RNA干涉在肿瘤研究中的应用进展

RNA干涉 (RNAinterference ,RNAi)是生物体内的一种通过双链RNA(double strandedRNA ,dsRNA)来抵抗病毒入侵和抑制转座子活动的自然机制 ,近来研究发现 ,2 1～ 2 5nt大小的小干涉RNA(smallinterferingRNA ,siRNA)可在哺乳动物细胞中介导高度序列特异性的基因沉默 ,并且具有高效性和序列特异性 ,已经成为功能基因组研究的有力工具 ,并且有可能在某些疾病如肿瘤等的基因治疗中发挥重要作用     

RNA干扰技术在肿瘤基因治疗研究中的应用

RNA干扰(RNAi)属于转录后基因沉默(PTGS)。其机制为利用双链RNA(dsRNA)特异性地降解相应序列的mRNA成为短干扰RNA，从而特异性地阻断靶基因的表达，现介绍RNA干扰的分子机制、技术应用及在肿瘤基因治疗方面的进展和广阔的发展前景。     

shRNA技术在肿瘤发生发展及耐药性研究中的应用

小发夹RNA（short hairpin RNA，shRNA）是近年来兴起的一种序列特异性诱导细胞内目的基因表达沉默的RNA干涉（RNA interference，RNAi）技术，shRNA作用特点主要是高效、持久以及多重抑制性，可广泛应用于基因功能、抗病毒、肿瘤基因治疗研究。本文对shRNA技术在肿瘤发生发展及其耐药性方面的实验研究作一综述。     

RNA干扰技术在肿瘤基因治疗研究中的应用

RNA干扰(RNAi)属于转录后基因沉默(PTGS).其机制为利用双链RNA(dsRNA)特异性地降解相应序列的mRNA成为短干扰RNA,从而特异性地阻断靶基因的表达,现介绍RNA干扰的分子机制、技术应用及在肿瘤基因治疗方面的进展和广阔的发展前景.     

短发夹状RNA使骨肉瘤细胞缺氧诱导因子HIF-1α基因沉默

目的构建低氧诱导因子HIF-1α发夹状小干涉RNA真核表达载体，观察发夹状双链小干涉RNA对骨肉瘤细胞HIF-1的转录后的基因沉默效果?方法体外合成两对互补的寡核苷酸链，分别针对缺氧诱导因子HIF-1αmRNA序列的两个靶位点。退火形成双链，插入pSilencer^TM neoU62．1真核表达载体。将构建好的载体经脂质体介导转染骨肉瘤SaOS-2细胞，观察HIF-lα基因的沉默效果。半定量RT—PCR检测HIF-1αmRNA的抑制程度，免疫荧光和免疫印迹(Western Blot)检测HIF-1α蛋白表达情况。结果测序证实成功构建HIF-1α发夹状小干涉RNA真核表达载体。转录生成的发夹状小干涉能够特异抑制HIF-1α表达。RT—PCR结果显示针对HIF-1αmRNA序列的两个靶位点的沉默效果分别为69％和92％，免疫荧光显示转染后荧光强度显著降低，免疫印迹显示两个靶位点的发夹状小干涉RNA分别使HIF-1α蛋白表达下降66％和90％。结论通过体内转录生成的发夹状小干涉RNA能够使骨肉瘤细胞缺氧诱导因子HIF-1α基因沉默。     

RNA干扰技术在肿瘤研究中的应用

RNA干扰为利用小分子RNA（siRNA）特异性地降解相应序列的mRNA，从而特异性地阻断靶基因的表达，现介绍RNA干扰的分子机制、技术应用及其在肿瘤基因治疗的应用和进展。     

RNA干扰技术的应用

RNA干扰(RNAi)能产生序列特异性的基因沉默。RNAi的研究与应用在短时间内得到了迅速发展，其应用主要围绕特异性降解同源mRNA的作用方面。现对其应用进展进行综述。     

RNA干扰技术在胃癌治疗中的研究进展

RNA干扰(RNA interference,RNAi)主要通过导入双链RNA(double strands RNA,dsRNA)进而靶向抑制转录后基因的沉默,小分子干扰RNA(short interfering RNA,siRNA),是RNA干涉的调控的关键.由于RNAi对基因沉默的高效、特异性,在胃癌治疗中,可明显影响胃癌细胞的生物学特性,故这一技术目前已被广泛应用于与胃癌发生相关的基因、蛋白、通路和酶等研究,为胃癌的治疗提供了一种新的途径.     

RNAi与肿瘤基因治疗的进展

近年来，RNA干涉(RNAi)已经广泛研究，并阐明Dicer酶是RNAi的关键酶之一。RNAi技术可以高效、特异地敲低靶基因的表达并使细胞出现特异性的表型缺失，因而在肿瘤的基因治疗中应用广泛。本文就上述进展予以综述。     

RNA干扰技术的应用

RNA干扰(RNAi)能产生序列特异性的基因沉默.RNAi的研究与应用在短时间内得到了迅速发展,其应用主要围绕特异性降解同源mRNA的作用方面.现对其应用进展进行综述.     

小干扰RNA的合理设计

引言大量实验表明,针对同一靶基因的不同si RNA序列具有不同的沉默效率,为了能够运用RNAi技术更有效地沉默靶基因,需要在RNAi的第一步,也是其成功与否的关键环节?si RNA序列的设计方面进行更多的改进。本文将在以下几个方面探讨si RNA序列设计方面的最新研究进展,作为应用RNAi技术时的参考。1SiRNA序列的设计RNAi最终要通过si RNA片段与靶基因结合并使之降解,因此,确保高度同源于靶基因而绝无与其他基因同源的si RNA序列,是决定RNAi特异性的关键所在,也是si RNA设计的基本原则。从具有不同沉默效率的si RNA序列中筛选出高效的si R-NA序列,需要经过严密的设计和不断的实验检验[1]。1.1si RNA序列在靶基因中的位置从靶基因起始密码子AUG下游50~100个核苷酸开始搜寻理想的si RNA序列,越靠近靶基因的3′端,其基因沉默效果可能越好[2]。以前的研究表明:不要以5′非翻译区(5′UTR)和3′非翻译区(3′UTR)及起始密码子附近序列作为设计si RNA的模板,这些区域含有调节蛋白结合位点(如翻译起始复合物),调节蛋白可与RISC竞争结合si RNA序列,降低R...     

RNAi及其抗肿瘤应用研究进展

RNA干扰是由双链RNA介导的序列特异性转录后基因沉默过程，为双链RNA分子在mRNA水平上关闭相关基因表达的过程。现综述RNAi技术在抗肿瘤研究等方面的研究进展。     

RNAi逆转肿瘤多药耐药的研究新进展

RNA干扰（RNAi）作为机体自我保护的防御机制，是由双链RNA（dsRNA）诱发的宿主细胞同源mRNA序列特异性降解的过程，是一种转录后的基因沉默现象。其主要优点是：具有高度序列特异性，抑制靶基因表达具有高效性，RNAi效应可在不同细胞间长距离传递和长时间维持，而在某些生物中（线虫等）则具有遗传特性。根据RNAi各种分子特性不同和疾病特征选择合适的进入RNAi途径的分子。     

RNA干扰对内皮祖细胞参与肿瘤血管和淋巴管新生的抑制作用

在趋化因子的作用下,内皮祖细胞(EPC)可定向迁移入肿瘤,经VEGF/VEGFR信号途径参与肿瘤血管和淋巴管新生.RNA干扰是由双链RNA引起的序列特异性基因沉默,主要通过小干扰RNA(siRNA)介导的靶mRNA降解,抑制基因表达.经siRNA干扰VEGF/VEGFR信号途径,抑制EPC向内皮细胞分化,有望达到抗肿瘤血管和淋巴管新生以及抗肿瘤生长和转移的目的.     

顺式激活和反式激活元件对HBV RNA稳定性的调节

乙型肝炎转基因小鼠模型中，在HBsAg特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)注射和细胞因子调节后，病毒RNA可以通过转录后机制诱导而下调。本研究的目的是证实反式激活因子控制HBV RNA稳定性和病毒RNA的降解过程。第一步，我们分析、纯化和鉴定了一个特异的RNA结合蛋白，称为La自身抗原，是众所周知的与RNA形成的多个步骤有关的RNA结合蛋白，显示在细胞因子介导的下调病毒RNA作用与细胞因子诱导La蛋白溶解过程之间存在着严格的时态相关性。La结合位点位于HBV转录后调节元件(PRE)的预测茎环5’端。除了具有核酸内切核酸溶解的特征外，并且显示当HBV RNA发生降解时活性增强。断裂点非常接近于La结合位点。估计La可能是一种胞内蛋白，控制HBV RNA稳定性。预测的茎环结构是HBV RNA稳定性的重要决定簇。     

Survivin特异性siRNA真核表达载体的构建

目的构建Survivin特异性siRNA真核表达载体，为以Survivin基因为靶点、小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）为手段的白血病和其它恶性肿瘤基因治疗的基础和临床应用提供良好的技术手段。方法根据GeneBank数据库提供的Survivin基因所有变异体的共同核苷酸序列，按照Tuschl设计原则，选择设计双链siRNA，再转化为能表达其小发卡结构RNA（small hairpin RNA，shRNA）的DNA序列，并与载体pSINsi-hU6定向连接，构建受控于启动子u6的真核表达载体pSIN／shRNA1、pSIN／shR-NA2，经限制性内切酶酶切和DNA测序进行鉴定。结果构建Survivin特异性siRNA真核表达载体pSIN／shRNA1、pSIN／shRNA2，经限制性内切酶酶切和DNA测序证实与设计完全一致。结论Survivin特异性siRNA真核表达载体构建成功。     

siRNA对生长抑素基因表达的抑制效应

目的研究siRNA对生长抑素(SOM)基因表达的抑制作用。方法根据SOM全长cDNA序列设计和合成RNA干扰的靶序列,应用T7RiboMAXTM体外转录合成siRNA并转染胃癌细胞系BGC-823,经RT-PCR,免疫组化法检测SOMmRNA和蛋白的表达水平。结果siRNA可以特异性抑制SOM基因的表达。结论通过体外合成siRNA可以特异性抑制SOM基因的表达,为筛选抑制SOM基因表达的有效序列研究奠定了基础。     

HnRNP A2/B1短发夹环RNA重组体的构建与序列分析

目的：利用RNA干扰（RNA interfering,RNAi）技术构建HnRNP A2／B1重组质料，并行序列分析。方法：分别将21bP长短的HnRNP A2／B1靶序列，中间为7b序列间隔的反向重复序列，置入PsiRNA-hHlneoG2质粒中，产生重组质粒PsiRNA-hHlneoG2 HnRNP A2／B1.结果：将重组质粒作测序分析，经测序鉴定确定为所需序列。结论：特异性短发夹环RNA（ShRNA）真核表达载体PsiRNA-hHlneoG2 HnRNP A2／B1的成功构建，为进一步研究其基因功能奠定基础。