早期乳腺癌患者外周血CK19 mRNA阳性循环细胞检测及其临床意义

 目的　探讨早期乳腺癌患者外周血CK19 mRNA阳性细胞检测的临床意义及其预后价值。方法　应用RT-PCR检测50例早期乳腺癌患者、24例良性乳腺病变患者及20名健康体检志愿者外周血有核细胞CK19 mRNA的表达,并根据基因标志物结果随访。结果　早期乳腺癌患者术后辅助治疗前外周血有核细胞CK19 mRNA阳性率40.0 %（20／50）,与良性乳腺疾病患者[12.5 %（3／24）]及健康体检志愿者[5 %（1／20）]比较,差异均有统计学意义（P＝0.018,P＝0.004）;外周血有核细胞CK19 mRNA阳性率与患者年龄、月经状况、TNM分期、肿瘤大小、淋巴结转移状况、病理分化、激素受体状况、Her-2、血清CA153、血清CEA水平异常升高无关（P＞0.05）;20例外周血有核细胞CK19 mRNA阳性的患者中有11例随访期出现转移复发（P＝0.002）,中位无瘤生存期明显缩短（P＝0.007）。结论　CK19 mRNA可以作为循环肿瘤细胞基因标志物。检测CK19 mRNA阳性循环肿瘤细胞,可能作为早期乳腺癌术后判断复发转移的辅助指标。     

非小细胞肺癌患者骨髓CK19和LUNX mRNA的实时荧光定量检测和意义

目的：检测非小细胞肺癌患者CK19mRNA和LUNXmRNA的表达情况，探讨其作为微转移检测分子标志物的可行性．方法：选择初治的非小细胞肺癌（NSCLC）患者62例，以肺部良性疾病10例作为对照组，采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（FQ—RT—PCR）和普通RT—PCR技术，检测肺癌、良性病变肺组织和骨髓的CK19mRNA和LUNXmRNA的表达。结果：肺癌和良性病变肺组织RT—PCR检测结果显示CK19mRNA和LUNXmRNA表达阳性率为100％：62例NSCLC患者骨髓标本FQ—RT—PCR检测结果显示，NSCLC患者中骨髓CK19mRNA表达阳性率45．2％（28／62），明显高于肺良性病变组10％（1／10）（P=0．037），NSCLC组骨髓LUNXmRNA表达阳性率38．7％（24／62）明显高于肺良性病变组0％（0／10）（P=0．017）；骨髓CK19mRNA表达阳性率随病理分期升高，接近统计学意义（P=0．06），而与病理类型、肿瘤分化程度无关；骨髓LUNXmRNA表达阳性率随分期升高且有统计学意义（P=0．02），而与病理类型、肿瘤分化程度无关：骨髓CK19mRNA和LUNXmRNA表达明显相关（P〈0．001）结论：CK19mRNA和LUNXmRNA可作为检测非小细胞肺癌患者微转移特异、敏感的分子标志物，可能有助于早期诊断肺癌转移，从而指导临床分期和治疗、     

肺癌患者外周血中CK19-mRNA表达的检测

目的　检测肺癌患者外周血中CK 19 mRNA的表达情况。方法　采用逆转录PCR (RT PCR )方法 ,分别检测有明确肿瘤病灶的肺癌患者、肺部良性疾病患者和健康对照者外周血中CK 19 mRNA的表达。结果　 70例肺癌患者外周血中CK 19 mRNA表达阳性率为 3 7.14 % ,3 8例肺部良性疾病患者阳性率为 18.42 % ,3 7例健康对照者阳性率为 5 .41% ,肺癌组与肺部良性疾病组、健康对照组间阳性率均有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,CK 19 mRNA表达阳性率与肿瘤分期及病理类型无相关性。结论　外周血中CK 19 mRNA作为肺癌的 1项分子检测指标 ,具有一定的临床应用价值 ,值得进一步扩大样本研究及随访 ,其检测的灵敏度及特异度尚有待提高     

大肠癌患者外周血中细胞角蛋白19和癌胚抗原的表达及临床意义

目的:应用巢式逆转录聚合酶链反应（nested RT-PCR）技术检测大肠癌患者外周血中CK19 mRNA、CEA mRNA的表达及临床意义,探讨其作为大肠癌微转移检测分子标记物的可能性。方法:应用巢式RT-PCR技术检测20例健康人、20例大肠腺瘤疾病患者和90例大肠癌患者外周血CK19 mRNA和CEA mRNA的表达。结果:大肠癌组CK19 mRNA和CEA mRNA表达的阳性率为58.89%（53/90）和53.33%（48/90）;20例健康人外周血中无CK19 mRNA和CEA mRNA的表达; 20例大肠腺瘤疾病患者有1例CK19 mRNA的表达,阳性率为5.00%（1/20）,无CEA mRNA的表达。大肠癌患者中CK19 mRNA、CEA mRNA的阳性率与肿瘤分期及肿瘤转移有显著相关性（P＜0.05)。结论:CK19 mRNA和CEA mRNA作为检测大肠癌患者外周血微转移的分子标记物具有良好的敏感度和特异性,同时可作为判断大肠癌患者的预后指标。     

非小细胞肺癌患者外周血CK19 mRNA的表达及与临床的关系

目的：研究非小细胞肺癌（NSCLC）患者外周血中细胞角蛋白19（cytokeratin 19，CK19）mRNA的表达变化及与临床的关系。方法：采用逆转录多聚酶链反应（RT—PCR）法进行外周血CK19mRNA表达的测定。结果：NSCLC组患者外周血CK19mRNA的阳性率为60．7％。显著高于良性病变组的3．3％和健康对照组的0（P〈0．01）；Ⅲ和Ⅳ期NSCLC患者的阳性率显著高于Ⅰ和Ⅱ期患者的阳性率（P〈0．05）；而不同病理类型NSCLC患者外周血CK19mRNA阳性率之间无显著性差异（P〉0．05）。结论：外周血CK19mRNA的检测有助于我们对NSCLC患者的病情、预后和治疗进行判断．且这并不受病理分型的影响。     

喉癌患者治疗前后外周血CK19mRNA、CK20mRNA的表达及临床意义

目的探讨喉癌患者根治性治疗前后外周血CK19mRNA、CK20mRNA的表达及临床意义。方法采用巢式RT—PCR技术检测48例喉癌患者术前和术后6、12、24个月外周血中CK19mRNA、CK20mRNA的表达情况。结果48例喉癌患者外周血术前CK19mRNA、CK20mRNA阳性率分别为37．5％（18／48）、45．8％（22／48）;患者术后6、12、24个月外周血CK19mRNA与CK20mRNA的表达均较术前下降（P〈0．05）;复发组CK19mRNA、CK20mRNA术前表达均高于无复发组（P〈0．05）;4例复发患者术前与术后6、12个月外周血CK19mRNA、CK20mRNA的表达差异无统计学意义（P〉0．05）。结论检测喉癌患者治疗前后外周血CK19mRNA和CK20mRNA的表达水平有助于评估喉癌微转移及临床疗效,从分子生物学方面为喉癌局部复发的预测提供帮助。     

荧光定量PCR检测上皮性恶性肿瘤患者外周血CK19、CK20mRNA

[目的]探讨荧光定量PCR技术检测外周血CK19、CK20mRNA对上皮性恶性肿瘤微转移的临床意义.[方法]采用荧光定量PCR技术检测41例上皮性恶性肿瘤患者术前外周血CK19、CK20mRNA的表达情况.[结果]41例肿瘤患者中CK19mRNA阳性率26.82%,CK20mRNA阳性率21.95%,两者均阳性5例(12.19%).CK19、CK20mRNA阳性率与患者的性别、年龄、肿瘤发生部位、肿瘤细胞分化程度无关(P＞0.05),而与肿瘤分期相关,其差异有显著性.[结论]CK19、CK20mRNA可作为一个检测上皮性恶性肿瘤患者外周血微转移标志物,两者联合检测可提高外周血癌细胞的检出率.     

检测CK19 mRNA、CEA mRNA诊断非小细胞肺癌外周血微转移

目的 探讨检测细胞角蛋白(cytokeratin 19，CK19)mRNA、癌胚抗原(cancer embryonic antigen，CEA)mRNA诊断非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)患者外周血微转移的临床意义。方法 应用RT-PCR法检测35例NSCLC患者外周血中的CK19mRNA、CEAmRNA，并以20例良性病变、20例健康人作对照。结果 35例NSCLC患者外周血CK19mRNA、CEAmRNA阳性表达率分别为40％和57％，两者均阳性者40％，两者均阴性者43％；肺良性疾病患者20例，CK19mRNA阳性2例(10％)，无CEAmRNA阳性者；20例健康对照2个指标检测结果均为阴性。随访发现CK-19mRNA阳性、CEAmRNA阳性和二者均阴性患者的远处转移率分别为50％、56％和27％。结论CEAmRNA和CK19mRNA是检测肺癌患者外周血微转移的良好标志物，检测外周血微转移有助于预测肺癌患者预后。     

非小细胞肺癌患者外周血中CK19mRNA、MUC-1mRNA及LUNXmRNA的表达及意义

目的 应用巢式逆转录聚合酶链反应(Nested RT-PCR)技术检测非小细胞肺癌患者外周血中CK19 Mrna、MUC-1 Mrna及LUNX Mrna的表达,探讨其作为肺癌微转移检测分子标记物的可能性.方法 应用巢式RT-PCR技术检测60例非小细胞肺癌患者外周血中靶基因的表达,并以15例肺良性疾病及20例健康人外周血作为对照.结果 CK19 Mrna、MUC-1 Mrna及LUNX Mr-NA表达的阳性率为:51.7%(31/60)、80.0%(48/60)和55.0%(33/60).对照组中15例肺良性疾病及20例健康人外周血中无LUNX Mrna表达,20例健康人外周血中有1例CK19 Mrna表达,而MUC-1 Mrna表达的阳性率在肺良性疾病中为60.0%(9/15),在健康人外周血中为65.0%(13/20).结论 CK19 Mrna、LUNX Mrna作为检测非小细胞肺癌患者外周血微转移的分子标记物,具有良好的敏感性和特异性.而MUC-1 Mrna作为诊断非小细胞肺癌微转移的指标还需进一步探讨.     

检测细胞角蛋白在食管癌外周血和骨髓微转移中的意义

目的：探讨食管癌患者外周血和骨髓中CK18mRNA基因表达及临床意义。方法：采用巢式RT—PCR方法检测50例M0、10例M0的食管癌患者及10例食管良I生病变患者外周血及肋骨骨髓中细胞角蛋白CK18mRNA基因的表达。结果：50例M0食管癌患者外周血、骨髓中CK18mRNA阳性表达率分别为38．0％（19／50）和42．0％（21／50）;10例M,的食管癌患者外周血、骨髓中CK18mRNA阳性表达率分别为90．0％（9／10）、100％（10／10）;食管良性病变患者的外周血和骨髓中K18mRNA阳性表达率均为0％（0／10）,CK18mRNA阳性表达在三组间差异有显著性（P〈0．01）。CK18mRNA在Ⅳ期食管癌患者外周血和骨髓中阳性表达率与III期以前患者相比,有显著性差异（P〈0．05）。CK18mRNA在外周血和骨髓中表达无差异（P〉0．05）,但呈正相关性（r=0．704,P〈0．01）。结论：应用RT—PCR法检测食管癌患者外周血或骨髓中CK18mRNA微转移有助于食管癌的分期和预后的判断。     

外周血CK20、uPA mRNA在肺腺癌胸腔积液患者合并远处转移患者中的作用

[目的]探讨细胞角蛋白19（cytokeratin 19,CK 19）mRNA,细胞角蛋白20（cytokeratin20,CK20）mRNA,基质金属蛋白酶9（matrix metalloproteinase 9,MMP9）mRNA,尿激酶型纤溶酶原激活物（urokinase plasminogen activator,uPA）mRNA在肺腺癌胸腔积液患者发生转移的作用。[方法]采用PCR技术和荧光定量RT-PCR检测47例经病理学确诊的肺腺癌合并胸腔积液患者中的CK19、CK20、MMP9、uPA mRNA水平。[结果]47例肺腺癌合并恶性胸腔积液患者CK19 mRNA 0~52 700copies/ml,CK20 mRNA 0~62 900copies/ml。肺腺癌恶性胸腔积液患者合并骨转移者CK20mRNA较无骨转移患者高（1 060 copies/ml vs 566.7 copies/ml,P=0.045）。伴有区域淋巴结转移患者uPA mRNA较无区域淋巴结转移患者高（553.4 copies/ml vs 173.7 copies/ml,P=0.048）。[结论]外周血CK20 mRNA高表达可能使肺腺癌合并胸膜转移患者更易发生骨转移。uPA mRNA表达可能与肺腺癌胸膜转移患者存在区域淋巴结转移相关。     

大肠癌组织Lumican基因及蛋白的表达及临床意义

目的：检测人大肠癌组织中Lumican基因及蛋白的表达,探讨其与大肠癌患者临床病理指标及预后之间的关系。方法：收集外科手术切除并经病理证实的27例新鲜大肠癌组织标本,以同一患者远离肿瘤的正常大肠组织为对照,采用实时荧光定量PCR法检测Lumican基因表达,剩余组织采用石蜡包埋用于免疫组化检测Lumican蛋白。另从我院病理科收集同期37例大肠癌组织蜡块,采用免疫组化SP法共检测64例大肠癌组织、27例正常大肠黏膜组织中Lumican蛋白表达。结果：27例新鲜大肠癌组织及对应正常大肠组织中Lumican的表达有显著差异性（ P〈0.001）,Lumican mRNA在大肠癌组织表达明显增高[以正常组织为1,癌组织Lumican基因表达上调（5.35±0.66）倍]。64例大肠癌组织Lumican蛋白阳性表达率为73.44%（47/64）,显著高于远离肿瘤的正常组织表达率0%（0/27）（P〈0.05）。Lumican表达与肿瘤的病理分级、Dukes分期、淋巴结是否转移有关（P〈0.001）,而与患者性别、年龄、病变部位无关（P〉0.05）。27例大肠癌标本Lu-mican蛋白量与mRNA相对表达量呈正相关（r=0.123）,但无统计学意义（P〉0.05）。结论：人大肠癌组织Lumican mRNA及蛋白均表达升高,Lumican高表达与大肠癌的临床病理特征及侵袭、转移特性密切相关,在大肠癌发生、发展过程可能起着重要作用。Lumican可作为判断大肠癌生物学行为的重要指标之一。     

大肠癌患者外周血CEAmRNA、HNP1-3的检测及临床意义

目的：研究大肠癌患者外周血中CEAmRNA、HNP1-3的表达及临床意义。方法：采用NestedRT-PCR法检测外周血CEAmRNA、ELISA法检测血清HNP1-3在大肠癌患者术前组、术后组及正常对照组中的表达。结果：外周血CEAmRNA在大肠癌患者术前组、术后组及正常对照组的阳性率分别为54%、34%、5%,术前组和术后组相比存在显著差异（P=0.044）,二者与正常对照组比较,有统计学差异（P〈0.001、P=0.012）;CEAmRNA与患者性别、年龄、肿瘤部位及分化程度无关,但与Dukes＇分期、淋巴结转移有关;外周血CEAmRNA对大肠癌的诊断敏感性和特异性分别为54%、95%。大肠癌患者术前组血清HNP1-3浓度中位数为20.33ng/ml,正常对照组7.69ng/ml,术后组14.35ng/ml;术前组、术后组血清HNP1-3水平均明显高于正常对照组,差异有统计学意义（P〈0.001、P=0.005）;并且血清HNP1-3水平也与Dukes＇分期、淋巴结转移有关;血清HNP1-3对大肠癌的诊断敏感性、特异性分别为62%、95%。联合检测外周血CEAmRNA与血清HNP1-3的敏感性（72%）及特异性（100%）均高于单一指标。结论：大肠癌患者外周血中CEAmRNA表达较正常对照组明显增高,且与Dukes＇分期、淋巴结转移密切相关。HNP1-3在大肠癌患者血清中呈高表达,且具有较高的敏感性及特异性,有望成为一种新的大肠癌肿瘤标志物。联合检测外周血CEAmRNA表达及血清HNP1-3水平可提高检测敏感性和特异性,对发现大肠癌微转移可能有重要的临床意义。     

联合检测乳腺癌患者外周血中细胞角蛋白19及人乳腺球蛋白mRNA的意义

目的通过检测分析乳腺癌患者外周血细胞角蛋白19(cytokeratin19,CK19)及人乳腺球蛋白(human mammaglobin,hMAM)mRNA表达,探讨其作为判断乳腺癌的相关指标。方法应用荧光定量PCR(Fluorescence Quantification-Polymerase Chain Reaction,FQ-PCR)技术对40例乳腺癌患者及10名健康志愿者外周血中CK19及hMAM mRNA的表达进行测定。运用χ2检验和Fisher确切概率法对各组间差别进行统计学分析;乳腺癌患者CK19和hMAM表达相关性分析采用Kappa检验。结果乳腺癌患者中CK19和hMAM阳性率分别为52.5%(21/40)和55%(22/40),均显著高于正常对照组(CK19阳性为1/10,hMAM均为阴性)(P0.050)。乳腺癌患者CK19和hMAM阳性表达具有相关性(Kappa=0.849,P=0.000)。CK19阳性表达与肿瘤大小、淋巴结转移和PR有密切关系(P0.050),与ER、HER-2无关;hMAM阳性表达与肿瘤大小、淋巴结转移、ER、HER-2有关(P0.050),与PR无关。结论联合检测乳腺肿瘤患者外周血中CK19及hMAM应用于临床动态监测,可起到帮助临床诊断的作用。     

食管癌放疗患者外周血CK19mRNA检测的临床意义

背景与目的肿瘤细胞在侵袭转移的早期阶段就可能进入血液循环,本研究检测食管癌根治性放疗前后外周血中循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTC)标记细胞角蛋白19(Cytokeratin 19,CK19)mRNA的表达,探讨其临床意义。方法收集72例食管癌患者根治性放疗前后外周血,应用巢式RT-PCR检测CK19 mRNA的表达,分析其与临床病理特征及两年无进展生存(progerssion-free survival,PFS)的关系。结果放疗前后CK19 mRNA阳性者分别占44.4%(32/72)与30.6%(22/72),差别无统计学意义(P=0.085)。放疗前后CK19 mRNA阳性与淋巴结转移相关(P值分别为0.037和0.031)。生存分析也表明放疗前后CK19 mRNA阳性与不良PFS有关(P值分别为0.040和0.001),Cox回归模型则进一步证实放疗后CK19 mRNA阳性是独立预后指标。结论放疗后外周血CK19 mRNA阳性可望成为食管癌根治性放疗预后判断的有效分子标记。     

结直肠癌转移相关标志物过表达的临床意义

背景与目的：当前除临床病理分期被广泛应用外,分子分期可以使结直肠癌的分期更准确。本研究旨在探讨单个或某一类转移相关标志物过表达对结直肠癌预后的影响。方法：收集1997～1998年95例结直肠癌的石蜡标本,用组织阵列仪制备组织芯片。采用免疫组化染色检测细胞黏附分子（Homing cell adhesion molecule variant-6,CD44v6）、基质金属蛋白酶-2（matrix matalloproteinase-2,MMP-2）、COX-2（cyclooxygenase-2）、表皮生长因子（epidermal growth factor,EGF）、表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）和血管内皮生长因子（vascular epidermal growth factor,VEGF）的表达情况。比较阳性组和阴性组之间复发转移率的差异和多个肿瘤标志物过表达对预后的影响。结果：Dukes’A、B期患者中,CD44v6、EGF和EGFR蛋白阳性组的复发转移率分别为30．9％、38．1％和27．5％,显著高于阴性组的复发转移率8．3％、8．8％和11．8％（P=0．045、0．022和0．047）;Dukes’C期患者中,MMP-2、COX-2和VEGF蛋白阳性组的复发转移率为73．3％、69．2％和62．5％．显著高于阴性组的复发转移率37．5％、25．0％和25．0％（P=0．045、0．017和0．049）。Dukes’A／B期中4～6个以上指标阳性组的复发转移率高于1—3指标阳性组,而5年生存率低于1—3指标阳性组,差异均有统计学意义（P=0．019和0．030）：而Dukes’C期中两组患者的5年复发率和5年生存率差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论：CD44v6、EGF和EGFR蛋白过表达与Dukes’A／B期患者高复发转移相关：MMP-2、COX-2和VEGF蛋白过表达与Dukes’C期患者高复发转移相关。对于DukesA／B期患者,肿瘤转移标志物高表达越多,复发转移的概率越高,5年生存率越低。     

术前5-FU化疗对结直肠癌患者血液微转移的影响

目的：检测术前5-FU化疗及手术对结直肠癌患者血液CK20mRNA含量的影响,并探讨其临床意义。方法：收集本院普通外科2009年5月至2010年12月病理证实的结直肠癌患者30例,随机分为对照组与术前化疗组各15例。术前化疗方案：CF 200mg ivgtt d1-d3、5-FU 500mg ivgtt d1-d3,化疗结束次日进行手术。两组患者均取术前（化疗组为化疗前1日及术前）、术中癌灶回流至门静脉血,术后首日清晨空腹外周静脉血各5ml;另设15份健康体检者外周血标本作为正常人群对照。以实时定量RT-PCR法检测血标本中CK20mRNA含量。结果：15例健康体检者中,CK20mRNA均未检出;30例结直肠癌患者治疗前外周血指标检出率如下：CK20mRNA为80.0%,其含量与肿瘤浸润深度（T）、淋巴结转移（N）、远处转移（M）、术后病理分期（TNM）、脉管或淋巴管癌栓正相关（P〈0.05）,而与分化程度、神经侵犯、性别、年龄无关。化疗组患者化疗前后CK20mRNA（P=0.055）含量降低,但差异不具有显著性意义。对照组手术前后外周血中CK20mRNA含量差异无统计学意义。比较两组患者术中血与术前外周血中CK20mRNA含量,化疗组指标降低病例数多于对照组,且CK20mRNA含量的变化具显著意义（P=0.004）。结论：外周血CK20mRNA为结直肠癌微转移检测的敏感指标。就观察术前化疗效果而言,CK20mRNA有明显下降。术前5-FU化疗可以降低外周血及回流入门静脉血中微转移的程度,提示对TNM II、III期结直肠癌患者开展规范新辅助化疗研究的必要性。     

胃肠癌患者外周血组织特异性mRNA的检测及其临床意义

目的 研究77例胃肠癌患者外周血中组织特异性mRNA（CK20、CK19及CEA）的表达,并探讨其意义.方法 RT-PCR技术检测77例胃肠癌患者术前外周血中CK20、CK19、CEA mRNA的表达.结果 77例胃肠癌患者外周血中,CK20、CK19及CEA的阳性表达率分别为44.2%、35.1%及54.5%;三基因同时检测时,至少一个基因检测结果为阳性的表达率为74.0%,与肿瘤的组织分化程度、浸润深度、淋巴结转移、远处转移及复发具有相关性.结论 分子生物学技术联合检测多种标志物检测肿瘤细胞的外周血微转移,可提高检测的敏感性及准确性,有助于指导临床治疗及预后判断.