PCR-SSCP技术检测矽肺合并肺癌癌组织p53基因突变的研究

用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析法对３６例矽肺患者的石蜡包埋的原发性肺癌组织ｐ５３基因第５、７、８外显子进行了检测，检出突变１５例。突变在第５、７、８外显子上都有发生，但以第８外显子上发现的阳性突变最多。对肿瘤类型和ｐ５３基因突变的关系进行了分析，发现矽肺病例肺腺癌ｐ５３基因阳性突变率最高，为５３．９％，高于普通型肺癌（３３．０％）。进一步对其中１例样本进行核苷酸序列直接测定，结果显示第５外显子非突变热点区的第１４４位密码子核苷酸由ＣＡＧ突变为ＡＡＧ，氨基酸由谷氨酰胺突变为赖氨酸，以上结果与非职业肺癌明显不同，提示ｐ５３基因突变在矽肺病例肺癌发生中起着重要作用，可能与矽尘作业环境中含有的某些化学致癌物有关。     

石棉相关肿瘤p53基因突变的免疫组化及PCR—SSCP研究

为了分析石棉相关肿瘤ｐ５３基因的突变特点，对石蜡包埋的石棉相关肿瘤ｐ５３基因突变体蛋白的表达进行了免疫组化观察，提取染色体ＤＮＡ，对ｐ５３基因的第５、７、８外显子进行ＰＣＲ－ＳＳＣＰ及测序分析。免疫组化观察发现：在分析的１０例病例中有５例阳性。ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析发现７例（８处）发生突变，其中４处集中在第８外显子上。５例腺癌中有４例发生ｐ５３基因突变。测序发现热点区突变。提示：石棉相关肿瘤ｐ５３基因突变率高。     

石蜡包埋的石棉肺癌组织中p53基因突变的分析方法

为了利用石蜡包埋的病理组织来研究石棉肺癌的基因突变情况，选用１０例石蜡包埋的石棉肺癌组织进行ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析，检测其抗癌基因ｐ５３的第５、第７和第８外显子的突变情况。经银染检查，发现４个病例的ｐ５３基因的第７或第８外显子片段呈突变阳性。用放射性自显影的ＰＣＲ－ＳＳ－ＣＰ方法分析这１０例病例，检测到７个病例的ｐ５３基因第７或第８外显子片段呈突变阳性。用两种方法检测均未发现这１０个病例的第５外显子呈突变阳性。银染ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测可检出放射性自显影ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析结果的６０％，二者的结果相符合。因而，简便、灵敏而且危害性小的银染检测方法，可以代替放射性自显影用于ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析，研究石棉肺癌的基因突变情况。     

石英的人类致癌性在DNA分子水平的证据

收集３６例石英粉尘作业工人肺癌（石英肺癌）的组织石蜡包埋物,提取其 Ｄ Ｎ Ａ,对 ｐ５３基因和 Ｋ ｒａｓ 基因进行了 Ｐ Ｃ Ｒ Ｓ Ｓ Ｃ Ｐ、 Ｐ Ｃ Ｒ Ｒ Ｆ Ｌ Ｐ及 Ｄ Ｎ Ａ 测序分析,发现具有完全有别于普通肺癌的特异基因突变谱。小细胞肺癌的 ｐ５３基因突变多发于第８外显子,腺癌的 ｐ５３基因突变率高。石英肺癌的 Ｋ ｒａｓ 基因突变未见一例发生于普通肺癌突变热点区第１２密码子上,相反发现多处非热点区突变,突变类型以 Ｇ→ Ｃ 突变为主。     

石棉肺癌组织中p53基因突变的PCR-SSCP及部分序列分析研究

为研究石棉致癌的分子机理，本研究首次直接分析石蜡包埋的石棉肺癌病例肺组织中抗癌基因ｐ５３的突变情况。利用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）技术分析１０例石棉肺癌病例，检测到７例（８个片段）存在ｐ５３基因的突变，突变位点位于其第５、７和８外显子区内，突变率为７０％。对其中２例进行ＰＣＲ产物直接序列分析，发现其基因一级结构分别发生Ｃ→Ａ和Ｔ→Ａ转换。     

肺癌中p53基因突变类型和可能致癌因素分析

为了研究肺癌中ｐ５３基因的作用及突变类型与不同致癌物的可能关系，用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ核酸序列技术分析了原发非小细胞肺癌中ｐ５３基因的突变谱，结果发现１２８例中９４例发生突变，其中８６例为点突变，７例为缺失和插入突变，１例为拼接部位突变。点突变以Ｇ→Ｔ和Ｔ→Ｇ突变为主（６３．９％），Ｇ→Ａ和Ａ→Ｇ占２５．６％，这些结果提示ｐ５３基因突变与非小细胞肺癌发生有密切关系，并根据其突变特点分析了可能的环境致癌物。     

应用PCR-SSCP检测转化细胞中p53基因突变

利用化学致突变物甲基丙烯酸环氧丙酯体外诱导人胚肺成纤维细胞，使之发生转化，分离转化细胞克隆。经ＰＣＲ特异性扩增ｐ５３基因外显子第５和第８，银染单链构象多态性（ＳＳＣＰ）分析，结果表明转化细胞中ｐ５３基因外显子第８发生突变，揭示出ｐ５３基因在化学致突变物诱导细胞转化中起着重要作用。     

用PCR—SSCP方法检测间皮瘤组织中p53基因点突变

为研究石棉纤维在人恶性间皮瘤病因学中的作用，检查了青石棉污染区１２例间皮瘤ＤＮＡ样品的ｐ５３基因点突变。应用非同位素ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法，聚丙烯酰胺凝胶电泳分析了ｐ５３基因５，６，７，８外显子的４个ＤＮＡ片段，结果显示：４例有异常移动的单链ＤＮＡ电泳带，其中２例位于外显子５，２例位于外显子６。提示：这些病例的ｐ５３基因存在点突变     

PCR-SSCP-DNA序列分析法检测人肺癌中K-ras基因突变

应用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）－单链构象多态性（ＳＳＣＰ）－ＤＮＡ序列分析法，对４０例肺癌样品中Ｋ－ｒａｓ基因突变进行检测。ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染分析，突变检出率为３０％（１２／４０），发现于肺腺癌的Ｋ－ｒａｓ基因突变率为４４％（１２／２７）；ＤＮＡ序列分析，１２例筛选突变阳性样品中的１１例检出了突变位点，９０％的突变发生于１２密码子，其突变谱以Ｇ→Ｔ颠换（占４０％）和Ｇ→Ａ转换（占６０％）为主。本研究结果显示ＳＳＣＰ银染分析对大量样品进行阳性筛选有很好的应用价值，ＰＣＲ－ＳＳＣＰ－ＤＮＡ序列分析法是检测基因突变的有效手段。     

胃粘膜腺癌p53基因序列分析

ｐ５３基因是人类进化上的高度保守基因，有５个高度保守区，其间的一个密码子突变可导致肿瘤的发生［１］。近年来，国内外对ｐ５３基因有过较多研究［２］，认为ｐ５３基因突变在恶性肿瘤中较普遍［３］，但国内用测序方法研究ｐ５３基因不多。为了解胃粘膜腺癌与ｐ５３基因突变的关系，作者对不同标本同时进行了ｐ５３基因５－８外显子测序分析。１　材料和方法１·１　标本　３３例胃粘膜腺癌和１７例胃粘膜非典型增生标本系胃镜下取材，同时送病理学对照确诊。３１例腹水患者均在手术前或手术时经病检确诊为胃腺癌、术后并发腹水。１·…     

食管癌与p53突变和人乳头状肉瘤病毒感染

目的探讨p53基因突变与人乳头状肉瘤病毒16（HPV16）感染在食管癌发病中的作用及相互关系。方法应用病例-病例研究方法进行分析，采用聚合酶链反应（PCR）、单链构像多态性（SSCP）、测序等分子生物学技术对110例食管癌组织标本中p53基因的突变与HPV16感染进行了检测。结果110例食管癌组织标本p53基因突变率为49．1％，其中外显exon5—6，exon7，exon8—9的突变率分别为19．1％，27．3％，17．2％。食管癌组织HPV16的检出率为49．1％。吸烟患者p53基因突变率（61．4％）明显高于非吸烟患者p53基因突变率（48．2％），差异有统计学意义；淋巴结转移患者p53基因突变率（65．2％）明显高于无淋巴结转移患者p53基因突变率（37．5％）；HPV16阳性者中，p53突变率是40．7％，HPV16阴性者仅为57．1％，两者差异无统计学意义。结论HPV16感染可能是食管癌高发区的危险因素；p53基因突变与吸烟、淋巴结转移有明显相关性；HPV16感染和p53基因突变可能是2个独立的事件。     

利用激光捕获显微分离技术和突变分析法检测肺癌病人痰细胞的K—ras和p53基因突变

[目的]探索激光捕获显微分离技术在检测肺癌病人K-ras和p53基因突变的应用。[方法]以3种不同的基因突变分析法对20例患者的痰细胞进行基因突变分析：①以PCR＋DGGE方法分析K—ras基因突变，以PCR＋SSCP方法分析p53基因突变；②以PCR十MAE＋DGGE方法分析K—ras基因突变；以PCR＋MAE＋SSCP方法分析p53基因突变；③以激光捕获显微分离技术和突变分析法检测肺癌病人痰细胞的K—ras和p53基因突变。[结果]在20例患者中，以现有的方法仅发现有15％（3／20）的基因突变，而激光捕获显微分离技术则发现有60％（12／20）的基因突变。[结论]激光捕获显微分离技术和突变分析法能高效灵敏检测肺癌病人痰细胞的K—ras和p53基因突变。     

食管癌P53基因第5外显子突变分析

目的　分析不同地区食管癌组织中 p5 3基因第 5外显子的突变谱。 方法　采用PCR扩增产物纯化后直接DNA序列测定技术对陕西省西安市 4 2例和河南省林州市 4 3例食管癌标本 p5 3基因第 5外显子突变情况进行检测。结果　西安和林州市食管癌标本中 p5 3基因第 5外显子突变率分别为 14 3% (6 /42 )和 18 6 % (9/43) ,两地突变率比较差异无统计学意义 (P >0 0 5 )。西安 6个突变位点中 4个为点突变 ,2个为缺失突变 ;林州 10个突变位点中9个为点突变 ,1个为插入突变。西安市有 4例突变发生在 12 6～ 12 8位点 ,林州市仅有 2例发生在该区域 (2 /10 ) ,但两者相比差异无统计学意义 (P >0 0 5 )。结论　西安市食管癌 p5 3基因第 5外显子的突变位点相对集中 ,林州市突变位点比较分散 ,可能与该地区多种危险因素的暴露有关。     

肺腺癌患者EGFR基因突变情况及影响因素分析

目的探讨肺腺癌患者表皮生长因子受体(EGFR)基因突变情况及与临床、影像学及病理学特征的相关性。方法选择2017年8月至2021年7月在海南省某肿瘤医院诊治的370例肺腺癌患者作为研究对象,根据EGFR基因检测结果分为野生型组和突变型组,将2组患者的性别、年龄、分期、腺癌类型、IASLC分级、组织学亚型、CT影像学特征等对EGFR突变的影响进行单、多因素分析。结果经EGFR基因检测,共有EGFR基因突变患者172例,EGFR野生型患者198例,基因突变率为46.49%;其中EGFR基因19号外显子突变75例,占突变组43.60%;EGFR基因21号外显子突变97例,占突变组59.40%。经多因素Logistic回归分析,女性、有吸烟史、有毛刺征、有空气支气管征、乳头型浸润型黏液性腺癌是EGFR突变的危险因素(均P<0.05),微浸润腺癌是EGFR突变的保护因素(P<0.05)。EGFR基因19号外显子、21号外显子突变患者的临床资料、影像学及病理学特征均无明显差异(均P>0.05)。结论肺腺癌患者EGFR基因突变具有相关的影像学、病理学特征,对制定患者的个性化治疗方案具有参考价值。     

p16基因结构及表达异常与非小细胞肺癌的关系

目的　探讨p16基因结构及表达异常与非小细胞肺癌临床病理因素的相关性。方法　利用免疫组化、PCR -SSCP方法检测了p16基因的表达水平及第 2外显子突变 ,并将以上结果与 5 2例非小细胞肺癌 (NSCLC)临床病理因素进行相关性研究。结果　p16基因第 2外显子缺失 /突变率为 2 3 1% (12 /5 2 ) ,p16蛋白丢失率为 5 3 8% (2 8/5 2 ) ,基因的缺失和蛋白的丢失与肺癌的转移和分期有关。结论　p16基因突变及表达异常可能在NSCLC的发生、发展中起重要作用 ,检测该基因可作为临床诊断及预后评估指标。