γ—干扰素对人角膜基质细胞I,Ⅱ型胶原合成的抑制作用

初步探讨γ－ＩＦＮ如何抑制人角膜基质细胞Ｉ，Ⅲ型胶原的合成，用体外培养的２－３代人角膜基质细胞在亚汇合状态下分别加入０．５，５，５０，５００和５０００Ｕ／ｍｌ的γ－ＩＦＮ，共培养４８小时，５００Ｕ／ｍｌ，共培养１２，２４，４８小时，地塞米松作为对照，应用Ｉ，Ⅲ型胶原和纤维连接蛋白（Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ，ＦＮ）ｃＤＮＡ探针行原位杂交检测ｍＲＮＡ的表达。结果表明，Ｉ，Ⅲ型胶原ｍＲＮＡ的表达与γ－ＩＦ     

γ-干扰素对人角膜基质细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的抑制作用

初步探讨γ－ＩＦＮ如何抑制人角膜基质细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成。用体外培养的２—３代人角膜基质细胞在亚汇合状态下分别加入０．５、５、５０、５００和５０００Ｕ／ｍｌ的γ－ＩＦＮ，共培养４８小时；５００Ｕ／ｍｌ共培养１２、２４、４８小时。地塞米松作为对照。应用Ⅰ、Ⅲ型胶原和纤维连接蛋白（Ｆｉ－ｂｒｏｎｅｃｔｉｎ，ＦＮ）ｃＤＮＡ探针行原位杂交检测ｍＲＮＡ的表达。结果表明，Ⅰ、Ⅲ型胶原ｍＲＮＡ的表达与γ－ＩＦＮ的剂量成反比，其表达从～±；相同剂量下，在７２小时Ⅰ、Ⅲ型胶原ｍＲＮＡ的表达量最低。ＦＮｍＲＮＡ的表达不受γ－ＩＦＮ的影响。地塞米松对其表达无任何影响。提示：γ－ＩＦＮ通过抑制Ⅰ、Ⅲ型胶原ｍＲＮＡ的转录而减少胶原的合成，这种抑制作用具有相对特异性。γ－ＩＦＮ的这种特异性抑制作用可能成为减轻角膜创伤后角膜混浊的新方法     

核因子кB在人角膜基质细胞中的表达

目的 探讨核因子кＢ（ＮＦ－кＢ）在人角膜基质成纤维细胞中的基础表达及激活情况。方法 取体外培养的第２或３代人角膜基质细胞,同步化后分为２组：无血清的ＤＭＥＭ液培养的不加药组;含质量浓度为１０μｇ／ｍｌ脂多糖的ＤＭＥＭ液培养６小时的加药组。均采用免疫荧光抗体染色、流式细胞仪计数法和核蛋白提取物凝胶迁移率法检测。结果 流式细胞计数法示,角膜基质细胞内ＮＦ－кＢ的基础表达率为９．４％,脂多糖作用后升高     

玻璃体内注射色素上皮源性因子对大鼠早期糖尿病视网膜病变的保护作用

目的　观察玻璃体内注射色素上皮源性因子（ｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ-ｄｅｒｉｖｅｄｆａｃｔｏｒ,ＰＥＤＦ）对ＳＤ糖尿病大鼠视网膜ＰＥＤＦ、血管内皮生长因子（ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＶＥＧＦ）、炎性相关因子细胞间黏附分子-１（ｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒｃｅｌｌａｄｈｅｓｉｏｎｍｏｌｅ-ｃｕｌｅ-１,ＩＣＡＭ-１）和单核细胞趋化蛋白-１（ｍｏｎｏｃｙｔｅｃｈｅｍｏｔａｃｔｉｃｐｒｏｔｅｉｎ-１,ＭＣＰ-１）以及细胞通透性相关因子紧密连接蛋白-１（ｚｏｎｕ-ｌａｏｃｃｌｕｄｅｎｓ-１,ＺＯ-１）和蛋白激酶Ｂ（ｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅＢ,ＰＫＢ,又称Ａｋｔ）表达的影响,探讨ＰＥＤＦ对早期糖尿病视网膜病变的保护作用。方法　选取６～８周龄ＳＤ大鼠６０只,随机分为４组:正常对照组（ＣＯＮ组）、糖尿病组（ＤＭ组）、糖尿病生理盐水注射组（ＤＭ＋ＮＳ组）和糖尿病ＰＥＤＦ注射组（ＤＭ＋ＰＥＤＦ组）。链脲佐菌素诱导建立糖尿病模型后第１周、２周、３周时,ＤＭ＋ＰＥＤＦ组大鼠玻璃体内注射ＰＥＤＦ,而ＤＭ＋ＮＳ组注射同样体积的生理盐水。第４周时处死大鼠,摘出眼球,进行视网膜组织病理学及电镜观察。并采用免疫组织化学方法检测视网膜ＰＥＤＦ、ＶＥＧＦ、ＩＣＡＭ-１、ＭＣＰ-１以及ＺＯ-１、Ａｋｔ的表达情况。结果　糖尿病大鼠均造模成功。４周糖尿病病程尚不能导致明显的视网膜新生血管形成。在透射电镜下,ＤＭ组大鼠视网膜可见神经节细胞水肿,线粒体肿胀变大,基质肿胀明显,可见大部分或全部的嵴消失,部分双侧膜融合,粗面内质网扩张,而玻璃体内ＰＥＤＦ注射可以明显地改善这一病理改变。ＤＭ组大鼠ＰＥＤＦ主要表达于视网膜神经纤维层、神经节细胞层以及内丛状层、光感受器基质以及色素上皮层、脉络膜等部位;ＶＥＧＦ主要表达于神经节细胞层,ＩＣＡＭ-１主要表达在光感受器层,ＭＣＰ-１主要表达在视网膜内层细胞,包括节细胞层和内核层,ＺＯ-１蛋白主要表达于内核层的细胞以及神经节细胞,Ａｋｔ主要表达于内丛状层以及脉络膜的细胞浆中。同ＣＯＮ组相比,ＤＭ组、ＤＭ＋ＮＳ组视网膜中ＰＥＤＦ、ＶＥＧＦ表达差异均无统计学意义（均为Ｐ＞０．０５）,而ＩＣＡＭ-１、ＭＣＰ-１表达增加,ＺＯ-１、Ａｋｔ表达减少,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。ＤＭ＋ＰＥＤＦ组大鼠视网膜中ＰＥＤＦ、ＶＥＧＦ的表达较ＤＭ组和ＤＭ＋ＮＳ组差异均无统计学意义（均为Ｐ＞０．０５）,但ＩＣＡＭ-１、ＭＣＰ-１表达减少,ＺＯ-１、Ａｋｔ表达增多,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。结论　ＰＥＤＦ可以明显地改善糖尿病视网膜病变早期视网膜神经节细胞的损害,通过减少炎性因子和增加细胞连接蛋白而减轻血-视网膜屏障的破坏,从而对早期糖尿病视网膜病变起一定的防治作用。     

小儿激素敏感性肾病综合征辅助性T细胞亚群研究

目的 进一步探讨微小病变型肾病综合征（ＭＣＮＳ）的发病有否ＴＨ－１／ＴＨ－２反应失衡。方法 通过逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法，检测１１激素敏感性肾病综合征患儿外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）淋巴因子基因表达和蛋白产生。结果 与正常对照组相比，ＮＳ患儿ＩＬ－１０、ＩＬ－４基因表达和蛋白产生明显增高，ＩＬ－２、ＩＬ－６降低，干扰素（ＩＦＮ）－γ和ＩＬ－５无明显差异。结论 激     

敲除TLR2基因对同种异体小鼠角膜移植排斥反应的影响

目的　探讨敲除Ｔｏｌｌ样受体２（ｔｏｌｌ-ｌｉｋｅｒｅｃｅｐｔｏｒ２,ＴＬＲ２）基因后是否抑制同种异体小鼠角膜排斥反应的发生。方法　以ＢＡＬＢ／ｃ为供体,各取３０只Ｃ５７ＢＬ／６和同背景ＴＬＲ２基因敲除鼠为受体行右眼角膜移植术,设为野生组（ＷＴ）和基因敲除组（ＫＯ）;取１９只Ｃ５７ＢＬ／６行右眼自体角膜移植术,为自体组（ＩＳＯ）;各取９只Ｃ５７ＢＬ／６和ＴＬＲ２基因敲除鼠分别设为野生对照组（ＷＴｃｏｎｔｒｏｌ）和基因敲除对照组（ＫＯｃｏｎｔｒｏｌ）。术后每周两次观察植片并记录免疫排斥的发生时间;术后１４ｄ,收集术眼同侧颈部淋巴结,行流式细胞术分析ＣＤ４＋Ｔ细胞百分比;收集术眼角膜,行免疫组织化学染色和实时荧光定量ＰＣＲ检测角膜干扰素（ｉｎｔｅｒ-ｆｅｒｏｎ,ＩＦＮ）-γ、ＴＬＲ２和ＭｙＤ８８的表达。结果　ＷＴ组和ＫＯ组小鼠角膜移植术后中位生存时间ＫＯ组（３５．０±３．８）ｄ长于ＷＴ组（２１．０±１．５）ｄ（Ｐ＜０．０５）。流式细胞术分析显示,ＷＴ组同侧颈部淋巴结ＣＤ４＋Ｔ细胞百分比较ＷＴｃｏｎｔｒｏｌ组明显增高（Ｐ＜０．０５）,而ＩＳＯ和ＫＯ组相对于其对应的ｃｏｎｔｒｏｌ组（ＷＴ／ＫＯｃｏｎｔｒｏｌ）差异均无统计学意义（均为Ｐ＞０．０５）;免疫组织化学结果显示,ＩＳＯ和ＫＯ组间角膜ＩＦＮ-γ和ＭｙＤ８８分子表达无差异,但两者均低于ＷＴ组。ＫＯ组角膜几乎不表达ＴＬＲ２分子,ＩＳＯ组有微量表达,ＷＴ组表达明显增高;ＰＣＲ检测显示,ＩＳＯ和ＫＯ组角膜ＩＦＮ-γ和ＴＬＲ２ｍＲＮＡ相对表达量差异均无统计学意义（均为Ｐ＞０．０５）,但两者均低于ＷＴ组（均为Ｐ＜０．０５）;ＫＯ组角膜ＭｙＤ８８ｍＲＮＡ相对表达量比ＩＳＯ组高（Ｐ＜０．０５）,但两者均低于ＷＴ组（均为Ｐ＜０．０５）。结论　敲除ＴＬＲ２基因可以一定程度抑制同种异体小鼠角膜排斥反应的发生。     

羊膜对激光角膜切除术后TGF—β1表达调控的初步研究

目的 探讨羊膜对激光角膜光学切除术（Ｐｈｏｔｏｒｅｆｒａｃｔｉｖｅ ｋｅｒａｔｅｃｔｏｍｙ ＰＲＫ）后角膜组织ＴＧＦ－β１表达的影响。方法 对６只新西兰白兔双眼行ＰＲＫ,术后１眼立即行角膜表面羊膜移植术,只眼作为对照。术后４周用原位杂交方法检测角膜上皮和基质ＴＧＦ－β１ｍＲＮＡ的表达。结果 ＰＲＫ后４周对照组角膜上皮和基质有较浓度的ＴＧＦ－β１ｍＲＮＡ表达,羊膜移植组角膜上皮和基质亦有ＴＧＦ－β１     

重组γ-干扰素作用人Tenons囊成纤维细胞体外研究

目的体外研究人重组γ－干扰素对人Ｔｅｎｏｎｓ囊成纤维细胞作用。方法以人Ｔｅｎｏｎｓ囊成纤维细胞作为实验对象,分别加入０．１～１０~６Ｕ／ｍｌ人重组γ－干扰素（ＩＦＮ－γ）、０．００１～１０ｍｇ／Ｌ丝裂霉素（ＭＭＣ）、０．１～１０３ｍｇ／Ｌ ５－氟尿嘧啶（５－Ｆｕ）孵育４８ｈ,然后以ＭＴＴ法进行检测。结果高浓度和低浓度ＩＦＮ－γ实验组ＯＤ值较对照组升高（Ｐ＜０．０５）,中间浓度 ＩＦＮ－γ实验组 ＯＤ值较对照组低（Ｐ＜０． ０５）。 ＩＦＮ－γ的抑制率较 ＭＭＣ及５－Ｆｕ低（Ｐ＜０． ００５）。结论 ＩＦＮ－γ对体外培养的人Ｔｅｎｏｎｓ囊成纤维细胞具有促增殖及抑制增殖双向调控作用,其抗增殖作用较ＭＭＣ及５－Ｆｕ弱。     

后部葡萄膜炎细胞间粘附分子—1的表达

目的 研究细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）在葡萄膜炎免疫反应中的作用。方法 应用免疫组织化学染色检查２０只正常眼和４３例葡萄膜炎眼球摘除眼的脉络膜和视网膜组织中的ＩＣＡＭ－１的表达。结果 正常眼的脉络膜和视网膜组织没有ＩＣＡＭ－１的阳性染色,葡萄膜炎眼中有增高表达（Ｐ〈０．０１）,外源性和内源性葡萄膜炎眼组间ＩＣＡＭ－１表达统计学上无显著差异（Ｐ〉０．０５）。结论 葡萄膜炎发病过程中,ＩＣＡＭ－     

LFA－1和ICAM－1在由HSV－1感染角膜所致的疱疹性疾病中的作用

ＬＦＡ－１和ＩＣＡＭ－１在由ＨＳＶ－１感染角膜所致的疱疹性疾病中的作用［英］／ＤｅｎｎｉｓＲＦ…∥ＣｕｒｒＥｙｅＲｅｓ，－１９９５，１４（１）．－５５～６２用单纯疙疹病毒Ⅰ型（ＨＳＶ－１）感染免疫功能正常的小鼠角膜，很快造成角膜上皮病变，２周后发展成...