PCR检测技术中石蜡包埋组织DNA提取方法的比较

聚合酶链反应技术应用于病理诊断和辅助诊断工作，其价值已不断受到重视。该项技术的关键是ＤＮＡ和ＲＮＡ的提取，模板ＤＮＡ和ＲＮＡ提取的纯度直接影响着ＰＣＲ的结果。我们实际工作中多遇到的是石蜡包埋组织标本如何能提取纯度高的模板ＤＮＡ和ＲＮＡ。我们采用经典与...     

脆性部位表达的DNA复制模型

脆性部位表达的ＤＮＡ复制模型贺明伟，李琪（湖南医科大学湘雅医院中心实验室长沙４１０００８广西医学院附院妇产科南宁５３００００）采用５─氟尿嘧啶核苷（５─ＦＵｄＲ）／咖啡因相继处理的方法，诱导脆性部位表达，发现在四倍体或核内复制的细胞中，脆性部位总是在...     

EB（Epstein－Barr）病毒与细胞转化

ＥＢ（Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ）病毒与细胞转化邵细芸综述陈主初审阅湖南医科大学肿瘤研究所长沙４１００７８ＥＢ（Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒｖｉｒｕｓ，ＥＢＶ）是ＤＮＡ肿瘤病毒，它不仅是传染性单核细胞增多症（ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓｍｏｎｏｎｕｃｌｅｏｓｉｓ，...     

从痰液中提取基因组DNA的研究

从痰液中提取基因组ＤＮＡ的研究连晓红，刘欣燕痰液中组织细胞含量较少，而能从痰液中有效地进行基因组ＤＮＡ的提取将会对肺部疾病的诊治提供很大帮助。本文对几种提取ＤＮＡ的方法进行了优化设计，发现蛋白酶Ｋ消化酌氯仿抽提方法是一种简单有效的方法。同时对提取的肺...     

子宫内膜癌中MTS1/p16基因甲基化的研究

ｐ16基因甲基化是ｐ16基因功能失活的一个重要原因。我们采用ＰＣＲ为基础的甲基化测定方法对子宫内膜癌中ＭＴＳ1/ｐ16基因的甲基化进行了检测 ,以了解ｐ16基因甲基化与子宫内膜癌发生、发展的关系。一、材料与方法1 标本来源 :46例子宫内膜癌组织、10例正常组织和 7例癌组织均取自我院妇瘤科手术或刮宫标本。患者术前未接受放疗、化疗或激素治疗。2 ＤＮＡ提取 :参照《分子克隆》一书提取高分子量ＤＮＡ。3 引物设计 :根据已知的ｐ16基因序列 ,我们在ｐ16第一外显子的两侧设计一对引物 ,这对引物包括ｐ16基因全部第一外显子及其启动区 ,…     

以DNA多聚酶为靶点筛选抗癌药的新方法的初步探讨

借鉴文献方法，从小鼠艾氏腹水癌细胞中提取ＤＮＡ多聚酶粗酶液，实验观察了十四种已知抗癌药和正在研究中的药物对ＤＮＡ多聚酶活性的影响。初步建立了以ＤＮＡ多聚酶为靶点的抗癌药筛选方法。实验表明，能够抑制ＤＮＡ多聚酶的药物可能具有抗癌作用。米托蒽酯已在临床肿瘤化疗中广泛使用，对ＤＮＡ多聚酶有很强的抑制作用，文献尚未见。室研究表明：龙井茶提取物和毛叶茶提取对小鼠艾氏腹水癌实体型和小鼠网织细胞肉瘤有一定程度的     

DNA引物酶抑制剂筛选方法的建立及应用

目的：建立ＤＮＡ引物酶抑制剂的筛选方法，并应用于大量筛选，找出对ＤＮＡ引物酶有抑制作用的抗癌药物或先导化合物。方法：以小鼠艾氏腹水癌细胞破碎液为材料，过ＤＥ－５２和Ｐ－１１层析柱，提取分离ＤＮＡ引物酶，用大肠杆菌大片段ＤＮＡ多聚酶延长引物法检测ＤＮＡ引物酶的活性。并在此反应液中加入化合物检测时ＤＮＡ引物酶活性的抑制人和用，以激活的小牛胸腺ＤＮＡ为模板排除化合物对大片断ＤＮＡ多聚酶Ｉ的抑制作用。结果     

一种可检测细胞凋亡多项指标的样品处理

目的：建立一种更为简便，可同时用ＤＮＡ电泳、流式的细胞仪，免疫组化分析检测细胞凋亡多项指标的样品处理方法。方法：用７５％乙醇预固定样品后，经柠檬酸缓冲液抽取凋亡细胞内降解的小分子量ＤＮＡ，而保持细胞形态完整，细胞的抗原，大分子ＤＮＡ完好，进而可用于流式细胞仪和免疫组化分析。结果：将柠檬酸抽提液用于琼脂糖电泳，出现典型的“ＤＮＡ梯形”图谱。其敏感性达２×１０６个细胞检出７．６％凋亡率。而标本可贮存５周之久。结论：本方法为对同一标本进行多种指标的同步分析提供了可能性。     

一个具有肿瘤转移抑制基因活性的人DNA序列

目的 分离鉴定人类肿瘤转移抑制基因或相应ＤＮＡ序列，探讨转移表型逆转的分子生物学机制。方法 应用Ｉｎｔｅｒ Ａｌｕ ＰＣＲ技术，将导入正常人肺基因组ＤＮＡ片段后转移表型抑制细胞株中的人源性ＤＮＡ片段扩增出来，对其中的７００ｂｐ左右ＤＮＡ片段进行核苷酸序列分析，并在ＧｅｎＢａｎｋ序列数据库进行类似性检索。将该ＤＮＡ再次转染高转移小鼠瘤细胞株，通过体内、体外转移相关性实验，验证其是否具有抑制高转移小鼠     

人肝癌细胞定向克隆表达cDNA文库的构建及鉴定

为克隆人肝癌相关基因，本实验从提取人肝癌细胞总ＲＮＡ入手，分离其ｍＲＮＡ。以ＮｏｔＩ／ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）１２－１８为引物合成双链ｃＤＮＡ，除去小于４００ｂｐ的ｃＤＮＡ片段后，连接ＥｃｏＲＩ人工接头，经ＮｏｔＩ酶酶切，     

人细胞色素P4502C9cDNA的克隆,鉴定及真核细胞表达重组质粒的构建

从人肝组织中提取总ＲＮＡ，用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增人细胞色素Ｐ４５０２ＣＯ的ｃＤＮＡ。     

转移相关基因CD44v在大肠癌中的表达及其临床意义

用ＲＴ－ＰＣＲ及ｃＤＮＡ印迹杂交技术，分别检测大肠正常粘膜、癌前病变及癌的ＣＤ４４ｖｍＲＮＡ表达，探讨ＣＤ４４ｖｍＲＮＡ异常表达和拼接与大肠癌临床病理之间的相关意义。通过对６７份大肠原发癌、２０份转移癌、７份癌前病变及１５份正常粘膜的研究，结果显示：ＣＤ４４ｖｍＲＮＡ异常表达者原发癌６５／６７、转移癌２０／２０、癌前病变５／７、正常粘膜０／１５；经ｃＤＮＡ杂交发现ＣＤ４４ｖｍＲＮＡ分子异常拼接和高分子量表达（简称高表达）者在原发癌为１０／２０（５０％），转移癌为１８／２０（９０％）；１０例原发癌ＣＤ４４ｖｍＲＮＡ高表达者中，８例有转移，另１０例原发癌弱表达者中，２例有转移。提示ＣＤ４４ｖｍＲＮＡ在大肠癌中的异常表达具有普遍性，既可能是早期癌变伴随出现的生物学标志，其高表达也可能是判断大肠癌转移的有用指标     

TNF与U937细胞的bcl—2基因表达及细胞周期的关系

目的：探讨肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）与白血病Ｕ９３７细胞的ｂｃｌ－２基因表达和细胞周期的关系。方法：首先用ＴＮＦ处理Ｕ９３７细胞，提取小片段ＤＮＡ进行ＤＮＡ断裂分析，继而用ＲＴ－ＰＣＲ和Ｓ－Ｐ免疫组化染色法检测Ｕ９３７细胞的ｂｃｌ－２基因表达变化，并通过流式细胞术分析ＴＮＦ对Ｕ９３７细胞的ＤＮＡ含量和细胞周期的影响。最后，用磷酸钙沉淀法将ｂｃｌ－２基因转染到Ｕ９３７细胞，经Ｇ４１８筛选稳定转染子，用不     

不同固定剂及固定时间对PCR扩增效果的影响

本研究选取五种不同固定液，分别按四种固定时间对存在有ＨＢＶＤＮＡ的人肝癌组织进行固定，脱水包埋。然后提取组织ＤＮＡ，观察不同固定液及固定时间对ＰＣＲ扩增效果的影响。同时，还比较了从蜡块中制取ＰＣＲ模块的四种方法。结果显示：新配中性缓冲用甲醛液对组织ＤＮＡ破坏较小，对ＰＣＲ扩增效果影响变较大且成本费用相对较低，固定时间最好不超过４８小时。     

对汽车废气致突变性的实验研究

对汽车废气致突变性的实验研究高泽宣，陈毓玲，陈佩琪，ＫａｒｅｎＪｏｚｗａ，汪耀珠（长沙湖南医科大学环境医学研究室４１００７８湖南医科大学环境卫生教研室，湖南医学专科学校澳大利亚交流学者）为探索汽车废气的致突变性，我们选用９０＃汽油的丰田面包车，在行驶...     

人胃癌细胞定向克隆表达cDNA文库的构建及鉴定

克隆胃癌的相关基因，方法，提取人胃癌细胞总ＲＮＡ，分离共ｍＲＮＡ。以ＮｏｔｔＩ／ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）１２－１８为引物合成双链ｃＤＮＡ，除去小于４００ｂｐ的ｃＤＮＡ片段后，连接ＥｃｏＲＩ接头，经ＮｏｔＩ酶酶切，插入定向克隆表达载体λＥｘｃｅｌｌＮｏｔＩ／ＥｃｏｒＲＩ／ＣＩＰ，体外包装后转染大肠杆菌ＮＭ５２２，构建了人胃癌细胞ＭＧＣ－８０３定向克隆表达ｃＤＮＡ文库。结果：文库含１．２＊１０＾６个重组子，     

DNA损伤修复能力,p53蛋白及增殖细胞核抗原在大肠癌发生过程中…

通过检测大肠粘膜不同病变上皮细胞的非程序ＤＮＡ合成，分析ＤＮＡ损伤修复能力，以及ＤＮＡ聚合酶，突变型ｐ５３蛋白和增殖细胞核抗原的表达，分析这些因素在大肠癌发生过程中的变化规律结果表明，从正常大肠粘膜，癌旁粘膜，散发性大肠腺瘤到腺癌，ＤＮＡ损伤修复能力依次呈逐渐下降趋势，而ｐ５３蛋白和ＰＣＶＡ的阳性表达率则随病变向恶性发展而呈逐渐地高的趋势。     

癫痫患者淋巴细胞微核率的测定

癫痫患者淋巴细胞微核率的测定陈朝晖，赖伏英，李宁，胡玲佳（长沙湖南医科大学湘雅医院中心实验室４１０００８湖南医科大学湘雅医院神经内科）为进一步探讨微核率的测定在细胞遗传效应上的应用，我们采用人体外周血淋巴细胞微核测试法，对３０例癫痫患者和４０例健康人...     

胎肌条件培养液抗损伤效应的观察

胎肌条件培养液（ＦＭＣＭ）可在ＣＦＵ－ＧＭ体外培养中提供集落刺激活性。研究发现它还能在体外培养中保护ＣＦＵ－ＧＭ，减轻理化损伤因素对其生长的抑制效应。所用化学损伤因素为５×１０－７Ｍ的阿糖胞苷与９×１０－９Ｍ的三尖杉酯碱，物理损伤因素为放射（３．５Ｇｙ），热（４４℃，６０分钟）与冷（—２０℃，１６分钟）。在损伤因素作用下，ＣＦＵ－ＧＭ的集落产率受到明显抑制，用２０％ＦＭＣＭ处理后，抑制现象可以减轻。ＦＭＣＭ可以对抗多种因素对ＣＦＵ－ＧＭ的抑制作用，没有特异性。用胰蛋白酶或热（８５℃，３０分钟）处理后的ＦＭＣＭ不具上述保护效应，用酸（ＰＨ＝２），碱（ＰＨ＝１０），ＤＮＡ酶与透析处理则无明显影响。提示ＦＭＣＭ中起保护作用的活性物质可能为分子量大于１００００的蛋白质。     

力尔凡治疗恶性胸腔积液的临床研究

 力尔凡（LIFEIN）是由α|溶血性链球菌株ZA|L经深层发酵，精制提取的，分子量为70KD的高溶血性链球菌素S复合物（SLS）和α|甘露聚糖多肽类物质。我们通过对70例恶性胸腔积液患者随机分组，胸腔内灌注力尔凡与DP化疗相比较，对其疗效及副作用进行临床评价。