汉坦病毒江西分离株全基因组序列分析

目的了解江西省汉坦病毒新分离株Jiangxi XinjianRn-07-2011的全基因组特征。方法设计特异性引物,分段扩增毒株的S、M、L全基因,对扩增产物进行序列测定,运用DNAStar、Mega 3.1软件对序列进行拼接和分析。结果全S、M、L基因分别含1 772个、3 651个、6 530个核苷酸,分别编码429个、1 133个、2 151个氨基酸,经序列比对和系统进化分析,该病毒属汉城型汉坦病毒(SEOV),S4亚型。S、M、L 3个基因与SEOV型病毒比较,核苷酸序列同源性分别为88.1%~98.0%、84.0%~96.1%、94.4%~95.9%;氨基酸序列同源性较高,分别为98.2%~100%、98.7%~99.5%、98.2~99.4%。结论测定了江西省新分离株Jiangxi XinjianRn-07-2011的全基因组序列,发现新分离株为SEOV,S4亚型。     

北京市2008年肠道病毒71型VP1编码区基因特征分析

目的了解北京市2008年手足口病（Hand,Foot and Mouth Disease,HFMD）流行期间,人肠道病毒71型（Human Enterovirus71,HEV71）分离株的VP1编码区基因特征。方法采集发病1～3d的咽拭子标本33份,采用人横纹肌肉瘤（Human Rhabdomyosarcoma,RD）细胞进行EV分离,用特异引物通过逆转录-聚合酶链反应扩增进行毒株鉴定。对分离到的HEV71进行VP1编码区全长扩增,并对扩增产物采用双脱氧链终止法进行序列测定,Bioedit7.0.5和Mega3.1软件进行序列比对和系统进化树分析。结果从33份咽拭子标本中共分离到16株病毒,经鉴定：HEV7114株,柯萨奇病毒（Coxsackie Virus,CV）A组16型（CVA16）2株,其中1例为HEV71和CVA16混合感染。对10株HEV71进行了VP1编码区全序列测定,10株病毒的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为95.5%～100%和98.9%～100%;与安徽省阜阳市2008年流行株的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为95.4%～99.1%;与C4基因型代表株的核苷酸序列同源性〉92%。基于HEV71的VP1编码区核苷酸序列构建亲缘性关系树,北京市2008年流行株与C4亚型代表株聚为一簇,属于C4基因亚型中的C4a分支;且10株病毒处于四个相对独立的进化分支。结论北京市2008年从HFMD患儿分离的HEV71均为C4亚型,且属于2004年以来我国的优势分支——C4a。亲缘性分析提示,此次流行中至少存在4个HEV71传播链。由于近年来HEV71在中国持续大规模流行,迫切需要对HEV71进行连续的分子流行病学监测,及时阐明现阶段流行毒株的基因特征,为疾病预防控制提供病毒学依据。     

华东地区猪基因4型戊肝病毒的季节变化及与人同源性的分析

目的 戊型肝炎病毒的人兽共患特征被认可,本研究检测华东地区猪群在不同季节中基因4型戊肝病毒(HEV)的感染情况,了解猪病毒株之间以及与人病毒株的同源性关系.方法2007年9月-2008年6月在华东地区浙江、安徽和江苏的3家屠宰场中共采集猪胆汁标本1200份,应用巢式RT-PCR方法检测HEV RNA,对阳性标本测序并结合同一地区人HEV序列进行同源性分析.结果猪胆汁标本中HEV RNA总检出率为4.5%,各季节猪群的检出率为9-10月平均检出率6%,12-1月4.33%,3-4月4.33%,5-6月3.33%,各地区的平均检出率为江苏6%、安徽5%、浙江2.5%.不同地区猪与猪、猪与人基因4型HEV病毒株的同源性都较高(猪株之间核苷酸序列约为80%～100%,氨基酸序列约为96%～100%;猪与人株之间核苷酸序列约为76%～99%,氨基酸序列约为95%～100%).部分猪HEV与人HEV构成独立的同源性分支,进化起源关系密切.结论 基因4型HEV在华东地区猪群中常年广泛流行,且可能拥有共同的进化与传播起源.猪群携带HEV可能会对人群戊肝的流行趋势产生影响.     

2009年珠海市肠道病毒71型分子流行病学特征分析

目的分析2009年珠海市手足口病(HFMD)患者中,肠道病毒71型(HEV71)的分子流行病学特征。方法2009年1—10月采集珠海市各医院就诊的HFMD患者的粪便标本558份,经HEV71通用引物扩增分析,确定为HEV71阳性158份。选取其中HEV71阳性标本24份用RT-PCR扩增衣壳蛋白vp1全长基因,核苷酸序列测定并分析病毒遗传学特征。结果珠海市24例HEV71的vp1基因核苷酸序列的测定结果显示,所有核苷酸序列长度都是891bp,编码297个氨基酸。该24株HEV71全部属于C4基因亚型C4b进化分支,与C4基因型相比较核苷酸同源性在95.4%～98.9%之间,氨基酸同源性在99.3%～99.7%之间,与2008—2009年中国流行的HEV71同源性极高;但24株HEV71在vp1区的核苷酸和氨基酸同源性分别为95.2%～100.0%和99.0%～100.0%,在核苷酸和氨基酸水平上存在一定差异;24例HEV71可划分为7条传播链,75%(18/24)流行株分布在其中的2条传播链,且这2条主要传播链只由珠海市HEV71分离株构成。结论2009年珠海市流行的HEV71属于C4基因亚型C4b进化分支,与中国2008—2009年流行的HEV71在基因亲缘关系和流行时间关系上都很接近,但珠海市HEV71流行株的基因特征存在其特殊性。     

广东省韶关地区戊型肝炎病毒基因型分析

目的了解韶关地区流行的戊型肝炎病毒基因型,并探讨戊型肝炎是否属于人兽共患病。方法通过同源比对HEV四种基因型的戊型肝炎病毒序列,选取其保守序列部分设计两对巢式聚合酶链式反应的简并引物,建立一种可同时扩增戊型肝炎四个基因型病毒RNA的PCR快速检测方法。在广东省韶关地区采集猪粪便标本和非甲非乙型肝炎病人血清,提取病毒RNA,然后进行PCR检测,阳性时对扩增片段进行基因序列测定,并进行基因型分析。结果RT-nPCR检测结果显示99份猪粪便标本中有6份HEVRNA阳性,7份病人血清样本中1份阳性,序列分析显示全部为HEV基因IV型,4份猪标本中的HEV基因序列与GenBank中人HEV的基因序列最相似,同源性为88%~94%,且其中1份猪标本中的HEV与1份病人标本中HEV的序列同源性高达91.5%。结论广东韶关地区HEV流行株为基因IV型,而且猪HEV基因序列与人HEV之间有着高度的相似性,结果证实戊型肝炎是一种人兽共患传染病。     

北京市门头沟区麻疹病毒流行株基因特征研究

目的研究北京市门头沟区流行麻疹病毒(Me V)的基因型别及特征。方法采集麻疹疑似患者咽拭子和尿液标本分离病毒,提取病毒RNA,逆转录PCR扩增病毒的N基因碳末端的634 bp的核苷酸片段,对扩增产物进行序列测定和比较分析。结果在发病的39例患者中,14例扩增到N基因片段,序列阳性率为35.9%,经过序列比对,均为H1基因型。本研究所获得的14株麻疹病毒H1基因亚型在亲缘关系进化树上与WHO推荐的H基因型代表株Hunan.China93-7/H1-H1c同属一个分支,核苷酸同源性为96.7%~97.9%,氨基酸同源性为95.5%~97.3%。结论 H1基因型麻疹病毒是门头沟区麻疹病毒的优势流行株,与北京市及全国麻疹病毒流行株无差异。     

深圳地区HEV流行基因型及动物宿主带毒状况分析

目的了解深圳地区戊型肝炎病毒(HEV)流行基因型及动物宿主带毒状况。方法通过同源比对HEV四种基因型的戊型肝炎病毒序列,选取其保守序列部分设计两对巢式聚合酶链式反应的简并引物,建立一种可同时扩增戊型肝炎四个基因型病毒RNA的PCR快速检测方法。对深圳市采集的80份猪粪便标本和6份戊型肝炎病人血清,提取病毒RNA,然后进行PCR检测,阳性时对扩增片段进行基因序列测定,并进行基因型分析。结果80份猪粪便标本5份HEV—RNA阳性,6份病人血清样本中4份阳性。序列分析显示全部为HEV基因IV型,5份猪标本中的HEV基因序列与GenBank中人HEV的基因序列最相似,同源性为88%～94%。结论深圳地区HEV流行株为基因IV型,而且猪HEV基因序列与人HEV之间有着高度的相似性,证实猪是HEV的宿主,戊型肝炎是一种人兽共患传染病。     

广西玉林市2005—2012年狂犬病病原学监测及病毒N基因特征分析

目的分析2005—2012年广西玉林市狂犬病病原学监测结果及病毒N基因遗传变异特征,为狂犬病防控提供科学依据。方法 2005—2012年在广西玉林市采集犬脑组织及临床诊断人狂犬病病例的唾液进行病原学检测,检测阳性标本进行N基因核苷酸序列测定、同源性比较和种系发生分析。结果共采集、检测外观健康犬脑组织728份、临床诊断人狂犬病病例唾液33份,RT-PCR检测阳性率分别为0.96%(7/728)和51.52%(17/33)。获得5条犬源、6条人源狂犬病病毒株N基因全序列。该11条序列之间的核苷酸同源性为94.7%~100.0%,与广西以往分离株GX01的核苷酸序列的同源性为94.5%~98.4%,与疫苗株CTN株的同源性为94.6%~99.7%。进化树分析显示,犬源株和人源株病毒N基因亲缘进化关系很近,处于同一分支,都属于基因Ⅰ型狂犬病病毒。结论从病原学和病毒分子水平证实玉林市外观健康犬携带狂犬病毒及17例临床诊断病例为确诊病例,其病原为狂犬病病毒基因I型,阳性带毒犬的流动是造成本病传播和扩散的主要因素,也是造成该地区疫情高发的重要原因之一。     

Analysis of the complete genome sequences of one swine and two human hepatitis E virus genotype 4 strains isolated in Beijing,China

Full-length sequences were determined and analyzed for two human (MO and W3) and one swine (W2–5) hepatitis E virus (HEV) isolates from Beijing, China. The genomes of the three strains were composed of 7242, 7239, 7239 nucleotides, respectively, excluding the poly (A) tails, and were 84% identical to each other. All were classified into genotype 4. Sequence analysis shows that the 2 human isolates have up to 91–94% nucleotide identity in full length genome with swine strains isolated in China, while the swine isolate share 92% identity with the human strain T1 from Beijing. At the amino acid level, the three strains share 94%, 97% and 89–92% identity in the ORF1, ORF2 and ORF3, proteins respectively. The human strains MO and W3 have the highest identity, 97%, 98–99% and 96–98% in ORFs 1–3, respectively, to swine strains CHN-XJ-SW13 and CHN-XJ-SW33 from Xinjiang, China, while swine strain W2–5 has highest identity with the human strain HE-JA2, 96%, 99% and 91% in ORFs 1–3, respectively. Genotype specific amino acid substitutions were found at a single site in all three ORFs by sequences alignment, and genotype specific short sequences (5–10aa in length) were found in ORF1 and the C-terminus of ORF3. However, no difference was found at any amino acid position that discriminates between human and swine HEVs within genotype 4 for any of the three ORFs. These results indicated that the genotype 4 HEV strains from humans and pigs in China may evolve from the common ancestor.     

中国发现基因3型戊型肝炎病毒

目的通过对中国华东地区分离出的2株基因3型戊型肝炎病毒株进行同源性分析，探讨其分子起源和传播问题。方法收集华东某地区13个养猪场的133份猪粪便标本，利用巢式RT—PCR技术扩增戊肝病毒基因组的开放读码区2（ORF2）和RNA依赖的RNA聚合酶区（RdRp，ORF1），并进行基因同源性分析。结果戊肝病毒RNA检出率为43．61％（58／133）。其中，在同一个养猪场检出的2份阳性标本与23条戊肝病毒基因3型全长序列在ORF2和ORF1区的同源性分别为77．10％～92．64％和77．49％～91．14％，被划分为基因3型。另外12个养猪场的56份阳性标本均为基因4型。同时发现，某些日本分离的基因3型病毒株比其他基因3型株更接近本次分离的病毒株。结论这是在中国大陆地区首次发现基因3型戊肝病毒。同时证明在一个较为局限的群体中基因3型和4型病毒可以共存。     

中国南方某农村地区人与猪戊型肝炎病毒的检测和部分序列分析

目的调查中国南方某农村地区戊型肝炎病毒（HEV）人株与猪株的相关性。方法应用逆转录-巢式聚合酶链法（RT—nPCR）对一般人群中HEV-IgM阳性者、急性戊型肝炎患者和当地某养猪场的猪进行HEV RNA检测，并对HEV RNA阳性标本进行克隆测序和序列分析。结果132份猪粪便标本中13份为HEV RNA阳性；26份IgM阳性一般人群血清标本中有4份HEV RNA阳性；4例急性戊型肝炎患者中有1例的血清和粪便标本为阳性。序列分析发现该地区HEV人株与猪株在ORF2部分区域的核苷酸序列同源性为89．3％～100．0％，这10株HEV序列与HEVⅠ型、Ⅱ型、Ⅲ型和Ⅳ型在同一区域的核苷酸序列的同源性分别为78．7％～84．7％、83．3％～85．3％、76．0％～80．0％和84．7％～95．3％。结论该地区人群及猪群中流行的HEV同属基因Ⅳ型。     

山东省某地屠宰场猪肝内戊型肝炎病毒感染状况研究

目的研究商品猪肝脏内戊型肝炎（戊肝）病毒（HEV）的检出状况及其基因分型。方法采集35份山东省某个人屠宰场和某城镇大型屠宰场内的猪肝，处理后采用逆转录．巢式聚合酶链反应（nested RT·PCR）方法检测HEV RNA。并与GenBank中登录的HEV全长序列进行同源性分析。结果35份猪肝标本中共有3份检出HEVRNA，阳性率为8．57％。同源性分析显示这3株病毒均为Ⅳ型HEV。结论即将上市的商品猪肝脏内存在HEV感染，其基因型与中国大陆HEV流行株相同，均为基因Ⅳ型。     

Characterization of Full Genome of Rat Hepatitis E Virus Strain from Vietnam

We amplified the complete genome of the rat hepatitis E virus (HEV) Vietnam strain (V-105) and analyzed the nucleotide and amino acid sequences. The entire genome of V-105 shared only 76.8%–76.9% nucleotide sequence identities with rat HEV strains from Germany, which suggests that V-105 is a new genotype of rat HEV.     

北京市郊区八种动物戊型肝炎病毒抗体流行率调查及病毒基因型研究

目的 调查北京地区与人密切接触的猪、牛、羊、马、驴、犬、鸡、鸭8种动物血清中戊型肝炎病毒(HEV)抗体流行率及该地区猪HEV基因型和亚型.方法 收集8种动物的血清标本及幼猪粪便标本,用双抗原夹心ELISA法检测血清中抗-HEV;用巢式反转录聚合酶链反应法(RT-nPCR)检测HEV RNA;对部分PCR产物进行克隆和测序,并对测序结果进行基因分型.结果 在8种动物中抗-HEV阳性率分别为猪80.43%(481/598),其中成猪(>6月龄)为87.86%(369/420),幼猪(2～3月龄)为62.92%(112/178);牛15.02%(52/346);马14.29%(40/280);驴0(0/26);羊9.88%(33/334);犬0(0/21);鸭3.03%(7/231);鸡2.53%(8/316).RT-nPCR检测3月龄以下猪粪便标本HEVRNA阳性率为66.67%(74/111).HEV RNA阳性的标本测序后可归为6株(分别命名为bjsw1、bjsw2、bjsw3、bjsw4、bjsw5和bjsw6),6株HEV开放读码框2(ORF2)部分核苷酸序列的相似性为94.5%～99.6%,与1、2、3、4型HEV的相似性分别为75.6%～78.6%、75.6%～76.2%、77.1%～80.7%和83.7%～94.5%.6株HEV与人HEV 4d亚型的同源性最高,为90.0%～94.5%.结论 北京市郊区猪、牛、马、羊、鸭、鸡中均存在HEV感染,其中猪抗-HEV流行率最高,驴、犬抗-HEV的流行率最低;6株猪HEV属于基因4型、4d亚型.