骨髓间充质干细胞移植对大鼠脑缺血损伤的治疗作用

分离和培养大鼠骨髓问充质干细胞（MSCs），并用线拴法制作大脑中动脉闭塞（MCAO）模型，将大鼠随机分为立体定向移植组、尾静脉移植组及模型组，其中移植组中又包括预诱导和未诱导MSCs。移植组在造模7天后分别经立体定向和尾静脉途径将MSCs植入MCAO大鼠脑内，比较MSCs不同移植时间的神经功能缺损（NSS）评分以及免疫组化染色的差异。结果移植后1d各组NSS评分无统计学差异；在2周及1、2、3个月时各移植组NSS评分均低于对照组；2、3个月时立体定向移植组的NSS评分低于尾静脉组；2个月时预诱导组NSS低于未诱导组；免疫组化结果显示立体定向组在梗死侧半球有大量Brdu阳性细胞，尾静脉组双侧半球均可见少量Brdu阳性细胞。移植后1个月可见MSCs分化为Brdu＋NSE、Brdu＋GFAP免疫组化双阳性细胞。认为MSCs可以在体外分离、培养和传代，以立体定向和尾静脉两种途径移植的MSCs可在宿主脑内存活和分化，并改善神经功能；立体定向途径移植效果优于尾静脉途径。     

神经干细胞移植治疗脑出血大鼠模型时间窗的研究

目的研究神经干细胞移植治疗脑出血的时间窗。方法分离、培养大鼠海马神经干细胞，经Nestin免疫荧光鉴定，Brdu标记；25只SD大鼠制作脑出血模型，随机分为5组（1、2、3、4d移植组、模型组），分别在造模后第1、2、3、4d移植Brdu标记的神经干细胞于脑出血大鼠的患侧侧腔室下区（SVZ），模型组不移植，测试大鼠运动功能，14d时处死，取全脑固定、冰冻切片、Brdu免疫荧光染色，Brdu阳性细胞计数。结果各移植组大鼠神经功能缺损明显改善，2d移植组明显优于其他组（P〈0．01）；2d移植组Brdu阳性细胞数明显高于其它组（P〈0．05）。结论神经干细胞移植治疗脑出血能有效改善脑出血动物运动功能；脑出血后2d可能是神经干细胞移植的最佳时间点。     

功能化纳米支架承载干细胞移植治疗大鼠心肌梗死的研究

目的:探讨功能化纳米纤维支架（NFS）承载骨髓源性心肌干细胞（MCSCs）移植对大鼠心肌梗死（MI）后心功能恢复的影响,寻找一种更适合承载MCSCs治疗MI的可注射性生物材料。方法:通过单细胞克隆培养技术,从骨髓间充质干细胞中筛选具有心肌特异分化潜能的MCSCs,并固相合成自聚多肽。将24只雌性大鼠MI模型随机分为3组,即对照组、MCSCs移植组和支架承载MCSCs移植组,每组8只。细胞移植后4周,用M型超声心动图检测心功能恢复的情况。将心脏组织切片并进行Masson染色,利用图像分析检测胶原纤维的比率。采用原位荧光杂交法标记心肌组织中的Y染色体细胞,并检测心肌肌钙蛋白T（cTnT）的表达。结果:与MCSCs移植组相比,支架承载细胞移植组大鼠的心功能指数明显提高,胶原纤维比率明显减小,Y染色体阳性细胞数明显增多（P＜0.05）。结论:支架承载MCSCs移植治疗MI,有利于移植细胞在受损心肌内的存活和向功能性心肌细胞分化,并可促进心功能恢复,其疗效优于单纯干细胞移植。     

同种异体移植骨髓间充质干细胞治疗大鼠心肌梗死

目的　探讨同种异体骨髓间充质干细胞 (MSCs)在梗死大鼠心脏局部存活、迁移、分化及对心功能的影响 ;明确同种异体细胞移植治疗心肌梗死 (MI)的可行性及效果。方法　雌性Wistar大鼠 3 5只 ,随机分为正常对照组、急性心肌梗死 (AMI)组及MI MSCs治疗组。分离纯化雄性Wistar大鼠骨髓MSCs ,于左冠状动脉前降支结扎后 1～ 3h植入到雌性大鼠心脏组织 ,移植后 10周检测心功能并取心脏检测各种相关指标。结果　异体大鼠MSCs经纯化后可在梗死心脏组织定居、生存 ,并与宿主心肌纤维排列方向一致 ,免疫组化检测胞质心肌特异蛋白染色阳性 ,与MI组比较 ,异体细胞移植组左室收缩压升高 (P <0 0 5) ,舒张末压明显降低 (P <0 0 1)、左心室内压最大上升和下降速率显著增快 (P <0 0 5) ,梗死边缘区心肌面毛细血管数目明显增加 (P <0 0 5) ,多功能真彩色病理图像分析系统显示MI面积缩小 (P <0 0 5)。结论　同种异体MSCs移植治疗MI可行、有效     

激活Notch信号的骨髓间充质干细胞移植对心肌梗死模型鼠炎性因子与心功能的影响

目的探讨激活Notch信号的骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对心肌梗死(MI)模型鼠炎性因子与心功能的影响。方法 66只Wistar大鼠通过结扎冠状动脉前降支(LAD)制作MI模型,其中60只建模成功,2 w后再将其随机分为激活Noth信号的MSCs移植组、MSCs移植组、培养液移植组及MI模型组,即E、D、C、B组,每组各15只,分别采取相应的处理。另选取10只Wistar大鼠作为对照组(A组),给予假手术处理。移植后4 w,所有大鼠均行超声心动图检查及心脏组织免疫组织化学染色,测量大鼠各项心功能指标及炎性细胞因子表达情况,并进行比较。结果移植4 w后,B、C、D、E组大鼠的LVEF、LVFs较A组降低,LVDd、LVDs较A组增高;而E组大鼠的LVEF、LVFs则较B、C、D组增加,LVDd、LVDs较B、C、D组降低(P0.05)。B、C、D、E组大鼠的IL-1β、IL-6、TNF-α表达水平均较A组明显增加,而E组大鼠的IL-1β、IL-6、TNF-α表达水平较B、C、D组明显降低(P0.05)。结论 MSCs移植既能改善MI大鼠的心功能,又能使炎性因子表达水平明显下调,尤以激活Notch信号的MSCs移植效果更佳,表明Notch信号激活可促进MSCs移植作用。     

同种异体骨髓间充质干细胞移植对扩张型心肌病心功能衰竭大鼠左心室功能的影响

目的探讨同种异体大鼠骨髓间充质干细胞移植在阿霉素诱导的扩张型心肌病心功能衰竭大鼠心脏内存活、分化的情况及对左心室功能的影响。方法雌性Wistar大鼠55只,随机分成正常对照组(n=10)、模型组(n=15)、诱导前移植组(n=15)和诱导后移植组(n=15)。体外分离培养雄性大鼠骨髓间充质干细胞,传至一代后用10μmol/L5-氮胞苷诱导4周,DAPI标记后,诱导前移植组移植诱导前的骨髓间充质干细胞,诱导后移植组移植诱导后的骨髓间充质干细胞;4周后检测左心室功能及移植细胞存活、分化情况。结果异体骨髓间充质干细胞移植4周后可存活并分化成心肌细胞,表达心肌细胞特异性蛋白;与模型组比较,细胞移植组左心室功能明显改善,且两细胞移植组间差异无显著性。结论同种异体骨髓间充质干细胞移植4周后可存活并分化成心肌细胞,对扩张型心肌病心功能衰竭大鼠的左心室功能有保护作用。     

二氮嗪预处理骨髓源性心肌干细胞移植治疗心肌梗死的实验研究

目的 探讨二氮嗪预处理骨髓源性心肌干细胞(MCSCs)移植治疗心肌梗死的机制及效果.方法 通过单细胞克隆培养技术,从雄性幼鼠骨髓间充质干细胞中筛选具有心肌特异分化潜能的MCSCs;将雌性大鼠心肌梗死模型随机分为对照组、MCSCs移植组、二氮嗪预处理MCSCs移植组;细胞移植后4 周,用M型超声心动图检测心功能恢复情况,心脏组织切片进行Masson染色,利用图像分析检测胶原纤维比率,用原位荧光杂交法标记心肌组织中Y染色体细胞,并检测其cTnT的表达.结果 二氮嗪预处理细胞移植组与MCSCs移植组相比,大鼠的心功能指数明显提高,胶原纤维比率明显减小,Y染色体阳性细胞数明显增多,差异均有统计学意义.结论 二氮嗪预处理MCSCs移植治疗心肌梗死,有利于移植细胞在受损心肌内的存活,并促进心功能恢复,其疗效优于单纯干细胞移植.     

异体骨髓基质干细胞移植治疗慢性心力衰竭大鼠的疗效

目的分离、培养、诱导大鼠骨髓基质干细胞(MSCs),并将其移植入慢性心力衰竭(CHF)大鼠并检测其治疗效果,探讨异体MSCs修复CHF受损心肌的能力。方法注射法分离幼龄大鼠胫骨中的MSCs并使用5-氮胞苷对其进行诱导分化。使用阿霉素鼠尾静脉注射法制备大鼠CHF模型,将大鼠分为4组,分别为正常非移植组10只,正常移植组10只,CHF非移植组20只,CHF移植组20只。将诱导分化的MSCs手术注射入左心室部位,对照组植入等量培养液。术后4 w进行超声检测及血流动力学分析,然后取心脏行免疫组织化学分析。结果 5-氮胞苷诱导后MSCs可分化为心肌样细胞。将其移植入CHF大鼠后,超声及血流动力学结果显示,与CHF非移植组比较,移植干细胞组左室收缩末压、左室射血分数和左室压力变化速率最大值均显著升高(P<0.05,P<0.01),左室舒张末压显著降低(P<0.05);术后4 wCHF移植组可以检测到Brdu标记阳性细胞。结论 CHF后移植MSCs可改善心功能,提高左室射血分数,为慢性心衰的治疗开辟了新的治疗途径。     

静脉移植骨髓间充质干细胞对心衰大鼠心肌细胞cx-43表达的影响

目的探讨骨髓间充质干细胞移植对阿霉素诱导的心衰大鼠模型心功能及细胞缝隙连接蛋白-43(cx-43)的影响。方法选取雌性Wistar大鼠(n=38),先随机选取8只作为正常对照组,其余30只通过腹腔注射阿霉素(2.5mg/kg,每周1次,连续6周)建立心衰模型。6周后存活大鼠(n=21)再随机分为细胞移植组(n=11)和移植对照组(n=10)。正常对照组大鼠腹腔注射等量的生理盐水。进行体外分离,纯化,增殖骨髓间充质干细胞(MSCs)并用含有12%胎牛血清的DMEM培养基培养,采用流式细胞仪对体外培养的MSCs表型CD44进行鉴定。取第三代MSCs进行移植,移植前用5-溴-2’脱氧尿苷(BrdU)进行标记。末次阿霉素注射后1周,将5×106个MSCs通过鼠尾静脉注射的方法移植到心衰细胞移植组大鼠。移植对照组大鼠注射等量培养基。细胞移植后4周,采用超声测量心功能及心室重塑,心脏切片行病理免疫组织化学了解移植细胞在受体心脏的存活及cx-43表达情况。结果体外培养的第三代MSCs流式细胞仪鉴定结果显示:CD44阳性细胞数占(99.7±0.9)%,心衰细胞移植组心肌组织中可以见5-溴-2’脱氧尿苷标记的骨髓间充质干细胞(MSCs)归巢并表达cx-43阳性;左室射血分数细胞移植心衰组、对照组与正常对照组分别为(89.36±3.74)%、(72.93±3.08)%和(97.54±2.30)%(P<0.05),心衰细胞移植相对于心衰对照组左室心功能有统计学意义(P<0.05)。结论经静脉移植骨髓间充质干细胞可以归巢心衰大鼠心肌组织而且改善心功能并影响受体心肌组织细胞表达cx-43。     

经静脉途径移植骨髓间充质干细胞修复梗死心肌的可行性与安全性研究

目的探讨经静脉注射移植同种异体骨髓来源间充质干细胞(MSC)修复损伤心肌是否可行和安全,观察移植MSC在宿主的归巢与组织学分布。方法雄性Wistar大鼠30只,分为正常大鼠MSC移植组,急性心肌梗死MSC移植组,假手术组,每组10只。结扎冠状动脉左前降支,建立大鼠急性心肌梗死模型。体外分离纯化、扩增同种大鼠骨髓MSC,于建立心肌梗死模型24h给各组大鼠经静脉输注4’6’二乙酰基2苯基吲哚(DAPI)标记的MSC,4周后处死、摘取心脏等脏器,行组织病理切片和免疫组织化学染色。结果(1)在急性心肌梗死MSC移植组,梗死区及其周边部位可见到DAPI标记的MSC;(2)在梗死心肌周边区,移植的MSC胞浆心肌特异性蛋白肌钙蛋白I和转录因子4免疫组织化学染色阳性;(3)在各组大鼠其他脏器,移植的MSC主要分布在肺脏、脾脏和肝脏;(4)细胞移植大鼠心肌组织切片未见淋巴细胞增殖,各脏器没有肿瘤形成。结论经静脉移植的MSC可归巢至大鼠梗死心肌部位,并分化为心肌细胞表型,该方法治疗缺血性心脏病安全、可行。