lncRNA HOXA11-AS对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的:探究长链非编码RNA(long-nocoding RNA,lncRNA) HOXA11-AS在骨肉瘤中的表达及其对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制.方法:采用2012年1月至2015年12月浙江省人民医院骨外科13例骨肉瘤组织及癌旁正常组织,以及骨肉瘤细胞系MG63、U20S和人成骨细胞株hFOB1.19,用实时荧光定量PCR检测骨肉瘤组织和骨肉瘤细胞系MG63和U20S中lncRNA HOXA11-AS的表达水平.用慢病毒载体构建稳定过表达lncRNA HOXA11-AS的骨肉瘤MG63及U20S细胞,用CCK-8和克隆形成实验、Transwell小室法分别检测过表达lncRNA HOXA11-AS对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响.建立过表达lncRNA HOXA11-AS MG63骨肉瘤细胞裸鼠移植瘤模型,以空载体慢病毒Lv-NC转染的细胞作为对照,观察过表达lncRNA HOXA11-AS对裸鼠移植瘤生长的影响.结果:lncRNA在骨肉瘤组织和MG63及U20S细胞中表达水平显著下调(P＜0.01).与hFOB1.19细胞比,过表达lncRNA HOXA11-AS细胞后,(1)显著抑制骨肉瘤MG63及U20S细胞的增殖[(4.03 ±0.98) vs(6.96 ±0.54),(4.68±0.77) vs (8.87±1.23),均P＜0.01]、迁移细胞数[(83.00 ±6.03) vs(168±12.54),(96.00 ±8.77)vs(184.00±14.63)个,均P＜0.01]和侵袭细胞数[(35.00±3.48) vs (97.00±8.32),(38.00±1.73) vs (87.00±6.37)个,均P＜0.01];(2)显著抑制骨肉瘤裸鼠皮下移植瘤的生长(P＜0.01).结论:lncRNA HOXA11-AS在骨肉瘤细胞中低表达,且lncRNA HOXA11-AS过表达对骨肉瘤的发生发展具有抑制作用,可以作为骨肉瘤治疗潜在的分子靶点.     

荧光原位杂交技术检测BCR/ABL融合基因阳性的病例分析

目的:本研究应用快速、高敏感性和特异性的荧光原位杂交技术(fluorecence in situ hybridization,FISH)检测BCR/ABL融合基因并对阳性病例进行分析.方法:回顾性分析2010年4月至2012年4月用FISH法检测初诊考虑为慢性骨髓增殖性疾病(chronic myeloproliferative disease,CMPD)或骨髓增生异常/骨髓增殖性疾病(myelodysplastic myeloproliferative disorders,MDS/MPD)、急性淋巴细胞白血病患者(acute lymphocyte leukemia,ALL)及口服格列卫的慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)和ALL患者的BCR/ABL 融合基因的表达情况.结果:BCR/ABL融合基因阳性的病例共456例,其中经骨髓细胞学初诊为CML的350例,占总阳性病例的76.8％;CML复查病例为85例,占总阳性病例的18.6％;诊断为B细胞型ALL(B-ALL)的21例,占总阳性病例的4.6％.31例初诊为CMPD和MDS/MPD的患者中,有5例患者骨髓形态学诊断为CML,应用FISH法检测BCR/ABL融合基因均为阳性(100％);另26例患者骨髓形态学诊断为非CML的CMPD及MDS/MPD,BCR/ABL融合基因均为阴性(100％).79例骨髓形态学诊断为ALL患者应用FISH法检测BCR/ABL融合基因,其中阳性病例为21例,占ALL病例的26.6％.45例初次口服格列卫的CML患者,6个月达到主要分子生物学缓解(major molecular response,MMR)或完全分子生物学缓解(complete molecular response,CMR)的为21例,占46.7％,12个月为40例,占88.9％.2例CML移植患者分别在91天和16个月发现融合基因阳性.结论:FISH法检测BCR/ABL融合基因快速、简单、特异性高、可靠,弥补了染色体检测报告需要时间长等不足.对CMPD和MDS/MPD的诊断及鉴别诊断有重要价值;可明确Ph+ ALL患者的诊断;在监测格列卫疗效和微小残留病灶(minimal residual desease,MRD)方面也有重要意义.     

长链非编码RNA AFAP1-AS1 在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨长链非编码RNA (long non-coding RNA,lncRNA)肌动蛋白纤维相关蛋白-1反义RNA1(actin filament-associated protein 1-antisense RNA1,AFAP1-AS1 RNA1)在胃癌组织中的表达情况及其临床意义.方法:采用Real-time PCR方法检测2010年1月至2014年12月宜昌市第二人民医院及三峡大学仁和医院手术切除的274例胃癌组织及相应癌旁正常胃组织中AFAP1-AS1的表达,并分析AFAP1-AS1表达量与临床及病理特征的关系.结果:AFAP1-AS1在胃癌组织比癌旁正常组织显著高表达(P＜0.01).AFAP1-AS1在早期胃癌组织中平均表达量明显低于进展期胃癌(P＜0.01).在不同病理类型胃癌中,AFAP1-AS1的表达量没有差异(P＞0.05).AFAP1-AS1表达量和胃癌淋巴侵袭或远处转移密切相关,在伴有淋巴结侵袭或远处转移的胃癌组织中,AFAP1-AS1明显高表达(P＜0.01).结论:AFAP1-AS1可能是胃癌发生发展的一个重要因素;有望成为新的胃癌预后标志物,用于胃癌的临床诊断和预后判断.     

成人急性淋巴细胞白血病患者骨髓ERG基因表达水平及其与预后的相关性

目的:探讨成人急性淋巴细胞白血病(ALL)患者ETS相关基因(ERG)的表达水平及其临床意义.方法:实时荧光定量PCR法检测91例初治成人ALL患者ERG的表达水平,并分析其与临床预后的关系.结果:91例ALL骨髓标本中ERG表达水平显著高于对照组,P<0.001.ALL患者ERG表达水平与就诊时外周血白细胞计数(WBC)、血红蛋白(HGB)、血小板计数(PLT)和血清乳酸脱氢酶(LDH)水平均无明显相关性,P均>0.05.B-ALL患者ERG表达水平与T-ALL组比较差异无统计学意义,P=0.547.BCR/ABL基因阳性ALL患者ERG表达水平与BCR/ABL阴性者比较差异无统计学意义,P=0.889.伴有髓系抗原表达组ALL患者与未伴有髓系抗原表达组之间ERG表达水平也差异无统计学意义,P=0.150.尽管ERG高表达ALL患者的CR率(72.7%)与低表达组(75.4%)比较差异无统计学意义,P=0.804,但ERG高表达ALL患者的复发率(62.5%)显著高于ERG低表达组(34.6%),P=0.047.ERG高表达ALL患者的总生存率显著低于ERG低表达组,P=0.016.结论:ERG高表达可能是ALL一个重要的预后不良因素,检测ALL患者ERG表达水平有助于判定预后,指导治疗.     

同源异型盒A5、高迁移率族蛋白1在卵巢癌中表达及临床意义

目的 探讨同源异型盒A5(HOXA5)、高迁移率族蛋白1(HMGB1)在卵巢癌中的表达及临床意义.方法 分别取38例上皮性卵巢癌患者、22例良性上皮性卵巢肿瘤患者、20例无卵巢病变患者的卵巢癌组织、良性病变组织、正常组织,免疫组化法检测不同组织中HOXA5、HMGB1蛋白的表达情况,及其与患者临床特征的关系;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测不同组织中HOXA5、HMGB1 mRNA的相对表达量.结果 良性病变组织和卵巢癌组织中HOXA5蛋白的阳性表达率和HOXA5 mRNA的相对表达量均低于正常组织,卵巢癌组织中HOXA5蛋白的阳性表达率和HOXA5 mRNA的相对表达量均低于良性病变组织,差异均有统计学意义(P﹤0.05).卵巢癌组织中HMGB1蛋白的阳性表达率和HMGB1 mRNA的相对表达量均高于良性病变组织和正常组织,差异均有统计学意义(P﹤0.05).不同淋巴结转移情况、组织学分级卵巢癌患者卵巢癌组织中HOXA5、HMGB1蛋白阳性表达率比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05).Pearson相关性分析显示,卵巢癌组织中,HMGB1表达与HOXA5呈负相关(r=-0.371,P﹤0.05).结论 HOXA5在卵巢癌组织中低表达,HMGB1高表达,二者异常表达可能与卵巢癌组织的分化、淋巴结转移有关.     

实时定量PCR检测成人ALL患者ZAP70基因的表达及意义

目的 探讨成人急性淋巴细胞白血病(ALL)患者中Zeta链相关蛋白-70 (ZAP70)基因的表达及其意义。 方法 构建实时荧光定量检测ZAP70基因表达的PCR技术,定量检测73例初治成人ALL患者ZAP70基因的表达水平。结果 建立的实时定量PCR 方法的标准曲线相关系数r>0.998。51例(69.8%)初治ALL患者可检出ZAP70基因表达。FAB各亚型中ZAP70基因表达水平差异无统计学意义(P>0.05),ZAP70基因表达水平的高低与初治ALL患者的免疫表型差异有统计学意义,T-ALL患者ZAP70基因表达水平显著高于B-ALL 和T、B双表型ALL(P<0.01)。ZAP70基因表达水平的高低与ALL发病时外周血白细胞计数、血红蛋白浓度、血小板计数及骨髓白血病细胞比例无相关关系(P均>0.05)。初治ALL中ZAP70基因高低表达与患者化疗的完全缓解(CR)率差异无统计学意义,但在普通B-ALL组中,ZAP70高表达组的CR率(52.6%)显著低于ZAP70低表达组(85%) (P＝ 0.041)。初治ALL中ZAP70基因高表达患者复发率明显高于低表达组(P＝0.048)。结论 ZAP70基因高表达可能是ALL一个重要的预后不良因素。     

Livin蛋白在儿童急性白血病中的表达及临床意义

目的 探讨Livin蛋白在儿童急性白血病(AL)中的表达及临床意义.方法 采用免疫组织化学S-P方法检测Livin蛋白在65例AL患儿骨髓细胞中的表达,其中初治35例,缓解30例;对照组10例为非恶性血液病.结果 AL初治患儿Livin蛋白阳性表达率(65.71%)高于缓解患儿(16.67%)和对照组(10.00%)(P<0.01),初治ALL患儿Livin蛋白阳性表达率(64.00%)与初治AML(60.00%)比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 Livin蛋白在AL初治患儿中表达上调,提示其可能参与了儿童AL的发生、发展,为儿童AL的基因治疗提供了新思路.     

不同化疗方案对初诊急性髓系白血病患儿预后及血小板的影响

目的 探讨不同化疗方案对初诊急性髓系白血病(AML)患儿预后及血小板的影响.方法 采用随机数字表法将116例初诊AML患儿分为A组和B组,每组58例.A组患儿采用柔红霉素+阿糖胞苷+依托泊苷(DAE)方案化疗,B组患儿采用柔红霉素+阿糖胞苷(DA)方案化疗.比较两组患儿首次化疗前后的白细胞计数、血小板计数、血小板恢复时间以及首次化疗后异常染色体、骨髓完全缓解、复发情况.采用Logistic回归模型分析首次化疗后AML患儿预后的影响因素.结果 首次化疗后,两组患儿的白细胞计数均明显低于本组化疗前,且A组患儿的白细胞计数明显低于B组,差异均有统计学意义(P﹤0.01).首次化疗后,两组患儿的血小板计数均低于本组化疗前,且B组患儿的血小板计数低于A组,差异均有统计学意义(P﹤0.05).A组患儿的血小板恢复时间明显短于B组,差异有统计学意义(P﹤0.01).首次化疗后,A组患儿异常染色体发生率低于B组,骨髓完全缓解率高于B组,复发率低于B组,差异均有统计学意义(P﹤0.05).Logistic回归分析结果 显示,白细胞计数、DA方案均是AML患儿首次化疗后骨髓完全缓解的危险因素(P﹤0.01),血小板计数是首次化疗后AML患儿骨髓完全缓解的保护因素(P﹤0.01).结论 DAE方案和DA方案均能够改善AML患儿的预后情况,降低血小板水平,但DAE方案的疗效更佳,安全性更高.     

BRCA1基因在白血病中的表达及其临床意义

 【摘要】　目的　研究白血病患者的乳腺癌易感基因1（BRCA1）的表达水平及临床意义。方法　采用荧光定量反转录-聚合酶链（RT-PCR）方法检测急性淋巴细胞白血病（ALL-L2）患者18例（初治13例,复发5例）、慢性粒细胞白血病（CML）慢性期患者20例、健康对照15名中的BRCA1的表达。结果　初治ALL患者13例中,BRCA1 mRNA表达减低或缺失6例（46.1 %）,初治ALL组表达水平低于健康对照组（P＜0.05）;ALL完全缓解9例中,BRCA1 mRNA表达减低3例（33.3 %）,ALL完全缓解患者表达水平高于初治ALL组（P＜0.05）,与健康对照组差异无统计学意义（P＞0.05）;ALL复发组5例,BRCA1 mRNA表达全部减低或缺失,ALL复发组表达水平低于健康对照组（P＜0.05）,与初治ALL组差异无统计学意义（P＞0.05）。CML患者BRCA1 mRNA表达水平与健康对照组比较差异无统计学意义（均P＞0.05）。结论　BRCA1在不同类型白血病中的表达不同,提示其与白血病的预后密切相关,并可指导临床诊断和治疗。     

miR-128在急性淋巴细胞白血病中的表达

目的 探讨miR-128在急性淋巴细胞白血病(ALL)中的表达及其意义.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应法对62例ALL患者和20例骨髓正常患者骨髓单个核细胞miR-128的相对表达量进行检测,并与患者的临床资料进行相关性分析.结果 miR-128在ALL患者中的相对表达量高于健康对照组(P＜0.05),但其在急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)及急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)中的表达水平差异无统计学意义(P＞0.05),miR-128的表达与是否存在bcr-abl融合基因及其mRNA的表达水平均无相关性(均P＞ 0.05).结论 miR-128在ALL患者中表达上调,可作为临床诊断ALL的潜在分子标志物,bcr-abl融合基因的表达对miR-128在ALL中的表达无明显影响.     

Changes in polysomal polyadenylated RNA and alpha-fetoprotein messenger RNA during hepatocarcinogenesis

Polysomal polyadenylated RNA was isolated from preneoplastic and neoplastic livers obtained from rats kept on a choline-deficient diet containing ethionine for 8 and 25 to 32 weeks, respectively. Normal, preneoplastic, and neoplastic liver polysomal messenger RNA's (mRNA's) were hybridized with homologous and heterologous 3H-labeled complementary DNA's (cDNA's). The results show that, in terms of RNA mass, all or most of the polysomal polyadenylated RNA present in preneoplastic or neoplastic liver is also present in normal liver. This was induced by the similar extent of hybridization between [3H]cDNA transcribed from preneoplastic or neoplastic liver mRNA's with their homologous mRNA's and with mRNA from normal liver. Conversely, most or all of the polysomal polyadenylated RNA of normal liver is also found in preneoplastic and neoplastic livers, as indicated by the extent of hybridization of [3H]cDNA transcribed from normal liver with mRNA's from normal, preneoplastic, and neoplastic livers. Shifts in the relative abundance of mRNA sequences were detected in the polysomal mRNA of preneoplastic livers and especially in the mRNA of neoplastic liver. Hybridization of alpha-fetoprotein cDNA with liver polyadenylated RNA showed a substantial increase in alpha-fetoprotein mRNA content after 8 and 15 weeks of feeding the carcinogenic diet. Similar experiments using globin cDNA failed to show an increase in globin mRNA content in preneoplastic livers.     

RNA异常与肿瘤调控研究进展

肿瘤的发生是一个多因素、多步骤的过程,其根本原因是细胞稳态的失衡.近年研究发现,在肿瘤的发生、发展中除了蛋白质功能紊乱、DNA突变之外,还存在着大量RNA的异常,包括异常的microRNA(miRNA)、长链非编码RNA(long non-coding RNA,IncRNA)、循环RNA等;此外,肿瘤细胞中还存在RNA转录、加工及调控功能的异常,如RNA选择性剪接、RNA编辑、竞争性内源RNA调控等.这些非编码RNA可以在转录后水平及表观遗传学水平调控癌基因和抑癌基因的功能,影响肿瘤的发生和发展,是肿瘤诊断、治疗及预后判断的潜在靶标.竞争性内源RNA使得lncRNA与mRNA通过miRNA相互调控,以“miRNA结合位点”为媒介,形成RNA调控网络.RNA选择性剪接使得癌基因或抑癌基因产生功能异常的转录本,进而影响其生物学功能.肿瘤中究竟哪些机制导致这些RNA表达及功能的异常,RNA表达及功能的异常又如何影响肿瘤的发生和发展,有哪些表达或功能异常的RNA可以作为肿瘤诊断及预后判断的标志物,又有哪些RNA可以作为肿瘤靶向治疗的靶标?等等问题亟待深入探讨,RNA异常与肿瘤调控已成为肿瘤研究的前沿热点领域.