戊型肝炎病毒核酸逆转录—套式聚合酶链反应法的建立及应用

应用戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）开放读框１（ＯＲＦ１）和开放读框２（ＯＲＦ２）区的两对寡核苷酸作为内外引物，建立了逆转录－套式聚合酶链反应（ＲＴ－ｎＰＣＲ）检测ＨＥＶＲＮＡ的方法，用本法检测２只人工感染ＨＥＶ猕猴的１１份系列血清，发现该２只猕猴地感染后第六天和第九天ＨＥＶＲＮＡ阳转，并持续至感染后第十七和第二十二天，检测４１例急性散发性戊型肝炎病人血清，ＨＥＶＲＮＡ阳性率为６８．３％（２８／４１），发病     

聚合酶链反应法检测戊型肝炎病人粪便HEV—RNA

应用逆转录－套式聚合酶链反应（ＲＴ－ｎＰＣＲ）法，对２６例散发性戊型肝炎（ＨＥ）患者发病后４～２８天收集的９１份粪便标本进行ＨＥＶＲＮＡ检测，并与同病期系列血清ＨＥＶＲＮＡ及ＡＬＴ水平作比较，以了解散发性ＨＥ患者的粪便排病毒规律。结果表明，患者粪便ＨＥＶＲＮＡ阳性率为４２．３％（１１／２６），与血清ＨＥＶＲＮＡ阳性率（５３．８％）相比无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。粪便ＨＥＶＲＮＡ检出率在发病头５天内为７５％（３／４），随后即与血清ＡＬＴ水平一样出现明显下降，于发病后１６～２０天降至１９．２％（５／２６），最长一例持续阳性至发病后２３天。上述结果提示，ＨＥ患者的粪便排病毒主要发生在疾病的急性期早期，将其隔离期定为病后３周可能比较合理。     

戊型肝炎患者病毒血症的研究

为了更全面地了解戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）的感染过程，从ＨＥＶ开放读框１（ＯＲＦ１）区设计两对寡核苷酸引物，建立逆转录－套式聚合酶链反应（ＲＴ－ｎＰＣＲ），对６２例戊型肝炎患者发病后５３１份血清进行ＨＥＶＲＮＡ检测。结果显示，阳性患者占７１％。全程随访３２例患者２８８份系列血清，发现阳性２４例（７５％），其阳性率随病程延长而下降，平均持续时间为发病后２０．６天。观察４４例血清ＨＥＶＲＮＡ阳性患者，有３６例（８１．８％）在血清转氨酶和总胆红素水平开始回落时仍呈阳性；３９例（８８．６％）同时检测到抗－ＨＥＶ。ＨＥＶ血症的阳性率及阳性持续时间与血清转氨酶、总胆红素及抗体应答水平无直接相关     

抗—HCV阳性单采浆供血员HGV感染随访研究

为了解单采浆供血员庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）感染及其转归，对１０２名抗－ＨＣＶ阳性单采浆供血员冻存血清进行抗－ＨＧＶ和ＨＧＶＲＮＡ检测，对抗－ＨＧＶ和（或）ＨＧＶＲＮＡ阳性者作３年随访研究。采用ＥＩＡ法检测抗－ＨＧＶ，包被抗原来自ＨＧＶ不同功能区的合成肽。应用ＲＴ－ＰＣＲ法检测ＨＧＶＲＮＡ，引物选自ＨＧＶＮＳ３区。结果表明，抗－ＨＣＶ阳性单采浆供血员ＨＧＶＲＮＡ阳性率为１９．６１％（２０／１０２），抗－ＨＧＶ阳性率为１７．６５％（１８／１０２），ＨＧＶ感染率（抗ＨＧＶ和／或ＨＧＶＲＮＡ阳性）为２４．５１％（２５／１０２），而对照组仅为０．９４％（１／１０６）。提示单采血浆是ＨＧＶ感染的重要危险因素。ＨＧＶＲＮＡ和抗－ＨＧＶ的３年阴转率分别为３５．００％（７／２０）和１１．１１％（２／１８），说明ＨＧＶ感染有慢性携带趋势     

用RT—PCR法分析合肥地区HCV基因型

应用逆转录－ＤＮＡ聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ），对合肥地区的１９５例病人的血清进行了ＨＣＶＲＮＡ检测及基因型分析。结果显示，８０例ＨＣＶＲＮＡ阳性标本中，７０例（８７．５％）为Ⅱ／１ｂ型ＨＣＶ感染，７例（８．８％）为Ⅲ／２ａ型，３例（３．７％）为Ⅱ和Ⅲ型混合感染，未发现Ⅰ／１ａ和Ⅳ／２ｂ型ＨＣＶ感染。     

慢性丙型肝炎患者外周血单核细胞中丙型肝炎病毒RNA正,负链的…

选择ＨＣＶ基因组５＇非编码区的两对引物，利用逆转录巢式ＰＣＲ技术对３５例慢性丙型肝炎患的血清中正链ＨＣＶ ＲＮＡ、ＰＢＭＣ中正、负莲ＨＣＶ ＲＮＡ进行检测。结果血清中正链ＨＣＶ ＲＮＡ阳性率为６２．９％（２２／３５），ＰＢＭＣ中正链ＨＣＶ ＲＮＡ的阳性率为５４．３％（１９／３５），负链ＨＣＶ ＲＮＡ的阳性率为３４．３％（１２／３５）。同时对第２次ＰＣＲ的阳性产物进行限制性片段长度多态性分析（ＲＦ     

庚型肝炎病毒母婴传播的研究

用ＥＬＩＳＡ法对１１０名健康孕产妇进行血清抗－ＨＧＶ测定,阳性和可颖阳性者再用ＲＴ－ＰＣＲ检测血清ＨＧＶ ＲＮＡ,并对ＨＧＶ ＲＮＡ阳性孕产妇的新生儿脐血和婴儿血进行ＨＧＶ ＲＮＡ检测。结果 １１０名孕产中有７人（６．３６％）抗－ＨＧＶ阳性８人可疑阳性。其中４人被检测到ＨＧＶ ＲＮＡ,阳性率２６．６６％（４／１５）。她们所产的４名婴儿中２人血清ＨＧＶ ＲＮＡ阳性。提示ＨＧＶ的母婴传播率为５０％（２     

柳州市急性散发性戊型肝炎病毒（HEV）部分核苷酸序列分析

应用逆转录套式聚合酶链反应（ＲＴ－ｎＰＣＲ）法检测柳州市７例散发性戊型肝炎病人急性期血清,６例ＨＥＶＲＮＡ阳性（８５．８％）。对其中２份阳性ＰＣＲ产物纯化后,直接测定其核苷酸序列,并与ＨＥＶ墨西哥株（Ｍ）、缅甸株（Ｂ）、中国流行株ＣＨ１．１进行比较。该２株ＨＥＶ散发株与ＨＥＶ（Ｍ）、ＨＥＶ（Ｂ）、ＨＥＶＣＨ１．１的核苷酸同源性分别为８０．８％、９２．４％～９２．７％、９７．５％～９７．７％。结论,该２株ＨＥＶ散发株与ＨＥＶ（Ｂ）和ＣＨ１．１为同一亚型。     

献血员抗HCV筛查效果的再评价

采用 ＥＬＩＳＡ及 ＲＴ－Ｎｅｓｔｅｄ ＰＣＲ对献血员与接受输血治疗者血清 ＨＣＶ感染标志进行了调查。结果表明，在筛选措施开展前献血员抗ＨＣＶ阳性率为１１．５４％，经地方血站筛选后献血员抗ＨＣＶ阳性率可降至２．５５％。同期受血者抗ＨＣＶ阳性率为８．８２％，而８例接受抗ＨＣＶ阳性血液者的血清抗ＨＣＶ与ＨＣＶＲＮＡ阳转比例分别为５／８与６／８。表明抗ＨＣＶ筛查措施在我国输血后丙肝预防中已起到十分重要的作用。进一步研究发现，在３０例抗ＨＣＶ阴性的献血员中，６例（２０％）血清ＨＣＶ ＲＮＡ阳性。３４例抗ＨＣＶ与血浆ＨＣＶ ＲＮＡ均阴性的献血员中 ５例（１４． ７１％）外周血单个核细胞内检出 ＨＣＶ ＲＮＡ。这一结果表明，采用血清抗ＨＣ Ｖ筛选措施不能完全筛除献血员中的ＨＣＶ感染者。部分抗ＨＣＶ阴性献血员血清及外周血单个核细胞中隐藏的 ＨＣＶ可能是抗 ＨＣＶ阴性血液传播ＨＣＶ感染的重要因素。     

HBV感染孕妇血清HBVM与TORCH抗体检测

目的了解ＨＢＶ感染孕妇血清ＨＢＶＭ与ＴＯＲＣＨ抗体阳性率。方法应用ＥＬＩＳＡ法筛查出９３例ＨＢＶ感染孕妇,并用ＰＣＲ检测ＨＢＶ－ＤＮＡ。分娩时取脐血测弓形体（Ｔｏｘ）、风疹病毒（ＲＶ）、巨细胞病毒（ＣＭＶ）、单纯疱疹病毒Ⅱ型（ＨＳＶ－Ⅱ）四种病原血清特异性ＩｇＭ和风疹病毒ＩｇＧ抗体。结果９３例ＨＢＶ感染孕妇中ＴＯＲＣＨ总感染率４７．３１％。单项抗体阳性率２５．８１％,７例为２项抗体阳性,２例３项抗体阳性。原发宫内感染以Ｔｏｘ最高（１２．９０％）,ＣＭＶ次之（６．４５％）,随后ＨＳＶ－Ⅱ（５．３８％）,ＲＶ最低（３．２３％）。孕妇ＨＢｓＡｇ阳性组,ＰＣＲＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率７６．９２％,ＴＯＲＣＨ感染率６１．５４％。ＨＢｓＡｇ阴性组,ＰＣＲＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率３８．８９％,ＴＯＲＣＨ感染率３７．０４％。结论脐血ＴＯＲＣＨ感染率与母血ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、ＨＢＶ－ＤＮＡ相关（相关系数分别为０．１４、０．２９、０．１５）。乙肝感染孕妇ＴＯＲＣＨ的抗体筛查对优生优育是非常有用的指标。     

我国不同人群及各型肝炎病人庚型肝炎感染检测分析

应用酶联免疫试验（ＥＩＡ）检测抗ＨＧＶ、ＨＢｓＡｇ、抗ＨＢｓ、抗ＨＢｃ和抗ＨＣＶ，对抗ＨＧＶ阳性的部分标本进一步用逆转录套式聚合酶链反应法（ＲＴｎＰＣＲ）检测ＨＧＶＲＮＡ。结果各类人群及肝炎病人抗ＨＧＶ阳性率分别是：一般人群１０％（４／３９５），献全血员３６％（１０／２７８），某单采浆点人群１２９％（７０／５４１），静脉毒瘾者１３５％（２２／１６２），血透析病人２１４％（１２／５６），ＨＢｓＡｇ携带者１２０％（３／２５），慢性乙型肝炎病人２６２％（１１／４０），慢性丙型肝炎病人１２５％（１７／１３６），肝硬化病人３６４％（４／１１），慢性非甲戊型肝炎病人１８８％（３／１６）。提示献血员、静脉毒瘾者、血透析病人及ＨＢＶ或ＨＣＶ感染者是ＨＧＶ感染的高危人群；ＨＧＶ常与ＨＢＶ或ＨＣＶ重叠／联合感染，也可单独感染；ＨＧＶ是非甲戊型肝炎的致病因子之一。抗ＨＧＶ阳性者中ＨＧＶＲＮＡ检出率为６６％（６４／９７），提示抗ＨＧＶＥＩＡ可用于ＨＧＶ感染的检测。     

慢性丙型肝炎患者外周血单核细胞中丙型肝炎病毒RNA正、负链的检测

选择ＨＣＶ基因组５’非编码区的两对引物，利用逆转录巢式ＰＣＲ技术对３５例慢性丙型肝炎患者的血清中正链ＨＣＶＲＮＡ、ＰＢＭＣ中正、负链ＨＣＶＲＮＡ进行检测。结果血清中正链ＨＣＶＲＮＡ阳性率为６２．９％（２２／３５），ＰＢＭＣ中正链ＨＣＶＲＮＡ的阳性率为５４．３％（１９／３５），负链ＨＣＶＲＮＡ的阳性率为３４．３％（１２／３５）。同时对第２次ＰＣＲ的阳性产物进行限制性片段长度多态性分析（ＲＦＬＰ），进一步证实ＰＣＲ产物为ＨＣＶ特异性扩增产物，结果说明ＨＣＶ能在ＰＢＭＣ中存在或复制，即肝细胞并非ＨＣＶ感染与复制的唯一场所。ＰＢＭＣ可能作为病毒长期滞留场所，使病毒感染持续存在，是丙型肝炎易发生慢性化的原因之一。     

应用聚合酶链反应（PCR）检测乙型肝炎患者的HBV一DNA

应用聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）检测１０８例乙型肝炎患者血清中ＨＢＶ一ＤＮＡ，在不同类型的ＨＢＶ感染标志物（ＨＢＶＭ）的血清中结果有所不同：（１）在ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ和抗ＨＢｃ阳性血清中，ＰＣＲ阳性率８６．１１％（３１／３６）；（２）在ＨＢｓＡｇ、抗ＨＢｅ和抗ＨＢｃ阳性血清中，ＰＣＲ阳性率５５．８８％（１９／３４）；（３）在抗ＨＢｓ、抗ＨＢｅ和ＨＢｃ阳性血清中，ＰＣＲ阳性率为２０％（２／１０）；（４）在抗ＨＢｅ和抗ＨＢｃ阳性血清中，ＰＣＲ阳性率为２５％（２／８）；文中就ＰＣＲ检测的结果及临床意义作了扼要的讨论。     

血液透析及肾移植患者乙型和丙型肝炎病毒感染状况分析

测定２０９例肾透析患者血液中ＨＢＶ－ＤＮＡ和ＨＣＶ－ＲＮＡ，阳性率ＨＢＶ－ＤＮＡ为２．４％、ＨＣＶ－ＲＮＡ为１６．３％；７６例肾移植后患者阳性率ＨＢＶ－ＤＮＡ为２．６％、ＨＣＶ－ＲＮＡ为２３．７％；对照组阳性率ＨＢＶ－ＤＮＡ为１．８％、ＨＣＶ－ＲＮＡ为２．０％。ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率在各组间无显著差异，Ｐ＞０．０５；血液透析组和肾移植组ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性率高于对照组，且有显著性差异Ｐ＜０．０１；肾移植组高于肾透析组，但无显著性差异，Ｐ＞０．０５。ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性合并ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性为４２．９％（３／７）。５２例ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性患者基因分型为Ⅱ型７６．９％、ⅡⅢ型１１．５％、Ⅲ型１１．５％。介于目前的状况，对献血检测，对阳性患者进行ＨＢＶ－ＤＮＡ、ＨＣＶ－ＲＮＡ检测，对阳性患者实行分机透析，是降低血透及肾移植患者乙、丙型肝炎病毒医院感染的关键。     

丙型肝炎病毒母婴传播的研究

检测７３２名产妇血中ＨＣＶ标记，抗ＨＣＶ（ＥＬＩＳＡ）和ＨＣＶＲＮＡ（ＰＣＲ）均阳性者３３例（３３／７３２，４．５％），其所生的３３名新生儿中有２３名的脐血检到ＨＣＶＲＮＡ（２３／３３，６９．７％）。对其中２７例新生儿的随访（平均１９．６月）表明，母婴传播感染的２２例新生儿，ＨＣＶ病毒血症在出生后逐渐阴转，血清ＨＣＶＲＮＡ阳性率（ＫａｐｌａｎＭｅｉｅｒ法计算）６月龄时为８１．８％，１２月龄时为４５．０％，１８月龄时为３０．０％，３０月龄为１６％，提示这些新生儿的ＨＣＶ感染发生于产前或分娩时的可能性。新生儿体内来自母体的ＩｇＧ类抗ＨＣＶ抗体出生后３个月即已基本阴转；婴儿本身在随访期间未检到有此类抗ＨＣＶ的产生。随访婴儿血清ＡＬＴ水平均正常，提示ＨＣＶ母婴传播感染的婴儿呈亚临床状态。     

应用聚合酶链反应（PCR）检测乙型肝炎患者的HBV—DNA

应用聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）检测１０３例乙型肝炎患者血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ，在不同类型的ＨＢＶ感染标志物（ＨＢＶＭ）的血清中结果有所不同：（１）在ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ和抗ＨＢｃ阳性血清中，ＰＣＲ阳性率８６．１１％（３１／３６）；（２）在ＨＢｓＡｇ、抗ＨＢｅ和抗ＨＢｃ阳性血清中，ＰＣＲ阳性率５５．８８％（１９／３４）；（３）在抗ＨＢｅ和ＨＢｃ阳性血清     

434名HBsAg阴性应招飞行学员中的HCV感染调查

为了解ＨＢｓＡｇ阴性应招飞行学员中的ＨＣＶ感染情况，对体检合格的４３４名ＨＢｓＡｇ阴性健康应招飞行学员用ＥＬＩＳＡ法检测血清中的抗－ＨＣＶ，对抗－ＨＣＶ阳性血清用套式ＰＣＲ法检测了ＨＣＶ ＲＮＡ。结果发现，抗－ＨＣＶ阳性率为０．４６％（２／４３４），在２例抗－ＨＣＶ阳性者中，１例ＨＣＶ ＲＮＡ阳性。提示，为防止慢性ＨＣＶ感染者进入航校，对入学前的飞行学员进行抗－ＨＣＶ检测是必要的。     

献血员中庚型肝炎病毒血清流行病学

目的 研究庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）在献血员中的感染状况。方法 采用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）和逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）法检测５９７名献血员（包括职业献血员２９７例和无偿献血员３００例）和７２１例正常人群血清标本。结果 职业献血员无偿献血员、正常人群抗－ＨＧＶ阳性率分别为２．６９％（８／２９７）、０．３３％（１／３００）,０．７０％（５／７２１）,抗ＨＧＶ阳必 上ＲＮＡ阳性率分别为７５％     

戊型肝炎病毒结构区编码多肽检测相应抗体方法的建立及应用

利用多肽合成技术在戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）的结构区内的开放读码框（ＯＲＦ）－２和ＯＲＦ－３区合成了Ｐ１、Ｐ２二条具有明确抗原表位的合成多肽,作为ＥＩＡ法抗－ＨＥＶ诊断试剂的固相抗原测定抗－ＨＥＶ。在７８例急性甲型肝炎中抗－ＨＥＶ检出率为７．８％,慢性乙型肝炎的检出率为２．９％,志愿献血员为１．４％,急性输血性丙型肝炎检出率为０。本室抗－ＨＥＶ诊断试剂的精密度检测ＣＶ值为６．８％～９．１％。优于部颁体外诊断试剂ＣＶ值≤１５％的标准。抗－ＨＥＶ的灵敏度测定Ｐ１合成肽为１∶１６００,而Ｐ２合成肽１∶１２…     

广西肝癌高发区壮族自然人群中流行的HCV,HBV的分子生物学研究

在广西肝癌高发区壮族自然人群中采集血清标本１７７６人份，采用ＥＬＩＳＡ方法检测抗－ＨＣＶ、ＨＢｓＡｇ，ＰＣＲ技术检测ＨＣＶ－ＲＮＡ、ＨＢＶ－ＤＮＡ，并对ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性的６９份标本采用型特异性引物进行基因分型。结果显示：（１）研究人群中ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性率为３．８８％；（２）流行的ＨＣＶ基因以Ｉ型或与其它型别的混合感染为主；（３）Ｉ型感染者中ＬＡＴ的异常率高于其它型别的感染者；（４）当地ＨＣＶ伴