应用时差成像技术选择优质胚胎移植

目的应用时差成像(time-lapse imaging,TLI)技术监测胚胎发育过程,依据胚胎形态学结合时间参数及卵裂模式挑选优质胚胎移植,并与传统培养法比较,探讨时间参数及卵裂模式与胚胎发育潜能的关系。方法对2015年5月-2016年1月在该科室进行体外受精(in vitro fertilization,IVF)治疗的107例不孕患者的胚胎资料进行回顾性分析,A组(40例)行TLI动态观察,根据胚胎发育时间参数及卵裂模式D3选择胚胎移植;B组(67例)行传统培养,根据形态学标准挑选胚胎,移植后剩余胚胎继续培养至囊胚。结果两组受精率(76.54%vs 76.58%)、优质胚胎率(53.74%vs 48.81%)、临床妊娠率(60.00%vs 53.73%)、种植率(41.33%vs 34.92%)、多胎率(28.00%vs 16.67%)及流产率(8.00%vs 16.67%)比较,差异均无统计学意义(P0.05)。A组种植胚胎与未种植胚胎两组相比,发育至2细胞的时间(t2)、从3细胞分裂到4细胞持续的时间(s2)、从2细胞分裂到3细胞持续的时间(cc2),差异均有统计学意义(P0.05),发育至3、4、5细胞的时间(t3、t4、t5)比较,差异均无统计学意义(P0.05)。对A组胚胎卵裂模式进行动态观察,正常卵裂胚胎组的优质囊胚形成率为50.47%,不均卵裂、碎片胚胎均有较高的囊胚形成率,分别为32.26%和37.50%,与正常卵裂胚胎组相比,差异均无统计学意义(P0.05),多核、非二倍性卵裂、混合型组的胚胎优质囊胚形成率分别为12.50%、6.25%和10.81%,与正常卵裂胚胎组相比,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 TLI对胚胎进行非侵入性评估,为胚胎提供一个安全无干扰的发育环境;时间参数及卵裂模式有利于预测胚胎发育潜能,作为挑选胚胎的重要参数,选择优质胚胎移植。     

胚胎卵裂速度异常对囊胚形成的影响

目的:探讨卵裂速度异常对胚胎发育能力的影响。方法:回顾分析78个第2天未卵裂的胚胎及1 298个发育迟缓的胚胎继续培养至第6天的囊胚形成情况。结果:卵裂迟缓的胚胎囊胚形成率、优质囊胚率、胚胎利用率(24.7%、25.6%、6.3%)均显著低于卵裂速度正常的优质胚胎(50.3%、62.3%、31.3%),且细胞数越少囊胚形成率越低。第2～3天发育停滞的胚胎,其囊胚形成率、胚胎利用率(21.9%、4.7%)均显著低于继续卵裂的胚胎(27.7%、8.1%)。第2天未卵裂胚胎培养后无囊胚形成。结论:卵裂速度是影响胚胎发育能力的重要因素,第2天不卵裂的胚胎及第3天细胞数≤3的胚胎几乎无发育活性,第2～3天继续卵裂的胚胎具有较高的临床利用价值。     

表皮生长因子与胰岛素对小鼠早胚体外发育的影响(英文)

目的:探讨表皮生长因子(epiderm algrowth factor,EGF)与胰岛素对小鼠体外受精(in vitro fertilization,IVF)胚胎植入前发育的影响。方法:小鼠IVF胚胎培养在添加不同浓度的EGF和/或胰岛素-葡萄糖的CZB培养基中,于hCG注射后138h检测囊胚发育率及每个囊胚的细胞数目。结果:培养基中添加0.1ng/mlEGF显著提高了小鼠扩张囊胚的形成率,而囊胚的细胞数目并未增加。EGF与胰岛素-葡萄糖共同添加对小鼠IVF囊胚发育率及囊胚细胞数目并未有显著提高。结论:EGF通过刺激细胞分化,而非细胞增殖方式促进小鼠IVF胚胎的早期发育。而各自最佳浓度的EGF与胰岛素共同添加对小鼠早胚并未有协同促进作用。     

瘦素对小鼠体外受精的影响

目的:观察瘦素(Leptin)对体外受精的影响。方法:采用小鼠卵母细胞体外受精的方法研究不同浓度瘦素对小鼠体外受精率的影响,仅受精时添加的瘦素对着床前各期胚胎发育率的影响。结果:①与对照组(0ng/mL组)相比,除100ng/mL组外,不同浓度瘦素对受精率均有显著影响(P<0.05)。②仅受精时添加不同浓度的瘦素对受精卵发育至4细胞胚、桑椹胚及囊胚的比率均无显著影响(P>0.05)。结论:①一定水平的瘦素可以显著提高小鼠的体外受精率,高水平瘦素反而对体外受精不利。②受精后至着床前各期胚胎的发育率与受精当时瘦素浓度无关。     

影响形态学低评分胚胎体外囊胚形成的相关因素研究

目的探究影响形态学低评分胚胎体外囊胚形成的相关因素。方法选取2015年5月至2016年7月在南方医科大学广济医院行常规体外受精与卵胞浆内单精子显微注射治疗周期中正常受精的D 3低形态学评分胚胎并将其移入囊胚培养液中进行培养,直至囊胚形成同时给予分级,随后分析囊胚形成与年龄、卵裂球数量、碎片率、受精方式的相关性。结果卵裂球数≥6个组的囊胚形成、可移植囊胚形成、优质囊胚形成情况均显著优于卵裂球数6个组;碎片率25%组囊胚形成、可移植囊胚形成、优质囊胚形成情况均显著优于碎片率≥25%组。结论形态学低评分胚胎具有不同程度的发育潜能,胚胎碎片率以及卵裂球数会影响其囊胚形成、可移植囊胚、优质囊胚形成。     

重组人钙调素对小鼠早期胚胎体外发育的影响

目的:探讨外源重组人钙调素(recombinant human calmodulin rhCAM)对小鼠早期胚胎体外发育的影响。方法:小鼠超数排卵,收集2-细胞胚胎放入含有不同浓度rhCAM的CZB培养液中,观察并记录胚胎形态及测定囊胚细胞数。结果:HCG(human chorionic gonadotropin)注射120h后,20μg/mlrhCAM添加组囊胚率、扩张囊胚率和孵化囊胚率显著高于对照组(P<0.05),200μg/mlrhCAM添加组囊胚率、扩张囊胚率和孵化囊胚率显著低于其它各组(P<0.05)。各组囊胚细胞计数无显著差异。结论:rhCAM可促进早期胚胎体外发育,但高浓度rhCAM抑制胚胎发育。     

4859枚非优质胚胎和废弃胚胎囊胚培养的临床观察

目的:探讨不孕症患者辅助生殖治疗过程中废弃的胚胎和新鲜周期移植后不够冷冻标准胚胎培养的临床意义。方法:收集本院不孕症患者接受辅助生殖治疗后第3天(D3)废弃的胚胎和移植后不够冷冻标准的胚胎,序贯培养至囊胚,将可利用囊胚进行冷冻保存。分析年龄、不孕类型、受精方式、胚胎卵裂球数目、集合培养胚胎的个数、胚胎质量分级等与囊胚形成的关系。同时比较冻融周期移植正常的卵裂期胚胎和培养形成的可利用囊胚的妊娠和出生婴儿情况。结果:共收集4859枚废弃的胚胎和新鲜周期移植后不够冷冻标准的胚胎,培养至第6天(D6),形成囊胚2020枚(41.6%),优质囊胚661枚(32.7%)。D3胚胎卵裂球数目≥10个,囊胚和优质囊胚的形成率最高,7~9个次之,6个时囊胚和优质囊胚的形成率急剧下降。D3Ⅰ~Ⅱ级胚胎囊胚形成率和优质囊胚显著高于Ⅲ、Ⅳ级胚胎(P0.05)。集合培养有利于囊胚的形成,每个微滴培养1个胚胎时优质囊胚形成率最低。冻融胚胎移植周期中移植D3胚胎和囊胚的临床妊娠率、流产率、双胎率、活产率、出生体重均为无统计学差异,其D3胚胎着床率低于囊胚且有统计学差异。结论:部分非优质胚胎和废弃胚胎仍具有发育潜能,囊胚培养有助于筛选出高发育潜能胚胎并进行保存,冻融囊胚移植可提高患者卵子的利用率,节约患者的治疗成本。     

复苏周期移植不同发育时期的鲜囊胚或冻融囊胚临床结局分析

目的分析冷冻胚胎复苏移植周期移植发育D5/D6的新鲜囊胚和冻融囊胚的临床结局,探讨不同发育时期囊胚的发育潜能,为进一步改进胚胎冷冻移植方案提供依据。方法回顾性分析因输卵管因素或男方因素行IVF/ICSI治疗后复苏周期行胚胎解冻培养新鲜囊胚移植和冻融囊胚移植患者的临床资料,根据囊胚形成和发育时间不同分为D5鲜囊胚组,D6鲜囊胚组,D5冻融囊胚组和D6冻融囊胚组。自然周期或雌激素替代周期准备子宫内膜,厚度达到8 mm以上后予黄体酮转化(D0),内膜转化第3天解冻复苏胚胎行囊胚培养,第5天移植发育至D5的囊胚,第6天移植发育D6囊胚;冻融囊胚在内膜转化第5天复苏,2 h后移植,分析比较各组间的临床结局。结果冷冻胚胎复苏后囊胚培养,D5鲜囊胚移植的胚胎种植率(48.57%)显著高于D6鲜囊胚(26.67%),差异有统计学意义(P0.05);临床妊娠率(68.52%)也明显高于D6鲜囊胚移植(46.67%),但差异无统计学意义(P0.05)。D5冻融囊胚的临床妊娠率(73.72%)和胚胎种植率(55.47%)均显著高于D6冻融囊胚组(47.89%和32.39%),差异有统计学意义(P0.01);D5/D6鲜囊胚分别与D5/D6冻融囊胚相比较,两组间临床妊娠率、胚胎着床率、流产率及活产率差异均无统计学意义(P0.05)。结论无论是冻融胚胎解冻养囊胚还是冻融囊胚复苏移植,D5囊胚移植相较于D6囊胚移植更有利于胚胎着床,获得更好的临床妊娠结局。新鲜周期移植后多余胚胎可行囊胚培养后冷冻保存,反复胚胎移植失败者可考虑将冻融胚胎行囊胚培养后移植,既提高胚胎利用率又有利于改善临床妊娠结局。     

D3低形态学评分胚胎的继续培养及其意义

目的:研究和评估低形态学评分胚胎的囊胚形成率及其价值。方法:将IVF/ICSI患者剩余的D3低形态学评分的胚胎转移至G2液中培养到D6,根据卵裂球生长速度和碎片比例分组,观察各组囊胚形成率和优质囊胚率。结果:低形态学评分胚胎中F1组的囊胚形成率和优质囊胚率均高于F3和F4组,F2组的囊胚形成率高于F4组;C1和C2组囊胚形成率和优质囊胚率均明显高于C3组,C1组的优质囊胚率高于C2组;D1组的囊胚形成率明显高于D2组。结论:低形态学评分的胚胎具有一定的发育潜能和利用价值,其继续发育能力与卵裂球数、碎片比例及发育速度有关。     

3种体细胞共培养体系对昆明鼠早期胚胎体外发育潜力的影响研究

目的:评价不同体细胞共培养体系对昆明鼠早期胚胎体外发育潜力的影响。方法:采用人卵丘细胞、昆明鼠卵丘细胞、昆明鼠成纤维细胞3种共培养体系与昆明鼠2细胞期胚胎共培养,与对照组比较,观察胚胎发育情况,计数囊胚细胞数、囊胚细胞凋亡数。结果:培养24～48h,4～8细胞及桑葚胚形成率共培养3组与对照组间无差异(P>0.05);培养72h,共培养3组间扩张囊胚形成率和囊胚形成率无差异(P>0.05),但均明显高于对照组(P<0.05);共培养3组间囊胚细胞数及囊胚细胞凋亡率无差异(P>0.05),但与对照组比较存在差异(P<0.05)。结论:不同类型的体细胞共培养体系均可在体外为胚胎发育提供一种更类似于体内的环境,有利于胚胎在体外发育。     

选择性单囊胚移植在降低多胎率中的应用

目的：探讨选择性囊胚培养与单囊胚移植（eBC-SBT）对妊娠结局、多胎妊娠率和单卵双胎率的影响。方法：按实施选择性囊胚培养与单囊胚移植技术的前、后,分为干预组（对预后良好、高危多胎妊娠风险的患者建议行选择性囊胚培养,自愿者行囊胚培养,其余患者于第3天移植）和非干预组（全部患者移植第3天卵裂期胚胎）。第5天或第6天对接受eBC-SBT患者的囊胚进行评级,评为BB及其以上级别的囊胚,予单囊胚移植;评为BC及以下级别的囊胚,予双囊胚移植。分析eBC-SBT对种植率、临床妊娠率、多胎率及单卵双胎率等的影响。结果：①干预组和非干预组患者的年龄、获卵数及受精率差异无统计学意义（P〉0.05）,干预后移植胚胎数降低（[1.60±0.56）vs（.2.17±0.51）,P〈0.01],种植率（33.75%vs.25.69%）和临床妊娠率（47.31%vs.40.84%）均提高（P〈0.05）,多胎率降低（15.38%vs.29.37%,P〈0.01）。②干预后,选择性单囊胚移植组移植胚胎数低于卵裂期胚胎移植组（[1.09±0.28）vs（.1.96±0.40）,P〈0.01],前者种植率提高（43.99%vs.30.18%,P〈0.01）,2组临床妊娠率差异无统计学意义（47.35%vs.47.29%,P〉0.05）,但多胎率降低（0.86%vs.24.59%,P〈0.01）。③干预组和非干预组的单卵双胎发生率差异无统计学意义（1.32%vs.1.67%,P〉0.05）。在干预组中,选择性单囊胚移植患者的单卵双胎率与卵裂期胚胎移植组的差异亦无统计学意义（2.59%vs.1.09%,P〉0.05）。结论：eBC-SBT能显著降低多胎率,有效维持总体临床妊娠率,且未见单卵双胎率异常增高。     

冻融优质胚胎体外培养时间对临床结局的影响

目的:探讨玻璃化冷冻复苏后优质胚胎的培养时间对临床结局的影响。方法:采用回顾性研究方法,将2011~2012年在本院实施冻融胚胎移植(FET)的1061例分为3组,其中冷冻胚胎复苏后的优质胚胎培养2~4h移植为A组(96例);培养4~8h移植为B组(615例);培养8h移植为C组(350例),比较各组胚胎植入率、临床妊娠率、流产率及活产率。结果:3组患者年龄、不孕年限、体重指数、移植日子宫内膜厚度、移植胚胎个数无统计学差异(P0.05);胚胎植入率(24.7%、23.4%、28.2%)、临床妊娠率(43.8%、40.8%、44.9%)、早期流产率(4.8%、10.4%、12.1%)、活产率(40.6%、32.7%、37.4%)均无统计学差异(P均0.05)。结论:玻璃化冷冻胚胎复苏后培养时间对FET周期临床结局无明显影响,可根据临床和患者情况,具体安排胚胎移植时间。     

废弃胚胎形成囊胚的潜力以及与妊娠结局的关系

目的 探讨废弃胚胎形成囊胚的潜力以及与妊娠结局的关系.方法 采用序贯培养方法,分别比较第3天2～3个细胞和4～5个细胞形成囊胚的潜能,碎片率＜5％和碎片率5％～10％的胚胎形成囊胚的潜能,以及有无囊胚形成与妊娠结局的关系.结果 共收集胚胎139个,第3天继续培养到第5天,囊胚形成率为29.5％(41/139).4～5个...     

D3形态学低评分胚胎囊胚形成的影响因素分析

目的：探讨取卵后第3天（D3）形态学低评分胚胎体外囊胚培养的发育潜能,分析影响囊胚形成的临床及胚胎因素。方法：通过序贯培养将D3低评分胚胎继续培养至囊胚期,观察囊胚形成率及优质囊胚形成率。分析年龄、基础窦卵泡数、基础卵泡刺激素（bFSH）、促性腺激素（Gn）总剂量、人绒毛膜促性腺激素（hCG）日雌二醇（E2）水平、获卵数、D3卵裂细胞数、D3胚胎碎片与囊胚形成的关系。结果：共收集422个取卵周期1 745个低评分胚胎进行囊胚培养,共形成1 046个（59.9%）囊胚,763个（43.7%）优质囊胚。不同基础窦卵泡、bFSH、Gn总剂量、hCG日E2水平、获卵数组间囊胚形成率及优质囊胚形成率差异均无统计学意义（P＞0.05）;不同年龄组间囊胚形成率差异无统计学意义（P＞0.05）,但优质囊胚形成率差异有统计学意义（P＜0.05）;不同D3卵裂细胞数、D3胚胎碎片组间囊胚形成率及优质囊胚形成率差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论：低评分胚胎有不同程度的发育潜能,D3卵裂细胞数、D3胚胎碎片影响低评分胚胎的囊胚形成;年龄、D3卵裂细胞数、D3胚胎碎片影响低评分胚胎优质囊胚的形成。     

胚胎卵裂球数及取卵后2天和3天冷冻对冻融胚胎移植临床结局的影响

目的：探讨胚胎卵裂球数及取卵后2天（D2）和3天（D3）冷冻对胚胎的复苏效果以及冻融胚胎移植（FET）临床结局的影响。方法：回顾性分析2010年1月—2012年5月行FET的417个周期的临床资料,分别按胚胎冷冻的时间（D2/D3）、卵裂球数、移植优质胚胎数进行分组,比较各组的胚胎复苏效果及临床结局。结果：D2≥4-细胞组的胚胎复苏率和卵裂球全存活率显著高于D2＜4-细胞组（89.35% vs. 79.11%,42.01% vs. 30.22%,P＜0.05）;D3≥6-细胞组的胚胎复苏率和卵裂球全存活率显著高于D3＜6-细胞组（86.52% vs. 72.43%,41.13% vs. 31.07%,P＜0.01）。D2组冷冻胚胎复苏后的优质胚胎率（56.84%）高于D3组（48.82%）,但D3组FET临床妊娠率（38.52%）高于D2组（27.61%）,差异均有统计学意义（P＜0.05）,2组间胚胎复苏率和流产率差异无统计学意义（83.50% vs. 79.44%,10.81% vs. 10.09%,P＞0.05）。随着移植优质胚胎数的增加,临床妊娠率和多胎率增加,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：D2≥4-细胞和D3≥6-细胞的胚胎冻融效果较好,D3冷冻胚胎的FET临床结局优于D2冷冻胚胎。     

激光辅助孵化对冻融卵裂期胚胎和囊胚移植妊娠结局的影响

目的：探讨激光辅助孵化（LAH）对玻璃化冻融卵裂期胚胎和囊胚移植妊娠结局的影响。方法：回顾性分析565个玻璃化冻融移植周期,根据是否行LAH,将426个卵裂期胚胎移植周期分为AH组和非AH组,139个囊胚移植周期分为AH1组和非AH1组。比较患者一般情况和妊娠结局。结果：卵裂期胚胎AH组和非AH组患者的临床妊娠率、胚胎种植率、多胎率、流产率、异位妊娠率比较差异均无统计学意义（P＞0.05）。囊胚AH1组的胚胎种植率和多胎率高于非AH1组（P＜0.05）,2组的临床妊娠率、流产率和异位妊娠率差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：LAH可提高玻璃化冻融囊胚移植的胚胎种植率和多胎率,但并不能提高玻璃化冻融卵裂期胚胎移植的临床妊娠率和胚胎种植率。     

人类植入前胚胎发育研究进展

随着近年无创成像技术、分子及基因组技术的发展,人类植入前胚胎发育的研究取得了相应进展。非侵入性实时成像法观察人类胚胎发育过程中最初3次有丝分裂可以预测囊胚发育的成败。目前世界各地多家体外受精（IVF）临床中心开始使用胚胎镜观察胚胎的卵裂时间和胚胎发育的空间模式。人类植入前胚胎发育的特征是重编程,包括精卵原核融合、表观遗传重编程和修饰、母源转录的全面退化和早期人类胚胎基因组激活,普遍认为在人胚胎发育的第3天即4-至8-细胞期胚胎基因组激活达高峰。谱系分化研究人类胚胎发育早期在8-细胞期每个细胞是独立的,但没有证据表明这一期不同细胞已经发生定向分化为滋养外胚层（TE）或内细胞团（ICM）。关于人单个卵母细胞的高精度全基因组测序、人类卵母细胞以及早期胚胎不同发育阶段基因转录组的动态变化已有报道。     

Formulation of a complex serum-free medium (CSM) for use in the co-culture of mouse embryos with cells of the female reproductive tract

Co-culture of pre-implantation embryos with cells of the reproductive tract requires a medium that is beneficial to both embryos and cells. However, many studies in this area utilize media originally formulated for specific cell lines. In the present study, a complex serum-free medium (CSM) was formulated on the basis of the ionic compositions of existing embryo culture media and mouse oviductal fluid as well as the concentrations of growth factors that appear to benefit mouse embryo development. The study began by investigating the effect of altering the concentrations of K+ ions (0-40 mM) and sulfate ions (0-10 mM) in embryo culture media on the development of 2-cell mouse embryos. Mouse embryos showed improved cell numbers at the blastocyst stage when cultured in 10 mM K+ compared with Whittingham's T6 medium. Embryos were also cultured in T6 supplemented with bovine serum albumin (BSA) containing various concentrations of insulin, insulin-like growth factors I and II, fibroblast growth factor, and epidermal growth factor. Insulin concentrations of 100 ng mL-1 significantly (P less than 0.05) improved the cell numbers of 2-cell embryos cultured to the morulae and blastocyst stages compared with those cultured in T6 + BSA alone. CSM was formulated on the basis of the results of these experiments and was found to support both improved development of 2-cell mouse embryos and the culture of mouse fibroblast and mouse oviduct cells.     

卵裂期胚胎不同解冻时间点对其囊胚培养及妊娠结局的影响

目的：探讨卵裂期冻融胚胎不同解冻时间点对囊胚培养后移植妊娠结局的影响。方法：回顾性分析2013-2016年在江门市中心医院行冻融胚胎囊胚培养477例患者共520周期的资料。依据胚胎复苏时间不同分为D2组（D2 15：00-16：00胚胎复苏）、D3组（D3 8：00-9：00胚胎复苏）,2组均于D5、D6 8：00-9：00观察囊胚形成。D5：D2、D3组培养时间分别为65 h、48 h;D6：D2、D3组培养时间分别为89 h、72 h。结果：2组的囊胚形成率（48.10% vs. 46.59%）、优质囊胚率（39.70% vs. 34.22%）、临床妊娠率（70.08% vs. 69.48%）、生化妊娠率（7.48% vs. 7.98%）、胚胎种植率（55.93% vs. 58.06%）,差异均无统计学意义（均P＞0.05）。优胚与非优胚在48 h、65 h囊胚形成率分别为30.37% vs. 13.28%、62.64% vs. 40.14%,差异有统计学意义（均P＜0.05）。优胚与非优胚在72 h、89 h囊胚形成率分别为32.32% vs. 27.59%、2.17% vs. 2.06%,差异无统计学意义（均P＞0.05）。不同培养时间移植周期的临床妊娠率、胚胎种植率：48 h组＞65 h组＞72 h组＞89 h组,而生化妊娠率：89 h组＞48 h组＞65 h组＞72 h组,但各组间比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）。结论：冻融胚胎囊胚培养可以根据工作需要选择在D2 15：00-16：00或D3 8：00-9：00进行胚胎解冻复苏;在D2 15：00-16：00解冻复苏,多数在D5即可形成囊胚进行移植;在D3 8：00-9：00解冻复苏,优胚在D5或D6均有形成囊胚可能,而非优胚需要培养较长的时间在D6形成囊胚。     

The effects of fertilization mode,embryo morphology at day 3, and female age on blastocyst formation and the clinical outcomes

Abstract

The aim of this study was to evaluate the influence of in vitro fertilization (IVF) versus intracytoplasmic sperm injection (ICSI), fertilization mode embryonic morphology at day 3, and female age on blastocyst development, on the clinical outcomes of pregnancy after blastocyst transfer. A total of 471 cycles were retrospectively investigated. The rates of blastocyst formation and of good blastocyst morphology were higher in IVF than in ICSI cycles but there were no significant differences in the clinical pregnancies or in the miscarriage rates. The rates of formation of blastocyst and of blastocysts with good morphology were significantly higher from good-morphology embryos than from poor-morphology embryos. Nevertheless, 16.9% of the poor-morphology embryos reached the blastocyst stage. The total rates of blastocyst formation, and rates of clinical pregnancy and implantation were statistically similar in the age <35, 35–39, and >39 year groups, although tending to decrease with increasing age. When equal numbers of embryos were transferred on day 3, the rates of clinical pregnancy and implantation after blastocyst transfer were significantly higher in the <35 year age group than in the 35–39 and >39 year age groups, which were not significantly different. The miscarriage rates after embryo or blastocyst transfers were not statistically different in groups of similar age. Therefore, extended embryo culture up to the blastocyst stage could be implemented for women aged younger than 35 years to increase the pregnancy rate. For older women, transfer and vitrification of available embryos at day 3 and extended culture of morphologically poor embryos to the blastocyst stage for cryopreservation may improve the clinical outcome.