脂质体介异的人α-干扰素基因转染人口腔粘膜鳞癌细胞引起的凋亡研究

肿瘤的细胞因子基因治疗是近年来新兴的一门学科，其中疗法之一是将细胞因子基因转至肿瘤细胞中使之表达，从而有效地提高肿瘤免疫原性．降低其致瘤性后作为新型“瘤苗”用于肿瘤的基因治疗。我们利用脂质体介导，在体外成功地将人α-干扰素基因转入人口腔粘膜鳞状细胞癌(Tca8113)中并证实有人α-干扰素基因存在及表达，     

TNFα基因转染的肿瘤细胞抗肿瘤转移作用的探讨

肿瘤瘤苗进行的主动性免疫治疗是一条较为理想的治疗途径，近几年发展起来的细胞因子基因转染的肿瘤细胞瘤苗，开创了肿瘤主动免疫治疗的新时代。肿瘤细胞靶向的TNFα基因治疗开展得较早，TNFα基因转染的肿瘤细胞的体内致瘤性显著下降，但是对于此肿瘤细胞制备成瘤苗对已发生的肿瘤能否具有抗肿瘤转移作用尚未见报道。     

SCF或(和)GM-CSF体内基因转染对"自杀基因"疗法抗肿瘤作用的增强效应及其相关机理的研究

目的通过增强体内抗原提呈功能提高“自杀基因”疗法疗效，探讨其相关免疫学机理。方法采用腺病毒介导的ＳＣＦ、ＧＭＣＳＦ基因体内转染联合ＣＤ／５ＦＣ“自杀基因”疗法治疗小鼠的ＣＴ２６结肠腺癌，观察肿瘤的生长和荷瘤小鼠的存活期、不同方法所诱导的ＣＴＬ杀伤活性及肿瘤局部的细胞因子表达。结果一次性低剂量腺病毒介导的ｍＧＭＣＳＦ或（和）ｍＳＣＦ基因的体内转染，能增强“自杀基因”疗法的疗效。在肿瘤局部出现新的细胞因子表达，包括ｍＩＬ４、ｍＩＬ２、ｍＩＦＮγ和ｍＴＮＦα。脾细胞对ＣＴ２６细胞的杀伤作用增强。结论ｍＧＭＣＳＦ或（和）ｍＳＣＦ基因的联合转染对“自杀基因”系统的疗效具有明显的增强作用，其与机体特异抗肿瘤免疫功能以及肿瘤局部分泌的细胞因子有关。     

肿瘤坏死因子-α与卵巢癌

肿瘤坏死因子-α(TNF-α)通过多种机制参与卵巢癌的生物学变化，TNF-α及其受体分泌量的变化可能与卵巢癌进展有关。近年来采用其治疗卵巢癌，主要集中在利用TNF-α与多种化疗药物产生协同的细胞毒作用以及促使内源性TNF-α的产生来杀伤癌细胞。TNF-α重组蛋白疗法、基因疗法和TNF-α单克隆抗体疗法为卵巢癌的治疗带来希望。     

肿瘤坏死因子-α与卵巢癌

肿瘤坏死因子-α(TNF-α)通过多种机制参与卵巢癌的生物学变化,TNF-α及其受体分泌量的变化可能与卵巢癌进展有关.近年来采用其治疗卵巢癌,主要集中在利用TNF-α与多种化疗药物产生协同的细胞毒作用以及促使内源性TNF-α的产生来杀伤癌细胞.TNF-α重组蛋白疗法、基因疗法和TNF-α单克隆抗体疗法为卵巢癌的治疗带来希望.     

联合自杀基因与IL-2基因转移疗法的抗肿瘤效果及其抗肿瘤免疫应答的诱导作用

单用自杀基因疗法或单用细胞因子基因疗法抗肿瘤效果不理想,本研究中我们观察了大肠杆菌胞嘧啶脱胺酶(CD)基因与白细胞介素2(IL-2)基因联合转移对荷瘤小鼠的治疗效果及其对抗肿瘤免疫的诱导作用。复制荷瘤小鼠模型后在荷瘤部位注射表达CD基因的重组腺病毒(AdCD)及表达小鼠IL-2基因的重组腺病毒(AdIL2),并连续10天、每天1次腹腔注射5氟胞嘧啶(5FC)对荷瘤小鼠进行治疗。结果表明,AdCD/5FC/AdIL2联合基因治疗能显著抑制荷瘤小鼠皮下肿瘤的生长,并明显延长其生存期(P<0.01)。联合基因治疗组小鼠肿瘤细胞发生明显的坏死,瘤内及瘤周有大量的炎性细胞浸润,瘤内CD4~ 和CD8~ T细胞明显增加,脾细胞NK和CIL杀伤活性明显高于单用AdCD/5FC、对照病毒AdLacZ/5FC或PBS组。实验结果表明,联合应用自杀基因与细胞因子基因治疗可更有效诱导机体的抗肿瘤免疫反应,从而更显著地抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长。     

TNFα基因和IL-2基因共转染的肿瘤细胞体内致瘤性和瘤苗效果的观察

如同联合应用两种具有协同作用的细胞因子可以达到更佳的免疫治疗效果一样，如果将两种具有协同作用的细胞因子基因共转染人一种肿瘤细胞内，此肿瘤细胞可能会具有更佳的抗肿瘤效果。IL-2和TNFα具有协同抗肿瘤作用和免疫调节作用。因此，本文选用IL-2基因和TNFα基因为共转染的目的基因，通过两步基因转移共转染人B16黑色素瘤细胞，观察了体内致瘤性和瘤苗效果。     

细胞因子疗法在肿瘤治疗中的应用

细胞因子在肿瘤的发生发展中起着重要作用,部分细胞因子的抗肿瘤机制研究较明确.目前应用于肿瘤临床治疗的细胞因子主要有干扰素(IFN)、白细胞介素(IL)、肿瘤坏死因子(TNF).由于细胞因子疗法作用缺乏靶向性,不良反应多导致部分患者难以耐受,细胞因子疗法临床进展受限.提高疗效稳定性、减少不良反应仍是发展肿瘤细胞因子疗法的重中之重.     

腺病毒介导M-CSF、IFN-γ基因分别转染黑色素瘤细胞体外生物学特性的研究

肿瘤的基因治疗是目前肿瘤研究领域中的一大热点，其方法之一是将细胞因子的基因转移至肿瘤细胞使之表达，提高局部作用的浓度，减少全身应用重组细胞因子带来的副作用，达到低毒高效的目的，巨噬细胞集落刺激因子(M-CSD最基本的功能是维持巨噬祖细胞增殖、分化、成熟，对于成熟的巨噬细胞(Mφ)也有调节作用，     

肿瘤基因疗法研究进展

基因疗法的研究方兴未艾，尤其肿瘤基因疗法已进入临床试验阶段，目前，建立的各种肿瘤基因疗法的模式越来越多，一些已在体外或动物体内显示了良好的特异性抗肿瘤作用。本文综述了近年来淋巴因子基因疗法、病毒导向的酶解药物前体疗法和调控细胞遗传系统的基因疗法等研究进展。     

HSV-TK2重组TNF-α融合基因表达载体的构建及在肝细胞癌细胞中的瞬时表达

目的：构建双特异性细胞因子融合基因表达载体及在肝细胞癌细胞中瞬时表达。方法：应用PCR方法对各目的基因进行扩增并经测序载体pGEM-T-Easy测序后，以逆转录病毒载体pLXSN中的多克隆位点将二者融合为融合基因TK-TNF-α，并将其亚克隆至pEGFP-N3的EcoRl和BamHl位点间，成功地构建表达载体pEGFP-TK-TNF-α仅，并在该载体转染人肝细胞癌细胞HCC9204后观察融合蛋白表达情况。结果：酶切鉴定证实TK-TNF-α融合基因片段已克隆到pEGFP-N3的EcoRl和BamHl位点问，并在转染人肝细胞癌细胞7901中观察到TK-TNF-α融合基因绿色荧光蛋白的表达。结论：pEGFP-TK-TNF-α表达载体便于观察转染细胞中融合蛋白的表达情况及蛋白定位，为双特异细胞因子基因疗法提供有利条件。     

细胞因子基因在肿瘤治疗中的应用

细胞因子基因在肿瘤治疗中的应用第四军医大学西京医院（西安市７１００３２）王占祥综述章翔审校应用细胞因子进行肿瘤过继性免疫治疗已有１０多年了，实践证明了细胞因子的抗肿瘤作用，但由于细胞因子生物半衰期极短，需要连续、大剂量用药才能达到治疗效果，这样应用又...     

SCF或（和）GM—CSF体内基因转染对“自杀基因”疗法抗肿瘤作用的增？…

目的 通过增强体内抗原提呈功能提高“自杀基因”疗法疗效,探讨其相关免疫学机理。方法 采用腺病毒介导的ＳＣＦ,ＧＭ－ＣＳＦ基因体内转染联合ＣＤ／５ＦＣ“自杀基因”疗法治疗小鼠的ＣＴ２６结肠腺癌,观察肿瘤的生长和荷瘤小鼠的存活期,不同方法所诱导的ＣＴＬ杀伤活性及肿瘤局部的细胞因子表达。结果 一次性低剂量腺病毒介导的ｍＧＭ－ＣＳＦ或（和）ｍＳＣＦ基因的体内转染,能增强“自杀基因”疗法的疗效,在肿瘤局部出     

自杀基因治疗恶性肿瘤研究进展

恶性肿瘤的基因治疗是现代医学领域的研究热点，其中自杀基因疗法可能成为一种极具潜力和临床应用价值的治疗手段，在治疗范围上，已扩大到全身所有脏器及各种组织类型的恶性肿瘤，在提高其转录靶向调控机制上，已发现了许多特异性启动子元件，来增强自杀基因作用的特异性及可调控性，并已尝试利用辐射诱导来提高其转基因表达的外源性调控机制；此外，采用自杀基因与集落刺激因子(GM—CSF)、细胞因子等联合应用，诱导产生更强的抗肿瘤免疫，进一步增强杀伤肿瘤的效力。     

转基因人腺癌细胞株的建立及其生物学特性的研究

自Rosenberg等把Neo~R、TNF基因导入肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)对晚期黑色素瘤患者进行治疗以来,肿瘤基因治疗开始问世并多集中于对细胞因子基因(IL-2,TNF,IFN-α,GM-CSF等)转导后抗肿瘤的研究.常用的方法是选择适当载体把细胞因子基因导入抗肿瘤的免疫效应细胞(TIL,LAK,CTL)或肿瘤细胞中,回输或接种机体,直接或间接杀伤肿瘤细胞,增强机体的免疫调节作用,从而达到治疗肿瘤的目的.     

细胞因子研究的现状与发展趋势

细胞因子研究是一个既有理论研究意义又有实际应用价值的热门课题．本文分四部分内容介绍了细胞因子生物学活性的研究、细胞因子受体的结构及其信号传导分子机制，新型细胞因子的研制、细胞因子疗法的适应症和应用途径．其中介绍了分子生物学技术在细胞因子研究中的应用．例如转基因小鼠和基因敲除小鼠对细胞因子生物学活性研究的推动作用，对已有细胞因子进行结构改良或通过基因融合创造出自然界不存在的但活性更佳的细胞因子融合蛋白等。最后对目前细胞因子研究的方法和思路提出了几点认识。     

sFv及重组人IFN—α融合基因表达载体的构建及瞬时表达

目的：构建pEGFP-sFv-rhIFN－α表达载体，观察其在成骨肉瘤细胞9901中的瞬时表达。方法：应用PCR方法对各目的基因进行扩增交经测序载体pGEM-T-Easy测序后，以逆转录病毒载体pLXSN中的多克隆位点将二者融合为融合基因sFv-rhIFN－α，并将其亚克隆至pEGFP-N3的EcoRI和BamHI位点间，成功构建表达载体pEGFP-sFv-rhIFN－α，并在该载体转梁人成骨肉瘤细胞9901后观察融合蛋白表达情况。结果：酶切鉴定证实sFv-rhIFN－α融合基因片段已克隆到pEGFP-N3的EcoRI和BamHI位点间，并在转梁人成骨肉瘤细胞9901中观察到sFv-rhIFN－α融合基因及绿色荧光蛋白的表达。结论：pEGFP-sFv-rhIFN－α表达载体便于观察转染细胞中sFv-rhIFN－α融合蛋白的表达情况及蛋白定位，为单链抗体基因联合细胞因子基因疗法提供有利条件。     

自杀基因与细胞因子基因联合治疗结肠癌肝转移可获得持续抗肿瘤能力并且延长动物生存期

本文研究了自杀基因与细胞因子基因联合应用治疗结肠癌肝转移的效果。用自杀基因(HSV-tk)治疗肝转移肿瘤,肿瘤有明显消退,但是所有的实验动物均有肿瘤复发。联合应用腺病毒载体包装的白介素Ⅱ(mIL-2)基因疗法有明显的抗肿瘤效果,然而这种抗肿瘤能力逐渐减退。最后,所有的实验动物都死于肿瘤复发或远处转移。本实验还证明了粒细胞巨噬细胞集落刺激     

旁观者效应的机制及加强措施

旁观者效应在肿瘤自杀基因疗法中起着相当重要的作用，其产生机制可能与细胞凋亡、缝隙连接及免疫炎症系统有关。探索加强旁观者效应的措施对优化自杀基因疗法具有重要意义。     

腺相关病毒载体及其介导的自杀基因疗法

自杀基因疗法是肿瘤治疗的方法之一.腺相关病毒(AAV)载体介导的自杀基因疗法尤其备受关注.通过对AAV栽体的选择改建,调控外源基因的有效表达,提高基因转染的效率,充分发挥自杀基因的杀伤作用及旁观者效应来达到治疗肿瘤的目的.本文就AAV栽体及其介导的自杀基因疗法方面的进展作一综述.