糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡与Bax和Bcl-2基因表达

目的　观察糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡、Bax和 Bcl- 2表达及二者的相关性。　方法　单侧肾切除大鼠腹腔注射链脲佐菌素诱发糖尿病 ,采用原位末端标记法检测肾脏细胞凋亡 ;流式细胞术和免疫组化检测肾皮质 Bax和 Bcl- 2表达水平 ;原位杂交检测 Bax和 Bcl- 2 m RNA表达 ,并观察尿蛋白、BU N、尿肌酐等反映肾功能的有关指标。　结果　在制模后 2、4、8、12周时 ,糖尿病组大鼠较对照组肾小球、肾小管凋亡细胞数明显增多 ,Bax、Bcl- 2蛋白和 m RNA的表达显著增强 (P<0 .0 5 )。随着大鼠糖尿病病程延长 ,肾功能恶化 ,肾脏凋亡细胞数逐渐增多 ,Bax表达亦逐渐增强 ,Bax/Bcl- 2比增加 ,且肾脏凋亡细胞数与 Bax及 Bax/Bcl- 2比具有相关性 (P<0 .0 5 )。　结论　肾脏凋亡细胞的不断增加可能是糖尿病肾病发生、发展的原因之一 ,Bax和 Bcl- 2可能参与肾脏细胞凋亡的调控。     

二黄糖肾康对糖尿病肾病模型大鼠肾脏细胞凋亡及Bax和Bcl-2表达的影响

目的观察二黄糖肾康对糖尿病肾病(DN)模型大鼠肾脏功能、细胞凋亡及Bax和Bcl-2表达的影响。方法SD大鼠单侧肾切除加腹腔注射链脲佐菌素复制DN模型,每日灌胃二黄糖肾康,8w后检测肾功能,流式细胞术检测肾脏细胞周期、凋亡数目及Bax和Bcl-2蛋白表达。结果二黄糖肾康明显改善DN大鼠肾功能,减少肾脏皮质细胞凋亡数目,影响肾脏细胞周期,降低Bax的表达,Bcl-2的表达增加。结论二黄糖肾康能通过降低肾脏凋亡数目,调节Bax和Bcl-2在肾脏细胞凋亡中的表达而保护肾功能。     

氯沙坦对糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡及bax／bcl—2表达的影响

目的：探讨血管紧张素受体1拮抗剂（AT1Ra)对糖尿病肾脏细胞凋亡及凋亡相关基因的影响。方法：单侧肾切除大鼠腹腔注射STZ诱发糖尿病模型,每日灌胃给予AT1Ra氯沙坦（40mg/kg),共12周,采用原位末端标记法检测肾脏细胞凋亡情况,流式细胞术和免疫组化检测肾皮质Bax和Bcl-2表达,原位杂交检测bax和bcl-2 mRNA表达。结果：糖尿病组较对照组肾小球、肾小管凋亡细胞数明显增多,bax和bcl-2蛋白及mRNA表达增强,Bax/Bcl-2增高;氯沙坦治疗组较糖尿病组凋亡细胞数减少,bax表达减弱,bcl-2表达增强,Bax/Bcl-2降低。结论：氯沙坦可能通过影响凋亡相关基因bax和bcl-2表达而抑制肾脏细胞凋亡,从而发挥肾脏保护作用。     

小剂量阿司匹林对糖尿病大鼠肾脏保护作用研究

目的 研究小剂量阿司匹林对糖尿病大鼠肾脏的保护作用,并探讨可能的机制.方法 雄性SD大鼠,尾静脉注射链脲佐菌素30 mg/kg,造成1型糖尿病动物模型,随机分为糖尿病模型组和9mg/kg阿司匹林治疗组,每组8只,另选8只健康雄性大鼠为正常对照组.各组大鼠灌服给药12周后,检测各组大鼠空腹血糖、血尿素和肌酐,以及尿蛋白含量,HE染色法检查肾组织病理显微结构,免疫组织化学法检测分析Caspase-3、Bax和Bcl-2的表达情况.结果 与正常对照组比较,糖尿病模型组大鼠空腹血糖、血尿素和肌酐,以及尿蛋白含量均升高,肾小球萎缩明显,肾组织Caspase-3、Bax表达增强,肾组织Bcl-2的表达减弱,Bcl-2/Bax比值降低;阿司匹林治疗组大鼠上述指标均有改善.结论 小剂量阿司匹林对糖尿病大鼠肾脏有保护作用,可能与调节细胞凋亡相关蛋白表达有关.     

淫羊藿苷对高脂血症大鼠粘附分子基因表达的影响

目的研究淫羊藿苷对高脂血症大鼠粘附分子基因表达的影响。方法健康雄性SD大鼠40只,随机分为对照组、高脂饮食组、高脂饮食 低剂量淫羊藿苷组、高脂饮食 高剂量淫羊藿苷组,检测各组大鼠血清脂质水平及观察主动脉病理学改变。并采用荧光实时聚合酶链反应法比较主动脉壁细胞间粘附分子1和血管细胞粘附分子1基因的表达。结果与高脂饮食组比较,淫羊藿苷低剂量组和高剂量组总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇水平(P<0.05或0.01)降低,细胞间粘附分子1mRNA的表达显著减低(P<0.01),而血管细胞粘附分子1mRNA的表达没有显著改变(P>0.05)。结论淫羊藿苷能降低高脂血症大鼠血脂并抑制细胞间粘附分子1mRNA的表达。     

二黄糖肾康对糖尿病肾病大鼠肾脏细胞凋亡及PI3 K/AKT信号转导系统的影响

目的 观察二黄糖肾康对糖尿病肾病(DN)大鼠细胞凋亡及PI3 K/AKT信号转导系统的影响. 方法 SD大鼠单侧肾切除加腹腔注射链脲佐菌素(STZ)复制DN模型,每日二黄糖肾康灌胃,8 w后流式细胞术检测细胞凋亡数目及调控因子Bax、Bcl-2、Fas、Fas-L的蛋白表达,采用Western 印迹方法检测细胞内磷酸化Akt蛋白质的表达.结果 二黄糖肾康明显减少DN大鼠肾脏皮质细胞凋亡数目,降低Bax、Fas、Fas-L的的蛋白表达,增加Bcl-2的蛋白表达,激活PI3 K/AKT信号通路.结论 二黄糖肾康能有效降低肾脏细胞凋亡,激活PI3 K/AKT信号通路.     

黄芩苷对糖尿病大鼠组织醛糖还原酶活性及肾脏细胞凋亡的影响

目的研究醛糖还原酶(AR)、凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax与糖尿病肾病(DN)的关系,探讨醛糖还原酶抑制剂(ARIs)对DN的治疗作用。方法雄性Wistar大鼠40只,随机分为正常对照组、糖尿病组、依帕司他组、黄芩苷组,每组10只。除正常对照组外,其余各组大鼠腹腔注射STZ(60mg/kg),72h后建立糖尿病大鼠模型。依帕司他组灌胃依帕司他10mg.kg-1.d-1,黄芩苷组灌胃黄芩苷150mg.kg-1.d-1。16w后处死大鼠,测定晶体、肾脏组织AR活性,观察Bcl-2、Bax的表达,取部分肾皮质病理观察、电镜观察细胞凋亡的形态学变化。结果与正常对照组相比,糖尿病组晶体、肾脏皮质AR活性明显升高(P<0.001),两治疗组AR活性明显较糖尿病组降低(P<0.01),而血糖无明显变化。糖尿病组肾脏Bcl-2、Bax蛋白表达增加,治疗组的Bcl-2蛋白表达较糖尿病组增多,而Bax蛋白表达较糖尿病组减少。透射电镜下见糖尿病组肾脏肾小管上皮细胞呈典型的凋亡形态学改变,治疗组大鼠肾组织细胞凋亡改变明显减轻。糖尿病组肾小球基底膜增厚,系膜区域扩大,治疗组病变减轻。结论ARIs通过抑制AR活性,调节Bax、Bcl-2的表达抑制细胞凋亡,延缓DN的发展。黄芩苷对AR抑制作用与依帕司他相似。     

淫羊藿对7/8肾切除大鼠肾脏病理改变的影响

采用中药淫羊藿对7/8肾切除制备的大鼠慢性肾功能不全模型进行实验治疗,并利用计算机图像分析系统及组织学记分法,对其病理改变进行了分析。结果发现淫羊藿可降低7/8肾切除大鼠尿蛋白的排泄量,减少肾小球的肥大改变,并能明显改善肾脏的病理状况。     

解毒通络保肾法对实验性DM大鼠肾足细胞凋亡相关因子Bax、Bcl-2、Caspase-3的影响

目的探讨解毒通络保肾法对实验性糖尿病(DM)大鼠肾足细胞保护作用机制。方法 60只Wistar大鼠,雌雄各半,给予高糖高脂饲料,适应性喂养1 w,随机分为阴性对照组(A组,n=10),其余为造模组。喂养4 w后,造模组用链脲佐菌素50 mg/kg腹腔注射造模;造模成功的大鼠随机分为模型组(B组,n=10)、中药组(C组,n=10)。C组给予解毒通络保肾散每次4 ml,日灌胃1次;A、B组大鼠给予等体积蒸馏水。灌胃8 w后,观察各组大鼠空腹血糖(FPG)、血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、尿微量白蛋白(mAlb)的变化情况,取肾脏,制备肾组织匀浆。采用酶联免疫吸附试验检测大鼠肾脏足细胞凋亡相关因子Bax、Bcl-2及半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3蛋白表达水平。结果与A组相比,B、C组Bax、Caspase-3及Bax/Bcl-2表达均显著增加,Bcl-2表达显著降低(P0.05,P0.01);与B组相比,C组Bax、Caspase-3及Bax/Bcl-2表达均显著降低,Bcl-2表达显著上升(P0.01,P0.05)。结论解毒通络保肾法能够降低实验性DM大鼠空腹血糖,保护肾功能,减少尿蛋白的产生,其机制可能是下调Bax表达,上调Bcl-2表达,致Bax/Bcl-2比例下降,从而减少细胞凋亡执行蛋白酶Caspase-3的产生,起到抑制足细胞凋亡的作用,保护肾小球滤过屏障。     

左归丸对大鼠胸腺细胞凋亡及Bcl-2,Bax表达的影响

目的 观察左归丸干预皮质酮致大鼠胸腺细胞凋亡及对Bcl-2、Bax表达的影响.方法 1×10-5mol/L皮质酮处理乳鼠胸腺细胞.实验分为正常对照组,模型组,左归组.Annexin V-PI双染色法结合FCM检测胸腺细胞凋亡情况;Real time PCR和Western印迹法检测Bcl-2、Bax的表达变化.结果 胸腺细胞经皮质酮处理后,胸腺细胞凋亡率显著升高(P<0.01);Bcl-2 mRNA表达显著降低;Bax表达显著升高(P<0.01),Bcl-2/Bax比值降低(P<0.01).与模型组比较,左归组胸腺细胞凋亡率降低(P<0.01);Bax mRNA表达降低,Bcl-2/Bax比值升高(P<0.05).结论 左归丸鼠血清能通过调节bcl-2/bax比率的异常变化,抑制胸腺细胞过度凋亡.     

糖尿病大鼠组织非酶糖化、细胞凋亡与糖尿病肾病的关系

目的 探讨非酶糖化、凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax与糖尿病肾病(DN)的关系.方法 雄性Wistar大鼠30只,随机平均分为3组,正常对照组、DN组、糖尿病氨基胍(10mg·kg<'-1>·d<'-1>)治疗组,腹腔注射链脲佐菌素(60 mg/kg)诱发糖尿病.16 w后,处死大鼠,分离肾脏,测定组织非酶糖化,观察Bcl-2、Bax的表达,取部分肾皮质电镜细胞计量、观察细胞凋亡的形态学变化.结果 ①与正常对照组相比,DN组肾脏皮质非酶糖化明显升高(P<0.001),氨基胍治疗组非酶糖化明显较DN组降低(P<0.01),而血糖无明显变化.②DN组肾脏Bcl-2蛋白表达减少、Bax蛋白表达增加,治疗组的Bcl-2蛋白表达较DN组增多,而Bax蛋白表达较DN组减少.③透射电镜下见DN组肾脏肾小管上皮细胞呈典型的凋亡形态学改变,治疗组大鼠肾组织细胞凋亡改变明显减轻.④DN组肾小球基底膜增厚,系膜区域扩大,治疗组病变减轻.结论 ①非酶糖化通过调节Bcl-2,Bax蛋白的表达诱导细胞凋亡,而参与DN的发生与发展.②非酶糖化抑制剂可调节Bax,Bcl-2的表达抑制细胞凋亡,明显改善糖尿病大鼠肾脏结构与功能,延缓DN的发展.     

曲美他嗪对慢性心力衰竭大鼠肾脏组织Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的研究曲美他嗪(TMZ)对慢性心力衰竭(CHF)大鼠肾脏组织Bcl-2、Bax表达的影响。方法通过缩窄肾上腹主动脉建立CHF大鼠模型,选择30只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、TMZ组,每组10只。监测各组心脏血流动力学参数,采用苏木素-伊红(HE)染色观察各组肾脏形态结构改变,TUNEL法检测各组肾脏组织细胞凋亡指数(AI);免疫组织化学法(SP法)检测各组肾脏组织中Bcl-2与Bax蛋白的表达水平,RT-PCR法检测Bcl-2、Bax mRNA含量。结果与模型组比较,TMZ组大鼠肾小管排列整齐,肾小管细胞水肿、脱落减少;AI和Bax蛋白、mRNA表达水平显著下降(P<0.01);Bcl-2蛋白、mRNA表达水平明显升高(P<0.01)。结论 CHF时应用TMZ可通过抑制细胞凋亡保护肾功能,进而改善心功能。     

高糖环境对乏氧损伤大鼠海马神经元凋亡的影响及脑神康胶囊的干预作用

目的 研究高糖环境对体外培养的大鼠海马神经元乏氧损伤时凋亡的影响以及脑神康胶囊对损伤神经元的保护作用.方法 原代培养大鼠海马神经元,将细胞随机分成8组:对照组、高糖组、黄嘌呤(X)/黄嘌呤氧化酶(XO)组、川芎嗪组、生理盐水组、脑神康低、中、高剂量组.干预后测细胞存活率及凋亡率,采用Real-time PCR法检测各组海马神经元HIF-1α mRNA、Bcl-2 mRNA和Bax mRNA的表达及Bc-2/Bax比值.结果 与对照组相比,高糖组及X/XO组神经元存活率、Bcl-2 mRNA表达水平和Bcl-2/Bax的水平均显著下降,神经元凋亡率、HIF-1α mRNA和Bax mRNA表达水平均显著升高(均P<0.01);与X/XO组比较,川芎嗪组及脑神康各浓度组神经元存活率、Bcl-2 mRNA表达和Bcl-2/Bax的水平均明显上升,而神经元凋亡率、HIF-1α mRNA和Bax mRNA表达均明显下降.结论 脑神康胶囊能够明显抑制高糖环境下大鼠海马神经元的凋亡,对高糖环境下海马神经元的乏氧损伤有保护作用,其作用机制之一是下调HIF-1α mRNA表达、上调Bcl-2 mRNA表达、改善乏氧环境及抗细胞凋亡.     

甘草酸对糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡的影响及防治糖尿病肾病的临床意义

雄性Wistar大鼠30只,随机平均分为3组,正常对照组、糖尿病组、糖尿病甘草酸（30mg／kg／d）治疗组,腹腔注射链脲佐菌素（60mg／kg）诱发糖尿病。16周后,处死大鼠,分离肾脏,观察Bcl-2、Bax的表达,取部允肾皮质电镜病理观察。结果①糖尿病组肾脏Bcl-2蛋白表达减少、Bax蛋白表达增加,甘草酸治疗组的Bcl-2蛋白表达较糖尿病组增多,而Bax蛋白表达较糖尿病组减少,电镜观察糖尿病组呈明显细胞凋亡形态学改变,甘草酸治疗组减轻。②糖尿病肾小球基底膜增厚,系膜区域扩大,甘草酸治疗组病变减轻。结论①糖尿病血糖升高可能调节Bcl-2、Bax蛋白的表达诱导细胞凋亡,而参与DN的发生与发展。②甘草酸可调查Bax、Bcl-2的表达抑制细胞凋亡,明显改善糖尿病大鼠肾脏结构与功能,延缓DN的发展。     

淫羊藿苷对高糖培养条件下大鼠骨髓基质细胞Shh通路的影响

目的探讨淫羊藿苷对高糖培养条件下大鼠骨髓基质细胞Shh信号通路的影响。方法实验分组:正常组(2%胎牛血清+DMEM培养的细胞),高糖组(2%胎牛血清+高糖-DMEM培养的细胞),淫羊藿苷组1(2%胎牛血清+DMEM+淫羊藿苷培养的细胞),淫羊藿苷组2(2%胎牛血清+高糖-DMEM+淫羊藿苷培养的细胞);荧光定量测定Shh通路相关基因——补丁基因1(PTCH1)和光滑基因(SMO)的表达情况。结果淫羊藿苷组1与其他组比较:PTCH1和SMO基因的表达均明显增高(P0.05)。结论淫羊藿苷对高糖培养条件下大鼠骨髓基质细胞Shh通路有加强作用。     

胆汁性肝硬化大鼠肾细胞凋亡及其机制

目的:探讨胆汁性肝硬化大鼠肾脏病理组织学改变、肾脏细胞凋亡及其机制.方法:应用胆总管结扎(CBDL)技术制备大鼠胆汁性肝硬化模型.将SD大鼠随机分为:假手术组(SO)、CBDL 2 wk组与5 wk组.显微镜下观察肝脏和肾脏组织学改变;生化法测定内生肌酐清除率(Ccr),比色法测定肾组织丙二醛(MDA)含量,TUNEL法检测肾组织细胞凋亡,免疫组化测定Bcl-2,Bax蛋白的表达.结果:CBDL大鼠2 wk发生肝纤维化,5 wk则形成肝硬化;5 wk时肾小管上皮细胞有脱落、坏死;电镜下基底膜不规则增厚,系膜增宽,上皮细胞足突融合.模型大鼠5 wk组Ccr明显降低,较2 wk组与SO组有显著性差异(1.10±0.03vs 1.40±0.03,1.80±0.02,P＜0.05或0.01),肾组织丙二醛5 wk组较2 wk组与SO组显著性增高(4.07±0.51vs 2.32±0.85,0.79±0.37,均P＜0.01);模型大鼠5 wk组肾组织凋亡指数显著性高于2 wk组和SO组(68.36%±8.71%vs 24.08%±2.59%,11.43%±2.77%;均P＜0.01). SO组、2 wk组及5 wrk组Bcl-2逐渐下降,Bax表达则逐渐升高,各组间有显著差异(p＜0.05).结论:胆汁性肝硬化大鼠存在肾病理组织学改变与细胞凋亡:凋亡抑制蛋白Bcl-2低表达和凋亡诱导蛋白Bax高表达在肾损害中起作用.     

灯盏花素对糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡及bax、bcl-2表达的影响

目的探讨灯盏花素对糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡及对bax和bcl-2 mRNA表达的影响。方法健康雄性SD大鼠随机分为正常对照组（NC）、糖尿病组（DM）和灯盏花治疗组（EB）,EB组行灯盏花素20mg·kg^-1·d^-1腹腔内注射。给药后2周和6周处死,检测肾脏细胞凋亡、肾脏bax和bcl-2 mRNA的表达。结果与NC组比较,（1）DM组及EB组肾小管凋亡细胞数明显增多,且DM组高于EB组;（2）DM组肾脏bax、bcl-2 mRNA的表达显著增强,bax／bcl-2值明显升高;EB组与DM组比较bcl-2 mRNA表达增强,bax mRNA减弱,bax／bcl-2比值降低;（3）EB组及DM组体重下降,肾指数、肾小球面积、体积升高,且EB组较DM组体重增加,肾指数、肾小球面积、体积下降。血尿素氮、肌酐比较：DM组〉EB组〉NC组。结论灯盏花素可能通过影响凋亡相关基因bcl-2和bax的表达而抑制。肾脏细胞凋亡,从而发挥肾脏保护作用。     

姜黄素对5/6肾切除鼠鞘氨醇激酶1和转化生长因子-β1表达的影响

目的探讨姜黄素对5/6肾切除大鼠肾脏损害的保护作用及相关机制。方法将36只SD大鼠随机分为对照组,5/6肾切除组和姜黄素治疗组,每组12只。10 w后检测各组大鼠24 h尿蛋白定量、血肌酐(SCr)及尿素氮(BUN)的水平;光镜观察各组大鼠肾组织病理改变,免疫组化法检测肾组织鞘氨醇激酶(SPHK)1和转化生长因子(TGF)-β1的表达。ELISA检测各组大鼠血清中TGF-β1的分泌水平。结果姜黄素治疗组大鼠24 h尿蛋白定量、SCr和BUN水平明显低于5/6肾切除组(P0.05)。免疫组化检测可见5/6肾切除组大鼠SPHK1和TGF-β1表达明显增加(P0.05),姜黄素治疗组上述指标的表达均受到明显抑制(P0.05)。姜黄素治疗组大鼠血清TGF-β1的分泌水平明显低于5/6肾切除组,但仍高于对照组(P0.05)。结论姜黄素能减轻5/6肾切除大鼠肾脏病理改变,其机制可能是通过抑制TGF-β1的表达和分泌,进而影响SPHK1的表达而发挥作用。     

中药淫羊藿对慢性肾衰大鼠免疫病理及细胞外基质的影响

采用７／８肾切除法制备了慢性肾功能不全的大鼠模型并用中药淫羊藿进行实验治疗。结果提示淫羊藿可明显减轻肾脏的组织学改变和减少细胞外基质产生。     

冬虫夏草对5/6肾切除大鼠肾脏皮质细胞外基质积聚的影响

目的 观察冬虫夏草对5/6肾切除大鼠肾脏皮质细胞外基质(ECM)积聚的影响,探讨其对肾脏保护机制.方法 将正常Wistar大鼠(50天龄)36只随机分为正常对照组、5/6肾切除组和虫草制剂组.5/6肾切除组、虫草制剂组分别行5/6肾切除制备进行性肾小球硬化模型.虫草制剂组每天给予虫草制剂(百令胶囊4 g·kg-1·d-1)水提取液灌胃,进行干预治疗.第2次术后4、9 w分别测定大鼠血生化指标;观察肾脏病理变化,用免疫组织化学检测肾组织胶原Ⅳ、纤维连接蛋白(FN).结果 冬虫夏草能降低肾小球硬化指数(GSI),减少胶原Ⅳ、FN表达;减少尿蛋白排泄,增加肾组织MMP-2mRNA表达,减少TIMP-2mRNA的表达.结论 冬虫夏草可能通过增加5/6肾切除大鼠肾脏MMP-2的活性和降低TIMP-2的表达,从而能增加ECM降解和减轻肾小球ECM积聚.