鼻咽癌细胞PI3K/AKT和ERK/MAPK信号通路活性表达及其临床意义的探讨

目的:探讨鼻咽癌细胞中PK3K/AKT和ERK/MAPK信号传导通路异常激活与鼻咽癌细胞发生发展的关系.方法:蛋白质印迹法检测3例鼻咽低分化鳞癌组织及其细胞株(CNE2)和鼻咽炎性组织中IGF-1R、AKT和ERKl/2蛋白的表达情况;相同实验方法检测鼻咽癌细胞株CNE2中磷酸化的PAKT和pERK1/2蛋白的表达和给予胰岛素样生长因子-1(IGF-1)刺激癌细胞后磷酸化的pAKT和pERK的表达水平,再分别用PKB/AKT和ERK/MAPK通路抑制剂对CNE2细胞信号传导通路磷酸化的调节作用进行抑制试验.结果:3例鼻咽低分化鳞癌组织和cNE2细胞株中IGF-1R、AKT和ERK1/2蛋白表达水平明显高于鼻咽炎性组织;IGF-1可刺激CNE2细胞中PAKT和pERK1/2的表达增加,与空白对照组相比,其pAKT和pERK表达量明显增高;给予wortrnannin和PD98059治疗24和48 h后,CNE2细胞株生长明显受到抑制.结论:IGF-lR的过度表达及其PK3K/AKT、ERK/MAPK信号传导通路的异常激活在鼻咽癌的发生、发展过程中可能起着非常重要的作用,IGF-1R系统有可能作为复发或转移性鼻咽癌治疗中一个潜在的靶分子.中华肿瘤防治杂志.2009,16(1):44-47     

鼻咽癌细胞株14-3-3σ启动子去甲基化与基因表达研究

目的 研究鼻咽癌细胞株14-3-3σ基因启动子甲基化状况及去甲基化处理对其表达的影响.方法 用甲基化特异性聚合酶链反应(PCR)和逆转录PCR方法检测鼻咽癌细胞株CNEI、CNE2、5-8F、6-10B和非肿瘤人鼻咽上皮细胞NP69细胞14-3-3σ基因启动子甲基化状况和mRNA表达水平.用不同浓度5-杂氮-2'-脱氧胞苷(5-aza-2dC)处理鼻咽癌细胞株72 h,检测处理组和对照组14-3-3σ基因启动子甲基化状况和mRNA表达水平,并用Western-blot检测14-3-3σ蛋白表达情况.结果 NP69细胞14-3-3σ启动子未检测到甲基化,CNE1、CNE2、5-8F、6-10B细胞14-3-3σ基因启动子都存在甲基化,4株肿瘤细胞的14-3-3σ mRNA表达水平显著低于NP69细胞.5-aza-2dC处理能剂量依赖性地逆转鼻咽癌细胞14-3-3σ启动子的甲基化状态并上调其mRNA和蛋白质的表达水平,高分化细胞株(CNE1)对药物的敏感性高于低分化细胞株(CNE2、5-8F和6-10B).结论 启动子甲基化是导致鼻咽癌细胞株14-3-3σmRNA和蛋白质表达降低的直接原因,14-3-3σ启动子去甲基化可能成为鼻咽癌治疗的新靶点.     

环氧化酶-2与鼻咽癌细胞分化的关系

目的检测人鼻咽癌细胞株中环氧化酶-2（COX-2）的表达情况,探讨鼻咽癌细胞中COX-2的表达与细胞分化程度的关系。方法应用流式细胞仪和免疫细胞化学法对细胞中COX-2的表达进行定位定量检测。结果2种细胞株（CNE1和CNE-2Z）均有COX-2的表达,表达强度和分布与分化程度有关,分化越低,表达越高;流式细胞仪检测COX-2在细胞株中表达强弱顺序为CNE-2Z〉CNE1,阳性表达细胞数CNE-2Z〉CNE1,差异有统计学意义,P〈0.01;免疫细胞化学法检测COX-2主要表达在细胞质,分布与分化程度有关,细胞质表达强度CNE-2Z〉CNE1,差异有统计学意义,P〈0.01。结论COX-2在鼻咽癌细胞株中表达和分布与细胞株的分化程度有关。     

生长抑素受体亚型在人鼻咽癌细胞株CNE2中表达

背景与目的：生长抑素受体（somatostatin receptor SSTR）在许多肿瘤组织均有表达，为生长抑素类似物如奥曲肽用于这些肿瘤的治疗提供了生物学基础，但对生长抑素受体在鼻咽癌中表达情况的研究甚少。本研究旨在了解生长抑素受体基因在鼻咽癌细胞中的表达情况，为生长抑素类似物用于鼻咽癌治疗的进一步研究提供试验基础。方法：采用RT—PCR法和SP免疫组化法联合检测体外培养的人鼻咽癌细胞株CNE2的SSTRs表达，并对PCR mRNA产物测序以鉴定结果。结果：RT—PCR提示人鼻咽癌细胞株CNE2分别表达生长抑素受体亚型SSTR1、SSTR2、SSTR4；免疫组化结果：人鼻咽癌细胞株CNE2表达SSTR1、SSTR2A为强阳性（〉60％），表达SSTR4为弱阳性、SSTR2介于两者之间、SSTR3和SSTR5则无表达。结论：我们的研究证实人鼻咽癌细胞株CNE2有多种生长抑素受体亚型基因表达，且以表达SSTR1、SSTR2较多。     

C2orf40蛋白在鼻咽癌中的表达及意义

目的 探讨C2orf40蛋白在鼻咽癌组织和细胞中的表达及其与细胞分化、临床病理特征的关系.方法 收集2001年1月至2003年12月在汕头大学医学院附属肿瘤医院诊断为鼻咽癌的122例病理活检组织石蜡标本及其病历资料,另外收集25例慢性鼻咽炎的石蜡标本作为对照.采用免疫组织化学法检测C2orf40蛋白表达情况,同时分析C2orf40表达水平与临床病理特征的关系.体外实验应用Western blotting对鼻咽癌细胞株CNE1、CNE2和C666-1进行C2orf40蛋白表达的测定,分析C2orf40表达与细胞分化程度的关系.结果 C2or40在对照组的阳性率为96.0％(24/25),且88.0％为高表达,病例组阳性率为58.2％ (71/122),但82.0％为低表达,二者差异有统计学意义(U=255.500,P＜0.001).C2orf40表达与淋巴结转移分期(N分期)和临床分期呈负相关(r=-0.058,P＜0.001;r=-0.202,P=0.026).C2orf40在高分化鼻咽癌细胞株CNE1中呈高表达,在低分化鼻咽癌细胞株CNE2和C666-1中呈低表达.结论 C2orf40蛋白表达下调与肿瘤细胞分化、淋巴结转移和临床分期相关,是鼻咽癌发生、发展的分子事件之一,可能成为抗肿瘤治疗的潜在靶点.     

小分子HIF-1α干扰RNA逆转鼻咽癌细胞耐药的实验

目的探讨小分子HIF-1α干扰RNA对人鼻咽癌耐药细胞株CNE2/DDP耐药性的影响。方法采用药物大剂量冲击和逐渐增加剂量相结合的方法建立人鼻咽癌顺铂耐药细胞株CNE2/DDP,瞬时转染法将HIF-1α小片段RNA导入CNE2/DDP细胞沉默HIF-1α基因,MTS法及流式细胞仪分别检测顺铂对CNE2/DDP细胞增殖、凋亡的影响,Western blot法分析细胞HIF-1α及MDR1表达水平。结果成功建立了人鼻咽癌顺铂耐药细胞株CNE2/DDP,耐药系数达16。当顺铂≥1.0μg/ml时,CNE2组与siHIF-1αsiRNA组细胞抑制率均明显高于CNE2/DDP组与siCtrl-siRNA组(P<0.05);同样,CNE2组与siHIF-1αsiRNA组细胞凋亡率也明显高于CNE2/DDP组与siCtrl-siRNA组(P<0.05);Westernblot显示siHIF-1αsiRNA组HIF-1α及MDR1蛋白的表达低于CNE2/DDP组。结论小分子HIF-1α干扰RNA沉默HIF-1α提高了人鼻咽癌顺铂耐药细胞CNE2/DDP对顺铂的敏感度,逆转了CNE2/DDP对顺铂的耐药性。     

鼻咽癌细胞系CNE1和CNE2Z中EBV-LMP1的表达

目的:探讨人高分化鼻咽癌细胞系CNE1和人低分化鼻咽癌细胞系CNE2Z中EB病毒编码的LMP 1基因表达情况.方法:用免疫组化法及Western bolt法分别检测鼻咽癌细胞系CNE1和CNE2Z中LMP 1基因的表达情况.结果:免疫组化及Western bolt 法均显示,CNE2Z细胞中LMP 1呈强阳性表达,而CNE1细胞中LMP 1呈阴性表达.结论:人高分化鼻咽癌细胞系CNE1中没有LMP 1的表达而人低分化鼻咽癌细胞系CNE2Z中LMP 1呈阳性表达,鼻咽癌的恶性程度可能与LMP 1的表达有关.     

siRNA干扰KLF8表达对鼻咽癌细胞上皮间质转化的作用

目的 探讨下调KLF8的表达对鼻咽癌CNE1-LMP1细胞侵袭能力的影响及其机制。方法 通过脂质体转染法将KLF8 siRNA真核表达质粒稳定转染至鼻咽癌细胞株CNE1-LMP1。Western blot和RT-PCR法检测CNE1-LMP1细胞中KLF8、E-cadherin、N-cadherin蛋白和mRNA表达水平的变化。Transwell侵袭实验观察siRNA后对CNE1-LMP1细胞侵袭能力的影响。结果 KLF8 siRNA转染的CNE1-LMP1细胞株与其阴性对照NC-si组比较KLF8蛋白和mRNA表达水平均下调,证实稳转细胞株建立成功。KLF8 siRNA可上调CNE1-LMP1细胞中E-cadherin的表达,而下调N-cadherin的表达。Transwell侵袭实验显示siRNA干扰CNE1-LMP1细胞侵袭能力下降。结论 KLF8在鼻咽癌CNE1-LMP1细胞中高表达;通过siRNA下调KLF8的表达能干扰上皮间质转化（EMT）相关蛋白E-cadherin、N-cadherin的表达,阻断EMT过程,抑制CNE1-LMP1细胞侵袭转移。     

亚砷酸对人鼻咽癌细胞增殖的抑制作用

目的观察亚砷酸对人鼻咽癌细胞株CNE1的生长抑制作用并初步探讨其机理.方法用不同浓度亚砷酸处理人鼻咽癌细胞株CNE1,MTT法观察不同浓度亚砷酸作用不同时间后对CNE1细胞生长的影响,流式细胞仪分析不同条件作用后CNE1细胞周期动力学改变,免疫组化法检测增殖细胞核抗原(PCNA)阳性细胞.结果亚砷酸明显抑制人鼻咽癌细胞株CNE1细胞的增殖,24、48、72 h的IC50值分别为3.12、0.65、0.12 μg/mL;其作用随亚砷酸浓度增加和作用时间延长而增加;G2/M期逐渐增多;随着亚砷酸浓度增加,PCNA阳性细胞平均灰度值逐渐下降,P<0.05.结论亚砷酸可明显抑制人鼻咽癌细胞株CNE1的生长,调控DNA合成及细胞增殖的PCNA蛋白合成降低可能是亚砷酸的作用机制之一.     

不同敏感性鼻咽癌细胞株中Ku蛋白表达情况比较

目的　比较作为DNA双链断裂修复蛋白DNA依赖性蛋白激酶 (DNA PK)的调节亚基70 Ku、80 Ku在不同放射敏感性鼻咽癌细胞株CNE1和CNE2中的表达情况。方法　成克隆实验测定鼻咽癌高分化鳞癌细胞CNE1和低分化鳞癌细胞CNE2不同剂量照射后的存活分数 ,用线性二次模型拟合剂量存活曲线并求出放射生物学参数α、β、SF2、MID以评价两株细胞的放射敏感性。Westernblot检测照射前和后不同时间及不同剂量CNE1、CNE2细胞中Ku的表达 ,检测蛋白条带的吸光度值做半定量分析。结果　CNE1在各个剂量点的存活分数均比CNE2高 ,MID也大于CNE2 (2 .35∶1.11) ,SF2也大于CNE1(0 .5 4∶0 .37)。Westernblot显示两株细胞中70 Ku、80 Ku均有表达 ,蛋白条带的吸光度值测定显示70 Ku在CNE1、CNE2细胞中分别为 2 0 .0 3± 7.5 6和 19.36± 6 .0 4 ,80 Ku分别为 2 5 .98± 12 .87和 2 3.74±9.2 4 (P值均 >0 .0 5 )。蛋白表达的定量和定性分析同样显示 4Gy照射后不同时间点及 0～ 16Gy照射后 12hKu的表达无统计学差异。结论　实验验证了CNE2比CNE1对放射更敏感 ;照射前后两个细胞均有70 Ku、80 Ku蛋白表达且无差异 ;CNE1、CNE2放射敏感性的差异与Ku蛋白表达量无明显关系。     

慢病毒载体介导 CDK2 基因沉默对黑素瘤B16-F1细胞生物学行为的影响

目的:探讨由慢病毒载体pUL介导的pUL-CDK2-shRNA3 (CDK2-shRNA)沉默CDK2基因后对小鼠黑素瘤B16-F1细胞恶性生物学行为的影响,初步探索其作用机制.方法:利用重组慢病毒载体CDK2-shRNA转染B16-F1细胞,MTT法检测其对细胞增殖的影响,DAPI染色、AnnexinV-FITC/PI双染流式术检测细胞凋亡情况,流式术检测细胞周期变化,细胞黏附实验、transweU小室实验分别检测细胞黏附、侵袭和迁移能力变化,Western blotting检测细胞周期信号通路上RB蛋白(成视网膜细胞瘤蛋白)、pRB蛋白、细胞周期相关转录因子E2F1及侵袭迁移相关蛋白基质金属酶-2(MMP-2)、基质金属酶-9(MMP-9)的表达水平.结果:与空白对照组和阴性对照组相比,CDK2-shRNA组细胞相对增殖率、细胞黏附率、细胞侵袭和迁移能力均显著下降(均P＜0.05).细胞凋亡率显著增加(均P＜0.05);G1期细胞显著增加而S期和G2期显著降低(P＜0.05).细胞周期相关蛋白pRB、E2F1明显降低而RB显著升高(P＜0.05),细胞侵袭和迁移相关蛋白MMP-2、MMP-9明显降低(P＜0.05).结论:慢病毒载体pUL介导的shRNA沉默CDK2基因对B16-F1细胞恶性生物学行为有显著的抑制作用,其机制主要与细胞周期和细胞侵袭迁移相关蛋白表达变化有关.     

构建COX2基因慢病毒载体对肺腺癌A549细胞增殖与凋亡的影响#br#

目的 构建环氧化酶2（COX2）基因慢病毒表达载体并观察其对非小细胞肺癌A549细胞增殖与凋亡的影响。方法 针对COX2基因的不同片段设计3对shRNA的寡核苷酸片段并克隆至慢病毒载体GV248中,构建并筛选最佳抑制效率的靶向COX2基因的慢病毒载体COX2 shRNA。选取对数生长期A549细胞进行慢病毒转染,其中靶向COX2基因的shRNA载体转染A549细胞为shRNA组,以空载体质粒转染作为阴性对照组（NC）及不转染质粒的A549细胞为空白对照组（CON）,采用实时荧光定量PCR和Western blotting测定COX2基因和蛋白的表达。分别采用MTT法和流式细胞仪检测干扰COX2表达对A549细胞增殖、凋亡能力的影响。结果 成功构建靶向COX2基因的慢病毒载体;稳定转染A549细胞后,COX2基因表达下降,其中以COX2 shRNA1干扰效率最为显著;shRNA组中shRNA1转染的A549细胞COX2 mRNA水平为0.17±0.06,低于NC组的081±011和CON组的109±0.07,差异有统计学意义（P＜0.05）。shRNA组细胞增殖活性低于NC组和CON组,shRNA组转染5 d的吸光值为0.976±0.016,低于NC组的1.557±0.015和CON组的1880±0034,差异有统计学意义（P＜0.05）。shRNA组细胞凋亡率为（6.28±0.31）％,高于NC组的（3.08±0.05）％和CON组的（3.01±0.31）％,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 成功构建靶向COX2基因的慢病毒表达载体,干扰COX2表达可抑制人肺腺癌A549细胞的增殖并促进细胞凋亡。     

Orai1对鼻咽癌细胞侵袭和上皮-间充质转化的影响及其机制

目的： 探讨Orai1对鼻咽癌细胞侵袭和上皮-间充质转化的影响及其作用机制。方法： 培养鼻咽上皮细胞NP69和4种鼻咽癌细胞系（CNE1、CNE2、HONE1和5-8F）,分别采用实时荧光定量PCR（qPCR）和Western blot法检测细胞中Orai1的mRNA和蛋白表达水平。采用靶向Orai1的短发夹RNA（shRNA）质粒,转染CNE2细胞,设转染对照质粒的CNE2细胞为阴性对照组,钙离子成像检测钙库调节的钙离子内流,Transwell小室检测细胞转移和侵袭,qPCR和Western blot法检测上皮-间充质转化（EMT）标志物E钙黏蛋白（E-cadherin）、N钙黏蛋白（N-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）的mRNA和蛋白表达水平。结果： NP69、CNE1、CNE2、HONE1和5-8F细胞中均表达Orai1,且CNE2细胞中表达相对较高,故选择CNE2细胞进行后续试验。与阴性对照组相比,转染Orai1 shRNA后,CNE2细胞中Orai1的mRNA和蛋白水平均显著降低（P<0.05）;CNE2细胞的钙库调节钙离子内流能力、转移/侵袭能力和EMT相关标志蛋白E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的mRNA和蛋白表达水平均显著下降（P<0.05）。结论： 抑制Orai1表达可抑制鼻咽癌细胞钙库调节钙离子内流、转移侵袭和EMT进程,提示Orai1可能成为治疗鼻咽癌转移的新靶标和新方向。     

抑制ATM表达致鼻咽癌细胞CNE1辐射增敏的细胞周期阻滞研究

背景与目的:细胞周期调控是决定细胞辐射敏感性的决定性因素之一。共济失调毛细血管扩张症突变基因(ataxia-telangiectasia mutant,ATM)功能与细胞DNA损伤修复、细胞周期检查点调控密切相关。我们前期研究通过反义RNA抑制ATM基因表达可增加鼻咽癌细胞系CNE1辐射敏感性,本研究拟探讨其辐射增敏的细胞周期阻滞调控机制。方法:ATM反义组细胞CNE1/pDOR-atm及对照组细胞CNE1/pDOR经2Gy、5GyX线照射后不同时间点(1h、4h、8h、24h、48h)收获,应用流式细胞仪(flowcytometer,FCM)检测各细胞周期百分比及凋亡率。结果:两组细胞X线照射后均未出现明显G1期阻滞和细胞凋亡,但分别在照射后1h、4h、8h出现明显S期阻滞,24h、48h出现明显G2期阻滞,其中反义组S期细胞百分率总均数水平低于对照组(P<0.05),而G2/M期细胞百分率总均数水平高于对照组(P<0.05)。结论:反义RNA抑制ATM表达致CNE1辐射增敏的细胞周期调控机制可能与减少S期细胞比例,增加G2/M期细胞比例有关,与G1期阻滞和细胞凋亡的调控无关。     

鼻咽癌干细胞的生物学行为特征及CD44对Ras信号通路的调控作用

目的探讨鼻咽癌干细胞的生物学行为和Ras信号通路特征,以及CD44与Ras信号通路活化之间的调控关系。方法采用无血清悬浮培养法获得鼻咽癌CNE2和5-8F细胞的干细胞CNE2-SC和5-8F-SC。采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测细胞增殖,细胞平板克隆形成实验观察细胞克隆形成情况,Transwell细胞迁移实验检测细胞的迁移能力,细胞黏附实验观察细胞贴壁情况,Western blot法检测细胞中Ras信号通路相关蛋白的表达水平,采用RNA干扰技术明确CD44对Ras信号通路的调控作用。结果接种后24、48和72 h,鼻咽癌干细胞CNE2-SC和5-8F-SC的增殖能力分别低于其来源鼻咽癌细胞(均P<0.05)。细胞种植14 d后,CNE2-SC细胞的克隆形成率为(44.5±1.9)%,高于其来源细胞CNE2[(34.9±1.5)%,P<0.01];5-8F-SC细胞的克隆形成率为(47.4±1.8)%,亦高于其来源细胞5-8F[(37.2±1.7)%,P<0.01]。CNE2-SC细胞的迁移细胞数为(87.6±7.8)个/视野,是CNE2细胞的3.97倍(P<0.01)。5-8F-SC细胞的迁移细胞数为(67.2±5.7)个/视野,是5-8F细胞的3.07倍(P<0.01)。接种后3 h,CNE2-SC和CNE2细胞的黏附贴壁率分别为(42.1±7.6)%和(8.9±2.0)%;接种后6 h,分别为(82.4±5.0)%和(12.1±2.2)%。CNE2-SC细胞的黏附贴壁率均高于CNE2细胞(均P<0.01)。接种后3 h,5-8F-SC和5-8F细胞的黏附贴壁率分别为(53.6±6.1)%和(7.3±1.5)%;接种后6 h,分别为(90.7±3.6)%和(11.0±1.2)%。5-8F-SC细胞的黏附贴壁率均高于5-8F细胞(均P<0.01)。与普通鼻咽癌细胞相比,鼻咽癌干细胞中CD44、Ras和N-钙黏蛋白(N-cadherin)的表达水平升高(均P<0.01),E-钙黏蛋白(E-cadherin)、10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)表达水平降低(均P<0.01),磷酸化丝裂原细胞外激酶1/2(p-MEK1/2)、磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)磷酸化水平升高(均P<0.01)。相关分析显示,CNE2细胞与CNE2-SC细胞中,5-8F细胞与5-8F-SC细胞中,CD44与Ras蛋白表达水平均呈高度正相关(r=0.985,P=0.002;r=0.962,P=0.038)。沉默CNE2-SC细胞中CD44的表达后,人表皮生长因子受体2(HER-2)和Ras的蛋白表达水平显著降低,p-ERK1/2、p-Akt和p-PKCδ磷酸化水平下降(均P<0.01)。结论相对于来源鼻咽癌细胞,鼻咽癌干细胞增殖能力降低,但其克隆形成能力、迁移能力、黏附能力增强,可能与其CD44调控的Ras信号通路异常激活有关。     

肌动蛋白相关蛋白2/3复合体亚基2基因沉默对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨沉默肌动蛋白相关蛋白2/3复合体亚基2(ARPC2)基因对甲状腺乳头状癌(PTC)TPC-1细胞生物学特性的影响。方法采用无义短发夹RNA(shRNA)序列慢病毒(shCtrl)感染的TPC-1细胞作为对照组,采用含有ARPC2 shRNA干扰序列慢病毒(shARPC2)感染的TPC-1细胞作为实验组。利用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、流式细胞术、蛋白质印迹法以及克隆形成实验检测抑制ARPC2表达对TPC-1细胞增殖、细胞周期及其相关蛋白表达、克隆形成的影响;利用流式细胞术和蛋白质印迹法检测抑制ARPC2基因对TPC-1细胞凋亡及相关蛋白的影响。结果shARPC2可以高效感染TPC-1细胞,72 h后感染效率达到85%以上。MTT法检测显示,与对照组相比,实验组TPC-1细胞的增殖被抑制。实验组S期细胞比例较对照组低[(14.79±0.21)%比(21.13±0.33)%,t=27.77,P<0.05],实验组G1与G2/M期细胞比例较对照组增高[G1期:(67.57±0.08)%比(62.06±0.36)%,t=25.56,P<0.05;G2/M期:(17.64±0.12)%比(16.91±0.17)%,t=6.154,P<0.05]。实验组细胞周期相关蛋白CDK2、CyclinE和CyclinD的表达均降低。实验组形成克隆数低于对照组,差异有统计学意义[(10±2)个比(161±6)个,t=9.011,P<0.05]。实验组细胞凋亡率高于对照组[(8.60±0.77)%比(4.08±0.40)%,t=9.011,P<0.05]。对照组抗凋亡因子p21与bcl-2蛋白表达降低,促凋亡因子bax蛋白表达上调。结论shRNA干扰ARPC2基因的表达可以抑制PTC TPC-1细胞的增殖,并促进细胞凋亡。ARPC2可能是PTC治疗的生物学新靶标。     

放射线诱导hEgr-1-CD对鼻咽癌CNE放射增敏作用的研究

目的 研究放射线诱导hEgr-1-CD自杀基因前药系统对鼻咽癌CNE细胞株放射增敏作用。方法 将pcDNA3.1（＋）Egr-1-CD利用脂质体转染的方法 转染入鼻咽癌细胞株,给予不同剂量的X线照射观察基因表达与放射的剂量效应关系,观察不同的放射线及不同剂量的前药对鼻咽癌细胞的杀伤效应。结果 电离辐射可诱导增强自杀基因阳性鼻咽癌CNE细胞株中CD基因的表达,电离辐射与前药5-Fc的联合应用大大增强了对自杀基因阳性细胞的杀伤作用,其杀伤作用大于单独自杀基因前药系统和单独照射。结论 hEgr-1-CD自杀基因前药系统对鼻咽癌CNE细胞株有放射增敏作用,其与放射联合应用对CNE细胞有明显的协同杀伤作用。     

EMP1 inhibits nasopharyngeal cancer cell growth and metastasis through induction apoptosis and angiogenesis

This study aimed to analyze the expression, clinical significance of epithelial membrane protein-1 (EMP1) in nasopharyngeal carcinoma, and the biological effect in its cell line by EMP1 overexpression. Immunohistochemistry and Western blot were used to analyze the EMP1 protein expression in 75 cases of nasopharyngeal cancer and 31 cases of normal tissues to study the relationship between EMP1 expression and clinical factors. Recombinant lentiviral vector was constructed to overexpress EMP1 and then infect nasopharyngeal cancer CNE2 cell line. Quantitative real-time RT-PCR and Western blot were used to detect the mRNA level and protein of EMP1. MTT assay, cell apoptosis, migration, and invasion assays were also conducted to determine the influence of the upregulated expression of EMP1 that might be found on CNE2 cells’ biological effect. Immunohistochemistry and Western blot: The level of EMP1 protein expression was found to be significantly lower in nasopharyngeal cancer tissue than in the normal tissues (P?<?0.05). Decreased expression of EMP1 was significantly correlated with T stages, lymph node metastasis, clinic stage, and histological grade of patients with nasopharyngeal cancer (P?<?0.05). Meanwhile, the loss of EMP1 expression correlated significantly with poor overall survival time by Kaplan–Meier analysis (P?<?0.05). The result of biological function has shown that CNE2 cell-transfected EMP1 had a lower survival fraction, higher cell apoptosis, significant decrease in migration and invasion, higher caspase-9, and lower vascular endothelial growth factor C protein expression compared with CNE2 cell-untransfected EMP1 (P?<?0.05). EMP1 expression decreased in nasopharyngeal cancer and correlated significantly T stages, lymph node metastasis, clinic stage, histological grade, and poor overall survival, suggesting that EMP1 may play important roles as a negative regulator to nasopharyngeal cancer cell.     

可条件性诱导PLK1稳定敲降的食管癌细胞株的建立

目的： 建立可条件性诱导PLK1-shRNA稳定表达的食管癌细胞株,为深入研究PLK1在食管癌发生发展中的作用及分子机制提供细胞模型。方法：合成PLK1-shRNA寡核苷酸,退火后连接到慢病毒表达载体pLKO-Tet-On并转化至感受态细胞Stbl3,利用菌落PCR和测序分析鉴定阳性重组子。用pLKO-shPLK1-Tet-On重组质粒和包装质粒共转染293T细胞,收集病毒上清,感染食管癌细胞KYSE510,利用嘌呤霉素筛选可诱导PLK1-shRNA稳定表达的细胞株。采用qRT-PCR和Western blot检测强力霉素(Dox)诱导PLK1-shRNA表达的效率。结果：菌落PCR和测序分析结果显示,pLKO-shPLK1-Tet-On重组质粒中PLK1-shRNA的序列及插入位点正确。包装、收获病毒并感染KYSE510细胞后,筛选获得了具有嘌呤霉素抗性的稳定细胞株KYSE510-shPLK1-Tet-On。qRT-PCR和Western blot的检测结果显示,0.1 μg/mL Dox即可显著下调KYSE510-shPLK1-Tet-On细胞中PLK1的表达。结论：成功构建了诱导型PLK1-shRNA慢病毒表达载体,并筛选获得了可条件性诱导PLK1稳定敲降的食管癌细胞株,为进一步探讨PLK1异常表达与食管癌发生发展的关系提供了理想的细胞模型。