索拉非尼治疗肝细胞癌的现状

在我国肝细胞癌有较高的发病率、术后复发率和病死率。肝细胞癌对放化疗不敏感,尤其是进展期肝细胞癌尚缺乏有效的治疗手段。索拉非尼是第一个用于肝细胞癌临床治疗的分子靶向药物,是肝细胞癌药物治疗的里程碑。然而,在临床应用中存在耐药现象。因此,探究索拉非尼的耐药机制、寻找耐药的分子标记物有重要意义。本文对索拉非尼治疗肝细胞癌的现状进行综述。     

嗜中性活性肽2（NAP-2）在人肝癌细胞株和肝癌组织的表达

目的:探讨NAP-2在人肝癌细胞株SMCC-7721和人肝正常细胞株HL-7702、肝癌组织及其癌旁组织表达的差异性.方法:采用免疫细胞化学法(Immunocytochemistry,ICC)检测人肝癌细胞株SMCC-7721和人肝正常细胞株HL-7702中NAP-2蛋白的表达,免疫组织化学法(Immunohistochemistry,IHC)检测30例肝癌组织及其癌旁组织中NAP-2蛋白的表达.结果:NAP-2在人肝癌细胞株SMCC-7721表达率为100%,人肝正常细胞株HL-7702无表达. 在肝癌组织中强阳性表达率为63.33%,癌旁组织无强阳性表达;经统计学分析,两者NAP-2的表达呈显著差异(P<0.01).结论:NAP-2在肝癌发生、发展过程中可能起着一定作用.     

lncRNA在肝细胞癌索拉非尼耐药中的最新研究进展

肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是全球最常见和最致命的癌症之一。大多数中晚期患者接受药物为主的治疗,索拉非尼(Sorafenib)作为晚期肝细胞癌的独特靶向药物,在临床上得到了广泛应用。然而,索拉非尼靶向治疗不仅单药有效率低,且耐药性也是亟待解决的大问题。最近研究显示长链非编码RNA(Long non-coding RNA,lncRNA)与肝细胞癌的发生发展、侵袭转移、预后及耐药有着密不可分的联系,并且在耐药研究方面成为新兴热点。本文就lncRNA在肝细胞癌索拉菲尼耐药中的最新发现及调控耐药性的具体机制展开综述。     

索拉非尼治疗肝细胞癌进展后的二线治疗

原发性肝癌是临床最常见的恶性肿瘤之一,其病理分型绝大多数属于肝细胞癌（HCC）。索拉非尼是第一个亦是目前唯一一个被多个国家批准用于治疗HCC的分子靶向药物,但其疗效有限,多数患者口服一段时间后会出现耐药而病情进展,对于这些患者目前尚缺乏标准的二线治疗方案,本文就索拉非尼治疗HCC耐药后的最新二线治疗研究进展作一综述。     

索拉非尼毒副反应1例报告

索拉非尼(sorafenib)是由拜耳和ONYX公司共同研制的一种针对VEGF及其受体的多靶点激酶抑制剂,2006年11月底正式在我国上市.临床研究表明索拉非尼对肾透明细胞癌、黑色素瘤、肝细胞癌等均有一定的疗效.     

肝癌细胞及正常肝细胞中间隙连接蛋白Cx32、Cx43的表达--激光扫描共聚焦显微镜研究

目的研究间隙连接蛋白Cx32、Cx43在肝癌细胞系HHCC、SMMC-7721及正常肝细胞系QZG中的表达.方法采用免疫荧光标记技术,对HHCC、SMMC-7721及QZG细胞中Cx32、Cx43蛋白进行激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)分析.结果Cx2、Cx43蛋白定位于肝细胞胞质中,在HHCC、SMMC-7721中阳性细胞率、阳性细胞的荧光强度较QZG中明显减弱.结论Cx32、Cx43蛋白表达降低可能与肝细胞癌的发生有关.     

经导管肝动脉化疗栓塞联合索拉非尼治疗中晚期肝细胞癌的临床观察

目的 观察经导管肝动脉化疗栓塞(TACE)联合索拉非尼治疗中晚期肝细胞癌的有效性和安全性.方法 40例已接受过TACE治疗的中晚期肝细胞癌患者口服索拉非尼单药治疗,400mg,2次/d,直至病情进展或出现不可耐受的毒性反应.按照实体瘤疗效评价标准(RECIST)评价疗效,按照美国国立癌症研究所常见毒性事件标准(NCI-CTCAE)评价不良反应.结果 40例中晚期肝细胞癌患者中,获得完全缓解1例,部分缓解7例,疾病稳定19例,疾病进展13例,疾病控制率为67.5%.全组患者的生存时间为1～18个月,1年生存率为54.0%.主要不良反应为手足皮肤反应,其次是腹泻和血小板计数降低.结论 TACE联合索拉非尼治疗中晚期肝细胞癌是有效和安全的.     

索拉非尼治疗肝细胞肝癌的发展进程

RAS/RAF/丝裂原活化蛋白/细胞外信号调节激酶(ERK)激酶(MEK)/ERK介导的血管生成信号在肝细胞癌(HCC)的发展中发挥重要作用.索拉非尼是一种口服的RAS/RAF激酶受体和包括血管内皮生长因子受体(VEGFR)、血小板衍生生长因子受体(PDGFR)、FLT3基因、RET和c-Kit受体在内的几个酪氨酸激酶受体的抑制剂,这些受体参与了血管生成和细胞增殖.索拉非尼在体外研究、不同类型的肿瘤、临床试验、临床异种移植模型中均被证明具有抗肿瘤活性.全文对索拉非尼的作用机制、临床研发历史以及正在进行的索拉非尼联合肝动脉栓塞化疗(TACE)治疗肝细胞癌的临床试验作一综述.     

肝细胞癌差异表达基因P-02反义寡核苷酸抑瘤作用的体外实验研究

目的：通过全硫代修饰的肝细胞癌差异表达基因P-02反义寡核苷酸对人肝癌细胞系SMMC-7721增殖活性的影响，探讨P-02基因的功能。方法：以脂质体为载体，采用MTT法、RT-PCR、流式细胞术检测P-02 AS-ODN(antisense oligonucleotide)对SMMC-7721细胞生长、增殖、细胞周期的作用。结果：脂质体介导的P-02基因反义寡核苷酸可抑制SMMC-7721增殖，RT-PCR结果显示P-02基因的扩增条带明显减弱，流式细胞术显示G1期细胞增多，M期及S期细胞数减少。结论：脂质体介导的AS-ODN可抑制SMMC-7721的恶性表型，证实P-02基因在肝细胞癌的发生发展中可能有重要作用。     

肝癌二线治疗免疫疗法研究

<正>多中心开放非随机Ⅱ期临床研究KEYNOTE-224研究显示,派姆单抗治疗此前接受过索拉非尼治疗的晚期肝细胞癌患者有效且耐受性良好,提示派姆单抗是这类患者的新的治疗选择。派姆单抗用于肝细胞癌二线治疗的两项Ⅲ期临床研究正在进行中。(Lancet Oncol. 2018年6月1日在线版)免疫检查点抑制剂在肝癌治疗中显示一定效果,该研究杂志评估派姆单抗用于晚期肝细胞癌患者二线治疗的疗效和安全性。患者采用一线索拉非尼治疗不耐受或治疗后出现影像学疾病进展,ECOG PS评分0～1分,有足够器官功能,Child-     

siRNA 靶向沉默 KIF20A 基因对人肝癌 SMMC -7721细胞体外增殖和侵袭迁移的影响

目的：研究 KIF20A 对肝癌 SMMC -7721细胞系增殖和侵袭迁移能力的影响。方法：利用 RNA 干扰技术下调肝癌细胞系 SMCC -7721中 KIF20A 的表达。qRT - PCR 和 Western blot 分别检测细胞 KIF20A 在mRNA 和蛋白水平表达中的变化。CCK -8实验检测增殖能力的改变。Transwell 实验检测迁移、侵袭能力的改变。结果：qRT - PCR 和 Western blot 结果显示 KIF20A - siRNA 能够成功下调 KIF20A 的表达,CCK -8和Transwell 实验分别证实肝癌 SMMC -7721细胞增殖和侵袭迁移能力下降。结论：抑制 KIF20A 的表达能够降低肝癌细胞的增殖和侵袭迁移能力。     

MiR-21 mediates sorafenib resistance of hepatocellular carcinoma cells by inhibiting autophagy via the PTEN/Akt pathway

Sorafenib resistance remains a major obstacle for the effective treatments of hepatocellular carcinoma (HCC). Recent studies indicate that activated Akt contributes to the acquired resistance to sorafenib, and miR-21 dysregulates phosphatase and tensin homolog (PTEN), which inhibits Akt activation. Sorafenib-resistant HCC cells were shown to be refractory to sorafenib-induced growth inhibition and apoptosis. Akt and its downstream factors were highly activated and/or upregulated in sorafenib-resistant cells. Inhibition of autophagy decreased the sensitivity of sorafenib-resistant cells to sorafenib, while its induction had the opposite effect. Differential screening of miRNAs showed higher levels of miR-21 in sorafenib-resistant HCC cells. Exposure of HCC cells to sorafenib led to an increase in miR-21 expression, a decrease in PTEN expression and sequential Akt activation. Transfection of miR-21 mimics in HCC cells restored sorafenib resistance by inhibiting autophagy. Anti-miR-21 oligonucleotides re-sensitized sorafenib-resistant cells by promoting autophagy. Inhibition of miR-21 enhances the efficacy of sorafenib in treating sorafenib-resistant HCC tumors in vivo. We conclude that miR-21 participates in the acquired resistance of sorafenib by suppresing autophagy through the Akt/PTEN pathway. MiR-21 could serve as a therapeutic target for overcoming sorafenib resistance in the treatment of HCC.     

miR-223-3p 通过靶向RAC1 调控肝细胞癌SMMC-7721 细胞的增殖和凋亡

目的：探讨miR-223-3p 通过调控Ras 相关C3 肉毒素底物1（Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1，RAC1）对肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）细胞增殖和凋亡的影响及其可能的作用机制。方法：选用2016 年8 月至2018 年8 月吉林市中心医院手术切除的30 例HCC 组织及其癌旁组织标本和人HCC 细胞系SMMC-7721、Bel-7402、HepG2 及人正常肝细胞QSG-7701，用qPCR检测HCC组织和细胞系中miR-223-3p的表达水平。分别将miR-223-3p mimics、miR-223-3p inhibitor 和siRAC1转染至SMMC-7721 细胞，通过CCK-8、克隆形成实验和Annexin V-FITC/PI 染色流式细胞术检测SMMC-7721 细胞的增殖、克隆形成和凋亡水平。用双荧光素酶报告基因实验检测miR-223-3p 与RAC1 的靶向关系，Western blotting 检测细胞中RAC1 蛋白的表达水平。结果：miR-223-3p 在HCC组织的表达水平显著低于癌旁组织（P<0.01），其表达水平与肿瘤大小、TNM分期及肿瘤分化病理特征相关（P<0.05 或P<0.01）；miR-223-3p 在HCC细胞系表达水平显著低于QSG-7701 细胞（均P<0.01），以在SMMC-7721细胞中表达水平最低。双荧光素酶报告基因实验证实RAC1 是miR-223-3p 靶基因，miR-223-3p 靶向负调控RAC1 的表达。转染miR-223-3p mimics 显著抑制SMMC-7721 细胞的增殖和克隆形成能力（P<0.05 或P<0.01），并促进细胞凋亡（P<0.01）；转染miR-223-3p inhibtor 则逆转miR-223-3p mimics 对细胞的抑制作用。结论：过表达miR-223-3p 抑制HCC细胞增殖和克隆形成能力并促进细胞凋亡，其机制可能与靶向下调RAC1表达有关。     

The effect of NET-1 on the proliferation, migration and endocytosis of the SMMC-7721 HCC cell line

To explore the effect of NET-1 on the proliferation, migration and endocytosis in the hepatocellular carcinoma (HCC) cell line SMMC-7721, we constructed the pU6H1-NET-1-siRNA (NET-1siRNA) and pcDNA3.1/myc-NET-1 (myc-NET-1) vectors and transfected them into SMMC-7721 cells. The expression levels of NET-1 mRNA and protein were detected using real-time quantitative RT-QPCR and western blotting. The proliferation rates of SMMC-7721 cells were determined by CCK-8 assays, flow cytometry (FCM) and immunohistochemistry staining. The migration in two or three dimensional space of SMMC-7721 cells were determined by wound-healing assay and in vitro invasion assay. The extent of endocytosis in SMMC-7721 cells was estimated by observing the amount of transferrin (Tfn) absorbed with capture ELISA assays, and Tfn endocytosis was observed under confocal immunofluorescence microscopy. The results show that: i) after transfecting NET-1 siRNA, the expression of NET-1 mRNA and protein in SMMC-7721 cells decreased significantly, the growth of cells was suppressed, which induced cell cycle arrest, the proliferation rates were dramatically reduced and the expression of Ki67 declined, and migration and endocytosis in cells were inhibited, compared with untreated cells (every P<0.01); ii) Following transfection with myc-NET-1, the expression of NET-1 mRNA and protein in SMMC-7721 cells increased, and both the proliferation of cells and the cell cycle were promoted (P<0.01, respectively). However, the abilities of cell migration and endocytosis were not affected compared with untreated cells. These data suggest that: i) the NET-1 gene may play an important role in proliferation, migration and endocytosis of cells; ii) siRNA technology may efficiently suppress the expression and function of NET-1 in HCC, suggesting that NET-1 may be a therapeutic target for HCC.     

KIF20A对胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭、凋亡及细胞周期分布的影响

目的:研究KIF20A对胶质瘤U87细胞系增殖、侵袭、迁移、凋亡及细胞周期分布的影响。方法:利用 RNA干扰技术下调胶质瘤细胞系 U87中 KIF20A 的表达。RT-qPCR 和 Western blot 分别检测 KIF20A 在mRNA 和蛋白水平上的表达。CCK-8 实验检测 U87细胞增殖能力的变化，Transwell 实验检测U87细胞迁移及侵袭能力的变化，流式细胞术检测 U87细胞凋亡及细胞周期的变化。结果:RT-qPCR和Western blot 结果显示 siRNA-KIF20A显著下调 KIF20A 的表达，CCK-8和Transwell 实验显示下调 KIF20A 的表达显著抑制了U87细胞的增殖、迁移及侵袭能力，流式细胞术结果显示下调 KIF20A 的表达显著促进了U87细胞的凋亡，诱导细胞周期阻滞在G0/G1期。结论:下调KIF20A的表达抑制胶质母细胞瘤细胞的增殖、迁移及侵袭，促进胶质母细胞瘤细胞的凋亡并诱导细胞周期G0/G1期阻滞。     

lncRNA BCAR4在肝癌细胞系中的表达及对增殖、凋亡和迁移的影响

目的:观察肝癌细胞系中长链非编码RNA BCAR4（lncRNA BCAR4）的表达,及对肝癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响,并探讨其机制。方法:采用荧光定量PCR技术（qRT-PCR）检测肝癌细胞系Huh7、HepG2、SMMC-7721和正常肝细胞系L02中lncRNA BCAR4的表达。将Huh7细胞系分为BCAR4-siRNA组、NC-siRNA组和Blank组,BCAR4-siRNA组和NC-siRNA组经LipofectamineTM 2000分别转染BCAR4-siRNA序列和NC-siRNA序列,Blank组以PBST为阴性对照。CCK-8法和流式细胞数测定细胞增殖和凋亡,细胞划痕实验测定迁移能力。Western blot测定细胞周期相关蛋白（Cyclin D1）和凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达。结果:肝癌细胞系Huh7、HepG2、SMMC-7721中lncRNA BCAR4的表达显著高于正常肝细胞系L02(P<0.05)。转染BCAR4-siRNA后,Huh7的lncRNA BCAR4表达下调（P<0.01）。CCK-8示:转染72 h及96 h后,BCAR4-siRNA组 vs NC-siRNA组的OD450 nm值分别为0.71±0.07 vs 0.92±0.10（P<0.05）及0.93±0.08 vs 1.37±0.11（P<0.01）。BCAR4-siRNA组和NC-siRNA组细胞凋亡率分别为（17.52±3.21）%和（4.69±1.56）%（P<0.01）。BCAR4-siRNA组细胞划痕愈合率为（19.65±2.41）%,显著低于NC-siRNA组的（47.50±5.88)%(P<0.05)。与NC-siRNA组比较,BCAR4-siRNA组Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达下调,分别为0.27±0.03 vs 1.0±0.05(P<0.01)、0.48±0.04 vs 1.0±0.04(P<0.05),Bax蛋白表达上调,为2.83±0.19 vs 1.0±0.03(P<0.01)。结论:lncRNA BCAR4高表达于肝癌细胞系,敲低lncRNA BCAR4的表达可抑制肝癌细胞增殖、迁移,并促进凋亡,其机制可能与Cyclin D1和Bcl-2蛋白下调表达,Bax蛋白表达上调表达有关。     

KIF21B在肝细胞癌中的表达及临床意义的研究

背景与目的:驱动蛋白家族(kinesin superfamily,KIF)是一类调控微管运动的分子马达,参与细胞运动、有丝分裂、细胞内运输及癌变过程。KIF21B作为经典的驱动蛋白分子,同时也是微管系统动态平衡的调控子,其在肿瘤中的表达尚未见报道。探讨KIF21B在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达水平与HCC患者临床病理学特征的关系及对预后的影响。方法:通过癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)分析KIF21B在HCC组织及正常组织中的表达差异,及其与临床病理学特征的关系;应用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测2株HCC细胞及1株正常肝细胞中KIF21B的表达差异;应用免疫组织化学法检测于甘肃省人民医院2014年3月-2018年6月行HCC手术切除的116例HCC组织及其癌旁组织中KIF21B的表达差异,验证TCGA数据库结果,分析KIF21B表达水平与临床病理学特征之间的关系;应用COX回归模型及Kaplan-Meier法分析KIF21B表达对HCC患者预后的影响。结果:KIF21B在HCC组织的表达显著高于正常组织(P<0.01),此结果与TCGA数据库结果一致,与TNM分期、乙肝病毒感染和血管侵犯有关(P<0.05);KIF21B在2株HCC细胞中的表达明显高于正常肝细胞(P<0.05);Kaplan-Meier法分析显示,KIF21B高表达组5年生存率明显低于低表达组(P<0.05);COX分析显示,KIF21B是影响HCC预后的独立因素。结论:KIF21B在HCC组织中的表达明显高于正常组织,且与预后不良密切相关,可能参与HCC的发生、发展过程。     

死亡受体5与肝癌细胞凋亡的相关性

目的探讨人死亡受体5(DR5)及其配体(TRAIL)和竞争性单克隆抗体(DR5mAb)对肝癌细胞凋亡的影响。方法采用半定量RT-PCR及Western blot法检测肝癌细胞株HepG2、SMMC7721和正常人肝细胞株LO2的DR5在mRNA和蛋白水平的表达含量。应用四甲基偶氮唑盐法测试细胞的生长曲线,以观察TRAIL和DR5mAb对肝癌细胞生长的抑制作用,并用流式细胞仪测定细胞的凋亡率。结果肝癌细胞株HepG2、SMMC7721的DR5高表达,正常人肝细胞株LO2的DR5低表达,差异有统计学意义(P<0.05)。肝癌细胞的增殖率随着TRAIL浓度的增加而逐渐降低,但当TRAIL超过1000ng/ml时,肝癌细胞株的增殖率就不再下降;而肝癌细胞的增殖率随着DR5mAb浓度的增加而逐渐降低,呈现明显的剂量依赖关系。1000ng/ml TRAIL处理24h时,HepG2的凋亡率在14.74%±0.48%,继续增加TRAIL浓度,其凋亡率无显著改变;而同样剂量的DR5mAb处理24h时,HepG2的凋亡率高达52.45%±0.57%,明显高于前者(P<0.05)。同时发现,正常人肝细胞株LO2的增殖率随着TRAIL浓度的增加呈下降趋势,与PBS阴性对照组差异有统计学意义(P<0.05);而DR5mAb的浓度变化对人正常肝细胞株LO2无明显影响。结论死亡受体DR5在诱导肝癌细胞凋亡中起重要的作用;DR5mAb选择性地诱导肝癌细胞凋亡,对人正常肝细胞无诱导凋亡作用。