TRAF4蛋白在乳腺癌组织中的表达及意义

背景与目的:对肿瘤坏死因子受体相关因子4(tumor necrosis factor receptor-associated factor 4,TRAF4)在乳腺癌中表达的研究存在争议.本研究探讨TRAF4在正常乳腺组织、乳腺癌组织及不同侵袭能力乳腺癌细胞系中的表达情况.方法:应用免疫组化方法检测TRAF4在70例乳腺癌组织和14例正常乳腺组织中的表达.应用Western blot方法检测TRAF4在乳腺癌细胞系MDA-MA-231(高侵袭)和MCF-7(低侵袭)中的表达.结果:TRAF4在正常乳腺组织中呈浆、核阳性表达.其浆阳性率在正常乳腺组织(78.57%)、非浸润性导管癌(88.57%)和浸润性导管癌(91.43%)中逐渐增高,但差异无统计学意义(P＞0.05).而核阳性率在正常乳腺组织(64.28%)中显著高于非浸润性导管癌(28.57%,P＜0.01),在非浸润性导管癌中高于浸润性导管癌(5.7%,P＜0.05).TRAF4总蛋白在乳腺癌高侵袭细胞系中的表达量高于低侵袭细胞系,但差异无统计学意义(P＞0.05).结论:TRAF4在乳腺癌细胞核中表达明显降低,与乳腺癌侵袭性相关.     

ATF-3在乳腺癌中的表达及临床意义

目的:探讨激活转录因子-3(ATF-3)在乳腺癌组织中的表达及临床意义.方法:采用免疫组化法检测ATF-3在乳腺浸润性导管癌、导管原位癌和癌旁乳腺组织中的表达情况及其与乳腺癌临床病理特征间的关系.结果:ATF-3在乳腺浸润性导管癌、导管原位癌及癌旁乳腺组织中的阳性表达率分别为80.95%(85/105)、48.98%(24/49)和11.43%(12/105),乳腺浸润性导管癌组ATF-3的阳性表达率显著高于导管原位癌组和癌旁乳腺组织,导管原位癌组ATF-3的阳性表达率显著高于癌旁乳腺组织,差异均具有统计学意义(P<0.0167).ATF-3的表达与乳腺癌的组织学分级、淋巴结转移及临床分期相关,而与患者年龄及肿瘤大小无关.结论:ATF-3与乳腺癌的发生、发展、侵袭和转移有关,可能作为预测乳腺癌恶性程度和评估乳腺癌患者预后的重要指标.     

AQP-1在肾透明细胞癌组织中的表达及临床意义

目的探讨水通道蛋白-1(AQP-1)在肾透明细胞癌组织中的表达及临床意义。方法采用免疫组织化学法检测25例肾透明细胞癌组织和20例正常肾脏组织中AQP-1的表达情况。结果在肾透明细胞癌组织和正常肾脏组织中AQP-1阳性表达率分别为8.0%和100.0%,差异有统计学意义(P<0.05);在肾透明细胞癌组织中,毛细血管内皮细胞中AQP-1表达高于正常肾脏组织,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 AQP-1的异常表达与肾透明细胞癌的发生及浸润转移有密切关系。     

uPA和HIF-1α在乳腺浸润性导管癌中的表达及其相关性

目的:探讨uPA和HIF-1α蛋白在乳腺浸润性导管癌组织中的表达及其相关性.方法:应用免疫组织化学法检测52例乳腺浸润性导管癌组织中uPA、HIF-1α蛋白表达.结果:乳腺浸润性导管癌组织中uPA蛋白阳性表达率为57.7%,HIF-1α蛋白阳性表达率为82.7%,uPA、HIF-1α蛋白表达之间存在显著正相关,r=0.498,P<0.01.结论:乳腺浸润性导管癌组织中存在uPA、HIF-1α的高表达,且两者之间的表达强度具有相关性.uPA蛋白可通过诱导HIF-1α蛋白的表达上调,成为促进乳腺癌侵袭、转移的途径之一.     

MDR1和Anxa2在乳腺癌组织中的表达与侵袭转移的关系研究

探讨乳腺癌组织中多药耐药基因（MDR1）和膜联蛋白（Anxa2）表达的相关性及其与乳腺癌转移的关系。方法:应用荧光定量PCR的方法检测20例配对的乳腺导管内癌、100例乳腺浸润性导管癌、70例癌旁正常组织中MDR1和Anxa2 mRNA的相对表达情况。结果:MDR1 mRNA在乳腺导管内癌中的表达水平明显高于癌旁正常组织（P=0.005）,乳腺浸润性导管癌组织中mRNA的表达明显高于癌旁正常组织（P=0.017）和导管内癌（P=0.019 6）。Anxa2 mRNA在乳腺导管内癌中表达与癌旁正常组织相比无显著性差异（P=0.188 9）,但是在乳腺浸润性导管癌组织中的表达明显高于导管内癌（P=0.000 8）和癌旁正常组织（P<0.000 1）;MDR1和Anxa2 mRNA的表达升高均与患者出现淋巴结转移有关（P<0.01）;2种基因在乳腺浸润性导管癌中的表达呈正相关（P<0.000 1）。结论:在肿瘤进展过程中,MDR1和Anxa2 mRNA表达上调与乳腺癌的淋巴结转移有关,二者之间表达具有正相关提示肿瘤细胞的多药耐药的获得和肿瘤侵袭转移之间有着密切联系。      

HIF-1α与Caspase-3在乳腺癌中的表达及临床病理意义

目的:检测HIF-1α、Caspase-3在乳腺浸润性癌、导管内癌、导管内乳头状瘤中的表达,分析两者与乳腺癌发生及临床病理因素的关系。方法:免疫组化法检测HIF-1α、Caspase-3在乳腺浸润性导管癌、导管内癌、导管内乳头状瘤组织中的表达。结果:乳腺浸润性导管癌、导管内癌、导管内乳头状瘤中,HIF-1α阳性表达率分别为68.3%(41/60)、46.7%(28/60)、33.3%(20/60),P<0.05,差异有统计学意义,Caspase-3阳性表达率分别为48.3%(29/60)、58.3%(35/60)、62.8%(47/60),P<0.05,差异有统计学意义;两者表达与浸润性导管癌患者年龄、肿瘤大小无相关性(P>0.05)。HIF-1α表达与乳腺癌病理分期、淋巴结有无转移、组织病理学分级有关(P<0.05)。Caspase-3表达与组织病理学分级有关(P<0.05)。HIF-1α、Caspase-3在乳腺浸润性癌中的表达呈负相关(r=-0.271,P<0.05)。结论:HIF-1α、Caspase-3在乳腺癌的发生中起重要作用,联合检测可作为判断乳腺癌恶性程度和预后的指标。     

AQP-1、MMP-9在肾透明细胞癌组织中的表达

目的探讨水通道蛋白-1(AQP-1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在肾透明细胞癌组织中表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学法检测29例肾透明细胞癌组织和20例正常肾脏组织中AQP-1、MMP-9的表达。结果 AQP-1主要表达于肾透明细胞癌新生毛细血管或正常肾脏组织毛细血管细胞膜上,而MMP-9主要表达于细胞质和间质中,均呈黄褐色。肾透明细胞癌组织和正常肾脏组织中AQP-1阳性率分别为89.7%和60.0%,差异有统计学意义(P<0.05);MMP-9的阳性率分别为65.5%和46.8%,差异有统计学意义(P<0.05)。AQP-1与MMP-9在肾透明细胞癌组织中的表达呈正相关(r=0.535,P<0.05)。结论 AQP-1、MMP-9的异常表达与肾透明细胞癌的发生及浸润转移有密切关系。     

CK5、CK8和BCRP在人乳腺病变组织中的表达及其意义

目的:探讨细胞角蛋白5(cytokeratin 5,CK5)、CK8和乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistance protein, BCRP)在乳腺上皮良、恶性增生病变中的表达及意义.方法:应用免疫组织化学法分别检测89例正常乳腺、乳腺增生、导管上皮非典型增生、导管原位癌和浸润性导管癌组织中CK5、CK8及BCRP的表达情况,分析CK5、CK8及BCRP的表达与乳腺病变组织分化程度之间的关系.结果: 在正常乳腺、乳腺增生、导管上皮非典型增生、导管原位癌和浸润性导管癌组织中CK5和CK8的阳性表达率逐渐下降,BCRP的阳性表达率则逐渐上升.CK5和CK8在乳腺良性增生组织(乳腺增生和导管上皮非典型增生)中的阳性表达率明显高于乳腺癌(导管原位癌和浸润性导管癌)组织(P＜0.01),BCRP在乳腺癌组织中的表达明显高于乳腺良性增生组织(P＜0.01).在乳腺浸润性导管癌中,CK5阳性表达主要集中在外层尚未受侵袭的基层细胞中,肿瘤细胞中没有表达或很少表达;CK8则主要在肿瘤细胞中表达,基层细胞中完全不表达;66.7%的浸润性导管癌患者呈CK5-/CK8+表型.结论:CK5、CK8和BCRP在不同乳腺病变组织中的表达不同,3者联合检测可能有助于乳腺病变的病理学诊断.     

乳腺浸润性导管癌组织Bmi-1的表达及其临床意义

目的:探讨Bmi-1在乳腺浸润性导管癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法:免疫组化法检测84例乳腺癌组织中雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、c-erbB-2和B细胞特异性莫洛尼小鼠白血病病毒整合位点-1(Bmi-1)表达,并取其中43例(51.2%)乳腺癌新鲜肿瘤组织和癌旁的正常组织,采用RT-PCR方法检测其Bmi-1表达。结果:84例乳腺浸润性导管癌组织中Bmi-1蛋白阳性表达率为56.0%(47/84)。43例乳腺癌新鲜肿瘤组织中Bmi-1mRNA阳性表达率为67.4%(29/43)。Bmi-1过表达与临床晚期及ER阴性表达显著相关,P<0.05。Bmi-1表达与患者年龄、肿瘤大小、组织学分级以及PR、c-erbB-2表达均无明显相关性,P>0.05。Bmi-1在乳腺浸润性导管癌与癌旁正常组织中的表达差异有统计学意义,P<0.01。结论:Bmi-1过表达与乳腺浸润性导管癌的发生、发展有关。Bmi-1可能成为预测乳腺浸润性导管癌临床分期的新分子标志。     

乳腺浸润性导管癌组织Livin和Caspase-3蛋白表达及其相关性研究

目的:探讨细胞凋亡相关因子Livin和Caspase-3在乳腺浸润性导管癌组织中的表达及相关性.方法:应用免疫组织化学SP法检测70例乳腺浸润性导管癌、20例乳腺增生和10例乳腺癌旁组织(距癌组织≥4 cm,组织学结构正常)标本中Livin、Caspase-3的表达情况,探讨两者的相关性及其与临床病理因素的关系.结果:Livin蛋白在癌组织中的阳性表达率为64.3％,高于乳腺增生和乳腺癌旁组织的25.0％和10.0％( P＜0.05);Caspase-3蛋白在癌组织中的阳性表达率为45.7％,明显低于乳腺增生和乳腺癌旁组织中的75.0％和80.0％(P＜0.05);Livin蛋白与Caspase-3蛋白表达呈负相关,P＜0.05.Livin蛋白的阳性表达率随着临床分期增加显著升高(P＜0.05),但与患者年龄、肿瘤大小、组织学分级、淋巴结转移无关,P＞0.05.Caspase-3蛋白的表达随着临床分期的增加其阳性表达率下降(P＜0.05),与患者年龄、肿瘤大小、组织学分级和淋巴结转移无关,P＞0.05.在乳腺浸润性导管癌组织中Livin蛋白与ER、PR表达负相关(P＜0.05),与c-erbB-2的表达无相关性,P＞ 0.05.Caspase-3蛋白与ER、PR表达显著正相关(P＜0.05),与c-erbB-2表达无相关性,P＞0.05.结论:Livin在乳腺癌的发生发展中发挥重要促进作用,可能成为乳腺浸润性导管癌诊断中的标志,并有望成为乳腺癌治疗的新靶点.Caspase-3在Livin抗凋亡通路中发挥着重要作用.     

水通道蛋白-4在小鼠肾脏发育中的表达

目的观察水通道蛋白-4(AQP-4)在小鼠肾脏发育中的表达,探讨其与肾脏发生发育的关系及作用。方法用免疫组织化学(SABC法)显色观察AQP-4从胚龄12 d胎鼠到生后42 d小鼠肾脏的表达部位,用体视学对AQP-4在小鼠肾脏不同发育阶段中的表达进行定量检测。结果AQP-4在胚龄14 d的胎鼠肾脏可见微弱表达,其后随胚(日)龄的增长而增加,到生后1 d达最高,以后无明显变化。AQP-4的表达部位在胚龄14 d、16 d的小鼠为输尿管芽细胞的侧膜和基底膜(侧基底膜),在集合管出现以后则还表达在集合管细胞的侧基底膜。结论AQP-4在生前小鼠水平衡的调节作用比较重要,对生后小鼠主要起辅助作用。     

沉默 AQP-5 对人结肠癌HT-29细胞的增殖、凋亡及其化疗敏感性的影响

目的： 探讨小干扰RNA（small interference RNA,siRNA）沉默水通道蛋白-5（aquaporin-5, AQP-5 ）的表达对人结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡及化疗药敏感性的影响。 方法： 以合成的AQP-5-siRNA序列转染HT-29细胞,采用Western blotting检测AQP-5-siRNA的转染效率,磺酰罗丹明（sulphorhodamine B, SRB）染色法检测各组细胞的增殖抑制率,流式细胞术检测HT-29细胞的凋亡。分光光度法检测HT-29细胞caspase-3活性,real-time PCR和Western blotting检测AQP-5-siRNA转染后HT-29细胞中 PCNA和P53 在mRNA和蛋白水平的表达。选用5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil,5-FU）和顺铂（cisplatin,DDP）刺激AQP-5-siRNA转染细胞,SRB染色法检测细胞的增殖抑制率,以金正均法计算两药联合作用的Q值。 结果： 与NC-HT-29细胞相比,AQP-5-siRNA-HT-29细胞中AQP-5蛋白的表达显著下降（P<0.05）。SRB检测显示,AQP-5-siRNA-HT-29细胞的增殖抑制率显著增加\[（9.23±0.51)% vs 0,P<0.05\]。流式细胞术检测显示,AQP-5-siRNA-HT-29细胞的凋亡率显著升高\[（1081±1.32)% vs (0.99±0.18）%, P<0.05\];caspase-3活性显著升高\[（0.19±0.03） vs （009±0.01）, P<0.05\]。Real-time PCR和Western blotting结果显示,AQP-5-siRNA-HT-29细胞中PCNA mRNA和蛋白表达明显下降（P<0.05）,同时,P53 mRNA和蛋白表达明显上升（P<0.05）。AQP-5-siRNA+5-FU组细胞的增殖抑制率显著高于AQP-5-siRNA组和5-FU组\[（44.93±2.28)% vs (9.11±0.32）%、（25.68±1.71）%,均P<0.05\],AQP-5-siRNA+DDP组细胞的增殖抑制率显著高于AQP-5-siRNA组和DDP组\[（39.01±1.76)% vs (9.11±0.32）%、（18.47±1.25）%, P<0.05\],而且,AQP-5-siRNA与5-FU或DDP联用的Q值分别为1.38和1.51,均表现为协同作用。 结论： AQP-5-siRNA能抑制HT-29细胞增殖、促进其凋亡、并提高HT-29细胞对5-FU和DDP的化疗敏感性。     

AQP-5基因沉默对结肠癌细胞增殖及信号转导通路的影响

背景与目的:水通道蛋白-5(aquaporin 5,AQP-5)在人结肠癌组织中表达增高,与结肠癌的发生、发展及转移过程有关。但AQP-5影响的信号转导通路及对结肠癌细胞的具体影响尚不明确。本研究通过抑制结肠癌细胞株HT-29内源性AQP-5的表达,探讨AQP-5对HT-29细胞丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AKT)、细胞外调节激酶细胞外调节激酶(ERK)、c-jun氨基末端激酶(JNK)和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号转导通路的影响。方法:体外常规培养人结肠癌HT-29细胞,取对数生长期的细胞用于实验。蛋白质印迹法(Western blot)检测AQP-5-siRNA转染效率;采用噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测转染AQP-5 siRNA的HT-29细胞AKT、ERK、JNK和p38蛋白的磷酸化形式及总蛋白的表达水平。结果:AQP-5-siRNA转染使HT-29细胞AQP-5基因表达下调的效率达90%。MTT分析结果显示,转染了AQP-5-siRNA的HT-29细胞增殖抑制率显著增高(P<0.05),流式细胞术发现转染了AQP-5-siRNA的HT-29细胞凋亡率显著增加(P<0.05)。Western blot结果显示,与转染NS-siRNA的阴性对照组相比较,转染了AQP-5-siRNA的HT-29细胞磷酸化的AKT、ERK和JNK蛋白磷酸化形式表达量与总蛋白表达量的改变两者差异无统计学意义(P>0.05)。而转染了AQP-5-siRNA的HT-29细胞磷酸化p38与总的p38蛋白比值下降(P<0.05)。结论:针对AQP-5的si-RNA具有促进HT-29细胞凋亡、抑制细胞增殖的作用,该作用可能与抑制p38MAPK蛋白的磷酸化活化有关。     

小鼠后肾集合管水通道蛋白表达及其上皮细胞超微结构研究

目的观察小鼠后肾集合管水通道蛋白(AQP)-4的表达及其上皮细胞超微结构变化。方法应用透射电镜、免疫组织化学及图像分析技术观察并检测小鼠后肾不同发育阶段集合管的超微结构及AQP-4表达。结果小鼠胚龄18 d见发育早期集合管主细胞,生后7 d～21 d,其形态结构发育基本完善。A型闰细胞于胚胎18 d出现,B型闰细胞生后21天出现。AQP-4于胚龄14 d始见表达,分布于集合管管壁上皮细胞侧基底细胞膜,随胚龄增加表达逐渐增强,生后1 d达高峰。结论集合管管壁上皮细胞于胚胎时出现,但其形态结构在生后才逐渐完善。AQP-4对小鼠胚胎时期肾水平衡调节可能起重要的作用。     

水通道蛋白-１在非小细胞肺癌中的表达及其与临床病理特征的关系

目的　研究水通道蛋白-１（ＡＱＰ-１）在非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）组织中的表达水平及其与临床病理特征的关系。方法　用免疫组化法（Ｓ-Ｐ法）检测８０例ＮＳＣＬＣ组织中ＡＱＰ-１的表达水平,并分析其与分化程度、分期、细胞学类型和术后生存率之间的关系。结果　ＮＳＣＬＣ组织ＡＱＰ-１表达较正常支气管上皮组织和癌旁支气管上皮组织显著增强;肺癌Ｔ分期晚期、淋巴结有转移者ＡＱＰ-１的表达水平高,低分化肺癌ＡＱＰ-１表达水平高于高分化者;ＡＱＰ-１高表达肺癌患者术后长期生存率显著低于低表达者。结论　ＮＳＣＬＣ组织中ＡＱＰ-１表达异常增强,可能与肺癌的侵袭和转移有关,检测ＡＱＰ-１的表达水平可能在预测ＮＳＣＬＣ患者的预后中有一定临床意义。     

沉默AQP-5表达对结肠癌细胞株HT-29凋亡影响机制探讨

目的 通过抑制内源性水通道蛋白(AQP-5)的表达,探讨AQP-5对HT-29细胞凋亡及凋亡抑制蛋白(inhibitaors of apoptosis proteins,IAPs)表达的影响.方法 体外常规培养人结肠癌HT-29细胞,通过siRNA技术抑制内源性AQP-5的表达,并经蛋白质印迹法检测AQP-5-siRNA转染效率;采用MTT法检测各组细胞增殖抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡率;荧光实时定量RT-PCR和蛋白质印迹法检测转染AQP-5-siRNA的HT-29细胞IAPs家族成员c-IAP1、c-IAP2、XIAP、NAIP、Survivin和Livin表达水平.结果 蛋白质印迹法检测结果显示,转染AQP-5-siRNA的HT-29细胞AQP-5表达下调达90％.MTT分析结果显示,与转染NS-siRNA组细胞增殖抑制率(1.13±0.11)％相比,AQP-5-siRNA组的HT-29细胞增殖抑制率显著增加,高达(27.9±5.16)％,t=12.705,P＜0.001;流式细胞分析结果发现,与NS-siRNA组细胞凋亡率(0.99±0.18)％相比,AQP-5-siRNA组的HT-29细胞凋亡率显著增加,高达(10.81±1.32)％,t=-12.767,P＜0.001.荧光实时定量RT-PCR和蛋白质印迹法检测结果显示,与转染NS-siRNA组相比较,AQP-5-siRNA组c-IAP1(t=-3.232,P=0.018)、c-IAP2(t=-0.651,P=0.001)、XIAP(t=-9.296,P＜0.001)和Livin(t =-8.07,P＜0.001)的mRNA表达水平下降,AQP-5-siRNA组c-IAP1(t=-0.591,P=0.007)、c-IAP2(t=-4.889,P=0.008)、XIAP(t=-6.487,P=0.003)和Livin(t=-6.216,P=0.003)蛋白表达水平也下降,其中以XIAP下降最明显;Survivin和NAIP表达变化不明显.结论 AQP-5-siRNA可体外促进HT-29细胞凋亡,其机制可能与下调c-IAP1、c-IAP1、XIAP和Livin mRNA及蛋白表达有关.     

AQP-4 in peritumoral edematous tissue is correlated with the degree of glioma and with expression of VEGF and HIF-alpha

It is recognized that expression of AQP4 protein is much greater in gliomas than in normal tissue. The relationship between AQP4 and glioma-associated brain edema is affected by osmotic pressure and hypoxia. In this study, we detected changes of AQP4 expression in tumor and peritumoral edematous tissues to analyze the relationship between AQP4 protein and the edema index (EI). We also detected expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) and hypoxia-inducible factor-1α (HIF-1α) to investigate their relationship with AQP4 protein, and thus to uncover the molecular biological mechanisms of AQP4 expression in glioma-associated brain edema. Sixty-five patients with brain glioma were divided into tumor and peritumor groups. Fresh tumor specimens, including six cases of grade I glioma, 18 of grade II, 11 of grade III and 30 of grade IV, and peritumoral edematous tissue specimens (1 cm distant from the tumor) were resected from these patients, and AQP4 protein expression levels were detected by western blot. Different AQP4 expression in the tumor and peritumor groups were compared. The relationship between AQP4 expression levels and the degree of peritumoral edema, and expression differences in different grades, were analyzed. Immunofluorescence cytochemistry was used to detect positive expression of AQP4 protein, VEGF protein, and HIF-1α protein in tumor tissue, and differences between expression were analyzed. Western blot showed that AQP4 expression in the peritumor (0.7697 ± 0.0941) and tumor (0.6934 ± 0.0625) groups was higher than in the control group (0.6215 ± 0.0884), and was highest in the peritumor group (both P < 0.01). AQP4 expression level in the peritumor group was positively correlated with EI (r = 0.677, P < 0.001) whereas AQP4 expression level in the tumor group was not correlated with EI (r = 0.096, P > 0.05). AQP4 expression increased with higher tumor grades in the peritumor group, but differences were not significant in the tumor group. Immunofluorescence cytochemical staining revealed that AQP4 protein in normal brain tissue was mainly expressed in the cell membrane surface, and that cytoplasm and nuclear staining was shallow. In glioma cells, AQP4 was widely distributed in the cytoplasm, particularly in the edematous area around the tumor. AQP4 protein expression in the tumor was significantly positively correlated with both VEGF protein (r = 0.877, P < 0.001) and HIF-1α protein (r = 0.876, P < 0.001). AQP4 expression was higher in brain tumor, especially peritumor. The degree of peritumoral edema correlates with AQP4 protein expression only in peritumor, whereas AQP4 expression is in accordance with expression of VEGF and HIF-1α. In glioma-associated brain edema, AQP4 is coregulated by osmotic pressure and hypoxia, with predominance of osmotic regulation, and is redistributed in glioma cells, mainly in the cytoplasm, and its expression level increased with higher glioma grades.     

The medically important dematiaceous fungi and their identification

Dematiaceous fungi include a large group of organisms that are darkly pigmented (dark brown, olivaceous, or black). In most cases the pigment is melanin, and specifically, dihydroxynaphthalene melanin. The diseases produced include chromoblastomycosis, eumycotic mycetoma, and phaeohyphomycosis. Phaeohyphomycosis is a new classification for a diverse group of previously known entities grouped together on the basis of finding dematiaceous hyphal and/or yeast-like forms in tissue; tissue involvement may be superficial, cutaneous and corneal, subcutaneous, or systemic. Identification of these fungi is based mostly upon morphology. Important structures include annellides (Phaeoannellomyces, Exophiala), phialides (Phialophora, Wangiella), adelophialides (Phialemonium without collarettes, Lecythophora with collarettes), differentiation of conidiophores (Xylohypha versus Cladosporium) and conidial hilum, septation and germination (Bipolaris, Drechslera, Exserohilum). Useful laboratory tests include the 12% gelatin test (controversial), nitrate assimilation (W. dermatitidis is negative, most other species are positive), and determination of temperature maxima (especially 37 degrees C for E. jeanselmei, 40 degrees C for W. dermatitidis and B. spicifera, 42 degrees C for X. bantiana, and 45 degrees C for Dactylaria constricta var. gallopava and Scedosporium inflatum).