人视网膜色素上皮细胞NF-кB的表达

目的探讨核因子闎(NF-кB)在体外培养的人视网膜色素上皮(human retinal pigment epithelium,hRPE)细胞中的基础表达以及吡咯二硫代氨基甲酸乙酯(pyrollidi ne dithiocarbamate,PDTC)、IL-1β对NF-кB表达的影响. 方法体外培养的hRPE细胞经同步化后分2组分别加药:(1)无PDTC组:分别加入IL-1β、生理盐水(用于检测NF-кB在hRRE中的基础表达);(2)PDTC组:分别加入IL-1β、生理盐水(用于检测NF-кB在PDTC预处理后hRPE中的表达).免疫荧光抗体染色、流式细胞计数法(flow cytometry, FCM)测定上述2组标本中hRPE的NF-кB的表达率. 结果 NF-кB在hRPE中的基础表达率为8.05 %,IL-1β作用后表达率升高到30.26%; hRPE细胞经PDTC预处理后,NF-кB的表达率下降为3.74%,加入IL-1(10 υg·L-1)作用后表达率为3.66%. 结论 IL-1β可以显著提高NF-кB在hRPE细胞中的表达;PDTC可以显著降低体外培养的hRPE中的NF-кB表达率,PDTC亦可显著抑制由IL-1β诱导的NF-кB的活化过程.     

人视网膜色素上皮细胞NF-κB的表达

目的探讨核因子κB(NFκB)在体外培养的人视网膜色素上皮(human retinal pigment epithelium,hRPE)细胞中的基础表达以及吡咯二硫代氨基甲酸乙酯(pyrolli dinedi thio carbamate,PDTC)、IL1β对NFκB表达的影响。方法体外培养的hRPE细胞经同步化后分2组分别加药:(1)无PDTC组:分别加入IL1β、生理盐水(用于检测NFκB在hRPE中的基础表达);(2)PDTC组:分别加入IL1β、生理盐水(用于检测NFκB在PDTC预处理后hRPE中的表达)。免疫荧光抗体染色、流式细胞计数法(flow cyto metry,FCM)测定上述2组标本中hRPE的NFκB的表达率。结果NFκB在hRPE中的基础表达率为8.05%,IL1β作用后表达率升高到30.26%;hRPE细胞经PDTC预处理后,NFκB的表达率下降为3.74%,加入IL1β(10μg·L-1)作用后表达率为3.66%.结论IL1β可以显著提高NFκB在hRPE细胞中的表达;PDTC可以显著降低体外培养的hRPE中的NFκB表达率,PDTC亦可显著抑制由IL1β诱导的NFκB的活化过程。     

核因子κB对大鼠视网膜血小板源性生长因子调控的研究

目的探讨核因子κB（NF—κB）是否参与调控白细胞介素1β（IL-1β）诱导大鼠视网膜组织中血小板源性生长因子A（PDGF—A）、PDGF—B的表达。方法128只SD大鼠随机分成4组,右眼为实验眼,左眼为正常对照眼。间隔1h行两次玻璃体腔注射,先后两次注射情况分别为：A组BSS＋BSS,B组BSS＋IL-1β,C组吡咯烷二硫氨基甲酸盐（PDTC）＋BSS,D组PDTC＋IL-1β。其中,PDTC为NF—κB的特异性抑制剂。注射后4和24h分别通过裂隙灯显微镜检查对大鼠眼内炎性反应进行临床观察、评分,并用组织病理学、免疫组织化学方法及RT-PCR方法检测视网膜组织中NF-κB、PDGF—A、PDGF—B的表达及其变化情况。结果B组即注射IL-1β组,产生明显的眼内炎性反应,注射后4h左右达高峰,而D组即PDTC预处理组,炎性反应明显减轻;D组中炎性细胞的表达以及NF-κB的活化均明显低于B组,PDGF—A、PDGF-B蛋白及mRNA的表达也显著低于B组（P＜0．05）;B组及D组内PDGF—A的表达显著高于PDGF—B（P＜0．05）。结论NF—κB参与调控IL-1β诱导大鼠视网膜组织PDGF—A、PDGF—B的表达,PDGF—A、PDGF—B不同异构体在眼内炎性反应中表达不同。     

急性细菌性角膜炎角膜中HF-κB的活化及二硫代氨基甲酸吡咯烷的保护作用

目的探讨核转录因子-kB（NF—κB）及细胞间粘附分子-1（ICAM—1）在急性细菌性角膜炎大鼠角膜中的表达及二硫代氨基甲酸吡咯烷（PDTC）对两者表达的影响。方法用绿脓杆菌脂多糖（LPS）建立急性细菌性角膜炎大鼠模型，模型制作前30min将生理盐水和PDTC分别注射于大鼠球结膜下（分别为炎症组;PDTC预处理组），在模型制作后0．5h、1h、3h、6h、12h、24h、及72h时，分别用裂隙灯显微镜观察大鼠眼部表现并给予评分；免疫组织化学法检测大鼠角膜组织中NF-κB的活化情况；逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测大鼠角膜组织内ICAM-1 mRNAR的表达。结果应用PDTC预处理后，PDTC预处理组大鼠的角膜炎症状、角膜组织的损害均较炎症组明显减轻；ICAM—1 mRNA的表达也较炎症组明显降低，免疫组组织化学染色显示PDTC预处理组的NF-κB阳性细胞数明显少于炎症组。结论NF-κB及其诱导的ICAM—1在急性细菌性角膜炎的发病过程中发挥重要作用；PDTC可有效减轻角膜炎症，此作用可能与其抑制NF-κB活化，进而减少细胞因子产生有关。     

吡咯烷二硫代氨基甲酸酯对TGF-β2诱导人晶状体上皮细胞EMT的抑制作用

目的：探究吡咯脘二硫代氨基甲酸酯(PDTC)对转化生长因子-beta2(TGF-β2)诱导人晶状体上皮细胞(LECs)上皮-间充质转化(EMT)的逆转机制。

方法：TGF-β2诱导人晶状体上皮细胞EMT,并给予不同浓度PDTC处理TGF-β2诱导的LECs。CCK-8、划痕试验检测细胞增殖与迁移,Western Blot检测EMT标志物E-cadherin、α-SMA和NF-κB信号传导通路相关蛋白表达,以及凋亡相关蛋白BAX、BCL-2、Caspase-3、细胞周期蛋白D₁的表达。

结果：TGF-β2处理组细胞增殖和迁移活力明显高于未添加TGF-β2的实验组; E-cadherin表达下调,α-SMA表达上调。在TGF-β2的作用下NF-κB p65和磷酸化的NF-κB p65表达增加(P<0.05)且在TGF-β2 10 ng/mL刺激浓度时LECs表现出较强的增殖活力和迁移能力。PDTC逆转EMT和诱导细胞凋亡的机制研究表明,PDTC干预处理后细胞活力和迁移能力都显著降低,PDTC抑制IκB的磷酸化进而抑制NF-κB核移位,NF-κB信号通路中NF-κBp65/p-NF-κB p65、Iκκ-α/p-Iκκ-α表达下调(P<0.05),诱导促凋亡蛋白BAX/Caspase-3表达上调、抑凋亡蛋白BCL-2、细胞周期蛋白Cyclin D₁表达下调,NF-κB/IκB mRNA表达下调,凋亡相关mRNA BAX表达上调BCL-2表达下调。

结论：PDTC可显著逆转由TGF-β2诱导的LECs细胞EMT过程,可能与抑制NF-κB信号通路活化使NF-κB p65/IκB/Iκκ-α表达降低以及激活凋亡相关蛋白表达有关,PDTC可通过抑制NF-κB信号通路达到逆转EMT的进程并使异常增殖的细胞发生凋亡,这将为后发性白内障的治疗提供新的潜在的治疗药物。     

结合磁珠hRPE细胞受附加磁场作用后MCP-1和IL-8的表达

目的:观察磁场对结合磁珠培养的人视网膜色素上皮细胞(hRPE)单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和白细胞介素-8(IL-8)的表达,以模拟在原发性视网膜脱离形成早期,hRPE受到机械牵拉力后的一些细胞因子分泌的改变。方法:将培养的hRPE与黏附有胶原包被磁珠的培养hRPE分别置于一个附加磁场下,分别暴露一定时间后,用反转录—聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定hRPE,黏附包被胶原磁珠的hRPE,及其在细胞松弛素D处理后,各时间点MCP-1和IL-8的表达。结果:只受磁场作用,未结合磁珠的hRPE表达的MCP-1及IL-8mRNA水平较低,不随暴露于磁场时间的延长而增加;在磁场作用下,结合磁珠的hRPE表达MCP-1及IL-8的有两个峰值,一是在暴露后0.5h内开始升高,分别达到3.30±0.12和1.88±0.08(P=0.009),另一是在4h左右时再次升高。细胞松弛素D预处理后,两种因子的表达均下降,分别为2.36±0.27和1.64±0.08。结论:hRPE细胞结合磁珠模拟的机械牵拉模型,可诱导细胞表达MCP-1和IL-8增加。这种作用可能是细胞骨架被部分破坏,短时间地抑制了细胞表达。我们的结果提示这两种炎性细胞趋化因子可能参与了视网膜脱离起始阶段的炎症反应过程。     

姜黄素对IL-1β诱导的兔RPE细胞中核因子-κB相关炎性因子表达的抑制作用

背景 白细胞介素-1β(IL-1β)是增生性玻璃体视网膜病变(PVR)早期释放的重要炎性因子,研究证实姜黄素能抑制IL-1β诱导的兔视网膜色素上皮(RPE)细胞的增生,但其是否能够对PVR发挥抗炎作用尚不清楚. 目的 观察姜黄素对IL-1β诱导的兔RPE细胞移行的影响,探讨姜黄素对IL-1β诱导的RPE细胞中炎性因子表达的影响.方法 采用对数生长期原代培养的第4代兔RPE细胞进行实验,在无血清DMEM培养基中分别添加0、0.1、1.0和10.0 μg/L的IL-1β作用于细胞24 h,分别采用Western blot和逆转录PCR法检测细胞中环氧合酶-2(COX-2)蛋白和mRNA的表达以筛选IL-1β最佳质量浓度.将培养的RPE细胞分为IL-1β组和姜黄素+IL-1β组,分别在无血清培养基中添加1.0 μg/L IL-1β和1.0μg/L IL-1β联合10 μg/ml姜黄素作用于细胞24、48和72 h,仅用无血清培养基培养的细胞作为对照组.培养的细胞行苏木精-伊红染色,于光学显微镜下计算进入损伤区的细胞数,比较各组细胞的移行能力;分别采用Western blot法和逆转录PCR法检测各组RPE细胞中COX-2蛋白及其mRNA的相对表达量,采用Western blot法检测并比较各组细胞中核因子-κBp65(NF-κBp65)蛋白和核因子κB抑制蛋白-α(IκB-α)的相对表达量;采用免疫化学染色法检测NF-κBp65、IκB-α和COX-2在各组RPE细胞中的表达和定位. 结果 初分离的兔RPE细胞呈球形,细胞中可见大量黑色素颗粒;第4代细胞色素颗粒明显减少,接近融合的细胞形态为长梭形,呈拉网状分布.免疫细胞化学染色法结果显示,细胞角蛋白(AE1/AE3)在细胞质呈阳性表达.对照组在培养24、48和72 h移行的细胞数分别为(31.93±1.21)、(36.27±2.50)和(38.33±2.40)个,IL-1β组分别为(45.73±2.30)、(71.13±1.92)和(80.60±1.71)个,而姜黄素+IL-1β组分别为(13.13±2.20)、(14.93±1.10)和(12.60±1.51)个,各时间点IL-1β组细胞移行细胞数均明显高于对照组,而姜黄素+IL-1β组移行细胞数均明显低于对照组和IL-1β组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).IL-1β质量浓度为1.0 μg/L时,RPE细胞中COX-2蛋白及其mRNA的相对表达量达峰,以1.0 μg/L IL-1β的剂量进行后续实验.细胞培养后24、48和72 h,姜黄素+IL-1β组细胞中COX-2蛋白及其mRNA的相对表达量均明显低于IL-1β组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).IL-1β作用于细胞后48 h,细胞中NF-κBp65蛋白的相对表达量最高,与IL-1β组相比,各时间点姜黄素+IL-1β组细胞中NF-κBp65蛋白相对表达量降低,差异均有统计学意义(均P＜0.05).IL-1β组药物作用于细胞后48 h细胞中IκB-α降至最低,各时间点姜黄素+IL-1β组细胞中IκB-α值均明显高于IL-1β组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).免疫细胞染色结果显示,IL-1β组RPE细胞的细胞核及细胞质中NF-κBp65呈强阳性表达,对照组表达较弱,姜黄素+ IL-1β组细胞中NF-κBp65的表达强度较IL-1β组明显降低;与对照组相比,IL-1β组细胞的细胞质中IκB-α表达强度明显减弱,而COX-2表达明显增强;与IL-1β组比较,姜黄素+IL-1β组细胞中IκB-α表达明显增强,而COX-2表达明显减弱.结论 姜黄素可抑制IL-1β引起的兔RPE细胞的移行,IL-1β通过激活NF-κB信号通路刺激细胞中COX-2的表达,姜黄素可通过阻断这一途径而抑制炎性因子的表达,从而发挥抗炎作用.     

重组胸腺素β4调节NF-κB表达促进兔角膜碱烧伤后修复

目的:探讨重组胸腺素β4(Thymosin β4,Tβ4)对角膜碱烧伤后角膜核转录因子κB(nuclear factor κB,NF-κB)表达的影响和促进角膜愈合的观察。方法:用1mol/LNaOH浸透的6mm直径圆滤纸片贴于兔角膜中央30s,建立兔角膜碱烧伤模型。动物随机分为实验组和对照组,实验组给予低中高剂量(0.1,1,10μg/50μL)Tβ4,对照组给予PBS(阴性对照组)和rh-EGF(阳性对照组)皆2次/d滴眼。烧伤后1,3,7,14d肉眼观察角膜烧伤面积的变化,照相、统计愈合率;免疫组化染色检测NF-κB和IL-1β表达;取烧伤区角膜组织匀浆液提取细胞核蛋白,用ELISA检测NF-κB的p65亚基表达水平。结果:角膜碱烧伤后Tβ4用药组角膜愈合率最高达到33.8%,相应阴性对照组为22.8%,Tβ4用药组显著高于对照组(P<0.01),其中中剂量Tβ4组愈合率高于其他剂量组;Tβ4用药组NF-κB免疫组化染色积分吸光度明显低于对照组(P<0.05),ELISA检测NF-κB的p65亚基,在Tβ4用药组中表达最少(P<0.01),IL-1β免疫组化染色阳性,但实验组和对照组差异无统计学意义。结论:重组Tβ4促进角膜碱烧伤修复,其机制可能与下调NF-κB在细胞核内的表达相关。     

NF-κB活性对TNF-α调节小梁细胞表达MMP-3和MMP-9的影响

目的探讨核因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）是否参与肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）调节人眼小梁细胞（human trabecular cells，HTCs）表达基质金属蛋白酶-3（matrix metalloproteinases-3，MMP-3）和基质 金属蛋白酶-9（matrixmetalloproteinases-9，MMP-9）的过程。方法采用RT-PCR法和酶谱分析法（zymography）检测体外培养的人眼小梁细胞经0ng／ml（对照组）、lng／ml、10ng／ml、25ng/ml TNF-α处理24h后，细胞表达MMP-3、MMP-9的量；运用NF-κB的特异抑制剂二硫氨基甲酸吡啶（pyrrolidine dithocarba-mate，PDTC）抑制NF-κB的活化，观察TNF-α对体外培养的HTCsMMP-3，MMP-9表达影响的改变。结果运用RT-PCR法和酶谱分析法研究均发现经浓度为1ng／ml、10ng／ml、25ng／ml的TNF-α处理的细胞在mRNA和上清液中活性蛋白水平均能增加MMP-3、MMP-9的表达，各组mRNA／β-actin吸光度比值和条带酶解量与对照组相比差异均有显著性（P〈0．05）。提前30min加入PDTC，MMP-3、MMP-9的表达量分别较未加入PDTC组表达量明显减少．差异有显著性（P〈0．05）。结论TNF-α可上调MMP-3及MMP-9的表达。PDTC能够下调TNF-α对小梁细胞MMP-3及MMP-9的表达，因此推测NF-κB可能参与MMP-3和MMP-9转录的启动．     

核转录因子-κB及细胞间粘附分子-1在大鼠视网膜缺血再灌注损伤中的表达及吡咯醛二硫氨基甲酸酯对两者表达的影响

目的 探讨核转录因子-κB(NF-κB)及细胞间粘附分子(ICAM)-1在大鼠视网膜缺血再灌注损伤中的表达及吡咯醛二硫氨基甲酸酯（PDTC）对两者表达的影响。 方法 建立大鼠视网膜缺血再灌注模型，60只SD大鼠随机分为缺血再灌注组和缺血再灌注+PDTC治疗组，每组30只大鼠。每只大鼠结扎左侧颈总动脉，右侧未作结扎作为对照。每组按再灌注后不同时间段再分为1、6、12、24、48、72 h组，每组5只大鼠。以原位杂交法检测视网膜中NF-κB和ICAM-1的表达，每只大鼠在1、6、12、24、 48、72 h相应时间段行断颈处死前均行视网膜电图（ERG）检测，并分别计算出左眼或右眼E RG a、b波波幅的比值，得出ERG a、b波的相对恢复率。 结果 缺血再灌注组在再灌注后6 h开始检测到NF-κB和ICAM-1的表达，在24 h表达最强，以后逐渐减弱 。缺血再灌注+PDTC组在再灌注后6 h未检测到NF-κB和ICAM-1的表达，在12 h有NF-κB 和ICAM-1的表达，24 h表达最强，但低于缺血再灌注组。对照组未检测到NF-κB和ICAM-1的表达。缺血再灌注各组ERG a、b波波幅相对恢复率低于缺血再灌注+PDTC组(P＜0.01 )。缺血再灌注与缺血再灌注+PDTC组各时间段ERG a、b波波幅相对恢复率以再灌注后24 h最差（P＜0.01）。 结论 NF-κB及其诱导的ICAM-1在视网膜缺血再灌注损伤中发挥重要作用，PDTC可能通过抑制NF-κB的活性减轻视网膜缺血再灌注损伤。 （中华眼底病杂志，2004，20：175-178）     

Homeostasis of the retinal micro-environment: I. Magnesium,potassium and calcium distributions in the avian eye

The concentrations of Mg²⁺, K⁺ and Ca²⁺ in the intraocular fluids (IOFs) and blood plasma of chickens and pigeons were determined by atomic absorption spectrophotometry. The Mg²⁺ concentration in the IOFs of both species was greatest in the liquid vitreous adjacent to the retina followed by aqueous > blood plasma > plasma dialysate. In contrast the concentration of K⁺ in the IOFs of both chickens and pigeons was greater in the aqueous than in the liquid vitreous. The concentrations of Ca²⁺ in all IOF compartments of chicken eyes were virtually identical and were lower than that of blood plasma. The concentrations of Mg²⁺ in the IOFs of the chicken, especially in the liquid vitreous, was remarkably stable; experimentally lowering or raising the plasma Mg²⁺ concentration over a relatively wide range had little or no effect on the Mg²⁺ concentration in the IOFs of these animals. We can conclude that a high Mg²⁺ and low K⁺ concentration in the extracellular fluids of the retina is maintained in the avian eye, as in the mammalian eye, by active transport processes across the blood-retinal barrier systems. Because the avian retina is completely avascular, the site of these homeostatic transport processes must be the epithelium of the retinal choroid and/or the pecten. These findings support the concept that the contribution of the vitreous to the homeostasis of the retinal micro-environment is inversely related in vertebrates to the degree of retinal vascularization.     

Vergleich der Durchmesserreaktion retinaler Arterien und Venen auf Flickerlicht

ZusammenfassungZiel In dieser Studie soll die durch Flickerlicht verursachte Durchmesserreaktion retinaler Arterien und Venen hinsichtlich Ausmaß und zeitlichem Ablauf verglichen werden.Methoden In die klinische Studie wurden 26 gesunde Probanden einbezogen. Der Durchmesser der retinalen Gefäße jeweils eines Auges wurde kontinuierlich mittels eines Retinal vessel analyzer gemessen. Jede Untersuchung bestand aus 100 s Baseline sowie 5 Perioden von 20 s Flickerlichtstimulation, gefolgt von 80 s Beobachtung.Ergebnisse Unmittelbar nach Flickerlicht dilatierten die Arterien um 6,9±2,8% (MW±STD) und die Venen um 6,5±2,8% (Unterschied nicht signifikant). Der Quotient aus arterieller und venöser Dilatation (AVDQ) betrug 1,25±0,69 (Spannweite 0,2 bis 2,8). Es konnte keine signifikante Altersabhängigkeit der arteriellen bzw. venösen Dilatation oder des AVDQ nachgewiesen werden. Die arterielle Dilatation ging nach 25,9±10,8 s in eine leichte Konstriktion von –2,7±1,4% über. Im Gegensatz dazu waren die Venen zum Zeitpunkt des individuellen Konstriktionsmaximums noch um 0,5±1,3% dilatiert (p<0,001).Schlussfolgerungen Die flickerlichtinduzierte Durchmesserreaktion retinaler Arterien und Venen unterscheidet sich bei Gesunden nicht in ihrem mittleren dilatativen Maximum, aber in Form und zeitlichem Verlauf des Abklingens der Dilatation.Unterstützung durch: BMBF 13N7999.Vortrag gehalten auf der 101. Jahrestagung der DOG, Berlin, September 2003.     

Acute Multifocal Placoid Pigment Epitheliopathy Associated with Cavernous Sinus Thrombosis

Acute multifocal placoid pigment epitheliopathy (AMPPE) has been associated with disease of the central nervous system. In this case report, we discuss a patient presenting with AMPPE in the setting of a new central nervous system association: cavernous sinus thrombosis.     

Dual nonlinearities regulate contrast sensitivity in pattern discrimination tasks

Many current psychophysical models propose that visual processing in cortex is hierarchical, with nonlinearities sandwiched between linear stages of processing. In earlier publications, we proposed a model of this type to account for masking effects found with spatial frequency and orientation discriminations. Our model includes two nonlinear mechanisms that regulate contrast sensitivity in early cortical mechanisms. The first is a local within-pathway nonlinearity that accelerates at low contrasts but is compressive at high. The second is a pooled nonlinear gain control process that operates over a broad range of neurons with different tuning characteristics. Here, we test predictions of the model for spatial frequency discriminations. The model predicts that at low contrasts, adding a grating mask oriented parallel to test gratings will improve discrimination performance via operation of the within-pathway nonlinearity, analogous to the "dipper effect" found with contrast discriminations. Adding an orthogonally oriented mask is predicted to have no effect at low contrasts, where pooled gain control processes contribute little to performance. At high contrasts, the model predicts that performance will asymptote and become independent of contrast with either parallel or orthogonal masks. The results confirm model predictions.