雌二醇对视网膜缺血-再灌注损伤后基质细胞衍生因子-1表达的影响

目的 通过观察视网膜缺血-再灌注损伤后基质细胞衍生因子-1(stromal cell-derived factor-1,SDF-1)的表达情况,以及雌二醇对SDF-1的表达及调控作用,研究雌二醇对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤的保护作用机制.方法 通过升高大鼠眼压的方法建立视网膜缺血-再灌注损伤模型,应用RT-PCR和Western blot方法检测视网膜缺血-再灌注损伤后各时间点(6h、12h、24 h)视网膜SDF-1表达情况;腹腔注射雌二醇后观察雌二醇对视网膜缺血-再灌注损伤后SDF-1表达的影响;并且应用雌激素受体拮抗剂ICI 182-780研究雌激素受体对雌二醇诱导视网膜缺血-再灌注损伤后的SDF-1的影响.结果 SDF-1 mRNA和蛋白在缺血-再灌注6h组、缺血-再灌注12h组和缺血-再灌注24 h组表达均增加,与正常对照组比较差异均有统计学意义(均为P＜0.05),并且在缺血-再灌注12h组SDF-1表达达高峰.雌二醇预处理对视网膜缺血-再灌注具有一定的保护作用;缺血-再灌注+雌二醇组SDF-1 mRNA和蛋白表达增加,与缺血-再灌注对照组及缺血-再灌注+溶剂对照组比较差异均有统计学意义(均为P ＜0.05).与缺血-再灌注+雌二醇组相比较,缺血-再灌注+雌二醇+ICI182-780组SDF-1 mRNA和蛋白表达明显降低,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).结论 雌二醇对视网膜缺血-再灌注损伤的保护作用是通过雌激素受体介导的SDF-1 mRNA和蛋白表达增强实现的.     

视网膜缺血-再灌注损伤干预治疗新进展

视网膜缺血-再灌注损伤(RIRI)是眼科常见的病理生理损伤性眼病,常发生于视网膜动静脉阻塞、糖尿病视网膜病变、急性闭角型青光眼等与缺血相关的眼病.表现为缺血性患眼在血液再灌注后,细胞功能发生代谢性障碍,视网膜组织结构损伤,视功能下降.缺血-再灌注损伤是由多种因素共同作用的结果,目前公认的假说主要包括氧自由基的损伤、细胞内的钙超载、白细胞介素介导作用和细胞凋亡等.但目前对于RIRI的保护及治疗研究有限,本文就国内外有关RIRI的干预治疗新进展综述如下.     

视网膜缺血再灌注模型的建立与观察研究进展

视网膜缺血再灌注模型是研究视网膜缺血再灌注损伤机制的重要模型,其建立手段较多,但定量方法较少。本文结合文献综述视网膜缺血再灌注模型的建立方法,比较不同模型的特点。     

一氧化氮与视网膜缺血-再灌注损伤

一氧化氮（NO）在视网膜缺血-再灌注损伤中占重要地位。视网膜缺血-再灌注时,一氧化氮合成酶（NOS）被多种炎性介质和细胞因子激活,使NO大量生成。NO是一种活性很强的自由基,具有广泛的生物学活性。在缺血-再灌注早期,少量NO可降低缺血缺氧对视网膜的损伤程度;晚期过多的NO可通过多种途径对视网膜造成损害。就目前有关NO在视网膜缺血-再灌注损伤中的研究进展进行综述。     

家兔视网膜缺血-再灌注损伤后形态学的动态变化

目的　观察家兔视网膜缺血 -再灌注后视网膜结构的动态变化。方法　通过前房灌注加压至 16 .7k Pa,维持 1h,建立缺血模型 ,观察再灌注 2～ 14d内其结构变化及内层视网膜平均厚度的变化。结果　家兔视网膜在缺血 -再灌注后 2～ 14d内表现为神经细胞持续丢失 ,视网膜层次逐渐不清 ,萎缩、变薄。其中神经节细胞、神经纤维及视锥、视杆对缺血最敏感 ,外颗粒层次之 ,内颗粒层最能耐受缺血 -再灌注后的损伤。结论　视网膜缺血 -再灌注损伤是个持续性、进行性的损伤过程 ,与功能变化相一致     

四溴-2-氮杂苯并咪唑对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤后视网膜神经节细胞的影响

视网膜缺血-再灌注损伤多见于急性闭角型青光眼等疾病.研究表明视网膜缺血-再灌注损伤可导致视网膜神经节细胞( retinal ganglion cells,RGCs)损伤甚至死亡[1].蛋白激酶2(casein kinase 2,CK2)是一种真核细胞中普遍存在的信使非依赖性丝/苏氨酸蛋白激酶,其功能较多[2],但CK2对RGCs的作用尚不清楚.     

α-硫辛酸对视网膜缺血-再灌注损伤大鼠视网膜中血管内皮生长因子和基质金属蛋白酶表达的影响

目的探讨α-硫辛酸对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤中血管内皮生长因子（VEGF）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达的影响及作用机制。方法按随机数字表法将78只SPF级健康成年Wistar大鼠分为正常对照组6只及α-硫辛酸组和缺血-再灌注组各36只。α-硫辛酸组和缺血-再灌注组根据再灌注时间的不同分为6、12、24、48h,3d和7d组。采用前房灌注生理盐水升高眼压的方法建立视网膜缺血-再灌注动物模型,其中α-硫辛酸组大鼠自造模前3d开始腹腔注射α-硫辛酸100mg/（kg.d）,缺血-再灌注组大鼠以同样的方法注射等体积生理盐水。在上述时间点分别处死大鼠并摘除眼球,行苏木精-伊红染色评估各组大鼠在各时间点视网膜组织的结构变化;应用免疫组织化学法检测大鼠视网膜缺血-再灌注损伤后不同时间点视网膜组织中VEGF和MMP-9的表达,并对各组VEGF和MMP-9的表达量进行比较。结果缺血-再灌注组大鼠在再灌注后6h出现视网膜水肿和视网膜神经节细胞（RGCs）的轻度改变,随着时间的延长,RGCs的结构改变明显加重。α-硫辛酸组视网膜水肿和RGCs结构的异常变化过程同缺血-再灌注组,但程度较轻。实验前后正常对照组大鼠视网膜中未见VEGF的表达;缺血-再灌注组于再灌注后12h开始出现VEGF的表达,随着时间的延长VEGF表达逐渐增加,到再灌注后48h达到高峰。各时间点缺血-再灌注组和α-硫辛酸组VEGF在视网膜的表达水平明显高于正常对照组,差异均有统计学意义（P〈0.05）,但各时间点α-硫辛酸组VEGF在视网膜的表达水平明显低于缺血-再灌注组,差异均有统计学意义（P〈0.05）。正常对照组大鼠视网膜未检测到MMP-9的表达;缺血-再灌注组在再灌注后6h可检测到MMP-9在视网膜中的表达,24h后其表达水平达到高峰。各时间点缺血-再灌注组MMP-9的表达明显高于正常对照组（P均〈0.05）,α-硫辛酸组视网膜中MMP-9的表达与缺血-再灌注组比较明显下降,差异均有统计学意义（P〈0.05）。缺血-再灌注组视网膜VEGF和MMP-9的表达呈正相关（r=0.834,P〈0.05）。结论视网膜缺血-再灌注损伤可诱导VEGF及MMP-9的表达在视网膜中过度表达,α-硫辛酸可通过抑制视网膜缺血-再灌注损伤中VEGF及MMP-9的表达而对视网膜起保护作用。     

视网膜缺血再灌注损伤的治疗进展

视网膜缺血再灌注损伤是目前临床上常见的眼病,主要发生于视网膜中央动静脉栓塞、急性闭角性青光眼、糖尿病性视网膜病等视网膜血管阻塞所引起的缺血性眼病.表现为许多缺血性眼病患者在血液再通后,视网膜损伤严重,视功能反而进一步下降.视网膜缺血再灌注损伤是多因素综合作用的结果,主要包括氧自由基的损伤作用,细胞内的钙超载现象,白细胞作用以及细胞凋亡等.本文就国内外有关视网膜缺血再灌注损伤的治疗进展综述如下.     

果糖二磷酸镁对大鼠视网膜缺血再灌注损伤的保护作用

目的 探讨果糖二磷酸镁(magnesium fructose diphosphata,FDPMg)时实验性大鼠视网膜缺血再灌注损伤的影响及其作用机制.方法 通过升高眼压的方法,制作大鼠实验性视网膜缺血再灌注损伤的模型.将66只SD大鼠随机分为正常组、缺血再灌注模型组、FDPMg干预组.后两组各分为6 h、12 h、24 h、48 h、72 h 5个时间段.采用DNA原位末端标记法检测凋亡的视网膜细胞;免疫组织化学法检测视网膜组织中Fas/FasL蛋白的表达变化.结果 正常组大鼠视网膜未见凋亡细胞.缺血再灌注模型组再灌注6 h可观察到凋亡细胞;12 h凋亡细胞逐渐增加;24 h细胞凋亡达高峰;48 h凋亡细胞减少;72 h视网膜仍可见凋亡细胞.各组Fas/FasL表达情况与视网膜细胞凋亡情况基本一致.FDPMg干预组各时段各观察指标表达均较缺血再灌注模型组明显下降,两组间比较差异均有显著统计学意义(均为P＜0.01).结论 FDPMg明显抑制Fas/FasL蛋白在视网膜缺血再灌注损伤中的表达,进而抑制细胞凋亡来实现其对视网膜缺血再灌注损伤的保护作用.     

外源性神经生长因子对大鼠视网膜缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨外源性神经生长因子对大鼠视网膜缺血再灌注损伤的保护作用.方法建立结扎颈总动脉的大鼠视网膜缺血再灌注模型,分缺血再灌注组、缺血再灌注+外源性神经生长因子组.每组按再灌注时间的不同分为缺血再灌注1、6、12、24、48、72 h组.同时记录各期大鼠视网膜电图(electroretinogram,ERG)a、b波波幅,通过透射电镜观察各期视网膜的超微结构.结果缺血再灌注+外源性神经生长因子组各时期ERGa、b波波幅高于缺血再灌注组.视网膜超微结构显示缺血再灌注+外源性神经生长因子组细胞受损情况明显好于缺血再灌注组.结论外源性神经生长因子对大鼠视网膜缺血再灌注损伤具有保护作用.     

MCP-1在大鼠视网膜缺血再灌注损伤中的实验研究

目的 了解视网膜缺血再灌注损伤中不同时期单核细胞趋化蛋白(MPC-1)的表达，探讨其在视网膜缺血再灌注损伤中的作用。方法 对大鼠建立结扎颈总动脉的视网膜缺血再灌注损伤模型，以免疫组织化学法(SABC法)检测视网膜组织中的MCP-1的表达状态。结果 在缺血再灌注损伤1小时，未见MCP-1的表达，在缺血再灌注6小时，MCP-1开始表达，至第24小时表达最强，第48小时开始减弱，但第72小时仍有表达。结论 MCO-1在视网膜缺血再灌注损伤中发挥着重要作用。     

一氧化氮合酶在大鼠视网膜缺血再灌注损伤中的表达及意义

目的：探讨诱导型一氧化氮舍酶(iNOS)在大鼠视网膜缺血再灌注损伤中的表达及意义。方法：建立结扎颈总动脉的大鼠视网膜缺血再灌注损伤模型，60只SD大鼠被随机分为缺血再灌注组和对照组。每组按再灌注后不同时间段相应分为1h、6h、12h、24h、48h、72h小组，每小组5只大鼠，以免疫组织化学法(SABC法)检测视网膜组织中iNOS的表达情况。结果：在缺血再灌注损伤1h时，未见到iNOS的表达，在缺血再灌注6h时，iNOS开始表达，至第24小时表达最强，第48小时开始减弱，但第72小时仍有表达。而对照组视网膜中未能检测到iNOS的表达。结论：iNOS可能在视网膜缺血再灌注损伤中发挥重要作用。     

血管内皮生长因子在视网膜缺血再灌注损伤中的表达

目的了解VEGFmRNA在大鼠视网膜缺血再灌注损伤中的表达及意义。方法建立大鼠视网膜缺血再灌注模型，以原位杂交法检测VEGFmRNA在大鼠视网膜中的表达，进行统计学处理。结果VEGFmRNA大鼠视网膜缺血再灌注12小时开始表达，第48小时达到最高，以后逐渐减弱。结论VEGFmRNA在大鼠视网膜缺血再注灌注损伤中起重要作用。     

高眼压缺血-再灌注中脑组织c-fos的表达及神经营养因子对其表达的影响

目的 观察视网膜缺血再灌注损伤过程中脑组织中c-fos的变化及神经营养因子对c-fos表达的影响，探讨c-fos在脑组织不同部位的改变及可能作用机制，进而为临床实践提供依据。方法 建立眼缺血再灌注损伤动物模型，分为对照组、实验组（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组）。实验Ⅰ组为缺血组（Ⅰ组），实验Ⅱ组为缺血2h＋再灌注组（I／R组），实验Ⅲ组在缺血再灌注前于右侧侧脑室注射神经营养因子（神经营养因子＋I／R组）。采用HE常规染色切片光镜下观察大鼠高眼压脑外侧膝状体、嘴侧丘、视皮质结构神经细胞变化，采用免疫组织化学染色分别测定各组大鼠中脑组织以上三个部位c-fos的变化。结果 （1）脑组织不同部位（外侧膝状体、嘴侧丘、视皮质）中c-fos在对照组、缺血组、缺血再灌注组间无统计学差异（P＞0.05）。（2）在再灌注1d组脑组织不同部位的c-fos与缺血再灌注组有显著性统计学差异（P＜0．01），其中在外侧膝状体中有明显改变。（3）在再灌注1d组与再灌注2d组间两者存在统计学差异。（4）在再灌注后5d组与2d组间c-fos无统计学差异（P＞0．05）。（5）在注射神经营养因子的实验Ⅲ组，脑组织中不同部位的c-fos与对照组无统计学差异。结论 （1）c-fos在脑外侧膝状体、嘴侧丘、视皮质参与损伤的作用。（2）在外侧膝状体中c-fos的变化在中枢调节作用中起着中介作用，c-fos可能参与引起脑组织改变。（3）神经营养因子能明显减轻损伤反应。     

重组人促红细胞生成素对急性高眼压兔视网膜谷氨酸表达的影响

目的探讨全身应用重组人促红细胞生成素（rhEPO）对急性高眼压兔眼视网膜谷氨酸表达的影响。方法采用日本大耳白兔54只,其中6只兔设为正常对照组。其余48只兔采用生理盐水前房灌注加压法建立急性高眼压模型,其中24只兔皮下注射rhEPO为EPO组,另外24只兔为模型组。分别于造模后第1、3、7、14天免疫组织化学法观察视网膜谷氨酸的表达。结果正常组视网膜组织无谷氨酸表达。模型组兔眼视网膜出现谷氨酸阳性表达细胞,各观察时间点EPO组兔眼视网膜谷氨酸阳性表达细胞数较模型组减少,差异均有统计学意义（P〈0.01）。实验第14天,模型组视网膜谷氨酸阳性表达细胞数为（3.3±1.1）个/高倍视野,EPO组为（0.3±0.2）个/高倍视野,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论rhEPO可以下调兔眼急性高眼压引起的视网膜谷氨酸高表达,可能与rhEPO保护视网膜神经功能损害有关。     

视网膜缺血再灌注损伤的机制及bFGF对其干预作用

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(basic fibric growth factor;bFGF)在大鼠视网膜缺血再灌注损伤(retina ischemi—a/reperfusion injury;RIRI)中治疗作用及机制。方法采用升高眼内压的方法建立大鼠视网膜缺血-再灌注模型,并将48只大鼠随机分为正常组、缺血组、治疗组。在再灌注后1、6、12、24、72h时段分别应用末端脱氧核酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记法(TUNEL)检测视网膜组织中凋亡细胞的表达,采用过氧化物酶标记的链酶卵白素(streptavidin perox—idase,SP)免疫组化方法检测caspase-3的表达,使用原子吸收光度计测定细胞内钙离子的变化。结果在大鼠RIRI中,缺血组凋亡细胞在再灌注6h组开始出现,以后时段依次递增,至24h达到高峰,于72h已无明显表达。Caspase-3表达改变与凋亡细胞表达相似。钙离子于再灌注后1h开始升高,至24h达到高峰,72h出现下降。而在bFGF治疗组各观察指标变化规律基本同上,但各指标与缺血组相比较均下降,于再灌注6、12、24h时段两者差别具有统计学意义。结论细胞凋亡可能在视网膜缺血再灌注损伤中起到重要作用,bFGF可通过对细胞内钙离子、自由基以及凋亡蛋白表达的调控而达到对细胞凋亡的抑制,并进而达到对视网膜缺血再灌注损伤的治疗作用。     

Activation of the aldosterone/mineralocorticoid receptor system and protective effects of mineralocorticoid receptor antagonism in retinal ischemia-reperfusion injury

The purpose of this project was to investigate the effects of the mineralocorticoid receptor antagonist against retinal ischemia-reperfusion injury and identify the aldosterone/mineralocorticoid receptor (MR) system in the rat retina. Retinal ischemia was induced by increasing intraocular pressure to 130?mmHg. Rats were treated with the angiotensin II type 1 receptor (AT1-R) antagonist (candesartan), MR antagonist (spironolactone), or aldosterone. Retinal damage was evaluated at 7 days after the ischemia by measuring the retinal thickness and the number of retinal ganglion cells. Pretreatment with candesartan, spironolactone, or candesartan and spironolactone significantly inhibited retinal ischemic injury. However, there was no protective effect against retinal ischemia-reperfusion injury provided by the combined aldosterone with candesartan treatment. Additionally, pretreatment with aldosterone alone also did not provide any neuroprotective effects against retinal ischemia-reperfusion injury. When rats were treated via local administration of aldosterone in the absence of ischemia, the number of retinal ganglion cells decreased while the retinal thickness remained unchanged. The present findings demonstrated the existence of a local aldosterone/MR system in the retina. Our results also demonstrated that an MR antagonist can attenuate subsequent ischemic damage in the rat retina.     

苯甲酸雌二醇对大鼠RIRI后Bcl-2和Bax表达的影响

目的：探讨外源性雌激素对大鼠视网膜缺血再灌注损伤的保护作用机制及对Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。 方法：雄性SD大鼠72只随机分为正常组（N,n=8）,单纯缺血再灌注组（IR,n=32）,苯甲酸雌二醇处理组(E₂+IR,n=32)。其中后两组又分为再灌注后6,24,48和72h组（每组8只）。通过前房灌注加压法建立大鼠视网膜缺血再灌注模型。常规HE染色观察视网膜组织形态变化,免疫组织化学方法检测Bcl-2和Bax蛋白的表达。 结果：E2+IR组视网膜组织损害程度在各时间点较IR组好转。IR组Bax蛋白在6h时已经开始表达,24h达高峰,48h表达开始下降,72h仍有部分表达;而E₂+IR组Bax蛋白的表达在各时间点上较IR组明显下调（P<0.01）;IR组Bcl-2蛋白的表达在再灌注6h时表达量最多,随时间延续表达量逐渐减少;Bcl-2蛋白的表达在各时间点上较IR组明显上调（P<0.01）。 结论：缺血再灌注损伤损害了视网膜组织结构。Bcl-2和Bax参与了视网膜缺血再灌注损伤的调控,苯甲酸雌二醇可上调Bcl-2的表达,下调Bax的表达,保护视网膜组织。     

川芎嗪对大鼠缺血再灌注视网膜SOD，MDA和NO水平及细胞凋亡的影响

目的 观察川芎嗪对大鼠视网膜缺血再灌注后视网超氧化物歧化酶（SOD）,丙二醛（MDA）,一氧化氮（NO）水平及细胞凋亡的影响。方法 采用大鼠视网膜压力缺血再灌注模型,分光光度法测定SOD,MDA和NO,琼脂糖凝胶电泳分析DNA断裂。结果 川芎嗪能显著对抗视膜膜缺血再灌注后视网膜SOD水平的下降及MDA和NO水平的升高;同时能阻断缺血再灌注12h后细胞DNSA凋亡样断裂。结论 川芎嗪可能通过抑制自由基的产生和提高抗氧化能力来对抗大鼠视网缺血再灌注诱导的细胞凋亡。