EBV⁃miR⁃BART17⁃5p对鼻咽癌细胞增殖及迁移功能的调控及其作用机制

目的 探讨EB病毒（epstein⁃barr virus,EBV）编码的EBV⁃miR⁃BART17⁃5p对鼻咽癌细胞增殖及迁移的调控及其机制。方法 将慢病毒Vector control和 EBV⁃miR⁃BART17⁃5p mimic分别感染至HK1⁃EBV细胞,记为Vector control组和Mimic组,采用RT⁃qPCR验证慢病毒感染效果;EdU和CCK⁃8实验分别检测细胞的增殖能力;平板克隆形成实验检测细胞的集落形成能力;细胞划痕实验及Transwell 细胞迁移实验检测细胞的迁移能力;Western blot检测EBV⁃miR⁃BART17⁃5p靶基因PTEN的蛋白表达水平。结果 与Vector control组比较,Mimic组HK1⁃EBV细胞中EBV⁃miR⁃BART17⁃5p表达量显著升高（P<0.001）,细胞增殖、集落形成和迁移能力均明显增强（均P<0.05）,PTEN蛋白表达水平显著降低（P<0.001）。结论 EBV⁃miR⁃BART17⁃5p能调控鼻咽癌细胞HK1⁃EBV增殖和迁移,其作用机制可能与EBV⁃miR⁃BART17⁃5p反向调控肿瘤抑制因子PTEN表达有关。     

全反式维甲酸联合辛二酰苯胺异羟肟酸对人乳腺癌细胞MCF-7裸鼠移植瘤的影响

目的 研究全反式维甲酸（all⁃trans retinoic acid，ATRA）联合辛二酰苯胺异羟肟酸（suberoyl anilide hydroxamic acid，SAHA）对人乳腺癌细胞MCF⁃7裸鼠移植瘤生长的影响及作用机制。 方法 体外培养MCF⁃7细胞，利用CCK⁃8方法选取ATRA和SAHA联合的最佳配伍浓度。建立人乳腺癌细胞MCF⁃7裸鼠移植瘤模型，随机分为对照组（PBS）、ATRA组（0.84 mg/kg ATRA）、SAHA组（0.42 mg/kg SAHA）和ATRA+SAHA组（0.84 mg/kg ATRA+0.42 mg/kg SAHA），每组5只裸鼠；待各组移植瘤长至100 mm3时，按照分组连续皮下给药2周后，取眼眶静脉血，断颈处死裸鼠后取肿瘤组织，称重并计算抑瘤率及脏器指数；用ELISA法检测裸鼠血清白细胞介素6受体（IL⁃6R）含量，HE染色观察肿瘤组织形态结构，免疫组化法和Western blot法检测肿瘤组织中肿瘤增殖和转移相关蛋白Caspase⁃3、MMP⁃9、MMP⁃2以及抑癌基因蛋白p53、EGFR的表达水平。结果 CCK⁃8检测结果表明，0.40 mg/mL ATRA和0.15 mg/mL SAHA联合处理时MCF⁃7细胞活性最低，为SAHA和ATRA的最佳配伍浓度。与对照组及各单药组比较，ATRA+SAHA组裸鼠抑瘤率明显提高（均P<0.05），血清中IL⁃6R的含量降低（均P<0.05），肝脏指数均显著降低（均P<0.01）；ATRA+SAHA组脾脏指数亦较ATRA组明显降低（P<0.05）。ATRA+SAHA组移植瘤肿瘤组织以重度坏死为主，肿瘤组织中MMP⁃9、MMP⁃2、EGFR的表达水平较对照组及各单药组明显下降（均P<0.05），p53、Caspase⁃3的表达水平则明显升高（均P<0.01）。 结论 ATRA与SAHA联合用药具有协同抑瘤作用。     

SLC1A5对三阴性乳腺癌MDA⁃MB⁃231细胞株放射敏感性的影响及作用机制

目的 探讨溶质载体家族1成员5（solute carrier family 1 member 5，SLC1A5）对三阴性乳腺癌MDA⁃MB⁃231细胞株放射敏感性的影响及其作用机制。方法 采用直线加速器X射线和SLC1A5抑制剂L⁃γ⁃谷氨酰⁃对⁃硝基苯胺（L⁃γ⁃glutamyl⁃p⁃nitroanilide，GPNA）处理三阴性乳腺癌MDA⁃MB⁃231细胞株，选取4 Gy、8 Gy剂量单独照射或分别联合3 mmol/L GPNA处理，采用CCK⁃8法检测细胞增殖能力；然后选取8 Gy剂量单独照射或联合3 mmol/L GPNA进行处理，分为对照组（DMSO组）、SLC1A5抑制剂组（GPNA组）、照射组（IR组）、联合组（IR+GPNA组）。采用细胞克隆形成实验、划痕实验、Transwell小室实验分别检测细胞克隆形成能力、迁移能力和侵袭能力。采用活性氧（reactive oxygen species，ROS）荧光探针（DCFH⁃DA）检测细胞内的ROS水平，丙二醛（malondialdehyde，MDA）试剂盒检测细胞内的MDA含量，Mito⁃Tracker Red CMXRos染色实验观察细胞线粒体形态，RT⁃qPCR法检测前列素内环氧化物合成酶2（prostaglandin synthase 2，PTGS2）基因的表达水平。结果 与DMSO组相比，4 Gy组、8 Gy组、4 Gy+GPNA组和8 Gy+GPNA组细胞增殖能力均下降（均P<0.01），且4 Gy+GPNA组、8 Gy+GPNA组细胞增殖能力均低于对应的单纯照射组（均P<0.01），其中高辐射剂量组下降更明显；与DMSO组相比，IR组、GPNA组和IR+GPNA组的细胞克隆形成能力、迁移能力、侵袭能力均降低（均P<0.01），且IR+GPNA组降低更明显。与DMSO组相比，GPNA组、IR组和IR+GPNA组都存在不同程度的细胞内ROS水平增加，线粒体形态缩小，MDA含量升高以及PTGS2基因表达升高（均P<0.05），其中IR+GPNA组变化更为明显。结论 SLC1A5抑制剂在照射的基础上进一步抑制三阴性乳腺癌MDA⁃MB⁃231细胞的增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力，提高细胞放射敏感性，其机制可能与铁死亡激活有关。     

miR⁃93⁃5p靶向PKMYT1对肺腺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的 探讨miR⁃93⁃5p靶向蛋白激酶膜相关酪氨酸/苏氨酸1（protein kinase membrane associated tyrosine/threonine 1,PKMYT1）对肺腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其作用机制。方法 使用LipofectamineTM 2000分别将质粒inhibitor NC、miR⁃93⁃5p inhibitor、pcDNA、pc⁃PKMYT1转染至A549细胞中,记为inhibitor NC组、miR⁃93⁃5p inhibitor组、pcDNA组和pc⁃PKMYT1组,同时将未转染的细胞记为control组。利用qRT⁃PCR检测细胞中miR⁃93⁃5p、PKMYT1 mRNA的表达水平。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR⁃93⁃5p与PKMYT1的靶向关系;CCK⁃8法检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期情况;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;Western blot法检测细胞中PKMYT1、细胞周期素D1（Cyclin D1）、细胞周期素B1（Cyclin B1）的蛋白表达水平。结果 与BEAS⁃2B细胞相比,SPC⁃A⁃1细胞、A549细胞、LTEP⁃α⁃2细胞中miR⁃93⁃5p表达水平均升高（均P<0.01）,PKMYT1 mRNA和蛋白表达水平均降低（均P<0.001）。转染24 h后,分别与control组、inhibitor NC组相比,miR⁃93⁃5p inhibitor组A549细胞增殖活性、S期细胞比例、迁移细胞数目、侵袭细胞数目、Cyclin D1和Cyclin B1蛋白水平均降低（均P<0.05）,G2/M期细胞比例升高（P<0.001）。双荧光素酶报告基因实验结果显示,与miR⁃93⁃5p NC+3'UTR⁃WT组相比,miR⁃93⁃5p mimic+3'UTR⁃WT组细胞相对荧光素酶活性下降（P<0.001）。转染24 h后,与pcDNA组相比,pc⁃PKMYT1组A549细胞增殖活性、S期细胞比例、迁移细胞数目、侵袭细胞数目、Cyclin D1和Cyclin B1蛋白水平均降低（均P<0.001）,G2/M期细胞比例升高（P<0.001）。结论 沉默miR⁃93⁃5p可能通过上调PKMYT1表达水平抑制肺腺癌细胞增殖、迁移及侵袭。     

IFIT3对鼻咽癌CNE⁃2R细胞侵袭转移及EMT的影响

目的 探讨干扰素诱导的具有四肽重复序列3（interferon induced protein with tetratricopeptide repeats 3,IFIT3）在鼻咽癌CNE⁃2R细胞中的表达及其对细胞侵袭、转移和上皮⁃间质转化（epithelial⁃mesenchymal transition,EMT）能力的影响。方法 采用RT⁃qPCR和 Western blot检测IFIT3在鼻咽癌细胞CNE⁃2R和正常鼻咽上皮细胞NP69中的表达水平。鼻咽癌CNE⁃2R细胞分别感染IFIT3 shRNA的3个序列LV1、LV2、LV3,并设立阴性对照组（NC组）;利用RT⁃qPCR和 Western blot检测上皮表型E⁃cadherin及间质表型N⁃cadherin和Vimentin的表达,采用划痕实验及Transwell 实验检测细胞的迁移和侵袭能力。结果 IFIT3在鼻咽癌CNE⁃2R细胞中的mRNA和蛋白表达水平均较NP69细胞显著上调（均P<0.001）。IFIT3在LV1组、LV2组和LV3组中的mRNA和蛋白表达水平均低于NC组（均P<0.001）,且以LV2组和LV3组的表达水平最低。与NC组相比,LV2组和LV3组的细胞迁移率显著下降,迁移和侵袭细胞数显著减少,E⁃cadherin蛋白表达水平显著升高,N⁃cadherin和Vimentin蛋白表达水平显著降低（均P<0.001）。结论 IFIT3在鼻咽癌CNE⁃2R细胞中表达上调,沉默IFIT3后CNE⁃2R细胞的侵袭、转移能力以及EMT显著被抑制。      

BLOC⁃3介导Rab32线粒体定位改变对肝癌细胞生长的作用研究

目的 观察溶酶体相关细胞器生物发生复合体⁃3 （biogenesis of lysosome⁃related organelles complex⁃3,BLOC⁃3）亚基Hps1和Hps4对肝癌细胞中Rab32线粒体定位的影响及在肝癌细胞生长中的作用。 方法 通过公共数据库GenDoma,String和InBio Discover分析Hps1和Hps4与Rab32的相互作用情况。体外培养人肝癌细胞系SNU⁃739和Hep⁃3B,利用脂质体转染方法分别转染Hps1和Hps4相关的siRNAs和质粒,采用免疫荧光和Western blot观察Hps1和Hps4对Rab32线粒体定位的影响,细胞划痕、克隆形成、EdU、MTS及Transwell侵袭实验检测Hps1和Hps4调控Rab32线粒体定位后肝癌细胞迁移、增殖和侵袭的变化情况。通过公共数据库UALCAN中的数据集CPTAC分析Rab32蛋白在肝癌和正常肝脏组织中的表达差异。 结果 数据库分析结果显示,Hps1和Hps4均可以与Rab32相互作用;与正常肝脏组织相比,Rab32蛋白在肝癌组织中的表达显著降低（P<0.001）。在肝癌细胞系SNU⁃739中干涉Hps1或Hps4或同时干涉Hps1和Hps4后,Rab32线粒体定位均减少（均P<0.01）,细胞线粒体Rab32蛋白表达均降低（均P<0.001）,细胞增殖、迁移和侵袭能力增强（均P<0.05）;在肝癌细胞系Hep⁃3B中过表达Hps1和Hps4后,Rab32线粒体定位增多（P<0.01）,细胞线粒体Rab32蛋白表达增加（P<0.001）,细胞增殖、迁移和侵袭能力均受抑制（均P<0.01）,而单独过表达Hps1或Hps4时无显著抑制作用（均P>0.05）。结论 BLOC⁃3亚基Hps1和Hps4均可与Rab32相互作用并增加Rab32线粒体定位,进而抑制肝癌细胞生长。     

miR⁃203a⁃3p通过靶向LASP1介导Akt/GSK⁃3β/Snail信号通路调控肝癌细胞生物学行为

目的 研究miR?203a?3p对肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）细胞生物学行为的影响及其相关分子机制。方法 将miR?203a?3p 模拟物（miR?203a?3p mimics）及阴性对照（miR?NC mimics）、LIM和SH3蛋白1（LIM and SH3 protein 1,LASP1）过表达质粒（pcDNA?LASP1）及阴性对照质粒（pcDNA?NC）分别转染至HepG2细胞。以qRT?PCR法检测细胞miR?203a?3p、LASP1 mRNA表达情况,CCK?8法和异体移植瘤实验分析细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,Annexin V?FITC/PI法检测细胞凋亡,双荧光素酶报告基因检测miR?203a?3p与LASP1的靶向关系,Western blot法检测细胞中LASP1、蛋白激酶B（protein kinase B,Akt）、磷酸化Akt（phosphorylated Akt,p?Akt）、糖原合成酶激酶3β（glycogen synthase kinase?3β,GSK?3β）、磷酸化GSK?3β（phosphorylated GSK?3β,p?GSK?3β）、Snail表达情况。结果 与miR?NC组相比,miR?203a?3p组HepG2细胞增殖活性、迁移率、侵袭数目、LASP1 mRNA和蛋白表达量、p?Akt/Akt和p?GSK?3β/GSK?3β比值、Snail蛋白表达量均显著降低,小鼠移植瘤体积和质量显著减少,细胞凋亡率显著升高（均P<0.01）。Targetscan软件预测显示,miR?203a?3p与LASP1 存在靶向关系;与LASP1?Wt+miR?NC组比较,LASP1?Wt+miR?203a?3p组相对荧光素酶活性显著下降（P<0.001）。与miR?203a?3p+pcDNA?NC组比较,miR?203a?3p+LASP1组HepG2细胞增殖活性、迁移率、侵袭数目、p?Akt/Akt和p?GSK?3β/GSK?3β比值、Snail蛋白表达量均显著升高,小鼠移植瘤体积和质量显著增加,细胞凋亡率显著降低（均P<0.01）。结论 miR?203a?3p可能通过靶向抑制LASP1表达调控Akt/GSK?3β/Snail信号通路活性,从而调控HCC细胞生物学行为。     

lncRNA LOC730101对肝细胞癌增殖、迁移与侵袭的影响

目的 探讨长链非编码RNA（long non⁃coding RNA,lncRNA）LOC730101对肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）生物学行为的影响。方法 利用R软件分析TCGA数据库LIHC数据集374例HCC组织和50例正常组织中LOC730101的表达差异。收集2018年广西医科大学附属肿瘤医院外科手术切除、经病理确诊的40例HCC患者的癌组织及其相应癌旁组织,培养肝癌细胞系Huh⁃7、HCCLM3、HepG2和人正常肝细胞系L02,采用qRT⁃PCR检测组织和细胞系中LOC730101的相对表达水平。在肝癌细胞系Huh⁃7、HCCLM3中采用慢病毒感染法构建过表达LOC730101（OE⁃LOC730101）和敲低LOC730101（sh⁃LOC730101）的稳转细胞株,同时设置相应空白对照（control组）及阴性对照组（sh⁃NC组、OE⁃NC组）,然后采用qRT⁃PCR验证感染效果,CCK⁃8实验检测各组细胞的增殖能力,划痕愈合实验和Transwell小室侵袭实验检测各组细胞的迁移、侵袭能力。结果 TCGA数据库分析结果显示,LOC730101在HCC组织中的表达水平高于正常组织（P<0.001）;qRT⁃PCR检测结果显示,LOC730101在HCC组织中的表达水平明显高于癌旁组织（P<0.001）;LOC730101在各肝癌细胞系（Huh⁃7、HepG2、HCCLM3）中的表达水平也高于人正常肝细胞系L02（均P<0.05）。与相应阴性对照组相比,LOC730101敲低组细胞的增殖、迁移和侵袭能力下降（均P<0.05）,而过表达组细胞的增殖、迁移和侵袭能力增强（均P<0.01）。结论 LncRNA LOC730101在肝癌组织和细胞中表达上调且可能促进其增殖、迁移和侵袭。     

柴胡皂苷d通过AKT/mTOR信号通路调控胶质瘤C6细胞自噬

目的 探讨柴胡皂苷d在胶质瘤C6细胞自噬中的作用及其机制。方法 分别以终浓度为0 μmol/L（Control组）、2 μmol/L、4 μmol/L、6 μmol/L、8 μmol/L、10 μmol/L、12 μmol/L的柴胡皂苷d作用胶质瘤C6细胞后,用CCK⁃8检测细胞增殖能力,后续分别采用克隆形成实验、划痕实验检测柴胡皂苷d（8 μmol/L）对胶质瘤C6细胞增殖能力和细胞迁移能力的影响,Western blot和qRT⁃PCR检测胶质瘤C6细胞中自噬相关蛋白Beclin1、LC3和AKT/mTOR信号通路相关蛋白及基因的表达情况。结果 与Control组比较,各浓度柴胡皂苷d均能抑制胶质瘤C6细胞增殖且增殖抑制率随着药物浓度的升高而升高（均P<0.01）。8 μmol/L柴胡皂苷d作用24 h后,与Control组比较,胶质瘤C6细胞的克隆形成数目显著减少［（479.33±30.66）个 vs （258.66±73.35）个,P<0.01］,细胞迁移率显著降低［（70.83±4.29）% vs （19.47±1.71）%,P<0.001］,自噬相关蛋白Beclin1和LC3的蛋白及mRNA表达水平均显著升高（均P<0.01）,而AKT和mTOR信号蛋白及mRNA表达水平均降低（均P<0.01）。结论 柴胡皂苷d可能通过抑制AKT/mTOR信号通路诱导胶质瘤C6细胞发生自噬并抑制其增殖与迁移。     

沉默G6PD对卵巢癌细胞顺铂敏感性的影响及其作用机制

目的 探讨葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（glucose-6-phosphate dehydrogenase，G6PD）在卵巢癌细胞顺铂耐药中的作用及其潜在的机制。方法 通过低浓度加量持续诱导法构建卵巢癌顺铂耐药细胞株A2780/CDDP，采用Label-free定量蛋白质组学法分析A2780和A2780/CDDP细胞差异蛋白G6PD，Western blot和RT-qPCR检测G6PD表达情况。通过siRNA技术将siRNA-G6PD及其阴性对照（siRNA-NC）转染至A2780/CDDP细胞，然后采用Western blot验证G6PD基因沉默效果，MTT法检测细胞增殖情况，流式细胞术检测细胞凋亡情况，流式细胞仪和酶标仪检测铁死亡相关物质活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）、还原型谷胱甘肽（GSH）和脂质过氧化物的表达水平。结果 与A2780细胞相比，A2780/CDDP细胞中有95个上调蛋白和102个下调蛋白，其中上调蛋白中以G6PD表达差异最为显著；这些蛋白大多富集在代谢通路，且其功能主要与细胞氧化应激反应、核糖磷酸代谢途径相关。与A2780细胞相比，A2780/CDDP细胞中G6PD mRNA和蛋白表达水平均显著升高（均P<0.05），铁死亡相关物质ROS、MDA和脂质过氧化物水平均降低（均P<0.05），而GSH水平升高（P=0.001）。沉默G6PD后的A2780/CDDP细胞中顺铂的IC₅₀值降低（P=0.012），细胞凋亡率升高（P=0.006），铁死亡相关物质ROS、MDA和脂质过氧化水平均升高（均P<0.05），而GSH水平降低（P=0.007）。结论 沉默G6PD可能通过诱导卵巢癌顺铂耐药细胞A2780/CDDP中的铁死亡水平而增强顺铂敏感性。     

槐定碱对骨癌痛小鼠的影响及其作用机制

目的 探讨槐定碱在骨癌痛小鼠中的影响及其作用机制。方法 将24只C57BL/6小鼠随机分成假手术组（Sham 组）、骨癌痛组（BCP 组）、骨癌痛+生理盐水组（BCP+NS组）、骨癌痛+槐定碱组（BCP+Sophoridine组,25 mg/kg）。分别于癌细胞接种前1 d以及接种后3 d、5 d、7 d、10 d和14 d时检测机械缩足阈值和热痛阈值;Western blot法检测脊髓L4⁃L5段背根神经节和大脑皮层组织中DAP12/Trem2/TLR4轴相关蛋白的表达水平。结果 与Sham组相比,在术后5 d、7 d、10 d、14 d,BCP组机械缩足阈值及热痛阈值均明显降低（均P<0.05）。与BCP组相比,在术后5 d、7 d、10 d、14 d,BCP+Sophoridine组的热痛阈值均明显升高（均P<0.05）;术后10 d、14 d,BCP+Sophoridine组机械缩足阈值均明显升高（均P<0.05）。Western blot实验结果显示,与BCP组相比,BCP+Sophoridine组小鼠背根神经节和大脑皮层组织中的TLR4蛋白表达水平均显著减少（均P<0.05）,DAP12、Trem2蛋白表达水平均显著升高（均P<0.05）。结论 槐定碱可减轻骨癌痛小鼠癌痛行为,其机制可能与调控DAP12/Trem2/TLR4轴有关。     

TIPIN分子与肝细胞癌预后的关系及其生物学作用机制

目的 分析节律分子Timeless（TIM）相互作用蛋白（TIM interacting protein,TIPIN）在肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）组织中的表达及其与患者预后的关系,并探究TIPIN对肝癌细胞增殖的影响及可能的生物学作用机制。方法 通过UALCAN数据库分析TIPIN在HCC组织中的表达情况及其与HCC患者预后的关系。将siTIPIN及其阴性对照序列分别转染至肝癌MHCC⁃97H细胞,采用qRT⁃PCR和Western blot检测TIPIN的表达情况,采用MTS实验和平板细胞克隆形成实验检测TIPIN表达对细胞增殖的影响。利用UALCAN数据库对TIPIN进行GO和KEGG富集分析,以及TIPIN与TIM、TP53的关联分析。 结果 UALCAN数据库分析结果显示,TIPIN在HCC组织中的表达明显高于正常肝组织（P<0.01）;TIPIN高表达患者的总生存期和无病生存期均明显短于TIPIN低表达患者（P=0.037,0.021）。与正常肝细胞HL7702相比,肝癌细胞MHCC⁃97H、MHCC⁃97L、HepG2、BEL⁃7402中TIPIN的mRNA和蛋白表达水平均明显升高（均P<0.01）。MTS和克隆形成实验结果显示,沉默TIPIN表达后肝癌MHCC⁃97H细胞的增殖和平板细胞克隆形成能力明显受到抑制（均P<0.05）。GO和KEGG富集分析结果显示,TIPIN可能通过调控细胞分裂、DNA复制、细胞周期的相互作用通路促进肝癌的恶性进程。Pearson相关性分析结果显示,TIPIN分子与TIM表达呈明显正相关（r=0.67,P<0.01）。TIPIN在TP53突变HCC患者中的表达显著高于TP53野生型HCC患者（P<0.01）。 结论 TIPIN在肝癌中表达上调,且与患者不良预后密切相关,沉默TIPIN可抑制肝癌细胞增殖。TIPIN在肝癌中可能通过与TIM形成复合体或调控TP53信号通路发挥其生物学作用。     

白细胞介素-33对急性髓系白血病细胞株HL-60、NB4凋亡和周期的调控作用及机制研究

目的  探讨白细胞介素-33（interleukin-33,IL-33）对急性髓系白血病细胞凋亡的影响及其可能的机制。方法 急性髓系白血病细胞株HL-60、NB4经外源性IL-33以及p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK）特异抑制剂（SB203580）处理72 h后,采用Annexin V/DAPI双染色流式细胞术检测细胞凋亡率,细胞周期检测试剂盒检测细胞周期,Western blot 检测细胞周期蛋白依赖性激酶1（cyclin-dependent kinases 1,CDK1）蛋白表达以及p38 MAPK的磷酸化水平。结果 与对照组相比,IL-33组的HL-60和NB4细胞经IL-33作用后,细胞凋亡水平降低（P<0.05）,细胞周期中S期比例升高（P<0.001）;而SB+IL-33组细胞经SB203580和IL-33联合处理后,细胞凋亡水平高于IL-33组（P<0.05）,S期细胞的百分比低于IL-33组（P<0.05）;Western blot检测结果表明,与对照组相比,IL-33组细胞的p38 MAPK磷酸化（p-p38 MAPK） 水平和CDK1蛋白表达水平均显著增高（均P<0.05）,而SB+IL-33组的p-p38 MAPK水平以及CDK1水平较IL-33组显著下降（均P<0.05）。 结论 IL-33可通过激活p38 MAPK,抑制急性髓系白血病细胞株HL-60、NB4细胞的凋亡,抑制细胞周期停滞。     

TRPM8激活Calcineurin-NFATc3通路调节结肠癌细胞免疫逃逸

目的  探讨TRPM8调节结肠癌细胞免疫逃逸的机制。方法 采用qRT-PCR和Western blot检测结肠癌细胞系SW620和正常人结肠上皮细胞系CCD 841 CoN中TRPM8的表达水平。将干涉和过表达TRPM8载体TRPM8 siRNA和pcDNA3.1-TRPM8转染至SW620细胞，并设置相应对照组（Control siRNA组和pcDNA3.1组），用CCK-8、集落形成实验和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡，酶标仪检测Calcineurin活性，Western blot检测Calcineurin-NFATc3信号通路相关蛋白的表达。采用CCK-8检测CD8⁺T细胞与SW620细胞共孵育的细胞活力，Western blot检测Calcineurin特异性抑制剂FK506处理SW620细胞后NFATc3和PD-L1蛋白表达。结果 与CCD 841 CoN细胞相比，TRPM8 mRNA和蛋白在SW620细胞中的表达均增加（P<0.01）。与Control siRNA组比较，干涉 TRPM8表达后SW620细胞活力、细胞增殖能力、Calcineurin活性，以及TRPM8、PD-L1和 NFATc3蛋白表达均降低（P<0.01），而细胞凋亡率和p-NFATc3蛋白表达均升高（P<0.01）；过表达TRPM8可增强细胞活力、细胞增殖能力和Calcineurin活性，上调TRPM8、PD-L1及NFATc3蛋白表达（P<0.01），下调p-NFATc3蛋白表达（P=0.002）。CD8⁺ T细胞与干涉TRPM8表达的SW620细胞共孵育后总细胞活力降低（P=0.002），而与过表达SW620细胞共孵育后总细胞活力增强（P=0.005）。FK506处理可抑制SW620细胞Calcineurin活性，下调NFATc3、PD-L1蛋白表达（P<0.01）。结论 TRPM8过表达可能通过激活Calcineurin-NFATc3信号通路而促进PD-L1表达，从而增强结肠癌细胞免疫逃逸能力，促进结肠癌细胞增殖。     

口腔鳞癌患者外周血及癌组织中IL-17和Foxp3的表达及意义

目的 探讨口腔鳞癌患者外周血及癌组织中IL-17和Foxp3的表达及意义。方法 选取40例原发初诊经病理证实的口腔鳞状细胞癌患者为实验对象,术前流式细胞术测定外周血中IL-17与Foxp3所占比例及CD3、CD4、CD8、CD56的表达。组织标本为术中立即取材,SP法测定IL-17及Foxp3表达。选取20例良性肿瘤患者瘤旁正常口腔黏膜作组织对照。实验分为A（Ⅰ、Ⅱ期鳞癌患者）、B（Ⅲ、Ⅳ期鳞癌患者）、C（健康者）三组进行组间比较。 结果 A、B组外周血CD4+IL-17+ 细胞、CD4+Foxp3+细胞所占比例均显著高于C组, IL-17+、Foxp3+的表达水平呈正相关（r=0.772,P<0.05）,其中B组CD4+IL-17+、CD4+Foxp3+细胞所占比例高于A组（P<0.05）。与C组相比,A、B组外周血中CD3+和CD4+细胞的百分率、CD4+/CD8+的比值降低,CD8+细胞的百分率升高,差异均有统计学意义（P<0.05）。 IL-17、Foxp3在A、B组中阳性率均明显高于C组,在A组中阳性表达率低于B组,差异均有统计学意义（P<0.05）,且A、B组癌组织中IL-17与Foxp3的表达水平呈正相关（r=0.386,P<0.05）。结论 IL-17及Foxp3在口腔鳞癌的发生发展中起着一定的促进作用,这种作用可能与机体免疫状态有关。     

miR-124通过调节Jagged1/Notch信号通路影响肾细胞癌OS-RC-2细胞 的恶性生物学行为

目的：探讨miR-124通过调节Jagged1（JAG1）/Notch信号通路对肾细胞癌（RCC）细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法：收集2018年6月至2021年10月在武汉市第三医院治疗的38例RCC患者的RCC组织和癌旁组织标本,并体外培养RCC细胞（Caki-2、A498、ACHN、786-O、OS-RC-2）和人正常肾细胞（293T）,采用免疫组织化学法、qPCR和WB法检测miR-124和JAG1蛋白在RCC组织和细胞中的表达水平。选择miR-124表达与293T细胞差异最大的OS-RC-2细胞进行转染,按转染物不同分为Control组、NC mimic组、miR-124 mimic组、miR-124 mimic+pcDNA组和miR-124 mimic+pc-JAG1组。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-124与JAG1的关系;qPCR法检测miR-124、JAG1 mRNA表达;免疫组化法分析JAG1蛋白表达;WB法检测JAG1、凋亡相关蛋白（cleaved caspase-3、BAX 和 Bcl2）和 Notch 信号通路相关蛋白（NICD、HES1 和 HES5）的表达;MTT 法检测OS-RC-2细胞增殖;Transwell 检测 OS-RC-2 细胞迁移和侵袭;流式细胞术检测OS-RC-2细胞凋亡。结果：与癌旁组织比较,RCC组织中miR-124表达降低,JAG1 mRNA和蛋白表达均升高（均 P<0.01）;与 293T 细胞比较,Caki-2、A498、ACHN、786-O、OS-RC-2细胞中miR-124水平降低,JAG1 mRNA和蛋白表达均升高（均P<0.05）;miR-124直接负调控JAG1。与Control组和NC mimic组比较,miR-124 mimic组miR-124表达水平、细胞凋亡率以及cleaved caspase-3和BAX蛋白表达均升高,JAG1 mRNA和蛋白表达均降低,细胞活力（24、48、72 h）下降,迁移、侵袭细胞数减少,Bcl2及NICD、HES1、HES5蛋白表达降低（均P<0.05）;与miR-124 mimic+pcDNA 组和 miR-124 mimic 组相比,miR-124 mimic+pc-JAG1 组 miR-124 表达水平、细胞凋亡率以及 cleaved caspase-3和BAX蛋白表达均降低,JAG1 mRNA和蛋白表达均升高,细胞活力（24、48、72 h）增加,迁移、侵袭细胞数增多,Bcl2及NICD、HES1、HES5蛋白表达均增加（均P<0.05）。结论：miR-124通过下调JAG1抑制Notch信号通路,降低RCC OS-RC-2细胞的增殖、迁移和侵袭能力,促进细胞凋亡。     

细胞骨架相关蛋白4在肾透明细胞癌中的表达及其临床意义

目的 探讨细胞骨架相关蛋白4（cytoskeleton⁃associated protein 4,CKAP4）在肾透明细胞癌（clear cell renal cell carcinoma,ccRCC）中的表达及其临床意义。方法 收集237例ccRCC患者的癌组织和癌旁组织,采用免疫组化法检测CKAP4蛋白的表达水平,采用χ²检验比较不同CKAP4蛋白表达水平患者的临床病理特征,Kaplan⁃Meier法和Log⁃rank检验分析不同CKAP4表达水平患者总生存期（overall survival,OS）和无进展生存期（progression⁃free survival,PFS）的差异,Cox比例风险回归分析影响ccRCC患者术后OS和PFS的因素。结果 ccRCC组织中CKAP4蛋白的高表达率显著高于癌旁组织（54.0% vs 23.6%,χ²=46.050,P<0.001）。Fuhrman分级高、肿瘤浸润深、有淋巴结转移、远处转移以及TNM分期高的ccRCC患者癌组织中CKAP4蛋白高表达（均P<0.05）。CKAP4蛋白高表达的ccRCC患者OS率（χ²=6.394,P=0.011）和PFS率（χ²=10.065,P=0.002）均较CKAP4蛋白低表达者显著降低。CKAP4蛋白高表达是影响ccRCC患者术后OS（HR=2.884,95%CI：1.425~4.765,P<0.001）和PFS（HR=3.512,95%CI：1.987~5.326,P<0.001）的独立危险因素。结论 CKAP4蛋白在ccRCC组织中呈高表达,且CKAP4蛋白高表达是ccRCC患者不良预后的独立危险因素。     

盐霉素通过靶向调控ALDH影响三阴性乳腺癌细胞MDA-MB- 231增殖和凋亡

目的 探讨盐霉素（salinomycin，Sal）对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法 采用流式细胞术筛选ALDH高表达乳腺癌细胞系；采用MTT法检测不同浓度Sal（1~32 μmol/L）对细胞增殖的影响；采用流式细胞仪检测Sal对细胞凋亡以及肿瘤干细胞表面标志物ALDH表达的影响；采用qRT-PCR、Western blot检测凋亡相关分子Caspase-3、Bax、Bcl-2、PARP mRNA和蛋白表达；TCGA（the Cancer Genome Atlas）数据库下载乳腺癌患者数据集（n=1 218），采用Pearson法分析ALDH与凋亡相关分子表达的相关性。结果 Sal在24 h、48 h、72 h均可以剂量依赖的方式抑制MDA-MB-231细胞增殖（均P<0.001）；Sal作用MDA-MB-231细胞48 h后，与对照组比较，2 μmol/L组、4 μmol/L组、8 μmol/L组的细胞凋亡率均升高（均P<0.05）；Bcl-2、PARP、Caspase-3 mRNA表达下降（均P<0.05），Bax mRNA表达升高（均P<0.05）；Bcl-2、Caspase-3 蛋白表达下降（均P<0.05），PARP、Bax 蛋白表达升高（均P<0.05）；MDA-MB-231乳腺癌干细胞表面标志物ALDH表达下降（均P<0.05）。TCGA数据库分析显示，ALDH与抗凋亡分子Bcl-2、Caspase-3的表达呈正相关（r=0.209，P=0.007；r=0.235，P=0.002），与Bax、PARP的表达呈负相关（r=-0.326，P＜0.001；r=-0.453，P＜0.001）。结论 Sal可抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞生长，可能通过下调肿瘤干细胞表面标志物ALDH表达实现。     

基于靶向代谢组学探讨两种二羧酸酰基肉碱在乙肝相关性疾病中的应用价值

目的 探讨辛二酰肉碱（suberylcarnitine,C8⁃DC）和十六碳二酰肉碱（hexadecanedioylcarnitine, C16⁃DC）诊断乙肝相关性肝细胞癌（hepatocellular carcinoma, HCC）和肝硬化（liver cirrhosis, LC）的价值。方法 收集2018年5月至2019年5月于广西医科大学附属肿瘤医院就诊的41例HCC患者（HCC组）、18例LC患者（LC组）的血清,另选择30名同期于我院就诊的健康志愿者作为正常对照组（NC组）。采用超高效液相色谱⁃四极杆飞行时间串联质谱联用技术对C8⁃DC和C16⁃DC进行靶向分析。采用受试者工作特征（receiver operating characteristic,ROC）曲线评价诊断效能。结果 LC组和HCC组的C8⁃DC水平高于NC组（均P<0.001）;LC组C16⁃DC水平高于NC组（P<0.001）和HCC组（P<0.05）。C8⁃DC诊断LC、HCC及区分LC和HCC的ROC曲线下面积（area under curve, AUC）分别为0.889、0.776和0.654;C16⁃DC诊断LC、HCC及区分LC和HCC的AUC分别为0.878、0.646和0.743。C8⁃DC和C16⁃DC联合诊断LC、HCC及区分LC和HCC的AUC分别为0.898、0.797和0.714。结论 C8⁃DC和C16⁃DC与乙肝相关性HCC和LC密切相关,对诊断乙肝相关性HCC和LC有一定的价值。