与SARS相关的卫生医疗机构内鼠形动物携带SARS冠状病毒的调查分析

目的　调查与SARS相关的卫生医疗机构内鼠形动物携带SARS冠状病毒 (CoV )情况 ,为寻找SARS的源头和传染途径提供证据。方法　常规方法捕捉老鼠 ,采用巢式PCR技术、荧光定量PCR技术、基因序列检定技术、病毒细胞培养技术进行测试。结果　在广州市与SARS相关的卫生医疗机构内捕捉的鼠形动物共 3种 5 9只 ;用SARS CoV特异性引物对 3 2份肛拭子样本进行PCR检测 ,结果显示肛拭子样本有 4份阳性 ,阳性率为 12 .5 % ;阳性片段基因序列与SARS CoV同源性为 90 %～ 96% ;PCR扩增片段阳性样本细胞培养结果未能分离到SARS CoV。结论　鼠形动物能否携带和传播SARS CoV ,仍需作进一步研究。     

广西野生动物SARS冠状病毒的感染状况及其意义

目的查明广西境内野生动物SARS冠状病毒感染状况。方法对广西境内15种117只野生动物及99只人工养殖的果子狸采用聚合酶链反应和血清学方法检测其病毒核酸。结果15种野生动物中鸟类及爬行类动物血清的SARS冠状病毒抗体阳性率分别为22．2％和20．0％，哺乳类动物SARS冠状病毒抗体阳性率为0，人工养殖的果子狸咽拭子及肛拭子标本未检出SARS冠状病毒核酸。结论野生动物中鸟类及爬行类动物SARS冠状病毒感染率较高，可能是SARS冠状病毒的自然宿主或储存宿主。     

广东省野生动物销售人员SARS冠状病毒抗体血清学研究

目的　比较野生动物销售人员和健康人群感染SARS冠状病毒的情况 ,为探索验证SARS冠状病毒源于动物的假设提供依据。方法　于 2 0 0 3年 5月选择广州市 3个野生动物市场销售人员、2家医院的医务人员、某疾病预防控制中心工作人员及某门诊健康体检人员等无SARS临床症状的健康人群为调查对象 ,采集调查对象的血清 ,用间接ELISA法检测SARS冠状病毒IgG抗体。结果　共检测销售野生动物人员血清 5 0 8份 ,SARS冠状病毒抗体阳性率为1 3 0 2 % (6 6 / 5 0 8) ,其中以主要销售果子狸人员的阳性率最高 ,为 72 7% (1 6 / 2 2 ) ,其次销售山猪人员为 5 7 1 % (1 6 / 2 8) ,销售黄犭京人员为 5 6 3% (9/ 1 6 ) ,销售兔人员为 4 6 2 % (6 / 1 3) ,销售山鸡人员为 33 3% (3/ 9) ,另在猫、鸟和蛇等其他 1 2种野生动物的销售人员中均不同程度检出SARS冠状病毒抗体。其他健康人群SARS冠状病毒抗体阳性率为 2 1 1 %(6 / 2 84 ) ,其中医院医务人员为 2 92 % (4 / 1 37) ,疾病控制人员为 1 5 9% (1 / 6 3) ,社区健康人员为 1 1 9% (1 / 84 )。销售野生动物人员SARS冠状病毒抗体阳性率与其他健康人群比较差异有显著性 (χ2 =2 6 0 89,P <0 0 1 )。结论　野生动物销售人员的SARS冠状病毒抗体阳性率显著高于其他健康人群     

广东省实施野生动物市场干预后SARS冠状病毒污染情况分析

目的了解广东省实施野生动物市场干预后野生动物市场SARS冠状病毒污染情况,为防控SARS疫情提供科学依据。方法于2004年9月至2005年5月,每月在广州市两家经营野生动物的场所分别采集动物市场外环境样本和各种动物样本(咽拭子、肛拭子、粪便等),用Realtime-PCR法检测SARS-CoV核酸基因片段。结果2004年1月起,广东省对动物市场进行干预,在全省范围内关闭野生动物交易市场,全面禁止果子狸等野生动物的饲养、运输、销售、屠宰和食用。市场干预后,检测销售飞禽类、水禽类、畜类、兽类、水产类等的动物市场外环境样本共417份,检测动物市场蛇、水产、黄犭京、竹鼠、兔、猫、鸡、鸭、鸽子等动物样本共1 160份,均未检出SARS-CoV核酸片断。结论实施对野生动物市场干预,能有效降低动物市场各种动物SARS-CoV的携带率,对预防SARS的发生和传播起到了重要作用。     

应用RT-PCR方法检测人与动物的SARS冠状病毒

目的选择合适的RTPCR检测方法应用于人和与人类生活密切相关的多种野生、圈养和市售动物携带SARS样冠状病毒的检测,探索SARS样病毒的来源。方法收集深圳SARS临床诊断病例、疑似及观察病例咽漱液标本共350份,分别用TaqMan和分子信标荧光RTPCR法进行检测;收集386只动物的咽肛拭子样本及病毒分离培养物共442份样品进行了TaqMan荧光RTPCR和普通RTPCR法的检测。结果41例临床确诊病例荧光RTPCR法检出10份阳性,阳性率24.39%,TaqMan法和分子信标法检出结果8份符合(符合率88.89%)。对动物样本病毒分离培养物细胞病变样本18份进行检测,检出16份阳性,其中14份(87.5%)样本来源为果子狸。深圳东门市场及广东周边地区市场及养殖场动物样本检测结果:果子狸、貉及獾类动物总的阳性率为39.02%,而其它动物的阳性率为0,两者间差异具有显著性(P<0.01);对东门市场109只主要野生动物咽肛拭子样本进行PCR检测,阳性率44.04%,而145只野外的野生动物阳性率仅为0(P<0.01)。结论TaqMan法和分子信标法均可用于SARS检测;动物中尤其是果子狸等野生动物可能携带有SARS冠状病毒。     

广州市动物市场从业人员SARS冠状病毒感染的危险因素分析

目的 探讨动物市场从业人员SARS冠状病毒(CoV)感染的可疑危险因素。方法 在对广州市3家大型野生动物市场从业人员进行SARS-CoV抗体检测的基础上,采用自行设计调查表进行SARS-CoV感染的危险因素调查,采用单因素和多因素logistic回归分析方法分析资料。结果经单因素logistic回归分析发现,经营其他畜类(猫、狗)、野生畜类(狸、山猪、黄猄)、其他野生类(蝙蝠、巨蜥、穿山甲等)、水产类(甲鱼、龟、鳗鱼、蛙等)动物、采购销售等是SARS-CoV感染的相关因素;经多因素logistic回归分析发现有意义的因素是经营野生畜类(狸、山猪、黄猄)(P<0.001)和经营家禽(鸡、鸭、鹅、鸽子)(P=0.04),OR值分别为12.28、0.41。结论 接触狸类动物是该从业人员感染SARS-CoV的主要危险因素。     

暴发性胃肠炎中诺沃克样病毒的检测

目的　确定暴发性胃肠炎中诺沃克样病毒的检测方法。方法　对2 0 0 3年10月和2 0 0 4年3月广东省疾病预防控制中心收集到的2起(广州市、江门市各1起)急性胃肠炎暴发患者的粪便和肛拭子标本,采用针对诺沃克样病毒的特异引物和逆转录 聚合酶链反应(RT PCR)技术进行检测,再经核苷酸序列测定方法证实,并与酶联免疫方法进行比较。结果　用RT PCR进行检测,12份急性期粪便标本(广州标本)中诺沃克样病毒阳性11份,13份肛拭子(江门标本)中阳性4份;用酶联免疫方法进行检测,11份粪便标本中有8份阳性,13份肛拭子标本均为阴性;阳性样本经序列分析证实为诺沃克样病毒GⅡ组,其中从广州标本中所获得的广州株与af39913的核酸相似性为96 7% ,从江门标本中所获得的江门株与saitamaU4毒株的核酸相似性为94 5 %。结论　采用PCR和酶标方法可有效地进行粪便的诺沃克样病毒检测,检测肛拭子时敏感性较差     

广州市野生动物批发市场从业人员SARS冠状病毒感染的流行病学研究

目的　了解广州市野生动物市场从业人员SARS冠状病毒感染状况。方法　对 3家野生动物市场部分从业人员进行SARS冠状病毒IgG抗体血清学检测并回顾性调查急性呼吸道感染症状。结果　 6 35名从业人员中 ,SARS冠状病毒抗体检出率为 16 6 9%。 3家市场从业人员抗体检出率存在着差异 ,主营野生畜类动物的甲市场为 2 5 6 1% ,明显高于分别主营禽类、蛇类的乙市场和丙市场 (7 5 0 %和 6 80 % ) ;只经营果子狸者抗体检出率为 5 8 5 4 % ,明显高于只经营蛇类者的9 4 6 %。甲市场内 ,主营野生畜类者、市场管理者、从业人员子女、主营家禽家畜类者、主营蛇类者及经营冷冻类食品者等 6类人员随着接触野生畜类动物机会的减少 ,抗体检出率下降 ,依次为5 9 34%、2 0 5 9%、16 0 0 %、15 2 2 %、10 4 0 %和 9 6 8%。在SARS流行期间 ,有急性呼吸道感染症状者抗体检出率为 30 70 % ,高于无症状者的 2 0 0 8% ;抗体阳性者急性呼吸道感染症状发生率为4 9 2 8% ,高于阴性者的 30 35 %。结论　动物市场人员SARS冠状病毒感染可能与野生畜类动物 ,特别是果子狸有密切关系。在SARS流行期间 ,不排除存在着部分从业人员曾感染人SARS冠状病毒并发病 ,但由于临床表现不明显而被忽略的可能性     

101例严重急性呼吸综合征患者粪便中SARS冠状病毒RNA的检测

目的　研究严重急性呼吸综合征 (SARS)患者粪便中排出SARS冠状病毒 (SARS CoV)RNA的情况。方法　采用荧光定量聚合酶链反应法 (FQ PCR)检测 10 1例病程为 10～ 5 5d的SARS患者、2 7例非SARS患者和 4 0 0名健康体检人群粪便中SARS CoVRNA。结果　 10 1例SARS患者的粪便标本中 5 8例 (5 7 4 % )SARS CoVRNA阳性 ;2 7例非SARS患者和 4 0 0名健康体检人群的粪便标本均为阴性。SARS患者发病后 10～ 19、2 0～ 2 9、30～ 39和 4 0～ 5 5d ,粪便中SARS CoVRNA阳性率分别为 10 0 % (8/ 8)、6 7 7% (2 1/ 31)、4 7 4 % (2 7/ 5 7)和 4 0 0 % (2 / 5 )。粪便中SARS CoVRNA载量对数值分别为 6 0 6± 2 0 5、4 5 1± 1 2 3、3 82± 1 4 4和 3 5 7± 1 2 5。结论　SARS患者急性期粪便中SARS CoVRNA阳性率和载量对数值最高 ,且随病程延长而下降     

深圳地区食物中毒低发期食品从业人员携带副溶血性弧菌的研究与分析

目的了解深圳某地区食物中毒低发期食品从业人员副溶血性弧菌携带情况。方法运用实时荧光PCR法快速检测肛拭子样本,阳性样本采用传统培养法进行分离鉴定。结果1200份食品从业人员肛拭子样本中,9份样本实时荧光PCR检测为阳性,PCR阳性率为0．8％。结论在食物中毒低发期,深圳某地区食品从业人员副溶血性弧菌携带率为0．5％。     

不同人群血清对人SARS冠状病毒和动物SARS样冠状病毒反应性的比较

目的 探讨不同人群血清中人SARS冠状病毒抗体和动物SARS样冠状病毒抗体所表达的意义及其之间关系。方法 应用人SARS冠状病毒和动物SARS样冠状病毒抗原片进行间接免疫荧光(IFA)定性和半定量试验,检测23份一般人群、25份动物市场从业人员和74份SARS病人的SARS冠状病毒IgG抗体阳性(ELISA法检测)血清样本,并进行比较分析。结果 23份一般人群、25份动物市场从业人员和74份SARS病人的血清样本的IFA阳性率分别为73．91％、68．00％和100．00％,在IFA阳性人群中其血清样本既能对人SARS冠状病毒也能对动物SARS样冠状病毒产生反应的分别占100．00％(17／17)、64．71％(11／17)和94．59％(70／74);70．59％(12／17)一般人群和76．47％(13／17)动物从业人员其血清中的动物SARS样冠状病毒抗体水平高于人SARS冠状病毒;而SARS病人血清中的人SARS冠状病毒与动物SARS样冠状病毒抗体水平以两者相同和前者高于后者为多,分别占56．76％(42／74)和33．78％(25／74)。结论 不同人群血清中的人SARS冠状病毒抗体和动物SARS样冠状病毒抗体两者之间均存在着一定的交叉反应现象,从血清学上提示了人SARS冠状病毒与动物SARS样冠状病毒之间存在着很高的同源性;人SARS冠状病毒抗体和动物SARS样冠状病毒抗体两者各自表达的意义是有所不同的,通过间接免疫荧光半定量试验可有助于区别感染者所染病毒的倾向性。     

上海地区SARS患者冠状病毒样颗粒培养与分离

目的 对上海地区SARS患进行病原体的培养10分离。方法 复旦大学公共卫生学院与上海市疾病预防控制中心合作,对上海地区第1例、第2例SARS确诊病例咽拭标本接种多种细胞,进行病原分离、观察。结果 在第1例SARS确诊病例咽拭标本感染的Vero E6细胞观察到CPE;经超速离心、电镜负染观察见到了直径在60～100nm的冠状病毒样颗粒;感染的VeroE6细胞和病人血清间接荧光抗体显示阳性。此株冠状病毒样颗粒暂时命名为SARS—CoV—Fudan I株。结论 在上海市的第1例确诊SARS病例的咽试培养中,见到新型冠状病毒样的颗粒。     

Animal coronaviruses: what can they teach us about the severe acute respiratory syndrome?

In 2002, a new coronavirus (CoV) emerged in the People's Republic of China, associated with a severe acute respiratory syndrome (SARS) and mortality in humans. The epidemic rapidly spread throughout the world before being contained in 2003, although sporadic cases occurred thereafter in Asia. The virus is thought to be of zoonotic origin from a wild animal reservoir (Himalayan palm civets [Paguma larvata] are suspected), but the definitive host is unknown. There is concern about possible transmission of SARS CoV to rodents or domestic cats (as proven experimentally) with perpetuation of the disease in these species. In livestock and poultry, CoVs are recognised causes of enteric and respiratory infections that are often fatal in young animals. Although the emergence of SARS surprised the medical community, veterinary coronavirologists had previously isolated CoVs from wildlife and documented their interspecies transmission to livestock. Furthermore, scientists were aware of compelling evidence pointing to the emergence of new CoV strains and the mutation of existing strains resulting in new disease syndromes in animals, but the evolution and disease impact of CoVs was not widely appreciated before SARS. This review focuses on the comparative pathogenesis of CoV infections, including the factors that accentuate CoV respiratory disease, with emphasis on livestock and poultry. The goal is to provide insights into CoV transmission and disease mechanisms that could potentially be applicable to SARS, highlighting the contributions of veterinary scientists to this area of study. Such examples illustrate the need for communication and collaboration between the veterinary and medical communities to understand and control emerging zoonotic diseases of the 21st Century.     

广东省不同人群SARS病毒抗体水平调查

目的对不同人群进行SARS-IgG抗体水平检测，分析SARS流行规模和特征，评价暴露的危险性，了解人数中是否存在SARS病毒隐性感染，为寻找SARS病毒传染源提供线索。方法抽取7708份不同人群标本，按临床症状和暴露因素分为临床确诊SARS病人、病人或污染物的接触者、普通健康人群和动物销售人员4类，采用酶联免疫方法(ELISA)进行SARS-IgG抗体检测，用免疫荧光法(IFA)复核，并结合流行病学资料进行分析。结果127例临床确诊SARS病人抗体阳性率为66．9％；密切接触者中女性发病率高于男性；SARS病人或其污染物的密切接触者抗体阳性率为0．88％；动物销售人员为13．4％；野生哺乳动物销售者的抗体阳性率显著高于其他动物销售者，普通健康人群未检出抗体阳性。低年龄健康人群ELISA检测阳性率为2．06％，高于总体水平。结论人群总体抗体水平很低，普通健康人群无SARS冠状病毒抗体，但可能存在某种可与SARS冠状病毒起交叉反应的抗体；有无接触史是影响抗体阳性率的重要因素；密切接触者可能存在隐性感染；野生动物可能是本次SARS的传染源。     

清远市小学学生SARS冠状病毒抗体血清流行病学研究

目的了解清远市小学学生SARS冠状病毒(简称SARS-CoV)抗体水平。方法分别于2005年10月和2006年4月,采集清远市2所乡镇小学学生及2003年SARS-CoVIgG检测阳性儿童的血液,用酶联免疫法检测血清中SARS-CoV抗体IgG。结果共检测小学学生血清样本449份,SARS-CoV IgG总阳性率为1.78%(8/449),男、女学生之间阳性率差异无统计学意义(P>0.05);其中在9、10、11、12岁年龄组学生中检出SARS-CoV IgG,阳性率分别为2.70%(1/37)、7.58%(5/66)、2.13%(1/80)、0.99%(1/101),4个年龄组阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05);8份SARS-CoV IgG阳性血清样本均来自同一学校;对17名2003年SARS-CoV lgG检测阳性的儿童进行追踪重新采血检测,阳性率为11.76%(2/17)。结论该地区小学学生SARS-CoV抗体阳性率较低,存在隐性感染及聚集现象,SARS-CoV抗体IgG水平随时间延长会逐渐下降,甚至消火。     

改良分子信标-双重实时荧光PCR快速检测SARS病毒

目的建立改良分子信标-双重实时荧光PCR检测SARS病毒的方法,用于SARS的早期诊断和动物溯源。方法利用改良分子信标技术、装甲RNA和双片段双色荧光技术,根据GenBank公布的SARS病毒聚合酶基因1b的阅读开放框架结构的保守序列,自行设计一对引物和探针,以部分临床标本的酶联吸附实验结果和传统细胞培养方法作为对照,建立分子信标检测SARS病毒的方法。对368份临床标本(咽漱液、血液、粪便、尿液)、52份细胞培养液和50份动物标本进行荧光PCR扩增。结果分子信标检测SARS病毒的方法灵敏度为10～100个拷贝ml,与流感病毒等呼吸道病毒无交叉反应。分子信标检测368份临床标本,20份阳性。其中确诊病例阳性率为21.27%(1047),确诊病例的咽漱液阳性率为43.48%,还分别从粪便和血清中检测到SARS病毒。52份细胞培养液,29份阳性,阳性率为55.77%。50份动物标本,23份阳性,阳性率为46%。结论改良分子信标-双重实时荧光PCR检测SARS病毒方法灵敏度高、特异性强,可用于SARS的临床早期诊断和动物溯源。     

SARS冠状病毒基因溯源分子生物信息学分析

目的：对广东省两次流行的SARS冠状病毒（SARS—CoV）进行分子水平的溯源分析，为进一步研究SARS冠状病毒提供分子生物信息学资料。方法：对GenBank登录的SARS冠状病毒和SARS样冠状病毒（SARS—like CoV）核酸序列进行了分析，以Breda病毒为外组，构建了SARS冠状病毒和SARS样冠状病毒系统进化树，并进行单核苷酸变异分析。结果：发现两次SARS自然流行的病毒可分为两个明显不同的聚类；第二次流行时从人类中分离的SARS冠状病毒和从果子狸等动物中分离的SARS样冠状病毒可分为两个基因型，两型的主要鉴别依据是病毒的全基因组变异而非Spike基因序列。结论：前后两次SARS自然流行病毒可能以不同的特性感染人类而不是简单的重复。结合流行病学资料，对第二次流行时的SARS冠状病毒进行分子水平溯源分析的结果表明，分离自前2例指标患者的病毒基因序列与来自果子狸等动物的SARS样冠状病毒的基因序列存在较大的差异。提示第二次流行的SARS冠状病毒由果子狸等动物传染人的论据不足。     

四川省首起家庭内暴发传染性非典型肺炎调查

目的 对四川省首起可疑传染性非典型肺炎(SARS)的家庭暴发病例进行流行病学调查，病原学、血清学检测，明确诊断。方法 对发生于2003年2月12日的首起家庭暴发病例进行流行病学调查，病原学和血清学检测。结果该起暴发发生于四川省广元市某厂，1家3口皆发病，有密切接触史，符合传染性非典型肺炎的临床诊断标准。患者鼻和咽拭子，上呼吸道分泌物标本，均未分离到流感病毒，禽流感病毒和肺炎衣原体。患者A恢复期血冠状病毒IgM和IgG抗体阳性，患者B恢复期血冠状病毒IgG抗体阳性，患者C急性期血冠状病毒和肺炎衣原体IgM抗体阳性。结论 该起暴发的流行病学、临床特征、血清学等均符合传染性非典型肺炎的诊断。为四川省首起传染性非典型肺炎疫情。