植入前遗传学检测第2次活检后胚胎移植结局分析

目的： 探讨胚胎植入前遗传学检测（preimplantation genetic testing,PGT）周期中首次活检诊断不明再行第2次活检的临床价值,及其对胚胎移植结局的影响。方法： 回顾性分析2015年9月—2021年5月南京医科大学第一附属医院临床生殖医学中心2 199个PGT周期中75个PGT周期的107枚胚胎首次活检遗传学诊断不明后,再行第2次活检检测后的临床结局。结果： 在75个周期中,共有107枚胚胎活检后首次遗传学诊断不明,其中96枚胚胎申请重新复苏活检,86枚胚胎第2次检测成功。基于高通量测序检测平台分析,获得可移植胚胎46枚（39枚整倍体胚胎,7枚嵌合体胚胎）。在27个复苏周期中,24枚囊胚存活并进入移植周期,二次活检的复苏存活率为88.89%（24/27）,临床妊娠率为50%（12/24）,活产率45.8%（11/24）,1例早期流产。结论： 对第1次活检遗传学诊断不明且无其他可移植胚胎的患者,第2次活检检测是可行的,并可获得一定的可移植胚胎和活产率。     

植入前遗传学筛查中卵裂期与囊胚期胚胎染色体异常的比较

目的 通过种植前遗传学筛查患者的胚胎和染色体结果分析,比较卵裂期与囊胚期胚胎染色体数目异常.方法 收集2015年1月1日至2017年4月30日西北妇女儿童医院生殖中心行种植前遗传学筛查(PGS)患者,胚胎培养至卵裂期和囊胚期活检,PGS检测采用array-CGH(BlueGnome 24SureV3),比较卵裂期与囊胚期胚胎染色体的结果.结果 PGS共活检348枚胚胎,其中卵裂期67例,囊胚期281例,囊胚期胚胎的整倍体率高于卵裂期胚胎(43.68% vs 14.75%,P<0.01),卵裂期胚胎中异常染色体的数目≥5条最为常见(42.31%),而囊胚中异常染色体数目为1条最为常见(53.79%).卵裂期胚胎中20,21,16,14号染色体发生率较高(>5.00%);8,4,12号染色体发生率较低(<3.00%).囊胚中22,16,19,7,1,性染色体,21,15号染色体发生率较高(>5.00%);10,17,12,3号染色体发生率较低(<3.00%).在染色体缺失异常中,20,16,22,1,21号染色体发生率较高(8.14%,6.98%,6.98%,6.59%,5.81%,均>5.50%);3号染色体缺失发生率低(0.78%).染色体重复异常中19,16,22,21,性染色体,7,15,13号染色体发生率较高(>5.50%);12号染色体缺失发生率最低(1.46%).结论 囊胚期胚胎的整倍体率高于卵裂期胚胎,卵裂期胚胎中异常染色体的数目≥5条最为常见,囊胚中异常染色体数目为1条最为常见.卵裂期胚胎中20,21,16,14号染色体发生率较高,而囊胚22,16,19,7,1,性染色体,21,15号染色体发生率较高.     

未见原核晚期卵裂胚胎染色体的微阵列-比较基因组杂交分析

目的观察体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗周期中未见原核(PN)晚期卵裂胚胎单个卵裂球染色体分子核型。方法取IVF-ET治疗中4枚未见PN晚期卵裂胚胎进行体外培养,在受精第3天行胚胎活检,对单个卵裂球行微阵列-比较基因组杂交(microarray-CGH)染色体分析。结果 4枚未见PN受精卵染色体均发生非整倍体变异。其中1枚胚胎性染色体为X染色体单体,3枚胚胎性染色体为XY正常二倍体。但4枚胚胎均存在常染色体变异。结论未见PN晚期卵裂胚胎染色体microarray CGH分析结果表明,其单个卵裂球全基因组呈非整倍性变异,未见PN晚期卵裂胚胎存在常染色体和性染色体变异风险。     

植入前遗传学检测后冻融胚胎移植周期妊娠结局的影响因素

目的：分析经植入前遗传学检测（preimplantation genetic testing,PGT）后,冻融胚胎移植（frozen-thawed embryo transfer,FET）周期时3种常见子宫内膜准备方案对妊娠结局的影响及相关影响因素,指导PGT患者的助孕治疗。方法：回顾性分析2017年1月—2022年1月于兰州大学第一医院行PGT助孕的195例患者共219个FET周期的临床资料及妊娠结局,包括非整倍体筛查检测（PGT for aneuploidies,PGT-A）周期、单基因疾病检测（PGT for monogenic,PGT-M）周期和染色体重排检测（PGT for structural rearrangements,PGT-SR）周期。按照内膜准备方案分为自然周期组（natural cycle,NC组,56个）、促性腺激素释放激素激动剂（gonadotropin releasing hormone agonist,GnRHa）联合激素替代疗法（hormone replacement therapy,HRT）周期组（GnRHa+HRT组,102个）及单纯HRT周期组（61个）。比较3组的一般临床资料及妊娠结局,并采用Logistic多因素回归分析活产的影响因素。结果：NC组、GnRHa+HRT组和HRT组均可达到较高的临床妊娠率（64.29%,80.39%,73.77%,P>0.05）和活产率（83.33%,85.37%,84.44%,P>0.05）。但3组采用的PGT方法差异有统计学意义（P=0.002）,NC组行PGT-SR的患者高于另两组（P<0.05）。且NC组异位妊娠率高于GnRHa+HRT组（P<0.05）。活产组与非活产组的体质量指数、获卵数、可移植胚胎数及优质囊胚数差异有统计学意义（P<0.05）,除上述4个指标外,将2组比较P<0.2的不良孕产史和总囊胚数一起纳入Logistic多因素回归分析,发现仅优质囊胚数对妊娠结局有影响,优质囊胚数>2个为PGT患者活产结局的保护因素（OR=0.480,P<0.05）。结论：3种FET内膜准备方案的临床妊娠率和活产率相似,但NC组异位妊娠率较高。应该注意体质量指数、获卵数、可移植胚胎数及优质囊胚数可能共同影响PGT患者的活产结局,尤其要关注优质囊胚数,以提高PGT患者的活产率。     

产前诊断中胎儿性染色体嵌合体的发生率及其妊娠结局

目的：分析妊娠中期产前诊断中胎儿性染色体嵌合体的发生率及其妊娠结局。方法：回顾性分析我院2016年1月-2017年12月10 341例羊水染色体核型分析的结果,进而分析35例性染色体嵌合体的临床结局。结果：妊娠中期通过羊水染色体核型分析的产前诊断病例中,性染色体嵌合体发生率为0.34%（35/10 341）,主要涉及3种嵌合类型：45,X/46,XX嵌合（17例）、45,X/46,XY嵌合（8例）和45,X与其他异常核型嵌合（10例）。在35例性染色体嵌合体中,产前诊断指征涉及无创提示性染色体数目异常、唐筛高风险、B型超声（B超）指标异常以及高龄,其终止妊娠率分别为86%（12/14）、83%（5/6）、75%（6/8）和29%（2/7）。结论：当产前诊断检出胎儿性染色体嵌合体时,建议结合染色体微阵列技术、荧光原位杂交检测技术、胎儿脐血核型检测以及B超等结果进行综合分析,从而为产前的遗传学咨询提供更加科学准确的信息和依据。     

冻融胚胎植入前遗传学筛查的研究

目的:对冻融胚胎进行植入前遗传学筛查和分析。方法:将2007~2009年冻存的42枚正常胚胎解冻,应用荧光原位杂交(FISH)技术对所有活检的卵裂球行18及X/Y染色体筛查,并分析胚胎染色体异常的影响因素。结果:活检成功率为92.8%,固定成功率为82.62%,杂交成功率为92.78%。正常受精胚胎中染色体异常率为35.90%,包括非整倍体、多倍体、单倍体和嵌合体等异常。随胚胎提供者年龄增长,Gn用量增加,非整倍体发生的几率也增加(P<0.05)。受精方式、超排方案和Gn使用天数与染色体异常的发生无关(均P>0.05)。结论:FISH是对胚胎进行特定染色体非整倍体筛查的一种行之有效的方法。胚胎解冻、高龄、Gn用量会影响非整倍体的发生。     

胚胎植入前遗传学筛查的临床应用

随着辅助生殖技术和遗传学分析技术的发展,胚胎植入前遗传学筛查应用于胚胎染色体数目异常（非整倍体）检测,以期改善体外受精-胚胎移植的妊娠结局。新方法、新技术不断出现并应用于胚胎植入前遗传学筛查中,如囊胚期活检、比较基因组杂交技术、微阵列技术、第二代测序技术等,显著增加了诊断准确性,减少误诊风险。同时,胚胎植入前遗传学筛查的广泛应用也面临许多挑战。综述该领域的应用进展和面临的挑战。     

高通量测序遗传学筛查对性染色体非整倍体患者的应用价值

目的探讨新一代高通量测序植入前遗传学筛查(NGS-PGS)对于性染色体非整倍体患者的应用价值。方法观察组采用新一代高通量测序(NGS)技术对8例性染色体非整倍体(SCA)患者的囊胚进行了全部23对染色体的筛查,取同期因反复流产行植入前遗传学筛查的21例患者作为对照组,比较两组患者的临床资料。结果两组女性患者的年龄、平均获卵数、MII率、受精率、卵裂率和可利用囊胚形成率间差异均无统计学意义(均P0. 05);两组患者囊胚的染色体非整倍体率间比较差异无统计学意义(37. 5%vs. 40. 6%; P0. 05)。在SCA患者检测的24个囊胚中,未发现性染色体异常,9个异常的囊胚均为常染色体的非整倍体。结论 SCA患者囊胚中性染色体异常比例很低,并不需要专门针对性染色体进行检测,但鉴于其较高的常染色体非整倍体发生率,仍有必要进行PGS,以减低流产率和防止出生缺陷。     

晚裂胚胎性染色体及18号染色体非整倍体分析

目的：分析晚裂胚胎性染色体及18号染色体数目异常情况。方法：应用荧光原位杂交技术检测晚裂胚胎X、Y及18号染色体的非整倍体情况,并与低评分的双原核（2PN）胚胎进行比较。结果：共收集85个胚胎,其中晚裂胚胎45个（不考虑形态学评分）,成功固定269个核;低形态学评分的2PN胚胎40个,成功固定243个核,用CEPX/Y、CEP18染色体探针对85个胚胎共512个核进行荧光原位杂交。晚裂胚胎组的染色体数目异常率为45.7%,其中性染色体异常率为34.5%,18号染色体异常率为38%;2PN胚胎组的染色体异常率为48.5%,其中性染色体异常率为32%,18号染色体异常率为39%。2组性染色体和18号染色体的异常率差异均无统计学意义。结论：晚裂胚胎性染色体及18号染色体数目有较高的异常发生率,与低形态学评分的2PN胚胎一样,均不适合宫腔内移植。     

胚胎培养液用于染色体筛查的初步研究

目的:对胚胎培养液筛查胚胎染色体进行初步探讨,为优质胚胎无创筛查体系提供数据和技术支持。方法:采集胚胎培养液86例和囊胚36例,其中56例为卵胞浆内单精子注射-胚胎移植(ICSI-ET)胚胎培养液,30例为体外受精-胚胎移植(IVF-ET)胚胎培养液。采用基因测序通用文库试剂盒对囊胚及胚胎培养液进行MALBAC单细胞全基因组扩增及文库构建,运用高通量测序平台进行测序,运用ChromGo~(TM)2.0数据分析平台检测染色体非整倍体及10M以上的片段缺失和(或)重复。结果:86例胚胎培养液中27例未检出染色体核型,其中前期收集36例标本,检出成功率41.7%;改进方法收集50例标本,检出成功率88.0%。对36例囊胚及其培养液染色体结果进行对比,IVF-ET 18例,染色体倍性一致率38.9%,非整倍体假阳性率50.0%,假阴性率0.0%;ICSI-ET 18例,染色体倍性一致率77.8%,非整倍体的假阳性率16.7%,假阴性率5.6%。结论:ICSI-ET受精方式在胚胎培养液用于胚胎染色体的筛查中优于IVF-ET;建立完善的培养液收集流程利于胚胎染色体检测。     

冻融胚胎移植周期中不同辅助生殖技术助孕方式和移植不同发育阶段胚胎对出生性别比的影响

目的探讨冻融胚胎移植(frozen-thawed embryo transfer,FET)周期中不同辅助生殖技术(assisted reproductive technology,ART)助孕方式和移植不同发育阶段胚胎对新生儿性别的影响。方法回顾性队列研究分析2010年4月至2018年10月期间于广州市妇女儿童医疗中心生殖中心接受体外受精(in vitro fertilization,IVF)、卵胞质内单精子注射(intracytoplasmic sperm injection,ICSI)和胚胎植入前遗传学检测(preimplantation genetic testing,PGT)治疗并进行FET且成功分娩的患者和新生儿临床资料。比较不同助孕方式及移植不同发育阶段胚胎对新生儿性别的影响。结果①IVF-FET共898对夫妇(920个周期),1166名新生儿,出生性别比为106.7。移植桑葚期前、桑葚期或囊胚期胚胎,出生性别比逐渐增高(99.0,135.4,142.6),但各组间差异无统计学意义(P>0.05)。②ICSI-FET(含PGT)共415对夫妇(433个周期),555名新生儿,出生性别比为111.0。移植不同发育阶段胚胎,出生性别比(116.0、87.2、137.5)差异无统计学意义(P>0.05)。③PGT-FET共33对夫妇(33个周期),33名新生儿,出生性别比为153.8。移植IVF、ICSI或PGT解冻囊胚对出生性别比没有显著影响(P>0.05)。结论在FET周期中,采用IVF技术助孕,移植较晚发育阶段胚胎可能会增加出生性别比的风险;ICSI技术移植不同发育阶段胚胎或移植IVF、ICSI或PGT囊胚对新生儿性别没有显著影响。     

辅助生殖技术中嵌合胚胎的发生机制及结局

随着胚胎植入前遗传学检测（preimplantation genetic test，PGT）的应用及其诊断方法的不断进步，嵌合胚胎作为整倍体胚胎、非整倍体胚胎以外的第三种胚胎类型，在移植前胚胎中的检出率越来越高。胚胎嵌合可导致流产、死产和遗传异常风险的增加，但也可发育为健康活产儿。嵌合胚胎在染色体异常类型、异常细胞比例和嵌合部位等方面存在很大差异性，为其移植的选择带来了巨大挑战，也使其移植后的结局具有极大未知性。减数分裂形成配子时发生的错误，将导致非整倍体胚胎的形成；而受精卵形成后细胞的有丝分裂错误，产生了嵌合胚胎。理解嵌合胚胎形成机制，了解其检出率及影响因素、发育结局，对避免错误地丢弃具有发育潜力的胚胎至关重要。     

Implantation potential of mosaic embryos

Chromosomal mosaicism is a relatively common finding in human IVF embryos. However, the association between mosaicism in trophoectoderm and inner mass cells, the mechanisms involved, and its effects on implantation are far from established. We retrospectively reanalyzed array-CGH results from 1,362 trophoectoderm biopsies. We detected chromosomal mosaicism in 183 blastocysts (13.4%). A decrease in the clinical pregnancy rate when we compared the cycles where only mosaic embryos were transferred (26.9%) vs. euploid embryos were transferred (40.2%) was not statistically different (p = 0.127). Also a tendency to increase the biochemical miscarriage was reported (21.2% mosaic group vs. 12.3% euploid group; p=0.102). Our data suggests that the transfer of some mosaic embryos achieve full term pregnancies. Additional studies are needed to clarify how embryo mosaicism affects the outcomes of the IVF cycles.     

Analysis of major factors of mosic embryo in blastocyst stage北大核心CSCD

Objective To analyze of the main influecing factors of mosic embryos during the preimplantation genetic test for chromosomal structural rearrangement (PGT-SR) to avoid the increase of risk of abortion and genetic abnormalities and to improve the diagnostic rate of mosic embryos. Methods We used a retrospective cohort study to analyze 94 cycles of infertile patients undergoing PGT-SR and 551 cycles of intracytoplasmic sperm injection (ICSI) from January 2018 to December 2019 in the Reproductive Medical Center of the Maternal and Child Health Hospital. The relationship of mosic embryos was analyzed between the age, the number of oocytes, gonadotropin (Gn)/oocyte, the grade of blastocysts and chromosome carrier of different genders by the SPSS21.0 software. Results In the PGT-SR cycle, single factor analysis found that mosaic embryos were related to age and sperm concentration (P=0.02, P=0.04), but multivariate logistic regression analysis showed that age (OR=3.41, 95% CI=1.34-8.66, P=0.01), sperm concentration (OR=0.41, 95% CI=0.17-0.96, P=0.04) and chromosome carrier of different genders (OR=2.21, 95% CI=1.04- 4.70, P=0.04) were the main factors of embryo mosaicism. Conclusion Female age, sperm concentration and chromosome carrier of different genders maybe affect the formation of mosaic embryos, providing theoretical basis for selective transfer of mosaic embryos. © 2021 Chinese Medical Journals Publishing House Co.Ltdg. All rights reserved.     

Correlation between aneuploidy and blastocyst quality

ObjectiveTo carry out a detailed investigation of the impact of aneuploidy on blastocyst quality.Methods1 257 cleavage-stage embryos from 203 patients underwent IVF treatment with aneuploidy screening were investigated. Comprehensive chromosome analysis involved the use of microarray comparative genomic hybridisation (aCGH) method on single blastomere biopsied on day 3 of embryo development. Embryo morphology was assessed and recorded on days 3 and/or 5–6 post-fertilisation. Morphologic grade A-C was assigned to the blastocysts with grade A being the highest grade and grade C the lowest.ResultsAmong the 1 257 embryos that were analyzed, 474 (38%) were euploid, and 783 (62%) were aneuploid. 315/474 (66.5%) of euploid embyos developed into blastocysts, while 57/783 (32.8%) of aneuploid embryos grew to blastocysts (P<0.01). At the blastocyst stage, the best quality embryos (grade A) were in their majority (164/241 or 68%) euploid. Of the 219 fair quality blastocyts (grade B) 129 were euploid (59%) and 22/112 (20%) of poor quality blastocysts (grade C) were euploid.ConclusionBlastocyst morphology showed a significant link to aneuploidy (P<0.05). However, grading morphology alone can not replace preimplantation aneuploidy screening. Morphology screening or other markers for embryo competence, combined with preimplantation genetic screening for 24 chromosomes may produce the best results.     

男性不育患者精子染色体畸变的检测及其对ICSI影响的研究

目的:探讨男性不育患者精子染色体畸变率及其对ICSI结果的影响。方法:随机选取外周血细胞染色体正常、行ICSI治疗的男性不育患者32例,其中少精症8例、严重少精症9例、阻塞性无精症经皮附睾穿刺吸精子11例、精液正常但常规IVF不受精患者4例以及5例对照组。应用荧光原位杂交技术检测了各类男性不育患者精子性染色体、13、18、21号染色体非整倍体的发生率和二倍体的发生率,统计分析这些染色体畸变的发生率与ICSI后的受精率、卵裂率、优质胚胎率、妊娠率、胚胎种植率以及流产率之间的关系。结果:少精症组精子性染色体非整倍体发生率明显升高(0.58%、0.25%,P<0.001),常见的形式为精子XY二体、XX二体以及YY二体;在严重少精症组,精子性染色体二体率(0.94%、0.25%)、13号染色体二体率(0.40%、0.09%)、21号染色体二体率(0.48%、0.10%)、二倍体率(0.43%、0.09%)明显高于对照组,有显著性差异(P<0.001);在阻塞性无精症组,性染色体二体率(1.43%、0.25%)、二倍体率(0.32%、0.09%)明显高于对照组,有显著性差异(P<0.001)。在IVF不受精组,各项检测指标与对照组相比无明显差异。严重少精症组ICSI后的优质胚胎率、妊娠率以及胚胎种植率明显下降,流产率升高。结论:在行ICSI治疗前,用FISH方法进行精子染色体畸变的检测是有效的,也是必要的;对检测阳性的患者,在行ICSI后对早期胚胎进行遗传学检测可减少或避免遗传缺陷的发生。     

囊胚培养液中游离DNA的重要染色体整倍性研究

目的探讨利用培养液中游离DNA检测对应囊胚的13、15、16、18、21、22号染色体整倍性的效率。方法本研究共纳入239枚囊胚,所有的胚胎均来源于PGT-A周期。囊胚活检的滋养层细胞采用SNP芯片检测胚胎的整倍性;培养液游离DNA采用无创胚胎染色体筛查(NICS)方法检测整倍性;采用盲法比较两者的结果。计算NICS在检测13、15、16、18、21、22号染色体整倍性的敏感性、特异性、诊断效率、阳性预测值和阴性预测值。结果239枚囊胚中的209枚有NICS结果,NICS检出率为87.5%(209/239)。NICS方法在检测13、15、16、18、21、22号染色体的特异性、效率比较高,均>90%,NICS结果的阴性预测值超过97%;但是敏感性波动较大(33%~100%),阳性预测值较低(<50%)。结论NICS方法可以检测囊胚整倍性。当NICS结果显示这些重要染色体(13、15、16、18、21、22号染色体)为整倍体时,对应囊胚该条染色体整倍性几率高;但是当NICS结果显示这些重要染色体为非整倍体时,对应胚胎并不一定为非整倍体。