和ELISA试验复检，任一复检试验阳性的血清再用westernblot（WB）试验确认。结果 224份初筛阳性血清经复检84份阳性，WB确认61份HIV—1抗体阳性，不确定10份，阴性13份。以WB结果为标准，ELISA、胶体硒法的阳性符合率分别为84．72％和82．43％。ELISA的敏感性为100％，特异性为96．84％，胶体硒法的敏感性为100％，特异性为95．03％。阳性、不确定和阴性组血清EI，ISA平均S／CO分别为20．550，2．244和1．434。ELISA和胶体硒法复检同时阳性，在阳性组、不确定组、阴性组分别为100％（61／61），10％（1／10）和0（0／13）。结论 胶体硒和ELISA复检可排除大部分初筛假阳性，但两种复检试验均存在一定的假阳性。3种试验的不符情况仅出现在HIV抗体阴性和不确定组，确定HIV感染依赖于WB确认试验。     

免疫诊断技术用于姜片虫病流行病学调查的研究 Ⅲ.间接血凝试验检测姜片虫感染的初步研究

本研究以姜片虫成虫纯化抗原（ＰＡＡ）（蛋白含量为１０μｇ／ｍｌ）致敏经醛化和鞣化的人“Ｏ”型血红细胞，采用间接血凝试验（ＩＨＡ）检测了６９份姜片虫感染者血清和６０份正常人血清，若以抗体滴度≥１：１０者为阳性，则两者的阳性率分别为８１．２％和６．７％（Ｐ＜０．００５）；此外，还检测了日本血吸虫、肺吸虫、华支睾吸虫和长膜壳综虫感染者血清，其交叉反应率分别为１０．０％（４／４０）、１２．５％（１／８）、０（０／８）和０（０／４）。结果表明，该法具有较好的敏感性和特异性。     

IFAT检测登革热IgM抗体的初步探讨

目的探讨用间接免疫荧光试验（ＩＦＡＴ）检测登革热ＩｇＭ抗体。方法采集１９９５年７～１１月份广东省登革热Ⅰ型流行期间疑似患者发病１～７ｄ血清６２份,用ＩＦＡＴ检测登革热ＩｇＭ抗体。结果阳性率为２４．１９％（１５／６２）,发病４～５ｄ的阳性率最高为４０．００％以上。ＩｇＭ阳性滴度在１∶１０～１∶４０之间,多数为１∶１０（８／１５）。本法与乙脑血清有交叉反应,与其他非登革热血清无交叉反应。在发病５～６ｄ的患者中可同时检测出登革热的ＩｇＭ和ＩｇＧ抗体。结论发病１～３ｄ的血清可进行病毒分离,４～６ｄ的血清可检测ＩｇＭ抗体,如阴性则再检测ＩｇＧ,以提高登革热的检出率。     

日本血吸虫31/32kDa循环免疫复合物的检测及其在疾病诊断中的作用

检测血吸虫循环免疫复合物（CIC）有助于提高疾病的检出率。利用抗血吸虫单克隆抗体H226和碱性磷酸酶标记的羊抗人IgG（Fc）作捕捉ELISA，检测日本血吸虫病患者血清中CIC，其阳性检出率为92．2％，其中，EPG＜100的病人阳性检出率为90．0％，EPG＞100的病人阳性检出率为95．5％，两者无显著性差异。由于羊抗人IgGFc段能与CIC中人IgG的Fc段特异性结合，因此不仅省去了常规分离CIC的步骤，而且有助于提高试验的敏感性和特异性。     

血吸虫病快速诊断试剂盒的优化及其应用

目的 对血吸虫病胶体染料试纸条诊断试剂盒（DDIA Kit）的检测方法作进一步优化并对其应用价值进行评价。方法 采用专用仪器定量轩DDIA试纸条，以定量的抗原和染料进行标记。分别对20，10，5μl的血清样本进行检测，将各组的敏感性，特异性和交叉反应性进行比较。再以确定的最适血清样本量对一血吸虫病低度流行区的自然人群进行筛查并与粪检结果比较，评价其应用价值。结果 用20μl血清样本检测时，急性和慢性血吸虫病人的检出率均达到100％（24／24和48／48），健康人的假阳性率为8．0％（8／100），与肝吸虫病人和肺吸虫病人的交叉反应率分别为20．0％（4／2）和65．0％（13／20）；用10μl样本血清检测时，急性血吸虫病人检出率为100％（24／24），慢性血吸虫病人的检出率为97．9％（47／48），健康人的假阳性率为2．0％（2／100），与肝吸虫病人和肺吸虫病人的交叉反应率分别为10．0％（2／20）和50．0％（10／20），对低流行区的筛查结果表明，DDIA与18例粪检阳性者的阳性符合率为94．4％（17／18，与445例粪检阴性者的阴性符合率为87．4％（389／445）。结论 定量制备的DDIA试剂盒在检测血清量为10μl时有较高的敏感性和特异性，适用于低度流行区化疗对象的筛查。     

弓形虫感染家庭聚集性研究

目的 探讨弓形虫感染的家庭聚集性。方法 对487户临床病例家属计1436人的血清用间接血凝试验(IHA)及酶联免疫吸附试验(ELISA)作弓形虫感染检测并作小鼠实验。数据采用二项分布齐性检验的G统计学方法分析。结果 弓形虫抗体阳性237户，占总户数的48．7％，阳性342人，占总检查人数的23．8％。30只小白鼠唾液涂片中1只发现弓形虫滋养体；10例弓形虫病人唾液涂片中1例查见典型的弓形虫滋养体2只。结论 弓形虫感染有明显的家庭聚集性。     

人巨细胞病毒PP150的原核表达及其ELISA诊断方法的建立

采用基因工程方法组建含有人巨细胞病毒（HCMV）PP150蛋白强抗原决定簇基因的重组抗原克隆，进行诱导表达及纯化，在此基础上，以纯化重组PP150蛋白作为包被抗原，对各种条件进行优化，确定判定标准，建立检测HCMV IgM抗体的间接ELISA方法。用此方法检测266份血清样品，并与ELISA试剂盒检测结果相比较。结果重组表达质粒pMAL-P2-PP150可在E.coliDH5a中有效表达，表达产物经SDS-PAGE电泳后，凝胶成像系统分析显示相对分子质量约为64000，约占菌体蛋白的10％。Western blot检测，阳性识别率为80％（12／15）。用此蛋白包被ELISA板，检测正常孕妇血清，与ELISA试剂盒的诊断符合率为98．1％，敏感性达88．2％，特异性100％。应用本方法检测569份正常人血清样品HCMV-IgM，阳性率为4．1％。提示该重组蛋白具有良好的抗原性，可望替代HCMV感染检测中的全病毒ELISA试剂盒。     

检测两种猪源链球菌抗体间接ELISA方法的筛选与应用

目的建立检测马链球菌兽疫亚种（Streptococcus equi subsp zooepidemius，Sez）与猪链球菌2型（Streptococcus suis type2，Ss2）抗体的间接ELISA方法。方法选用Sez与Ss2的全菌（WAC）、超声波抗原（UA）、英膜多糖（capsular polysaccharide，CPS）作为抗原，筛选最优的检测两种抗体间接ELISA方法。结果3种抗原检测60份免疫后的血清表明，Sez与Ss2的CPS抗体阳性率分别为98．3％、96．7％，WAC为91．7％、85％，UA均为88．3％，前者与后两者差异显著（P〈0．05）。检测免疫前50份血清、免疫后156份血清、60份临床采集血样表明，10％猪免疫前呈现Sez与Ss2的CPS抗体阳性；免疫后CPS抗体阳性率均在90％以上，此结果与免疫保护率相一致；苏州与常州两个猪场的血清各30份，CPS抗体阳性率均在6．7％左右。结论CPS-ELISA方法具有较好的稳定性、特异性、灵敏性，此方法在诊断和流行病学调查方面有价值。     

384例性病门诊就诊者荧光梅毒螺旋体抗体吸附试验结果分析

目的对384例荧光梅毒螺旋体抗体吸附试验（FTA_ABs）检测结果进行分析,更好地为临床提供梅毒诊断的依据。方法对2012年确诊梅毒并经FTA—ABS检测为阳性的384例患者的血清,同时用梅毒螺旋体明胶颗粒凝集法（TPPA）和酶联免疫吸附试验（ELISA）进行复核检测,并对其中的40例患者进行脑脊液FTAABS检测。结果384例FTAABS检测确诊的阳性病例中,梅毒抗体IgG、IgM同时阳性的59例（占15．4％）,抗体IgG阳性IgM阴性的325例（占84．6％）。40例脑脊液中抗体IgG阳性的12例,未见抗体IgM阳性。梅毒合并感染HIV的患者有29例（占7．6％）,其中RPR滴度〉1：8有21例（72．4％）。单纯梅毒感染的355例（92．4％）,其中RPR滴度〉1：8有97例（27．3%）。结论FTAABS试验敏感性和特异性高,值得在临床中推广。     

卵黄抗体IgY检测血吸虫病人循环抗原的初步研究

目的 探讨抗可溶性虫卵抗原（SEA）卵黄抗体（IgY）检测血吸虫循环抗原的应用价值。方法以纯化的鸡IgY作为捕捉抗体,以酶标抗SEA单克隆抗体NP28-5B为检测抗体的双抗体夹心酶联免疫吸附试验法（S-ELISA）检测急、慢性血吸虫病人和健康人血清,并与常规检测抗体的酶联免疫吸附试验法（SEA-ELISA）作比较。结果S-ELISA测得SEA浓度（y）与吸光度（A450）值（x）呈明显的正相关（y=459．22x-108．14,r=0．9481）。急性血吸虫病人循环抗原的阳性率为100．00％（9／9）,慢性血吸虫病人循环抗原的阳性率为84．44％（38／45）,健康人的特异性为96．00％（48／50）。两种方法对血吸虫病的检出率差异无统计学意义（P〉0．05）。结论S-ELISA具有较好的敏感性和特异性,可用于血吸虫病免疫诊断。     

云南省新平县疟疾抗体水平调查

目的了解新平县疟疾流行强度，评价防治效果。方法采用间接荧光抗体试验（IFAT）、居民带虫镜检、疟疾相关知识问卷调查。结果共检测1810例，查出≥1：20抗体阳性272例，抗体阳性率为15．03％，阳性GMRT为24．15；血检查出间日疟1例，原虫阳性率为0．06％；居民疟疾知晓率为74．48％，蚊帐使用率为97．02％。3个高疟乡（镇）抗体阳性率分别为20．07％、14．12％和10．83％；阳性GMRT分别为25．82、23．35和22．23。结论疟疾流行已得到有效控制，但传播尚未阻断，在今后的疾病防治工作中，疟疾仍然是新平县重点控制的传染病之一。