PTPRZ1通过调控PI3K/Akt通路促进乳腺癌细胞增殖和多西他赛耐药

目的:探讨蛋白酪氨酸磷酸酶受体Z1型(protein tyrosine phosphatase receptor type Z1,PTPRZ1)对人乳腺癌MCF-7细胞多西他赛耐药性的影响及其作用机制。方法:将MCF-7细胞暴露于逐渐增强浓度的多西他赛中建立对多西他赛耐药的乳腺癌细胞（MCF-7/Doc）。采用CCK-8法分别检测MCF-7和MCF-7/Doc细胞对多西他赛的耐药性。qRT-PCR和Western blot检测细胞中PTPRZ1 mRNA及蛋白表达水平。克隆形成实验检测细胞增殖情况，流式实验检测细胞凋亡情况。最后采用Western blot检测PTPRZ1调控乳腺癌化疗敏感性的作用机制。结果:CCK-8实验表明成功构建了乳腺癌多西他赛耐药细胞株MCF-7/Doc，克隆形成实验表明MCF-7/Doc细胞增殖能力显著高于亲本MCF-7细胞（P＜0.05）；MCF-7/Doc细胞中，PTPRZ1 mRNA及蛋白水平均显著上调（P＜0.05）。过表达PTPRZ1能显著增强MCF-7/Doc细胞对多西他赛的耐药性和增殖能力，显著抑制细胞凋亡（P＜0.05）；敲减PTPRZ1能显著降低MCF-7/Doc细胞对多西他赛的耐药性，并能显著诱导细胞凋亡（P＜0.05）。Western blot结果显示，PTPRZ1能够激活PI3K/Akt信号通路。结论:PTPRZ1通过介导PI3K/Akt信号通路促进乳腺癌对多西他赛的耐药性。     

微小RNA-630对U251神经胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨微小RNA-630(miR-630)对U251神经胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响及其调控机制。方法 荧光定量PCR(qPCR)检测人脑胶质瘤组织和细胞的miR-630表达水平。采用脂质体转染法向U251细胞转染miR-630模拟物mimics(miR-630 mimics组)及阴性对照序列(miR-NC mimics组),另选取未转染细胞为空白对照(Control)组，经qPCR验证miR-630 mimics显著增强miR-630基因表达后进一步进行功能研究：CCK-8和Hoechst染色法检测细胞增殖变化，采用流式细胞术、qPCR和Western blot分别检测凋亡细胞百分率和凋亡基因表达，qPCR和双荧光素酶报告基因系统分别检测20S蛋白酶体α1亚基(PSMA1)的表达及其与miR-630靶向关系验证。结果 miR-630在胶质瘤组织和细胞表达下调。与Control组和miR-NC mimics组相比，miR-630 mimics组U251细胞增殖能力下降，细胞凋亡增加，抗凋亡基因Bcl-2表达降低，cleaved caspase-3表达增加。过表达miR-630显著降低...     

miR-26b靶向GSK-3β发挥抗乳腺癌细胞干性的作用研究

目的 探讨miR-26b对乳腺癌细胞增殖、凋亡及干性的影响并探讨其相关机制。方法 采用无血清悬浮培养法培养MCF-7细胞以获得MCF-7干细胞,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测MCF-7及其干细胞中的miR-26b水平,根据实验将MCF-7干细胞分为3组：对照组、空转染组（转染con-mimics）和miR-26b过表达组（转染miR-26b mimics）,MTT法检测各组转染24、48、72及96 h的增殖能力,流式细胞仪检测各组转染后的凋亡水平及侧群（SP）细胞数量,体外干细胞成球培养实验检测各组转染后的成球率情况,qRT-PCR检测转染后各组干细胞标记物CD44、ALDH 1、BMI 1、OCT-4和Lin-28B的mRNA水平,生物信息学及Western blotting法分析验证miR 26b对靶基因糖原合成酶激酶 3β（GSK-3β）的调控机制。结果 MCF-7干细胞的miR-26b水平低于MCF-7细胞（P＜0.05）,且转染miR-26b mimics可升高MCF-7干细胞的miR-26b水平（P＜0.05）;与对照组相比,过表达组转染后增殖抑制率和凋亡率均升高,SP细胞数量和成球率均降低（P＜0.05）;转染miR-26b mimics可导致CD44、ALDH-1、BMI-1、OCT-4和Lin-28B的mRNA水平降低（P＜0.05）。生物信息学软件预测GSK-3β是miR-26b的潜在靶基因,转染miR-26b mimics可显著降低GSK-3β的表达,双荧光素酶报告基因检测证明miR-26b 可作用于GSK-3β 基因 mRNA的 3’ UTR区预测靶位。结论 MCF-7干细胞中miR-26b呈低表达,过表达miR-26b可抑制细胞增殖、诱导凋亡并负性参与了乳腺癌细胞的干性调节,可能与其下调GSK-3β表达有关。     

乳腺癌中miR-221、miR-222表达水平对GATA3和FOXA1蛋白的影响及其作用机制

目的： 探讨乳腺癌中miR-221和miR-222（miR-221/222）表达水平对GATA结合蛋白3（GATA3）和叉头框蛋白A1（FOXA1）表达的影响及其作用机制。方法： 收集汕头大学医学院附属肿瘤医院2020年1月—2021年5月经手术切除的86例乳腺浸润性导管癌及其癌旁组织标本,分别采用茎环引物实时荧光定量PCR（qPCR）和免疫组织化学方法检测癌组织和相应癌旁组织中miR-221/222的表达水平及GATA3、FOXA1蛋白的表达水平,分析其与临床病理指标的关系。进一步在5种乳腺癌细胞系（MCF-7、T47D、SKBR3、MDA-MB-231和BT-549）中转染miR-221/222 mimics后,采用qPCR检测各细胞中miR-221/222的表达水平;采用Western blot检测转染后MCF-7细胞中GATA3、FOXA1、雌激素受体-α（ER-α）和钙黏蛋白E（E-cadherin）的表达;用细胞划痕和迁移侵袭实验检测转染后MCF-7细胞修复和迁移侵袭能力。结果： 在乳腺癌组织中,miR-221/222的表达水平明显高于癌旁正常乳腺组织（P=0.00）。miR-221/222表达水平在FOXA1、GATA3、ER-α及孕激素受体（PR）阴性表达组均显著高于阳性表达组（P<0.01）;在Her-2阳性和高表达Ki-67的乳腺癌中较Her-2阴性和低表达Ki-67组显著升高（P<0.05）;在三阴性和Her-2阳性亚型乳腺癌中显著高于Luminal A和Luminal B1型乳腺癌（P=0.00）;而miR-221/222水平与患者年龄、月经状况、肿瘤大小、组织学分级、淋巴结转移及TNM分期无显著相关关系（P>0.05）。在5种乳腺癌细胞系中,miR-221/222在MCF-7细胞中均低表达。与对照组相比,在MCF-7细胞中瞬时转染miR-221/222 mimics后miR-221/222表达显著升高（P<0.05）,且内源性的GATA3和FOXA1蛋白表达被抑制（P<0.01）,上皮细胞相关分子ER-α和E-cadherin表达显著下降（P<0.01）;划痕修复能力和迁移侵袭能力均显著增强（P<0.01）。结论： miR-221/222可能通过下调GATA3和FOXA1的表达促进乳腺癌的迁移和侵袭。     

miR-374过表达增强人乳腺癌细胞对多西他赛的耐药性

目的:观察miR-374过表达对人乳腺癌MDA-MB-231细胞docetaxel(多西他赛)耐药性的影响。方法:qPCR检测miR-374过表达细胞MDA-MB-231-miR-374和对照细胞MDA-MB-231-Cherry中miR-374的相对含量;采用不同浓度的多西他赛处理细胞72小时后,MTT检测细胞的活性。在终浓度为3.2nmol/L的多西他赛处理下,用平板克隆实验检测MDA-MB-231-Cherry和MDA-MB-231-miR-374细胞的增殖能力。流式细胞术检测细胞周期和凋亡。结果:与MDA-MB-231-Cherry细胞相比,miR-374过表达细胞MDA-MB-231-miR-374中miR-374的相对表达量明显增高;MDA-MB-231-miR-374细胞的耐药性和克隆形成能力明显增强(P<0.05)。细胞凋亡率明显降低,G0/G1期细胞减少,S期细胞增加,G2/M期细胞增加。结论:miR-374过表达可明显增强乳腺癌细胞株MDA-MB-231对多西他赛的耐药性。     

miR-129-5p通过HMGB1 调控乳腺癌MCF-7 细胞对紫杉醇的敏感性

目的：探讨miR-129-5p 通过调控高迁移率族蛋白B1 基因（high mobility group box 1,HMGB1）影响乳腺癌MCF-7 细胞对紫杉醇（paclitaxel,PTX）的敏感性。方法：采用脂质体转染技术将miR-129-5p mimics、HMGB1 小干扰RNA（si-HMGB1）分别转染入MCF-7 细胞,用PTX刺激培养细胞后,用实时荧光定量PCR检测转染后MCF-7 细胞miR-129-5p 和HMGB1 mRNA的表达,Western blotting 检测转染后MCF-7 细胞HMGB1 蛋白的表达,CCK-8 增殖实验检测转染后PTX对MCF-7 细胞增殖的影响,流式细胞术检测转染后对PTX诱导MCF-7 细胞凋亡的影响。结果：转染miR-129-5p mimics 后,MCF-7 细胞中miR-129-5p 的表达水平明显高于阴性对照组细胞（P<0.01）;过表达miR-129-5p 后可明显增强PTX抑制MCF-7 细胞的增殖和诱导细胞凋亡的能力（均P<0.05）,并显著抑制HMGB1 mRNA和蛋白的表达（均P<0.05）。转染si-HMGB1 后,显著降低MCF-7 细胞HMGB1 mRNA 和蛋白的表达（均P<0.05）;干扰HMGB1 表达进一步促进PTX抑制MCF-7 细胞的增殖并诱导细胞凋亡（均P<0.05）。结论：miR-129-5p 通过下调HMGB1 的表达增强乳腺癌MCF-7 细胞对PTX的敏感性。     

LncRNA NBAT1通过调控miR-3664-5p/Caspase 9分子轴对人乳腺癌细胞增殖的影响

目的 探究lncRNA NBAT1通过调控miR-3664-5p/Caspase 9分子轴对人乳腺癌细胞增殖的影响。方法 通过在线生物软件分析TCGA(The Cancer Genome Atlas)数据库比较lncRNA NBAT1在乳腺癌和正常乳腺组织中的表达量。RT-qPCR方法比较正常细胞株MCF-10A和乳腺癌细胞株MCF-7、MDA-MB-231及MDA-MB-453中lncRNA NBAT1的表达水平。生物信息学预测lncRNA NBAT1、miR-3664-5p、Caspase 9三者之间关系,并进一步通过荧光素酶报告系统进行验证;lncRNA NBAT1过表达载体转染乳腺癌MCF-7细胞株,RT-qPCR检测转染后lncRNA NBAT1的表达,qPCR检测miR-3664-5的表达,Western blot检测Caspase 9的蛋白表达水平;CCK-8和克隆形成实验检测细胞的增殖能力;同时将lncRNA NBAT1过表达载体和mimics miR-3664-5p转染MCF-7细胞,观察mimics miR-3664-5p对lncRNA NBAT1抑制细胞增殖能力产生的缓解效应。结果 TCGA数据库分析发现,lncRNA NBAT1在乳腺癌组织中的表达量显著低于正常组织(P＜0.001);qPCR检测发现lncRNA NBAT1在正常细胞株MCF-10A细胞中表达量最高(P＜0.001),MDA-MB-231和MDA-MB-453细胞中表达量比MCF-10A细胞低(P＜0.001),MCF-7细胞表达量最低(P＜0.001);通过生物信息学预测lncRNA NBAT1可以吸附miR-3664-5p,Caspase 9是miR-3664-5p的靶基因,并进一步通过荧光素酶报告系统进行验证;lncRNA NBAT1过表达载体转染乳腺癌细胞株MCF-7,qRT-PCR检测发现pc-NBAT1组比pc-NC组LncRNA NBAT1的表达增高(P＜0.001),miR-3664-5的表达降低(P＜0.001),Western blot检测发现pc-NBAT1组比pc-NC组Caspase 9的表达增高(P＜0.001)。CCK-8和克隆形成实验发现pc-NBAT1组比pc-NC组细胞的增殖能力降低(P＜0.001);同时将lncRNA NBAT1过表达载体和mimics miR-3664-5p转染MCF-7细胞,发现mimics miR-3664-5p能够对lncRNA NBAT1抑制细胞增殖能力产生缓解效应(P＜0.001)。结论 lncRNA NBAT1通过调控miR-3664-5p/Caspase 9分子轴抑制乳腺癌细胞的增殖,为乳腺癌治疗提供新的潜在靶点。     

miRNA-34a抑制乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231的增殖与侵袭

目的:研究miRNA-34a(miR-34a)对乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231的生物调控作用。方法:采用定量PCR检测人乳腺上皮细胞MCF-10A,乳腺癌细胞株MCF-7、T47D、MDA-MB-231、MDA-MB-453、Hs578T中miR-34a的表达水平。通过miR-34a mimics分别上调MCF-7、MDA-MB-231细胞中miR-34a的表达水平,MTT和Transwell检测肿瘤细胞增殖能力、侵袭力等生物学行为的变化。结果:乳腺癌细胞MCF-7、T47D、MDA-MB-231、MDA-MB-453、Hs578T中miR-34a处于低表达水平。通过miR-34a mimics上调MCF-7、MDA-MB-231细胞中miR-34a的表达后,细胞的增殖能力被miR-34a抑制（P＜0.05）,miR-34a对细胞侵袭有显著抑制作用（P＜0.05）。结论:miR－34a在乳腺癌细胞MCF-7、T47D、MDA-MB-231、MDA-MB-453及Hs578T中低表达,miR-34a抑制乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231的细胞增殖和侵袭能力。     

miR-155对乳腺癌细胞增殖、凋亡及耐药蛋白表达的调控作用研究

目的 探讨microRNA-155（miR-155）对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡及乳腺癌耐药相关蛋白表达的调控作用。方法 采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测MCF-7细胞和人乳腺正常上皮细胞中miR-155的表达水平。将MCF-7细胞分为4组：对照组、空转染组、抑制（转染miR-155 inhibitor）组和过表达（转染miR-155 mimics）组,采用qRT-PCR检测转染24、48、72及96 h后各组的转染效果,噻唑蓝（MTT）法检测各组转染24、48、72及96 h的增殖能力,采用流式细胞仪PI／Annexin V双染色法检测各组转染24、48 h后的凋亡率,Western blotting法检测各组转染48 h后乳腺癌耐药蛋白（BCRP）、P-糖蛋白（P-gp）及多药耐药相关蛋白1（MRP1）的表达水平。结果 乳腺癌MCF-7细胞中的miR 155水平高于人乳腺正常上皮细胞（P＜0.05）,且转染miR-155 inhibitor或mimics可呈时间依赖的方式降低或升高MCF-7细胞的miR-155水平（P＜0.05）。与对照组相比,抑制组转染后的细胞增殖率及BCRP、P-gp和MRP1的表达水平均降低,凋亡率升高（P＜0.05）;而过表达组的细胞增殖率及BCRP、P gp和MRP1的表达水平均升高,凋亡率降低（P＜0.05）。结论 MCF-7细胞中miR-155呈高表达,下调miR-155表达可抑制其增殖及耐药相关蛋白的表达,同时诱导凋亡。     

Hsa-miR-133b影响人乳腺癌MCF-7细胞增殖及FSCN1蛋白表达的研究

目的:研究Has-miR-133b真核表达载体在人乳腺癌MCF-7细胞中的表达及对细胞增殖和对靶蛋白FSCN1表达的影响。方法:构建pEZX MR04-133b真核表达载体,瞬时转染乳腺癌MCF-7细胞,RT-PCR法检测miRNA-133b在转录水平的表达,MTT检测其对细胞增殖的影响。利用生物信息学的方法,根据Tarbase数据库预测miR-133b的靶基因,并进行基因功能初步分析。Western blot检测miR-133b对细胞中FSCN1蛋白表达情况的影响。结果:真核表达载体pEZX MR04-133b成功转染MCF-7细胞,并经RT-PCR检测可有效表达,MTT结果显示miR-133b能明显降低MCF-7细胞的相对增殖率。Western blot结果显示FSCN1为miR-133b在MCF-7细胞中的作用靶点之一。结论:构建了真核表达载体pEZX MR04-133b,转染乳腺癌MCF-7细胞后能有效表达,并以FSCN1基因作为作用靶点。     

Bmi-1与miR-221-3P在乳腺癌组织和细胞中的表达及相互调控关系

目的:探讨Bmi-1与miR-221-3P在乳腺癌组织及细胞中的表达水平及相互调控关系。方法:运用RT-PCR检测Bmi-1与miR-221-3P在乳腺癌组织、癌旁组织及MCF-7、MCF-10a细胞中的相对表达水平。运用统计学方法探讨两者的相关性。运用Targetscan软件分析Bmi-1与miR-221-3P存在的结合位点,构建双荧光报告基因载体验证Bmi-1与miR-221-3P的相互结合作用。Western-blotting检测乳腺癌组织及细胞中Bmi-1蛋白的相对表达水平。结果:Bmi-1在乳腺癌组织及MCF-7细胞中呈高表达,而miR-221-3P的表达水平明显下调,两者呈负相关性,相关系数为r=-0.826。在转染克隆有Bmi-1基因3' UTR质粒的实验中,miR-221-3P组与空白组、miR-221-3P抑制剂组、NC组、NC抑制剂相比较,P＜0.05,差异极显著。降低Bmi-1的表达水平之后,miR-221-3P的表达水平显著上调。结论:Bmi-1在乳腺癌组织和细胞中呈高表达,miR-221-3P在乳腺癌组织和细胞中呈低表达,miR-221-3P负性调控Bmi-1的表达,为阐明乳腺癌的发病机制指明方向。     

miR-4728-3p通过PI3K/AKT信号通路调控DOT1L基因抑制乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移

目的:探讨miR-4728-3p通过调控类端粒沉默干扰体-1(disruptor of telomeric silencing 1-like,DOT1L)基因对乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法:使用乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231及人正常乳腺细胞MCF-10A。转染MCF-7和MDA-MB-231细胞随机分为NC组(转染miR-4728-3p-NC)和敲低组(转染miR-4728-3p-inhibitor)。利用RT-qPCR技术检测不同的细胞中miR-4728-3p和DOT1L的表达量改变情况。集落克隆形成实验和EDU实验可以同时检测体内各个细胞异常增殖的情况;TUNEL荧光标记检测法和流式细胞术实验可以同时检测不同组癌细胞的凋亡变化;划痕实验和Transwell实验可以同时检测到在各个细胞内因不同处理而可能产生的细胞迁移率和侵袭力的改变;Western blot检测与细胞凋亡状态相关细胞蛋白以及与细胞通路凋亡相关细胞蛋白p-AKT和p-PI3K相对表达的含量。结果:在乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231以及SKBR3中发现miR-4728-3p和DOT1L的表达高于人正常乳腺细胞MCF-10A(P＜0.05)。转染细胞miR-4728-3p后,与NC组细胞进行实验比较,发现敲低组细胞中miR-4728-3p和DOT1L的表达量明显降低,且敲低组细胞的增殖能力明显减弱,细胞凋亡率明显升高,细胞迁移能力大大降低。敲低组的细胞凋亡活性蛋白相对表达明显发生变化。其中p-AKT与p-PI3K蛋白均被抑制激活。RT-qPCR和Western blot实验验证DOT1L是miR-4728-3p的下游靶向基因。结论:敲低miR-4728-3p可以下调DOT1L的表达从而促进乳腺癌细胞凋亡,抑制乳腺癌细胞增殖,同时使乳腺癌细胞侵袭和迁移能力减弱。     

miR-520a-3p靶向ABCG2增强乳腺癌细胞对多西他赛敏感性的机制研究

目的:研究miR-520a-3p对乳腺癌细胞多西他赛敏感性的影响,并探索潜在的分子机制。方法:收集2015年4月至2017年10月在我院乳腺外科确诊的45例乳腺癌标本,实时荧光定量PCR法检测乳腺癌组织中miR-520a-3p的表达水平。分析miR-520a-3p与乳腺癌化疗耐受和肿瘤生物学特征的相关性。采用实时荧光定量PCR检测乳腺癌细胞MCF-7、MCF-7/Doc和MDA-MB-231中miR-520a-3p和三磷酸腺苷结合盒转运蛋白（ABCG2）mRNA的表达,采用蛋白质免疫印迹实验检测ABCG2的表达。转染miR-520a-3p mimic后,采用细胞毒性实验观察乳腺癌细胞对多西他赛敏感性的变化。采用实时荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹实验观察miR-520a-3p升高后,ABCG2 mRNA和蛋白的表达变化。进一步采用双荧光素酶活性实验验证miR-520a-3p对ABCG2的靶向作用。结果:化疗耐药组新辅助化疗后肿瘤原发部位的miR-520a-3p表达水平明显降低（P＜0.05）,同时相关性分析发现,miR-520a-3p低表达与高TNM分期（III期）和淋巴结转移相关（P＜0.05）。miR-520a-3p在MCF-7/Doc和MDA-MB-231细胞中表达较在MCF-7细胞中下降（P＜0.05）,而ABCG2的表达水平则明显升高（P均<0.05）。上调miR-520a-3p后,MCF-7和MCF-7/Doc细胞对多西他赛的敏感性增强（P＜0.05）,而ABCG2在mRNA和蛋白水平的表达均下降（P＜0.05）。双荧光素酶报告基因结果则证实ABCG2是miR-520a-3p的靶基因。结论:miR-520a-3p可逆转MCF-7/Doc对多西他赛的耐药性,这一作用可能与负调控肿瘤耐药相关蛋白ABCG2的表达从而抑制药物外排有关。     

干扰B7-H4表达通过下调E2F家族相关转录因子抑制乳腺癌细胞的增殖

目的： 探讨干扰B7-H4表达对乳腺癌细胞增殖、凋亡、周期以及相关下游分子表达的影响。 方法： 利用脂质体转染技术分别将特异性靶向B7-H4的siRNA（siB7-H4）及其阴性对照（siNC）转染至对数生长期的乳腺癌T47D和MCF-7细胞,分别命名为T47D-siB7-H4、T47D-siNC、MCF-7-siB7-H4和MCF-7-siNC组。用qPCR法和WB法验证siRNA干扰效果及其对细胞周期分子cyclin D1表达的影响,CCK-8法和FCM分别检测干扰B7-H4表达对T47D和MCF-7细胞增殖、周期和凋亡的影响,qPCR法检测B7-H4干扰对E2F家族相关转录因子表达的影响。 结果： 成功构建干扰 B7-H4 表达的乳腺癌T47D和MCF-7细胞。与T47D-siNC和MCF-7-siNC组相比,T47D-siB7-H4和MCF-7-siB7-H4组细胞中B7-H4 mRNA和蛋白表达水平均显著降低、细胞增殖能力显著降低（均P<0.01）,并伴有G1/S期细胞周期阻滞以及cyclin D1表达下调（均P<0.01）,但细胞凋亡率差异无统计学意义（均P>0.05）。与T47D-siNC相比,干扰 B7-H4 后 T47D 细胞中 E2F1、E2F2、E2F7 和 E2F8 mRNA 水平有不同程度的降低（均P<0.01）;与MCF-7-siNC 相比,干扰 B7-H4后MCF-7细胞中E2F1、E2F2、E2F3、E2F7和E2F8 mRNA水平均有不同程度的降低（P<0.05或P<0.01）。 结论： 干扰乳腺癌细胞B7-H4表达可下调cyclin D1和E2F家族相关转录因子的表达,导致细胞周期阻滞并抑制细胞增殖。     

Exosomal miR-221/222 enhances tamoxifen resistance in recipient ER-positive breast cancer cells

Recent studies have demonstrated that specific miRNAs, such as miR-221/222, may be responsible for tamoxifen resistance in breast cancer. Secreted miRNAs enclosed in exosomes can act as intercellular bio-messengers. Our objective is to investigate the role of secreted miR-221/222 in tamoxifen resistance of ER-positive breast cancer cells. Transmission electron microscopy analysis and nanoparticle tracking analysis were performed to determine the exosomes difference between MCF-7^TamR (tamoxifen resistant) and MCF-7^wt (tamoxifen sensitive) cells. PKH67 fluorescent labeling assay was used to detect exosomes derived from MCF-7^TamR cells entering into MCF-7^wt cells. The potential function of exosomes on tamoxifen resistance transmission was analyzed with cell viability, apoptosis ,and colony formation. MiRNA microarrays and qPCR were used to detect and compare the miRNAs expression levels in the two cells and exosomes. As the targets of miR-221/222, p27 and ERα were analyzed with western blot and qPCR. Compared with the MCF-7^wt exosomes, there were significant differences in the concentration and size distribution of MCF-7^TamR exosomes. MCF-7^wt cells had an increased amount of exosomal RNA and proteins compared with MCF-7^TamR cells. MCF-7^TamR exosomes could enter into MCF-7^wt cells, and then released miR-221/222. And the elevated miR-221/222 effectively reduced the target genes expression of P27 and ERα, which enhanced tamoxifen resistance in recipient cells. Our results are the first to show that secreted miR-221/222 serves as signaling molecules to mediate communication of tamoxifen resistance.     

lncRNA H19靶向miR-106a-5p调控乳腺癌细胞放射敏感性的分子机制

目的:研究lncRNA H19对乳腺癌细胞MCF-7增殖、凋亡及放射敏感性的影响，并探讨其机制。方法:运用qRT-PCR检测MCF-7细胞中H19、miR-106a-5p的表达；将si-NC组（转染si-con）、si-H19组（转染si-H19）、si-H19+anti-miR-NC组（si-H19和anti-miR-NC共转染）、si-H19+anti-miR-106a-5p组（si-H19和anti-miR-106a-5p共转染），均用脂质体转染至MCF-7细胞，再用4 Gy放射照射；MTT法检测各组细胞的增殖情况；流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况；双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果:与对照组相比，放射照射组（IR）MCF-7细胞中H19显著降低，miR-106a-5p显著升高（P＜0.05）；敲减H19、过表达miR-106a-5p均可抑制MCF-7细胞增殖并促进凋亡，增强细胞的放射敏感性；H19靶向miR-106a-5p。抑制miR-106a-5p可逆转敲减H19对MCF-7细胞放射敏感性的增强作用。结论:敲减H19可抑制乳腺癌细胞增殖，促进凋亡，增强放射治疗的敏感性，其机制可能与靶向miR-106a-5p有关，可为提高乳腺癌的放射敏感性提供新靶点。     

miRNA-34a is associated with docetaxel resistance in human breast cancer cells

Docetaxel is a chemotherapy drug to treat breast cancer, however as with many chemotherapeutic drugs resistance to docetaxel occurs in 50% of patients, and the underlying molecular mechanisms of drug resistance are not fully understood. Gene regulation through microRNAs (miRNA) has been shown to play an important role in cancer drug resistance. By directly targeting mRNA, miRNAs are able to inhibit genes that are necessary for signalling pathways or drug induced apoptosis rendering cells drug resistant. This study investigated the role of differential miRNA expression in two in vitro breast cancer cell line models (MCF-7, MDA-MB-231) of acquired docetaxel resistance. MiRNA microarray analysis identified 299 and 226 miRNAs altered in MCF-7 and MDA-MB-231 docetaxel-resistant cells, respectively. Docetaxel resistance was associated with increased expression of miR-34a and miR-141 and decreased expression of miR-7, miR-16, miR-30a, miR-125a-5p, miR-126. Computational target prediction revealed eight candidate genes targeted by these miRNAs. Quantitative PCR and western analysis confirmed decreased expression of two genes, BCL-2 and CCND1, in docetaxel-resistant cells, which are both targeted by miR-34a. Modulation of miR-34a expression was correlated with BCL-2 and cyclin D1 protein expression changes and a direct interaction of miR-34a with BCL-2 was shown by luciferase assay. Inhibition of miR-34a enhanced response to docetaxel in MCF-7 docetaxel-resistant cells, whereas overexpression of miR-34a conferred resistance in MCF-7 docetaxel-sensitive cells. This study is the first to show differences in miRNA expression, in particular, increased expression of miR-34a in an acquired model of docetaxel resistance in breast cancer. This serves as a mechanism of acquired docetaxel resistance in these cells, possibly through direct interactions with BCL-2 and CCND1, therefore presenting a potential therapeutic target for the treatment of docetaxel-resistant breast cancer.     

miR-26a通过调控E2F7、Myc抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖和迁移能力

目的:研究miR-26a对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和迁移能力的影响,并分析miR-26a 调控增殖与迁移的可能机制。方法:应用实时荧光定量PCR法(QPCR)检测乳腺癌细胞系和正常乳腺上皮细胞中miR-26a的表达水平,并检测三阴型乳腺癌组织及相应正常乳腺组织中miR-26a与E2F7 mRNA的表达水平。应用脂质体介导的方法,以miR-26a mimics与E2F7 siRNA瞬时转染MDA-MB-231细胞,实时荧光定量PCR法检测miR-26a表达水平,Western blot法检测E2F7、Myc蛋白的表达水平。MTT法检测MDA-MB-231细胞的增殖能力,划痕实验检测MDA-MB-231细胞迁移能力。结果:乳腺癌细胞中miR-26a的表达水平均低于正常乳腺细胞MCF-10A,且三阴型乳腺癌细胞表达水平降低最明显。三阴型乳腺癌组织中miR-26a相对于正常乳腺组织表达减低,而E2F7 mRNA表达则显著升高。miR-26a mimics转染后miR-26a表达水平显著升高,miR-26a过表达可抑制E2F7、Myc蛋白的表达;E2F7 siRNA转染后E2F7表达水平减低,Myc蛋白表达亦减低。MTT实验结果示miR-26a过表达可抑制MDA-MB-231细胞增殖,划痕实验示miR-26a过表达可抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移能力。结论:miR-26a可能通过抑制E2F7、Myc调控乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖与迁移能力。