1型糖尿病儿童肠道菌群谱分析研究

目的 通过16SrRNA基因测序方法探索1型糖尿病(T1DM)儿童肠道菌群结构变化的特征,并比较T1DM儿童与健康儿童间肠道菌群的差异,为临床应用益生菌进行TIDM早期干预提供理论基础和实验依据。方法 选取2018年10月-2019年10月在昆明市儿童医院内分泌遗传代谢科住院并初诊为T1DM的5~14岁儿童18例,同时选取19例性别、年龄相近的健康儿童为研究对象,收集两组儿童粪便标本后进行16SrRNA基因测序实验,并采用QIIME 2分析流程进行生物信息学分析,比较两组间肠道菌群的差异。结果 1)利用QIIME2软件将相似度100%的序列聚类分析后共获得3 248个Feature数;2)经物种鉴定及注释,绝大部分菌群都分类到属级和种级;3)Alpha多样性分析说明本次研究测序深度充分,并且T1DM儿童肠道菌群的丰富度及多样性较健康儿童降低 (P<0.05);4)Beta多样性分析中,PCoA图说明T1DM儿童和健康儿童间肠道菌群结构存在明显差异;5)肠道菌群组成差异分析中,在门水平上,T1DM儿童放线菌门、拟杆菌门和蓝细菌门丰度显著增高,而变形菌门、杆菌门的丰度降低(P<0.05);在属水平上,T1DM儿童粪杆菌属、双歧杆菌属和拟杆菌属的丰度较健康儿童增高,而埃希氏杆菌属-志贺氏杆菌、肠球菌属、Blautia菌属丰度降低(P<0.05)。结论 T1DM儿童存在肠道菌群生态失衡,并且菌群物种的丰富度及多样性降低。此外,T1DM儿童与健康儿童肠道菌群结构分布存在明显差异。     

孤独症谱系障碍儿童与健康儿童粪便肠道菌群结构及短链脂肪酸的差异性研究

目的 分析孤独症谱系障碍(ASD)儿童与健康儿童粪便肠道菌群结构及短链脂肪酸变化差异,从肠道菌群角度为ASD的防治提供新思路。方法 选取2019年1—11月在江苏大学附属医院被诊断为ASD的25名儿童和同期体检的24名生长发育正常的健康儿童为研究对象,分别为ASD组和对照组。收集其粪便,采用16SrRNA测序分析肠道菌群结构;气相色谱法检测粪便短链脂肪酸含量。结果 与对照组比较,ASD组儿童肠道菌群丰富度(Chao1指数及Ace指数)及多样性(Shannon指数)显著降低,差异均有统计学意义(t=2.917、2.890、3.353,P<0.05);门水平上厚壁菌门、变形菌门丰度显著增高,拟杆菌门丰度明显降低,差异均有统计学意义(t=3.180、5.761、5.970,P<0.05);属水平上拟杆菌属、双歧杆菌属、布劳特氏菌属、链球菌属丰度显著降低,梭状芽胞杆菌属、萨特氏菌属丰度显著增加,差异均有统计学意义(Z=2.440、3.100、3.620、3.500、4.200、4.054,P<0.05);粪便短链脂肪酸中乙酸、丙酸及总短链脂肪酸含量显著增高,丁酸含量显著下降,差异均有统计学意义(t=3.040、3.220、2.560、4.100,P<0.05)。相关分析显示双歧杆菌属与丙酸及总短链脂肪酸呈负相关(r=-0.422、-0.412,P<0.05)。结论 ASD儿童粪便肠道菌群结构及短链脂肪酸含量发生明显改变,其中双歧杆菌属减少所致丙酸及总短链脂肪酸增高可能与ASD相关。     

孤独症谱系障碍儿童肠道菌群多样性的研究

目的 分析孤独症谱系障碍(ASD)儿童肠道菌群多样性,为减轻胃肠道症状提供科学依据。方法 选取2018年1-6月在广西壮族自治区妇幼保健院确诊为ASD的儿童20例和健康儿童20例作为研究对象。采集两组儿童粪便提取总DNA,扩增16S rDNA中V4/V5区进行高通量测序,分析ASD儿童肠道菌群多样性。结果 两组在样品文库的覆盖率(Z=242.500,P=0.256)、丰度指标Chao1(Z=250.000,P=0.181)、 ACE(Z=234.000,P=0.365)、Shannon(Z=259.000,P=0.114)和Simpson(Z=146.000,P=0.145)指数上差异均无统计学意义(P>0.05),多样性无差异。门水平上,两组儿童在8种菌群上差异无统计学意义(P>0.05),属水平上,两组儿童在20个属上差异具有统计学意义(P＜0.05)。结论 ASD儿童和健康儿童在肠道菌群属水平上具有差异;临床上可根据不同菌属特点对ASD儿童肠道菌群进行精准调整,保持肠道微生态平衡,减轻ASD儿童胃肠道症状。     

孤独症谱系障碍儿童肠道菌群多样性的研究

目的 分析孤独症谱系障碍(ASD)儿童肠道菌群多样性,为减轻胃肠道症状提供科学依据。方法 选取2018年1-6月在广西壮族自治区妇幼保健院确诊为ASD的儿童20例和健康儿童20例作为研究对象。采集两组儿童粪便提取总DNA,扩增16S rDNA中V4/V5区进行高通量测序,分析ASD儿童肠道菌群多样性。结果 两组在样品文库的覆盖率(Z=242.500,P=0.256)、丰度指标Chao1(Z=250.000,P=0.181)、 ACE(Z=234.000,P=0.365)、Shannon(Z=259.000,P=0.114)和Simpson(Z=146.000,P=0.145)指数上差异均无统计学意义(P>0.05),多样性无差异。门水平上,两组儿童在8种菌群上差异无统计学意义(P>0.05),属水平上,两组儿童在20个属上差异具有统计学意义(P＜0.05)。结论 ASD儿童和健康儿童在肠道菌群属水平上具有差异;临床上可根据不同菌属特点对ASD儿童肠道菌群进行精准调整,保持肠道微生态平衡,减轻ASD儿童胃肠道症状。     

137例高危型人乳头状瘤病毒感染患者的阴道菌群分布分析

目的 探讨阴道菌群与高危型人乳头状瘤病毒(high-risk human papillomavirus, HR-HPV)感染的关系。 方法 选择188例在苏州市相城人民医院体检或就诊的妇女,依据HR-HPV感染情况分为HPV+组(HR-HPV阳性,137例)和HPV-组(HR-HPV阴性,51例),采用高通量基因测序分析研究对象阴道菌群多样性和菌群结构,比较两组患者阴道菌群差异。 结果 HR-HPV阳性组的菌群,其丰度(ace)和深度(Chao)指数均高于HR-HPV阴性组,差异有统计学意义(均P<0.05);多样性指数分析结果: HR-HPV阳性组Shannon指数高于HR-HPV阴性组,差异有统计学意义(P<0.05);Simpson指数显著低于HR-HPV阴性组(P<0.05);菌群结构分析显示HR-HPV阴性组以乳杆菌属为主(80.15%),HR-HPV阳性组以乳杆菌属(41.57%)和加德纳菌属(18.59%)为主,还有布鲁氏菌属(0.38%)。 结论 HR-HPV感染与阴道菌群改变关系密切,HR-HPV阳性患者菌群多样性和丰富度显著增加,乳杆菌属水平降低,加德纳菌属、普氏菌属、奇异菌属、厌氧球菌属可作为HPV阳性患者的标记物种。     

孕期增重对新生儿肠道菌群定植的影响

目的 了解新生儿肠道菌群的多样性和物种组成,分析孕期增重对新生儿肠道菌群定植的影响。方法 本研究基于前瞻性出生队列,随机选取2016年4月-2017年2月纳入队列的具有完整孕期随访信息的323名孕妇,留取分娩后新生儿胎粪样本进行16S rDNA肠道菌群测序,并对测序成功的207个样本序列进行分析。按照美国医学研究所的孕期增重标准,将研究对象分为孕期增重不过量组(n=129)和孕期增重过量组(n=78)。结果 孕期增重量影响新生儿肠道菌群丰度,和孕期增重不过量组相比,孕期增重过量组的新生儿肠道变形菌门(Proteobacteria)相对丰度较高(P<0.05),副拟杆菌属(Parabacteroides)相对丰度较低(P<0.05)。在调整孕前体重指数、分娩方式、生育史、孕周、宫内抗生素暴露等因素,并按性别分层后,结果显示孕前BMI和孕期增重与男性新生儿肠道菌群的Shannon指数(β=-0.378,P=0.013和β=-0.502,P=0.041)、Simpson指数(β=-0.055,P=0.012和β=-0.073,P=0.039)呈显著负相关。结论 孕期增重过量影响新生儿肠道菌群组成并降低男性新生儿肠道菌群的α多样性。     

孕期增重对新生儿肠道菌群定植的影响

目的 了解新生儿肠道菌群的多样性和物种组成,分析孕期增重对新生儿肠道菌群定植的影响。方法 本研究基于前瞻性出生队列,随机选取2016年4月-2017年2月纳入队列的具有完整孕期随访信息的323名孕妇,留取分娩后新生儿胎粪样本进行16S rDNA肠道菌群测序,并对测序成功的207个样本序列进行分析。按照美国医学研究所的孕期增重标准,将研究对象分为孕期增重不过量组(n=129)和孕期增重过量组(n=78)。结果 孕期增重量影响新生儿肠道菌群丰度,和孕期增重不过量组相比,孕期增重过量组的新生儿肠道变形菌门(Proteobacteria)相对丰度较高(P<0.05),副拟杆菌属(Parabacteroides)相对丰度较低(P<0.05)。在调整孕前体重指数、分娩方式、生育史、孕周、宫内抗生素暴露等因素,并按性别分层后,结果显示孕前BMI和孕期增重与男性新生儿肠道菌群的Shannon指数(β=-0.378,P=0.013和β=-0.502,P=0.041)、Simpson指数(β=-0.055,P=0.012和β=-0.073,P=0.039)呈显著负相关。结论 孕期增重过量影响新生儿肠道菌群组成并降低男性新生儿肠道菌群的α多样性。     

高通量测序探讨脑瘫儿童肠道菌群的变化

目的 利用高通量测序方法,探讨脑瘫儿童肠道菌群的变化。方法 选择龙岗区社会福利中心诊断为脑瘫且正常进食的34例患儿作为脑瘫组;同时选取脑瘫伴癫痫且正常进食的20例患儿作为脑瘫伴癫痫组;另外选取同龄健康儿童22例作为健康组。留取所有受试者的粪便标本,提取总DNA并扩增,采用对16SrRNA基因进行高通量测序,对测序结果进行生物学分析。结果 1)健康组与脑瘫组、脑瘫伴癫痫组儿童相比肠道菌群结构差异有统计学意义(R²=0.410、P=0.001;R²=0.450、P=0.001),但脑瘫组与脑瘫伴癫痫组儿童相比肠道菌群结构较为相似,差异无统计学意义(R²=0.025、P=0.272)。2)脑瘫组和脑瘫伴癫痫组儿童肠道菌群中Prevotella丰度均明显增加(脑瘫组均值为32.68%,脑瘫伴癫痫组均值为34.34%)。结论 正常进食的脑瘫组、脑瘫伴癫痫组儿童中Prevotella丰度明显增加,Prevotella也许是脑瘫儿童的“保护菌属”。     

高通量测序探讨脑瘫儿童肠道菌群的变化

目的 利用高通量测序方法,探讨脑瘫儿童肠道菌群的变化。方法 选择龙岗区社会福利中心诊断为脑瘫且正常进食的34例患儿作为脑瘫组;同时选取脑瘫伴癫痫且正常进食的20例患儿作为脑瘫伴癫痫组;另外选取同龄健康儿童22例作为健康组。留取所有受试者的粪便标本,提取总DNA并扩增,采用对16SrRNA基因进行高通量测序,对测序结果进行生物学分析。结果 1)健康组与脑瘫组、脑瘫伴癫痫组儿童相比肠道菌群结构差异有统计学意义(R²=0.410、P=0.001;R²=0.450、P=0.001),但脑瘫组与脑瘫伴癫痫组儿童相比肠道菌群结构较为相似,差异无统计学意义(R²=0.025、P=0.272)。2)脑瘫组和脑瘫伴癫痫组儿童肠道菌群中Prevotella丰度均明显增加(脑瘫组均值为32.68%,脑瘫伴癫痫组均值为34.34%)。结论 正常进食的脑瘫组、脑瘫伴癫痫组儿童中Prevotella丰度明显增加,Prevotella也许是脑瘫儿童的“保护菌属”。     

强化四周抗结核药物治疗对结核病患者肠道微生态影响分析

目的 分析强化四周抗结核药物治疗对结核病患者肠道微生态的影响。 方法 收集青岛市某医院10名强化四周抗结核治疗结核病患者及10名健康对照组的粪便标本,提取细菌基因组DNA,PCR扩增16S rDNA 的V3~V4区特定序列,用Illumina HiSeq 平台测序。对序列进行操作分类单元(operational taxonomic unit,OTU)聚类和物种注释;通过Alpha多样性反映单个样品物种丰度及物种多样性;通过主坐标分析(principal co-ordinates analysis,PCoA)观察两组之间菌群结构的差异程度;通过比较门和属水平各细菌的相对丰度来描述菌群结构的差异并进一步采用线性判别分析效应量(line discriminant analysis effect size,LEfSe)找出两组的差异菌。采用 Mann-Whitney U检验对两组微生物多样性指数进行比较。 结果 四周抗结核治疗的Alpha多样性指标Chao1指数和Ace指数分别为(140.13±34.73)和(145.18±30.74),显著低于对照组的(196.56±37.12)和(197.62±31.76)(分别U=13.000,P=0.004;U=11.000,P=0.002);抗结核治疗组的Shannon指数为(2.31±0.57),与对照组(2.89±0.46)相比略有降低,但差异未见统计学意义(U=30.000,P=0.143)。基于binary jaccard的PCoA分析显示两组整体菌群结构有显著差异。抗结核治疗组与对照组比肠道菌群组成发生改变,其中厚壁菌门、毛螺菌科的相对丰度明显低于对照组(46.4% vs. 72.4%, χ²=5.491,P=0.019;72.4% vs. 43.1%, χ²=5.851,P=0.016);而拟杆菌门、拟杆菌属的丰度明显高于对照组(39.0% vs. 18.8%, χ²=4.166,P=0.041;31.4% vs. 10.3%, χ²=7.406,P=0.007)。 结论 强化四周抗结核药物治疗可使肠道菌群多样性下降,肠道菌群结构失衡;肠道毛螺旋菌科等丰度减少,拟杆菌属等丰度增加。     

糖尿病并发抑郁症大鼠肠道菌群失衡初步研究

目的 通过对糖尿病并发抑郁症(diabetes-related depression, DD)大鼠肠道微生物进行16s rRNA测序分析，探讨该疾病状态下肠道菌群的改变。方法 建立DD模型，以健康SD大鼠作为空白对照组。每周称量体重的同时进行空腹血糖检测；采用强迫游泳和矿场实验检测大鼠行为学；对各组大鼠肠道内容物进行16s rRNA测序；以血清为检测对象，对下丘脑-垂体-肾上腺轴(hypothalamic-pituitary-adrenal axis, HPA轴)相关蛋白及细菌脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)含量进行检测。结果 与空白组比较，DD模型组血糖显著升高并表现出明显抑郁样行为和HPA轴亢进；16s rRNA测序结果提示，与空白组比较，DD模型组肠道菌群α多样性(Chao、Simpson、Shannon指数)无明显差异；但β多样性差异明显，即空白组与DD模型组的样品间距离较远；肠道菌群组间差异明显，与空白组比较，DD模型组中厚壁菌门丰度明显降低(P<0.01),而拟杆菌门则无明显差异；Bugbase表型预测提示，与空白组比较，DD模型组中革兰氏阴性...     

初发1型糖尿病患儿的血脂情况及与糖化血红蛋白水平的关系研究

目的 观察初发1型糖尿病(T1DM)儿童血脂水平, 并分析其与患儿糖化血红蛋白(HbA1c)水平的相关关系。方法 回顾性分析保定市儿童医院于2018年1月-2019年6月期间收治的168例T1DM患儿的临床资料, 并以同期内100例健康儿童作为对照组。比较两组儿童血总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)等血脂指标的差异。采用Pearson分析及多元回归方法分析T1DM患儿血脂水平与HbA1c水平的相关性。结果 T1DM组儿童TC、TG和LDL-C水平均显著高于对照组(t=4.691、7.705、4.119, P<0.001), HDL-C水平显著低于对照组(t=3.845, P<0.05)。血脂异常组患儿HbA1c水平显著高于血脂正常组患儿[(13.09±2.71)% vs.(11.78±2.56)%, t=3.209, P<0.05]。Pearson相关性分析结果表明, T1DM患儿TC、TG和LDL-C水平与HbA1c水平具有显著正相关关系(r=0.547、0.514、0.438, P<0.05), HDL-C与HbA1c水平无显著相关性(r=0.109, P>0.05)。多元回归分析结果表明, TC和TG与HbA1c显著正相关(β=0.008, 0.045, P＜0.05)。结论 T1DM患儿中血脂异常比例较高, HbA1c水平越高合并血脂异常风险越高, 临床应予以重视。     

血浆促肾上腺皮质激素、皮质醇水平与1型糖尿病患儿糖化血红蛋白水平的相关性研究

目的 分析促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质醇(CORT)与1型糖尿病(T1DM)患儿糖化血红蛋白(HbA1c)水平的相关性,为T1DM的临床诊断提供科学依据。 方法 选择2014年1月—2018年12月在唐山市妇幼保健院内分泌科就诊的T1DM患儿105例为T1DM组,另选同期在本院健康体检儿童105例作为对照组,采用酶联免疫吸附法检测各观察对象在1 d内各时间点(8:00、16:00、24:00)的血浆ACTH、CORT水平,Pearson相关分析法分析T1DM患儿血浆ACTH、CORT日平均水平与空腹血糖(FPG)、HbA1c等指标相关性,Logistic回归分析影响T1DM发病的因素。 结果 与对照组比较,T1DM组患儿甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、FPG与HbA1c水平显著升高,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平降低,差异有统计学意义(P＜0.05);T1DM组患儿血浆ACTH、CORT在8:00、16:00、24:00表达水平和日平均水平显著高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05);相关性分析显示,T1DM患儿血浆ACTH、CORT日平均表达水平与血浆FPG、HbA1c呈正相关(r_ACTH=0.717、0.585、r_CORT=0.636、0.696,P<0.01);Logistic回归分析显示ACTH、CORT是T1DM患儿发病的独立危险因素。结论 ACTH、CORT在T1DM患儿血浆中高表达,其与HbA1c有一定相关性,是T1DM患儿发病的独立危险因素,可作为T1DM血糖控制好有效的评价指标。