JNK通路在氯通道阻断剂抑制Aβ25～35诱导细胞凋亡中的作用

目的探讨JNK通路在氯通道阻断剂4，4＇-diisothiocyano-2，2＇-disulfonic acid stilbene（DIDS）及Phloretin在β淀粉样蛋白活性片段（Aβ，Aβ25-35）诱导PC12细胞凋亡过程中作用。方法采用MTT比色法、乳酸脱氢酶（lactate dehydrogen，LDH）活力检测、琼脂糖凝胶电泳法，比较正常对照组、Aβ25-35损伤组和Aβ25-35 ＋Phloretin组、Aβ25-35 ＋DIDS组的PC12细胞存活与凋亡；Western印迹法检测4组的JNK、P-JNK蛋白表达。结果10μmol／L Phloretin和50μmol／LDIDS均能抑制Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡，提高细胞存活率，减少LDH释放，降低P-JNK蛋白的水平。结论JNK的磷酸化水平下调，参与了氯通道阻断剂抑制的Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡。     

琐琐葡萄多糖对β淀粉样蛋白诱导PC12细胞凋亡的影响

目的探讨琐琐葡萄多糖(VTP)对β淀粉样蛋白(Aβ25~35)诱导PC12细胞凋亡的影响及作用机制。方法 Aβ25~35诱导PC12细胞建立阿尔茨海默病(AD)细胞模型,VTP(20、40、80 mg/L)作用于细胞模型,CCK-8法检测各组细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡率,Real-time PCR检测凋亡相关基因Bcl-2和Bax表达。结果 VTP可提高PC12细胞活性,降低细胞凋亡率,增强Bcl-2 mRNA表达,抑制Bax mRNA表达。结论VTP对Aβ25~35诱导的PC12细胞凋亡具有明显的保护作用,其机制可能是通过增强Bcl-2 mRNA表达、降低Bax mRNA表达,抑制细胞凋亡。     

氯通道阻滞剂在β_(25-35)淀粉样多肽诱导PC12细胞凋亡的保护作用

目的探讨氯通道阻滞剂(DIDS)对β25-35淀粉样多肽(Aβ25-35)诱导PC12细胞凋亡的影响。方法PC12细胞按实验不同分为对照组(DMEM培养液)、Aβ25-35组(Aβ25-35 40μmol/L)、DIDS组(Aβ25-35 40μmol/L+DIDS 50μmol/L)。MTT法测细胞存活率,Hoechst 33258荧光染色观察细胞核形态学改变,流式细胞技术测细胞凋亡率。结果Aβ25-35组与对照组和DIDS组比较,PC12细胞的存活率明显降低(P<0.05),细胞凋亡率明显增高(P<0.05),不同DIDS浓度依赖性升高PC12细胞存活率,DIDS 50μmol/L能显著下调Aβ25-35诱导的细胞凋亡(P<0.05)。结论DIDS对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤有保护作用。     

玉郎伞多糖对Aβ25-35所致PC12细胞损伤细胞内钙离子浓度的影响

目的观察Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡损伤模型胞内钙浓度的变化及YLSP的影响。方法采用Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡损伤模型,石杉碱甲作为对照药,给予YLSP预处理后,加入Flu-3/AM,用流式细胞仪（FCM）测定各组细胞的平均荧光强度。结果各组PC12细胞内钙离子含量存在显著性差异（F=14.051,P〈0.01）,其中,Aβ25-35作用PC12细胞后,PC12细胞内钙离子含量显著升高（P〈0.01）,经YLSP处理后,PC12细胞内钙离子含量较模型组细胞显著降低（P〈0.01）,其中,YLSP高剂量组的PC12细胞内钙离子含量显著低于石杉碱甲组（P〈0.01）。结论 YLSP能对抗Aβ引起的细胞内钙离子浓度升高,防止钙超载的发生。     

原花青素对β-淀粉样肽(25-35)诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

目的 探讨原花青素(pmcyanidins，PC)对β-淀粉样肽(25-35)[βamyloid pepfide-(25-35)，Aβ25-35]诱导PC12细胞凋亡的保护作用。方法 采用MTT比色法分析细胞存活率，Hoechst 33258-PI荧光染色法检测凋亡，流式细胞仪检测分析细胞凋亡率变化情况。结果 不同剂量PC预处理PC12细胞1h可剂量依赖性对抗Aβ25-35引起的PC12细胞凋亡，提高细胞的存活率，减少Aβ25-35引起的核固缩、凝聚和碎裂，降低细胞凋亡率。结论 PC可剂量依赖性对抗Aβ25-35对PC12细胞的毒性作用。     

氯通道阻滞剂在β25-35淀粉样多肽诱导PCl2细胞凋亡的保护作用

目的 探讨氯通道阻滞剂(DIDS)对β25-35淀粉样多肽(Aβ25-35)诱导PCl2细胞凋亡的影响.方法 PCl2细胞按实验不同分为对照组(DMEM培养液)、Aβ25-35组(Ap25-35 40 μmol/L)、DIDS组(Aβ25-35 40,μmol/L+DIDS 50μmol/L).MTT法测细胞存活率,Hoeehst 33 258荧光染色观察细胞核形态学改变,流式细胞技术测细胞凋亡率.结果 Aβ25-35组与对照组和DIDS组比较,PCI2细胞的存活率明显降低(P＜0.05),细胞凋亡率明显增高(P＜0.05),不同DIDS浓度依赖性升高PC12细胞存活率,DIDS 50 μmol/L能显著丁调Aβ25-35诱导的细胞凋亡(P＜0.05).结论 DIDS时Aβ25-35诱导PC12细胞损伤有保护作用.     

神经甾体化合物对PC12细胞损伤的保护作用

目的 研究神经甾体化合物(CPU 03-03)对H2O2和Aβ25～35所诱导的PC12细胞损伤的保护作用.方法 用H2O2和Aβ25～35造成PC12细胞损伤模型,采用MTT比色法检测细胞存活率,同时检测乳酸脱氢酶(LDH)活力和丙二醛(MDA).结果 CPU 03-03能显著减少细胞死亡,降低LDH漏出量及MDA生成.结论 CPU 03-03对PC12细胞损伤具有保护作用.     

亲环素A保护PC12细胞对抗β-淀粉样蛋白诱导的氧化应激损伤和凋亡

目的 探讨亲环素A(CyPA)对Aβ25 ～35诱导PC12细胞氧化应激损伤和凋亡的影响.方法 用不同浓度的CyPA预处理PC12细胞,再加入Aβ25 ～35继续培养,采用MTT法分析细胞存活率.用10 nmoL/LCyPA预处理PC12细胞,再加入Aβ25 ～35继续培养,碘化丙啶(PI)单染后流式细胞仪进行凋亡的定量检测;罗丹明123(Rd 123)染色流式细胞仪检测线粒体跨膜电位;二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)染色,倒置荧光显微镜和流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)含量.结果 CyPA可提高细胞的存活率,减少Aβ25 ～35引起的细胞凋亡,CyPA还可以改善由Aβ25 ～35引起的线粒体跨膜电位的下降,降低Aβ25 ～ 35诱导产生的大量ROS.结论CyPA可对抗Aβ25 ～ 35对PC12细胞的毒性作用,并通过增加线粒体跨膜电位和降低ROS产生从而减少细胞凋亡.     

琐琐葡萄齐墩果酸对Aβ_(25~35)诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的研究琐琐葡萄提取物齐墩果酸(OA)对β淀粉样蛋白25³5(Aβ2535(Aβ25³5)所致PC12细胞损伤的神经保护作用。方法体外培养PC12细胞,20μmol/L Aβ2535)所致PC12细胞损伤的神经保护作用。方法体外培养PC12细胞,20μmol/L Aβ25³5作用24 h建立阿尔茨海默病(AD)体外模型,设对照组、模型组和OA(20、40、80μg/ml)保护组,CCK-8法检测细胞的存活率,乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞膜通透性及完整性,化学比色法测定超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA),流式细胞术检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR检测细胞凋亡相关基因NF-κB p65表达。结果 20、40、80μg/ml OA可提高PC12细胞存活率,减少LDH渗漏,增加SOD活力,减少MDA含量,降低细胞凋亡率,下调NF-κB p65 mRNA表达,与模型组有显著差异(P<0.05)。结论 OA对Aβ2535作用24 h建立阿尔茨海默病(AD)体外模型,设对照组、模型组和OA(20、40、80μg/ml)保护组,CCK-8法检测细胞的存活率,乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞膜通透性及完整性,化学比色法测定超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA),流式细胞术检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR检测细胞凋亡相关基因NF-κB p65表达。结果 20、40、80μg/ml OA可提高PC12细胞存活率,减少LDH渗漏,增加SOD活力,减少MDA含量,降低细胞凋亡率,下调NF-κB p65 mRNA表达,与模型组有显著差异(P<0.05)。结论 OA对Aβ25³5诱导的PC12细胞凋亡和氧化损伤具有明显的保护作用。     

刺五加皂苷对Aβ_(25~35)诱发PC12细胞毒性及细胞凋亡的保护作用

目的研究刺五加皂苷对Aβ25³5处理PC12细胞毒性及细胞凋亡的保护作用。方法将神经细胞生长因子(NGF)诱导的PC12细胞用10 mol/L Aβ2535处理PC12细胞毒性及细胞凋亡的保护作用。方法将神经细胞生长因子(NGF)诱导的PC12细胞用10 mol/L Aβ25³5处理,建立体外老年性痴呆模型。采用线粒体琥珀酸脱氢酶活性测定、乳酸脱氢酶(LDH)测定法、丙二醛(MDA)含量检测法、流式细胞仪检测法、Western印迹方法检测活化的Caspase-3蛋白水平。结果 Aβ2535处理,建立体外老年性痴呆模型。采用线粒体琥珀酸脱氢酶活性测定、乳酸脱氢酶(LDH)测定法、丙二醛(MDA)含量检测法、流式细胞仪检测法、Western印迹方法检测活化的Caspase-3蛋白水平。结果 Aβ25³5损伤组与对照组比较噻唑蓝(MTT)代谢率下降,LDH释放量增多(P<0.05或P<0.01),MDA含量增高,细胞凋亡率明显增高,活化的Caspase-3蛋白水平明显增高;刺五加皂苷组可不同程度地保护Aβ2535损伤组与对照组比较噻唑蓝(MTT)代谢率下降,LDH释放量增多(P<0.05或P<0.01),MDA含量增高,细胞凋亡率明显增高,活化的Caspase-3蛋白水平明显增高;刺五加皂苷组可不同程度地保护Aβ25³5的细胞毒性及细胞凋亡。结论刺五加皂苷对Aβ2535的细胞毒性及细胞凋亡。结论刺五加皂苷对Aβ25³5处理PC12细胞毒性及细胞凋亡有较好的保护作用。     

核转录因子-κB对β-淀粉样肽25-35诱导下PC12细胞周期的影响

目的 探讨核转录因子κB(NF-κB)在β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)肽段诱导的PC12细胞周期异常中的机制.方法 应用流式细胞仪检测技术及Western印迹方法,在Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡过程中检测NF-κB的活性和细胞周期相关蛋白周期蛋白A(cyclin A)、周期蛋白D1(cyclin D1)、周期蛋白E(cyclin E)、周期蛋白依赖性激酶2(CKD2)、周期蛋白依赖性激酶4(CKD4)、周期蛋白依赖性激酶6(CKD6)表达量的变化.分别将PC12同步化于G0期和S期,再检测Aβ25-35诱导对上述指标的影响.抑制NF-κB活性后,进一步检测上述细胞周期相关蛋白在Aβ25-35诱导下的变化.结果 Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡过程中NF-κB活性增加(P＜0.05),同时细胞周期相关蛋白量升高;细胞同步化于G0期,Aβ25-35处理PC12细胞,细胞凋亡率下降,NF-κB活性的增加和细胞周期相关蛋白量升高均受抑制;而同步化于S期,则细胞凋亡率、NF-κB活性的增加和细胞周期相关蛋白量升高均无显著性变化;Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡过程中,抑制NF-κB活性则会引起细胞周期相关蛋白表达受抑制.结论 NF-κB主导了Aβ25-35诱导PC12细胞周期的异常变化,异常发生在G0期到G1期的过渡以及G1期到S期过渡,而不是S期到G2期以及G2期到M期的过渡.     

知母总皂苷对β-淀粉样蛋白诱导PC12细胞凋亡的抑制作用

目的探讨知母总皂苷对于β-淀粉样蛋白(Aβ)诱导的PC12细胞凋亡的保护作用。方法采用10、20、30、40μmol/L Aβ25～35分别刺激PC12细胞24、36、48、72 h,通过MTT法测定出最佳的刺激浓度为20μmol/L和时间为48 h用于后期的实验。用0.05、0.25、0.5、2.5、5、10、15、20 mg/L的知母总皂苷和20μmol/L Aβ25～35共同作用PC12细胞48 h,MTT测定出其细胞活力的改变,选定最佳知母总皂苷浓度0.5 mg/L用于实验。实验分为:空白组,正常组,模型组,知母治疗组。通过倒置相差显微镜观察各组细胞的形态和成长情况,MTT比色法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,荧光显微镜观察细胞凋亡的形态变化。结果 MTT法显示不同时间,不同浓度的Aβ25～35处理细胞后细胞均有不同程度的凋亡,并成剂量依赖关系。不同浓度的Aβ25～35其最大抑制率均在48 h。用不同浓度的知母总皂苷预保护PC12细胞,可抑制Aβ25～35诱导的凋亡,0.5 mg/L效果最为显著,与模型组有显著性差异(P<0.01),流式细胞仪检测凋亡率和荧光显微镜观察均能显著抑制Aβ25～35对于PC12细胞的凋亡的作用(P<0.01)。结论 Aβ25～35能诱导PC12细胞凋亡,知母总皂苷对其诱导的细胞凋亡具有明显的保护作用。     

万拉法辛对Aβ25-35诱发PC12细胞损伤及Bcl-2表达下降作用的研究

目的 研究抗抑郁药万拉法辛对β淀粉样蛋白片段(Aβ25-35)诱发 PC12细胞损伤的作用.方法 将培养的PC12细胞分为三组:正常对照组、Aβ损伤组和药物保护组.Aβ损伤组用Aβ25-35处理细胞,药物保护组在用Aβ25-35处理前2 h加入万拉法辛.采用细胞形态学方法、LDH法、MTT法、免疫组化法及Western印迹法观察万拉法辛的保护作用.结果 药物保护组与Aβ损伤组相比细胞数显著增多,受损变圆的细胞数较少;LDH释放量较少(P＜0.01);OD490值显著升高(P＜0.01).Aβ损伤组中Bcl-2的表达比正常对照组低,药物保护组Bcl-2的表达比Aβ25-35损伤组升高;药物保护组、Aβ损伤组与对照组相比细胞内Bax蛋白表达均无明显变化.结论 万拉法辛对Aβ25-35诱发PC12细胞损伤有保护作用,其机制可能和万拉法辛升高Bcl-2蛋白水平有关.     

JNK信号转导通路在β-淀粉样蛋白25-35诱导PC12细胞凋亡中的作用机制

目的研究β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)诱导大鼠嗜铬细胞瘤(PC12)细胞凋亡的机制以及c-Jun氨基端激酶(JNK)抑制剂SP600125的保护作用，探讨在Aβ25-35细胞毒性中JNK—c-Jun信号转导通路的可能作用机制。方法在培养的PC12细胞中加入Aβ25-35共孵育，用磷脂酰丝氨酸外翻分析(Annexin V)方法和流式细胞仪检测PC12细胞的凋亡，用免疫印迹法检测不同时间点的JNK及c-Jun蛋白活性。结果PC12细胞经过Aβ25-35处理后发生凋亡，呈时间依赖性细胞生存率下降，免疫学方法检测显示细胞在Aβ25-35处理早期出现磷酸化JNK和磷酸化c-Jun的表达增高，且这一过程可被SP600125抑制。流式细胞仪检测显示在使用SP600125后，细胞生存率上升，差异具有统计学意义。结论体外PC12细胞培养显示Aβ25-35可诱导细胞凋亡，SP600125对Aβ25-35的细胞毒性具有保护作用，JNK—c-Jun信号转导通路可能参与了上述细胞毒作用机制。     

晚期糖化终产物对β-淀粉样蛋白诱导PC12细胞凋亡作用机制的实验研究

目的 研究AGEs对Aβ诱导的PC12细胞的作用机制是否与氧化应激有关，阻断RAGE活性能否作为有效的作用靶点。方法 Aβ诱导PC12细胞后加入低、中、高浓度AGEs孵育12h；胰蛋白酶处理PC12细胞后加入Aβ，MTT法检测细胞活力，流式细胞仪测定细胞凋亡，RT-PER法测定RAGE，NF-κB表达。结果 MTT法显示随AGEs浓度升高，细胞活力下降，胰蛋白酶处理组细胞活力升高，流式细胞仪检测显示随AGEs浓度增加，细胞凋亡率增加，RT-PCR法半定量分析RAGE、NF-κB达随AGEs浓度升高而增高。结论 AGEs对Aβ诱导的PC12细胞神经毒性损害由RAGE介导．并与RAGE引起NF-κB达有关，阻断RAGE可减低其神经毒性，阻断RAGE活性可作为有效的药物作用靶点。     

灵芝提取物通过miR-143-3p对Aβ25～35诱导的神经细胞损伤的影响

目的 探讨灵芝提取物对β淀粉样蛋白(Aβ)_25～35诱导的神经细胞损伤的影响及其可能的作用机制。方法 采用Aβ_25～35诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞PC12建立阿尔茨海默病(AD)细胞模型,不同浓度的灵芝提取物处理PC12细胞,anti-miR-NC、anti-miR-143-3p分别转染至PC12细胞后进行Aβ_25～35处理24 h, miR-NC、miR-143-3p mimics分别转染至PC12细胞后加入10 mg/L灵芝提取物与Aβ_25～35处理24 h;采用噻唑蓝(MTT)法、流式细胞术分别检测细胞增殖及凋亡;采用试剂盒检测丙二醛(MDA)的水平和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)的活性;采用实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-143-3p表达量。结果 Aβ_25～35作用条件下,灵芝提取物可明显降低细胞凋亡率、MDA水平、miR-143-3p表达量(P<0.05),明显升高细胞活力和SOD、CAT的活性,且呈剂量依赖性(P<0....     

硫化氢对Aβ25-35致PC12细胞损伤的保护作用

目的 探讨H2S对Aβ25-35致PC12细胞损伤的保护作用.方法 应用NaHS作为H2S的供体,甲氮甲唑蓝法检测细胞成活率,Hoechst染色检测细胞凋亡,碘化丙啶染色流式细胞技术检测细胞凋亡率.结果 5～80 μmol/L的Aβ25-35呈浓度依赖性地引起PC12细胞的存活率显著降低(P＜0.01)、凋亡率明显升高(P＜0.01);100 μmol/L NaHS与20 μmol/L Aβ25-35共同作用于PC12细胞24 h后,NaHS浓度依赖性地阻断Aβ25-35引起的PC12细胞存活率降低,升高了的细胞凋亡率(P＜0.01).结论 H2S对Aβ25-35致PC12细胞损伤具有保护作用.     

β-淀粉样肽(25-35)对PC12细胞Cyclin D1、CDK4、pRb、E2F1基因表达的影响

目的 观察β-淀粉样肽(25-35)[β-amyloid peptide (25-35),Aβ25-35]对体外血清饥饿培养PC12细胞的Cyclin D1、CDK4、pRb、E2F1基因表达的影响.方法 用终浓度为25 μmol/L Aβ25-35处理PC12细胞,流式细胞仪检测分析细胞周期的改变,通过RT-PCR检测Cyclin D1、CDK4、E2F1基因mRNA表达变化,Western印迹检测Cyclin D1、CDK4、pRb蛋白表达的变化.结果 流式细胞仪分析表明血清饥饿培养24 h可使约90%PC12细胞停滞于G0/G1期,25 μmol/L Aβ25-35诱导组8、16、24 h与对照组比较,S期百分率明显增加(P＜0.01),16 h后细胞凋亡率明显增加(P＜0.01),可见明显的亚二倍体峰(Ap峰);Aβ25-35浓度诱导血清饥饿培养的PC12细胞0～20 h,Cyclin D1、CDK4、pRb 、E2F1 mRNA和蛋白表达增高.结论 Aβ25-35诱导同步化于G0/G1的PC12细胞重新进入细胞周期,并阻滞于S期,同时出现凋亡,可能与增加Cyclin D1、CDK4、pRb 、E2F1 mRNA和蛋白的表达有关.     

环孢菌素A抑制内质网应激减轻β淀粉样蛋白_(25-35)对PC12细胞凋亡的研究

目的探讨环孢菌素A对β淀粉样蛋白_(25-35)(Aβ_(25-35))诱导PC12细胞凋亡的保护机制。方法 PC12细胞传代培养,分为对照组、Aβ_(25-35)组、Aβ_(25-35)+环孢菌素A组(环孢菌素A组)。Aβ_(25-35) 10μmol/L,环孢菌素A 20 -μmol/L。药物作用24 h后,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测内质网应激蛋白钙网蛋白、半胱天冬氨酸酶12(caspase 12)活化片断的蛋白表达。结果与对照组细胞凋亡率(2.0±0.2)%比较,Aβ_(25-35)组细胞凋亡率(45.0±3.7)%明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);而环孢菌素A组细胞凋亡率为(27.0±2.4)%,较Aβ_(25-35)组明显下降,差异有统计学意义(P<0.01)。Western blot显示,与对照组比较,Aβ25 35组钙网蛋白、caspase-12活化片断表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);与Aβ_(25-35)组比较,环孢菌素A组钙网蛋白、caspase 12活化片断表达明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论环孢菌素A可通过抑制内质网应激相关蛋白表达,来减轻Aβ_(25-35)对PC12细胞的凋亡作用。     

原花青素对Aβ25-35诱导PC12细胞周期紊乱的保护作用

目的 观察原花青素(PAC)对β-淀粉样肽(25-35) (Aβ25-35)诱导体外血清饥饿培养的PC12细胞周期紊乱与凋亡的保护作用,并探讨其可能的作用机制.方法 采用血清饥饿培养使PC12细胞同步于G0期,PAC预处理后加入Aβ25-35,通过流式细胞仪分析细胞周期与凋亡,RT-PCR和Western印迹从mRNA及蛋白水平检测p21、Cyclin D1、pRb和E2F1基因表达的变化.结果 与Aβ25-35诱导组比较,PAC保护组S期细胞百分率明显减少,凋亡率明显降低(P＜0.05);p21 mRNA和蛋白表达增加(P＜0.05),Cyclin D1、E2F1 mRNA和Cyclin D1、pRb蛋白表达降低(P＜0.05).结论 PAC对Aβ25-35诱导的PC12细胞周期紊乱与凋亡起保护作用,其机制可能与上调p21表达,下调Cyclin D1、pRb、E2F1表达有关.