RNA干扰下调RhoA表达对卵巢癌细胞SKOV-3恶性表型的影响

目的:探讨RNA干扰(RNAi)下调RhoA表达对卵巢癌细胞SKOV-3恶性表型的影响.方法:构建RhoA基因特异性短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体,以脂质体介导转染卵巢癌细胞SKOV-3,RT-PCR和蛋白质印迹法检测RNAi后SKOV-3中RhoA的mRNA及蛋白表达水平变化;Boyden小室体外侵袭和划痕实验观察细胞侵袭和迁移能力,MTT比色法测定转染前后细胞增殖及粘附能力的变化.结果:转染RhoA shRNA的实验组细胞与转染空载体的对照组细胞比较,RhoA mRNA的表达分别为(5.46±2.02)%和(56.37±17.42)%,蛋白质的表达分别为(6.03±2.04)%和(59.03±19.94)%,细胞平均侵袭百分比为(15.84±4.17)%和(33.64±4.64)%,愈合百分比为(44.79±6.21)%和(68.36±4.46)%,增殖能力(A值)分别为0.726±0.166和1.703±0.340,P<0.05(n=3);而粘附能力(A值)分别为0.833±0.137和0.894±0.189,P>0.05(n=3).结论:通过RNAi降低RhoA的表达能降低卵巢癌细胞SKOV-3体外侵袭、迁移和增殖能力.     

siRNA沉默人组织因子基因对大肠癌侵袭转移能力影响的观察

目的:应用RNA干扰(RNA interference,RNAi)的手段抑制人类结肠癌细胞内组织因子(tissue factor,TF)基因表达,从而探讨对其侵袭转移能力的影响.方法:首先构建携带有针对TF基因有效的siRNA序列的真核细胞表达质粒pSU-PER-TF,用此质粒转染人类结肠转移癌细胞系LoVo,应用RT-PCR和蛋白质印迹法从RNA及蛋白质水平检测证实细胞内源性TF基因被敲减后的表达水平变化,通过Matrigel体外侵袭实验进一步考证对细胞侵袭转移能力所造成的影响.结果:RT-PCR及蛋白质印迹法结果显示,与转染pSUPER质粒的LoVo细胞相比,转染重组干扰质粒pSUPER-TF-1的细胞其内源性TF基因的表达水平被显著敲减.Matrigel体外侵袭实验证实,转染pSUPER质粒的LoVo穿膜细胞均数为(220±7.0)个,而转染pSUPER-TF-1质粒的LoVo穿膜细胞均数为(102±4.0)个,两组差异有统计学意义,t=25.293,P=0.008.结果表明,转染pSU-PER-TF-1质粒的LoVo细胞侵袭转移能力显著下降.结论:以TF基因作为靶点应用RNA干扰技术敲减其表达可以明显降低LoVo细胞体外侵袭转移能力,为结肠癌的临床治疗提出新的思路,可以作为结肠癌治疗的一个新靶点.     

LncRNA HOTAIR通过Wnt/β-Catenin信号通路调控NSCLC细胞增殖、迁移及侵袭

目的探究长链非编码RNA HOTAIR对非小细胞肺癌增殖、迁移和侵袭的影响及其分子作用机制。方法采用qRT-PCR法检测NSCLC细胞系A549、H460、H1650中HOTAIR的相对表达。转染干扰序列siRNNA敲降HOTAIR基因表达,验证干扰效率。采用CCk-8法、Transwell实验分别检测敲降HOTAIR表达对A549、H460、H1650细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响。通过Western blot检测敲降HOTAIR表达后Wnt/β-Catenin信号通路相关蛋白表达情况。结果与正常HBE细胞对比,NSCLC细胞系A549、H1650、H460中HOTAIR高表达(P<0.01);敲降HOTAIR表达后,三组细胞系中HOTAIR相对表达水平均较阴性对照组显著降低(P<0.05)。与阴性对照组相比,敲降HOTAIR表达后A549、H1650、H460细胞在各转染时间点的增殖能力受到不同程度抑制(P<0.05),细胞侵袭率、迁移率显著降低(P<0.01);三组细胞系中Wnt/β-Catenin信号通路相关蛋白β-catenin、c-Myc表达水平较阴性对照组和空白对照组显著下调(P<0.05)。结论LncRNA HOTAIR在NSCLC细胞系中高表达,敲降细胞内HOTAIR表达可抑制NSCLC细胞增殖、迁移及侵袭,其机制可能与Wnt/β-Catenin信号通路活性受抑制有关。     

lncRNA BLACAT1靶向LEMD1促进结直肠癌细胞的增殖和转移

目的 研究长链非编码RNA(lncRNA)BLACAT1在结直肠癌细胞发生发展过程的作用机制。方法 starBase分析TCGA数据库中lncRNA BLACAT1分别在结直肠癌组织和癌旁组织中的表达水平,采用qPCR分别检测10例结直肠癌患者癌组织和癌旁组织中lncRNA BLACAT1的表达水平;检测结直肠癌细胞系SW620、SW480、HT-29、LoVo、HCT116和正常结直肠上皮细胞FHC中lncRNA BLACAT1的mRNA表达水平,筛选lncRNA BLACAT1高表达细胞系;敲低lncRNA BLACAT1验证对高表达细胞系增殖、迁移和侵袭的影响;starBase在线预测与lncRNA BLACAT1靶向作用的基因,qPCR和Western blot实验验证结果;starBase分析lncRNA BLACAT1与作用基因相关性,双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA BLACAT1的靶基因;检测lncRNA BLACAT1作用靶基因对结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响。结果 TCGA数据库分析和结直肠癌患者检测结果均表明癌组织中lncRNA BLACAT1表达明显高于癌旁组织(P＜0.001);结直肠癌细胞系SW620中lncRNA BLACAT1的mRNA表达水平最高(P＜0.001);敲低lncRNA BLACAT1能够抑制SW620细胞的增殖(P＜0.001)、迁移(P＜0.001)和侵袭能力(P＜0.001);qPCR和Western blot实验及数据库分析结果表明lncRNA BLACAT1与LEMD1的表达存在正相关关系(r=0.778,P＜0.001),双荧光素酶报告基因实验证明LEMD1是lncRNA BLACAT1的靶基因;lncRNA BLACAT1上调LEMD1的表达,促进SW620细胞的增殖(P＜0.001)、迁移(P＜0.001)和侵袭(P＜0.001)。结论 lncRNA BLACAT1靶向LEMD1促进结直肠癌细胞SW620的增殖和转移。     

siRNA敲减DNMT1表达对T-cadherin基因甲基化及结肠癌细胞生物学行为的影响

目的 肿瘤的发生、发展和侵袭转移是影响结肠癌治疗的重要原因,有研究发现DNA甲基化状态在肿瘤的发生、发展中起着重要作用,抑制T-cadherin表达可增强肿瘤细胞侵袭和迁移能力.本研究探讨siRNA敲减DNA甲基转移酶1(DNA methyl transferase 1,DNMT1)基因表达对结肠癌细胞T-cadherin基因甲基化及细胞生物学行为影响.方法 设计针对DNMT1的siRNA1、siRNA2和siRNA3重组质粒,分别转染HT-29、SW620和HCT116细胞系,采用实时荧光定量PCR检测DNMT1表达,以筛选敲减效率最高的DNMT1 siRNA和细胞系.用敲减效率最高的DNMT1 siRNA转染相应细胞系,采用甲基化特异性PCR检测T-cadherin甲基化水平,采用实时荧光定量PCR和蛋白印迹法检测T-cadherin表达.用敲减效率最高的DNMT1 siRNA转染相应细胞系,采用噻唑蓝比色法、流式细胞术、Transwell和细胞划痕实验检测细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移情况,观察敲减DNMT1对细胞生物学行为的影响;同时设置T-cadherin shRNA重组质粒转染组,观察同时敲减DNMT1和T-cadherin对细胞生物学行为的影响.结果 DNMT1 siRNA1重组质粒对HT-29细胞系DNMT1的敲减效果最好.DNMT1 siRNA1转染HT-29细胞后,DNMT1组T-cadherin基因甲基化水平明显低于空质粒组和空白组,DNMT1组与空质粒组(F=314.182)和空白组(F=283.625)差异有统计学意义,均P<0.001.DNMT1组和联合组DNMT1 mRNA表达量(0.27±0.08)和蛋白表达量(0.41±0.12)显著低于空质粒组和空白组.其中mRNA表达,DNMT1组与空质粒组(F=544.581)和空白组(F=525.811)组差异有统计学意义,均P<0.001;联合组与空质粒组(F=507.501)和空白组(F=494.958)也差异有统计学意义,均P<0.001.蛋白表达量,DNMT1组与空质粒组(F=217.550)和空白组(F=275.469)差异有统计学意义,均P<0.001:联合组与空质粒组(F=321.707)和空白组(F=407.225)也差异有统计学意义,均P<0.001:而DNMT1组和联合组比较mRNA(F=0.002,P=0.965)和蛋白表达量(F=0.811,P=0.394)均差异无统计学意义.DNMT1组T-cadherin mRNA表达量(1.17±0.34)和蛋白表达量(1.38±0.54)显著高于联合组、空质粒组和空白组.其中mRNA表达,DNMT1组与联合组(F=433.103)、空质粒组(F=313.768)、空白组(F=372.118)差异有统计学意义,均P<0.001.对于蛋白表达量,DN-MT1组与联合组(F=89.315)、空质粒组(F=156.745)、空白组(F=196.702)差异有统计学意义,均P<0.001.而联合组与空质粒组(F=1.310,P=0.262;F=0.144,P=0.714)和空白组(F=3.713,P=0.064;F=0.038,P=0.850)的mRNA和蛋白表达量比较差异无统计学意义.与联合组、空质粒组和空白组比较,DNMT1组第24、36、48、72 h的A值显著减小,F组别=14.479,P<0.001;F时间=37.755,P<0.001.DNMT1组与联合组(F=1004.194,P<0.001)、空质粒组(F=1190.815,P<0.001)、空白组(F=781.018,P<0.001)比较细胞总凋亡率显著升高;DNMT1组穿膜细胞数目为(61.3±10.7)个,与联合组(F=86.730,P<0.001)、空质粒组(F=282.962,P<0.001)、空白组(F=152.538,P<0.001)比较显著减少.DNMT1组细胞迁移距离为(235.8±6.3)μm,与联合组(F=2535.55,P<0.001)、空质粒组(F=9767.233,P<0.001)、空白组(F=8420.830,P<0.001)比较显著减少.而联合组与空质粒组和空白组比较,A值、细胞总凋亡率、穿膜细胞数目和细胞迁移距离均差异无统计学意义,P>0.05.结论 DNMT1 siRNA1可有效敲减HT-29细胞DNMT1表达,逆转T-cadherin高甲基化状态并上调其表达.敲减DNMT1可明显抑制HT-29细胞增殖,促进其凋亡,降低其侵袭和迁移能力;而同时敲减T-cadherin能够逆转此种现象,说明敲减DNMT1引起的细胞生物学行为改变可能是通过T-cadherin来实现的.     

成纤维生长因子19稳定敲减对大肠癌细胞增殖、迁移的影响

目的:构建慢病毒稳定敲减FGF19大肠癌细胞系,探究FGF19敲减对人大肠癌细胞增殖、迁移的影响。方法:通过慢病毒转染大肠癌COLO201和HCT116细胞,分别在适宜病毒转染指数条件下转染并构建稳转株;以嘌呤霉素进行筛选,获得稳定敲减FGF19的细胞株;PCR和Western bloting鉴定COLO201和HCT116稳转细胞株中FGF19的表达情况;Transwell实验检测细胞的迁移活性,CCK-8和克隆形成实验检测细胞的增殖活性。结果:成功构建了稳定敲减FGF19的两株大肠癌细胞。稳定敲减FGF19的HCT116、COLO201细胞(KD组)的FGF19 mRNA水平与空载对照组(NC组)相比明显减少(P=0.001 1,P=0.000 1);与NC组相比,KD组细胞的FGF19蛋白表达明显下降,差异均具有统计学意义(P=0.001,P=0.000 1)。KD组细胞的迁移活性以及增殖能力均相比NC组明显下降(迁移P=0.001 7/P=0.000 1; CCK-8 P=0.042 5/P=0.033 4;克隆P=0.005 1/P=0.002 2)。结论:成功构建FGF19...     

RhoC/ROCK-Ⅰ信号通路封闭对卵巢癌细胞生物学行为影响的研究

目的:探讨 RhoC/ROCK-Ⅰ信号转导通路的封闭对卵巢癌细胞体外生物学行为的影响.方法:RT-PCR及蛋白质印迹法检测RhoC及ROCK-Ⅰ在不同卵巢癌细胞系中mRNA及蛋白的表达水平;将ROCK-Ⅰ反义寡核苷酸(ASODN)转染人卵巢癌细胞系SW626与Caov-3细胞后,检测转染前后ROCK-Ⅰ蛋白的表达,Boyden小室观察各株细胞转染前后侵袭及运动能力的变化,MTT比色法测定转染前后黏附能力的变化.结果:RhoC和ROCK-Ⅰ在4种卵巢癌细胞中呈不同程度表达,其中RhoC的表达水平与癌细胞侵袭力和迁移能力呈正相关,r=0.95,P<0.01,转染ROCK-Ⅰ ASODN后,细胞内ROCK-Ⅰ的表达明显减少;细胞的侵袭能力受到明显的抑制,10 μmol/L组和20 μmol/L组SW626细胞的侵袭能力分别为对照组的(75.6±3.8)%和(54.7±2.9)%,Caov-3为(68.8±4.7)%和(50.0±4.5)%;转染两种浓度ASODN的SW626与Caov-3细胞的随机运动能力分别为对照组的(80.0±1.3)%、(63.7±1.9)%、(72.0±1.3)%和(55.9±2.5)%;定向运动能力分别为对照组的(83.9±1.4)%、(64.1±1.3)%、(72.5±3.4)%和(54.5±1.9)%.结论:RhoC/ROCK-Ⅰ信号转导通路与人卵巢癌细胞的体外侵袭与迁移密切相关,阻断ROCK-Ⅰ的表达可有效地抑制卵巢癌肿瘤细胞的体外侵袭能力.     

miR-1253对肺腺癌细胞增殖与迁移侵袭能力的影响

目的 探讨微小RNA-1253 （miR-1253）在肺腺癌细胞株中的表达及其对肺腺癌细胞增殖、迁移侵袭能力的影响。方法 采用实时荧光定量PCR（QPCR）检测肺腺癌A549、NCI-H1299、NCI-H157、A973及GLC-82细胞株中的miR-1253表达水平,将miR-1253 mimics和miR-1253 inhibitor分别转染至A973和NCI-H157细胞,以转染阴性对照质粒NC的细胞为阴性对照（NC）组。MTS 实验、克隆形成实验及Transwell 迁移侵袭实验检测不同miR-1253表达对A973和NCI-H157细胞增殖、克隆形成及侵袭转移能力的影响。结果 QPCR检测结果显示,A549、NCI-H1299、NCI-H157、A973及GLC-82细胞中miR-1253相对表达量分别为0.92±0.06、0.06±0.03、1.10±0.26、0.03±0.01、0.45±0.08。A973细胞转染miR-1253 mimics后miR-1253相对表达量显著升高（P＜0.05）,NCI-H157细胞转染miR-1253 inhibitor后miR-1253相对表达量显著下降（P＜0.05）。与NC组比较,转染miR-1253 mimics能够显著抑制肺腺癌细胞A973的增殖活性、平板克隆形成能力（166.0±29.3 vs. 371.0±31.4,P=0.001）、迁移 （91.1±32.1 vs. 166.7±33.9,P=0.008）以及侵袭能力 （74.4±20.5 vs. 145.6±28.8,P=0.001）;而miR-1253 inhibitor 能够上调NCI-H157的增殖、平板克隆形成细胞数目（545.0±61.9 vs. 337.0±39.7, P=0.008）、迁移（246.7±36.7 vs. 151.1±32.9,P＜0.001）以及侵袭能力 （231.1±38.8 vs. 137.8±27.3,P=0.001）。结论 miR-1253可以抑制肺腺癌细胞的增殖与侵袭转移,可能作为肺腺癌基因治疗的有效靶点。     

靶向RhoA shRNA对卵巢癌HO8910细胞体外侵袭能力影响的研究

目的:观察RNA干扰(RNAi)技术对卵巢上皮癌HO8910细胞株RhoA基因表达的抑制作用,探讨其对HO8910细胞侵袭、迁移的影响。方法:构建RhoA基因特异性短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体,以脂质体介导转染卵巢癌细胞HO8910,实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测RNAi后HO8910中RhoA的mRNA及蛋白表达水平变化,Transwell小室体外侵袭和划痕试验检测细胞侵袭和迁移能力。结果:转染RhoA shRNA(质粒1、2和3)组的RhoA mRNA的表达明显弱于未转染任何质粒的空白组和对照组,P<0.05,且质粒2组表达最低(27.9%),抑制效率最高(72.1%),具有序列特异性。转染序列特异性RhoA shRNA的细胞(实验组)与对照组比较,RhoA蛋白的表达分别为(6.08±2.24)%和(59.25±17.96)%,P<0.05;细胞平均侵袭能力测值为18.82±2.61和35.25±5.12,P<0.05;愈合百分比为(43.80±6.21)%和(69.35±4.42)%,P<0.05。结论:靶向RhoA的shRNA可抑制卵巢癌HO8910细胞RhoA基因的表达,能降低细胞体外侵袭和迁移能力。     

Tiam 1反义寡核苷酸转染对胃癌细胞体内外侵袭转移能力的影响

背景与目的:作为细胞骨架结构调节因子,T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1(Tiam 1)与胃肠道肿瘤侵袭转移密切相关。本研究应用反义寡核苷酸(ASODN)转染技术,特异抑制胃癌细胞中Tiam1表达,进而观察对胃癌细胞体内、外侵袭转移能力的影响。方法:采用层粘连蛋白黏附法,由胃癌MKN-45细胞株(M0)中筛选获得高侵袭转移亚株(MH)。以脂质体介导将Tiam 1 ASODN转染至MH细胞中,并应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及定量细胞ELISA技术分别检测Tiam 1 mRNA和蛋白的表达。应用Boyden小室及裸鼠接种法分别观察ASODN转染后MH细胞在体内、外侵袭转移能力方面的改变。结果:应用0.43μmol/L Tiam 1 ASODN转染能特异性抑制胃癌MH细胞中Tiam1 mRNA和蛋白表达(0.162±0.018,0.982±0.119),与脂质体转染组(0.789±0.054,1.237±0.108)、正义寡核苷酸(SODN)-脂质体转染组(0.754±0.039,1.234±0.103)、未转染组(0.801±0.065,1.290±0.182)相比,分别约为后三者的20.2%~21.5%、76.1%~79.6%(P<0.05)。ASODN转染组细胞的体外侵袭、移行能力(10±3、21±9)较SODN转染组(27±10、56±13)、未转染组(26±6、53±12)明显受抑制(P<0.05),同时ASODN转染组细胞在裸鼠体内的肺转移率(1/5=20%)也较SODN转染组(4/5=80%)、未转染组(4/5=80%)显著下降(P<0.05)。结论:特异性ASODN转染可有效抑制Tiam1在胃癌细胞中的表达并削弱其体内、外侵袭转移能力。     

Snail蛋白对E-钙黏蛋白表达的抑制在上皮性卵巢癌细胞侵袭及淋巴结转移中的作用

目的:探讨Snail蛋白对E-钙黏蛋白(E-cad)表达的抑制在上皮性卵巢癌细胞侵袭及淋巴结转移中的作用。方法:选择人卵巢癌细胞株C13,将Snail/siRNA、Snail/smRNA分别转入C13细胞,以PBS作为空白对照组,检测E-cad蛋白表达情况,采用Transwell上室进行细胞侵袭性及淋巴结转移实验分析。结果:C13细胞空白对照组、Snail/smRNA组、Snail/siRNA组,12 h穿膜细胞数分别为98.24±7.92、90.93±8.38和21.48±4.85,Snail/siRNA组与另两组相比有显著性差异(P＜0.05);Snail/siRNA组的转移细胞与另两组相比也有显著性差异(P＜0.05)。相对于Snail/smRNA组,Snail/siRNA组细胞E-cad的蛋白水平降低,两组差异有统计学意义(P＜0.05),而空白对照组则没有明显变化(P＞0.05）。结论:Snail蛋白对E-cad表达的抑制能抑制上皮性卵巢癌细胞的侵袭及转移,能够在分析卵巢癌转移分子机制时给予理论支持,为靶向逆转的研究提供了可供参考的靶点。     

miR-212在上皮性卵巢癌中表达的临床意义

目的:本研究探讨上皮性卵巢癌中miR-212的表达及其与临床病理特征的关系。方法:采用茎环实时荧光逆转录聚合酶链反应Real-time RT-PCR检测我院46例上皮性卵巢癌组织及癌旁良性组织中miR-212表达,并对临床病理数据进行分析。Transwell 检测转染miR-212 mimic对SKOV3细胞运动、侵袭的影响,Western Blot检测E-cadherin和Vimentin蛋白表达。结果: 46例上皮性卵巢癌miR-212相对表达量(0.842±0.223)显著低于癌旁卵巢组织(1.212±0.438)。miR-212在Ⅲ/Ⅳ期中相对表达量为(0.865 3±0.469 3),明显低于I/Ⅱ期(1.095 2±0.415 2)（P<0.05)。在低分化癌组织中相对表达量为(0.856 0±0.437 6),明显低于中高分化癌组织(1.131 9±0.471 2)（P<0.05)。而且miR-212在有淋巴结转移组相对表达量为(0.879 4±0.462 2),明显低于无淋巴结转移组（1.163 7±0.412 7)（P<0.01)。但与患者年龄（P=0.430）,肿瘤组织学类型（P=0.546）无关。miR-212转染组SKOV3细胞运动、侵袭均低于未转染组,miR-212转染组抑制SKOV3细胞Vimentin表达,但促进E-cadherin表达。结论:卵巢癌中miR-212低表达,miR-212表达缺失可能与卵巢癌的肿瘤生长和侵袭发展相关,在卵巢癌预后判断中可能有一定价值。     

应用RNAi技术研究乳腺癌转移抑制基因1对卵巢癌细胞侵袭转移的影响

目的研究乳腺癌转移抑制基因1（BRMS1）对人类卵巢上皮性癌（卵巢癌）细胞侵袭、转移的影响。方法应用脂质体介导法将BRMS1-siRNA转染人卵巢癌细胞株OVCAR3细胞内（实验组）,设转染不干扰任何基因的NC-siRNA的OVCAR3细胞为阴性对照组,未进行任何转染的为空白对照组。通过实时荧光定量PCR及免疫印迹法筛选并鉴定BRMS1基因有效沉默后,用Transwell侵袭、迁移实验检测BRMS1基因沉默前后3组细胞侵袭、迁移能力的变化。结果人卵巢癌细胞OVCAR3中BRMS1基因成功沉默。BRMS1基因沉默后,Transwell侵袭实验中,实验组转入底层膜的细胞数为（190±8．5）个,明显高于阴性对照组和空白对照组[分别为（144±7．8）个、（146±6．8）个;t=8．747,t=8．869;P=0．0001,Transwell迁移实验中,实验组转入底层膜的细胞数为（231±8．9）个,明显高于阴性对照组和空白对照组[分别为（177±9．7）个、（182±7．9）个;t=9．314,t=9．224;P=0．000]。结论BRMS1基因能抑制人类卵巢癌细胞的侵袭和转移,有望成为卵巢癌治疗的靶基因。     

ZNF488对电离辐射诱发的鼻咽癌细胞CNE1侵袭迁移能力的影响

[目的]研究ZNF488 siRNA对电离辐射诱发的鼻咽癌CNE1侵袭迁移能力的影响.[方法]采用qRT-PCR和Western blot检测ZNF488 siRNA转染效率.采用划痕实验和Transwell侵袭实验检测电离辐射对鼻咽癌CNE1细胞侵袭迁移能力的影响.采用划痕实验和Transwell侵袭实验检测沉默ZNF488后,电离辐射诱发的CNE1细胞侵袭迁移能力是否改变.[结果]在mRNA和蛋白水平,实验组(siZNF488组)表达量均明显低于对照组(siRNA-Ctrl 组),其中实验组ZNF488 mRNA水平为对照组的(0.54±0.12)倍(P=0.023).划痕实验证明电离辐射明显增强鼻咽癌CNE1细胞迁移能力;Traoswell侵袭实验检测到0Gy组侵袭细胞数为302.67± 18.77,4Gy组侵袭细胞数为371.67± 15.63,4Gy组侵袭细胞数为0Gy组(1.23±0.03)倍(P=0.006).沉默ZNF488后,电离辐射诱发的CNE1细胞侵袭迁移能力明显减弱,这一功能的实现与上皮间质转化(EMT)进程的逆转息息相关.[结论]ZNF488 siRNA通过逆转EMT进程抑制鼻咽癌细胞CNE1电离辐射诱发的侵袭迁移能力.     

EZH2 基因在卵巢癌发生发展中的作用及其临床病理意义*

目的:探讨EZH 2 基因对卵巢癌细胞增殖和转移能力的影响,及其在卵巢癌组织中的表达与临床病理学意义。方法:运用EZH 2 小干扰RNA（siRNA ）转染卵巢癌OVCAR- 3 细胞株,Western blot方法分析OVCAR- 3 细胞中EZH 2 的蛋白表达;MTT 实验检测细胞增殖水平,Transwell 小室实验检测细胞侵袭和转移能力。另外,应用RT-PCR 和免疫组织化学法分别检测EZH 2 在卵巢癌组织中的mRNA 和蛋白表达情况。结果:与阴性对照组相比,EZH 2 siRNA 能明显降低OVCAR- 3 细胞的EZH 2 蛋白表达,并显著抑制肿瘤细胞的增殖能力（P=0.032）;转染EZH 2 siRNA 的OVCAR- 3 穿膜细胞数,在侵袭实验中,siEZH 2 组为29.3 ± 5,与对照组（51± 6.8）比较,差异有统计学意义（P=0.027）;在迁移实验中,siEZH 2 组的迁移细胞数为51.6 ± 7.7,显著低于对照组（72.3 ± 11.7,P=0.036）。 RT-PCR 检测发现,卵巢癌组织中的EZH 2 mRNA 表达水平明显高于正常组织。在免疫组化实验中,61.0%的卵巢癌组织呈EZH 2 蛋白高表达,而且与卵巢癌的T 分期、N 分期以及FIGO分期显著正相关（P<0.05）。 另外,单变量生存分析发现EZH 2 高表达与卵巢癌患者短生存期密切相关（P=0.007）;多变量分析显示EZH 2 是卵巢癌的独立预后参数（P=0.047）。 结论:EZH 2 在卵巢癌的发生与进展中发挥着重要的作用,而且EZH 2 高表达是卵巢癌患者预后不良的独立分子指标。      

miRNA-519d对卵巢癌的生长抑制作用及其对XIAP表达的影响

目的 探讨MicroRNA-519d(miRNA-519d)对卵巢癌细胞生长抑制的作用及其对XIAP表达的影响.方法对人卵巢癌细胞系OVCAR3瞬时转染miR-519d mimic(实验组)和NC(阴性对照组),不进行任何转染为空白对照组,转染48 h后进行MTT实验、流式细胞实验、Transwell侵袭实验,观察卵巢癌细胞生长抑制状况,WB实验测定XIAP的表达变化.结果定量Real-time PCR检测显示:miR-519d的表达水平均较对阴性对照组与空白对照组有明显的增高(P<0.05).MTT检测显示:上调OVCAR3细胞内miR-519d水平后,细胞增殖抑制率为(29.81±8.24)%,而阴性照组与空白对照组分别为(2.49±0.28)%和(1.98±0.34)%,对比差异有统计学意义(P<0.05).流式细胞术检测显示实验组OVCAR3细胞凋亡率为(8.33±1.39)%,而阴性对照组与空白对照组分别为(2.13±2.11)%和(1.89±1.08)%,对比差异有统计学意义(P<0.05).Transwell侵袭实验显示:转染miR-519dmimics后实验组、阴性对照组、空白对照组的三组的细胞转移能力对比无明显差异(P>0.05).Western实验结果显示:处理后实验组的XIAP蛋白相对表达量为(0.98±0.34),阴性对照组为(7.54±1.22),空白对照组为(7.67±1.32),对比差异有统计学意义(P<0.05).结论增强miR-519d的表达能对卵巢癌细胞的增殖起抑制作用,并促进其凋亡,而对卵巢癌细胞的转移没有影响,能抑制XIAP的表达,表明miR-519d在卵巢癌的生长中起到一定的抑制作用.     

赖氨酸甲基转移酶2D在膀胱癌中的表达水平及对细胞增殖和侵袭的影响

目的:检测赖氨酸甲基转移酶2D（KMT2D）在膀胱癌中的表达水平与临床病理特征的关系及KMT2D对膀胱癌细胞增殖和侵袭的影响。方法:免疫组化实验和qRT-PCR实验分别检测膀胱癌组织和癌旁组织中KMT2D蛋白和mRNA表达水平。根据免疫组化评分将患者分为KMT2D低表达组和KMT2D高表达组,比较两组患者的临床病理特征。蛋白免疫印迹实验检测SV-HUC-1、5637、T24和TCCSUP细胞中KMT2D蛋白表达水平。将miR-NC质粒和miR-KMT2D质粒转染至5637、T24和TCCSUP细胞中,蛋白免疫印记实验检测转染效率。MTT实验和Transwell实验检测细胞的增殖和侵袭情况。结果:膀胱癌组织中KMT2D蛋白免疫组化评分低于癌旁组织（t=17.371,P<0.001）。膀胱癌组织中KMT2D mRNA相对表达水平为（0.8±0.2）低于癌旁组织（2.6±0.4）,t=7.606,P=0.002;KMT2D低表达组与高表达组的年龄、肿瘤分化程度、淋巴结转移和浸润深度之间差异有统计学意义（P<0.05）;KMT2D蛋白在膀胱癌细胞5637、T24和TCCSUP中的表达水平分别为（0.38±0.03）、（0.42±0.03）、（0.36±0.05）均低于SV-HUC-1的表达水平（0.92±0.06）,q=21.131、19.584、21.647,均P<0.001;miR-KMT2D质粒转染至5637、T24和TCCSUP细胞后,KMT2D蛋白水平明显增加;细胞培养72 h时,5637-KMT2D组细胞OD值（0.73±0.05）低于5637-NC组（1.34±0.07）（t=8.241,P<0.001）,T24-KMT2D组细胞OD值（0.67±0.06）低于T24-NC组（1.12±0.06）（t=9.524,P<0.001）,TCCSUP-KMT2D组细胞OD值（0.62±0.07）低于TCCSUP-NC组（1.32±0.06）（t=8.941,P<0.001）;5637-KMT2D组细胞发生侵袭细胞数（34.5±4.7）低于5637-NC组（56.0±5.2）（t=3.524,P=0.008）,T24-KMT2D组细胞发生侵袭细胞数（36.4±4.5）低于T24-NC组（68.5±6.7）（t=7.302,P<0.001）,TCCSUP-KMT2D组细胞发生侵袭细胞数（30.1±3.4）低于TCCSUP-NC组（74.2±6.5）（t=8.206,P<0.001）。结论:KMT2D在膀胱癌组织中表达水平降低与患者的年龄、肿瘤分化程度、淋巴结转移和浸润深度有关,增加KMT2D的表达水平后可减弱细胞增殖和侵袭能力,KMT2D有望成为治疗膀胱癌的有效靶点。     

EIF4E基因下调对胃癌细胞的侵袭转移能力的影响及机制研究

目的:探讨特异性下调真核起始因子EIF4E对胃癌细胞侵袭转移能力的影响及可能的作用机制。方法:采用siRNA技术下调EIF4E的表达,Western blot检测转染前后EIF4E和MMP9蛋白质表达,通过Traswell小室实验检测转染前后侵袭迁移能力的差异。结果:Western blot证实,与阴性对照相比,转染EIF4E siRNA组细胞EIF4E表达明显下调,同时与阴性对照相比,转染EIF4E siRNA组细胞MMP9蛋白表达同样明显下调,Traswell小室实验证实,下调EIF4E后,MKN28细胞的体外侵袭迁移能力显著降低。结论:在胃癌MKN28细胞中存在EIF4E基因对MMP9的调控作用,EIF4E基因可能通过调控MMP9的表达参与胃癌的侵袭迁移行为,EIF4E有望成为肿瘤基因治疗的新靶点。     

Cx43对乳腺癌细胞侵袭和迁移及细胞间隙通讯的影响

目的:探讨Cx43对乳腺癌侵袭、迁移以及细胞间隙通讯功能的影响。方法:用脂质体转染法将Cx43质粒、Cx43 siRNA及阴性对照转染入人乳腺癌细胞株MDA-MB-231。细胞黏附实验、Transwell试验检测细胞黏附、侵袭和迁移能力。分子生物学方法检测MMP-2、MMP-9、BRMS-1的表达。荧光染料传输实验检测不同Cx43表达的细胞间隙通讯的功能。结果:细胞黏附实验结果表明相较于野生型细胞,Cx43 siRNA组黏附能力（0.43±0.07）降低（t=20.801,P=0.002）,Cx43质粒组黏附能力（1.63±0.26）增高（t=5.917,P=0.027）。Transwell实验表明相较野生组,Cx43质粒组侵出小室的细胞数增加（侵袭:1.25±0.04,t=16.339,P=0.004;迁移:1.33±0.02,t=22.770,P=0.002）,而Cx43 siRNA组侵出小室的细胞数减少（迁移:0.84±0.04,t=11.139,P=0.008;侵袭:0.79±0.04,t=5.743,P=0.029）。分子生物学检测发现Cx43质粒组MMP-2、MMP-9表达增高,BRMS-1表达降低,而Cx43 siRNA组MMP-2、MMP-9表达降低,BRMS-1表达增高。染料传输实验证实相较野生组传输能力,Cx43质粒组传输作用增强;Cx43 siRNA组细胞间的传输作用减弱。结论:Cx43对乳腺癌细胞侵袭及迁移能力存在正调控。这一调控能力可能通过GJIC实现。     

siＲNA 介导的eIF3b基因沉默抑制乳腺癌细胞MCF-7的侵袭和迁移

目的:探讨siＲNA介导的eIF3b基因沉默对乳腺癌细胞MCF-7侵袭和迁移能力的影响。方法:设计eIF3b基因的小分子干扰RNA(siRNA)片段,脂质体介导转染入乳腺癌细胞株MCF-7,转染分3个组:I组(空白对照组)、II组(转染非特异性对照组)和III组（转染eIF3b-siRNA组）。应用qＲT-PCＲ和Western blotting免疫印迹法检测转染前后eIF3b基因mＲNA和蛋白表达水平;运用Matrigel 胶模型细胞迁移和侵袭实验检测MCF-7细胞迁移和侵袭能力的变化。结果:与I组（1.09±0.19）、II组（1.05±0.17）相比,III组eIF3b 蛋白表达水平（0.45±0.06）明显下降,差异具有统计学意义(P＜0.05),I组和II组eIF3b蛋白表达水平比较,差异无统计学意义(P＞0.05)。III组eIF3b mRNA相对表达水平为0.54±0.08,明显低于I组(1.12±0.16)和II组(1.08±0.18),差异有统计学意义（P＜0.05）,I组和II组eIF3b mRNA表达比较,差异无统计学意义(P＞0.05)。细胞迁移实验中,III组细胞明显少于I组和II组(P＜0.05);细胞侵袭实验中,III组穿过人工基底膜的细胞明显少于I组和II组(P＜0.05)。结论:下调eIF3b表达可明显抑制乳腺癌细胞侵袭和迁移。