30例配对新鲜胃癌标本中p53基因突变的研究

目的：探讨胃癌标本中p53基因外显子5～8的突变情况及其与胃癌各临床特征的关系。方法：采用银染PCR—SSCP检测30例配对新鲜胃癌手术标本中p53基因外显子5～8的突变。结果：p53基因突变检出率为46．7％（14／30），p53基因外显子5—8的突变率分别为10％、16．7％、23．3％、16．7％；p53基因突变与病人年龄、性别、原发灶部位及肿瘤分化程度之间差异没有显著性意义（P〉O．05）；但是，p53基因突变与胃癌临床分期、淋巴结转移之间差异有显著性意义（P〈O．05），进展期胃癌p53基因突变高于早期胃癌，有淋巴结转移的胃癌组织中p53基因突变高于无淋巴结转移胃癌组织。结论：p53基因突变可能参与了早期胃癌一进展期胃癌的发生发展过程，并可能是胃癌发生淋巴结转移的机制之一。     

胃癌组织和腹腔冲洗液p53基因突变的DHPLC技术检测

目的:应用部分变性高效液相色谱(denaturing high performance liquid chromatography, DHPLC)检测胃癌组织、腹腔冲洗液中p53基因突变,并探讨该技术成为检测胃癌腹膜亚临床转移理想方法的可能性.方法: 应用DHPLC对45例胃癌组织及腹腔冲洗液中p53基因突变进行检测,并测序验证.结果:胃癌组织p53基因的突变率为20 0%(9/45),9例突变中有3例突变均未见报道;p53基因在肠型胃癌中突变率35 3%(6/17)明显高于弥漫型胃癌10 7 %(3/28),P＜0 01.腹腔冲洗液中检出p53基因突变2例,检出率为22 2%(2/9),经测序证实分别位于第5 外显子(AAG>AGG,Lys132Arg) 和第6外显子(CTG>CCG,Leu188Pro),均与原发癌组织中相同,这2例患者腹腔冲洗液细胞学检测均为阴性.结论:DHPLC可应用于胃癌患者原发癌灶及腹腔冲洗液中p53基因突变的检测,而且如有效地联合检测多个指标,则可能成为预测胃癌腹膜亚临床转移的理想方法.     

喉鳞癌中人乳头瘤病毒感染与p53基因突变的关系

目的 :探讨抑癌基因p53突变和人类乳头状瘤病毒 16,18型 (HPV16,18)感染与喉鳞癌的关系及二者在喉鳞癌中的相关性。方法 :应用聚合酶链反应结合单链构象多态性分析 (PCR -SSCP)技术对4 0例喉鳞癌组织中HPV16,18DNA及p53基因第 5,7外显子的突变进行检测。结果 :HPV16,18的检出率分别为 35% ( 14/ 4 0 )和 10 % ( 4 / 4 0 )。 12例 ( 30 % )标本p53基因突变 ,其中第 5外显子 10例( 2 5% ) ,第 7外显子 2例 ( 5% ) ,p53基因在HPV阳性和阴性标本中的突变率分别为 33 3%和 2 7 3% ,二者差别无显著性 ( χ2 =0 1732 ,P >0 0 5)。结论 :HPV感染和p53基因突变在喉鳞癌的发生发展过程中都起重要作用 ,但二者之间无相关性     

肺癌组织中p53、K-ras、p15、p16基因的改变

目的　探讨p5 3、K ras、p15、p16基因在肺癌组织中改变情况及多基因联合检测在肺癌诊断中的价值。 方法　对 5 9例肺癌组织和 14例肺部良性组织 ,应用PCR SSCP 银染法检测 p5 3基因第 5～ 8外显子突变情况 ;应用PCR RFLP法对K ras基因突变进行检测 ;并应用PCR法检测 p15、p16基因纯合缺失情况。 结果　肺癌组织中 p5 3、p15、p16基因改变频率分别为 3 7.3 %、11.9%、2 3 .8% ,而在肺部良性组织中只有 1例 p16基因阳性。在 2 5例肺腺癌中 ,K ras基因突变率为 48.0 % ,其它类型肺癌中突变率仅为 8.8% ,而 14例良性组织中未检测出K ras基因突变。另外 ,p5 3基因和K ras基因突变与吸烟存在着密切关系 ,即吸烟者出现突变的频率 ( 4 8.7% ,68.5 % )明显高于非吸烟者 ( 15 .0 % ,11.1% ) ,P <0 .0 1。 4种基因联合检测敏感度为 78.0 % ,明显高于单一基因 (以阳性率最高的 p5 3为例 )的敏感度 3 7.3 %。 结论　p5 3基因、K ras基因和 p16基因在肺癌组织中改变率相对较高 ;多基因的联合检测有助于肺癌的早期诊断和筛查。     

PCR-SSCP技术检测原发性胃腺癌石蜡标本p53第七外显子基因突变的初步研究

目的 :研究PCR SSCP技术检测原发性胃腺癌石蜡标本中p53第 7外显子基因突变 ,探讨其与肿瘤发展的关系。方法 :应用PCR SSCP(聚合酶链反应 单链构象多态性 )技术检测 37例原发性胃腺癌标本中p53第 7外显子的基因突变 ,同时应用免疫组织化学技术检测p53蛋白的表达。探讨其与肿瘤发展的关系。结果 :37例原发性胃腺癌标本中 ,p53第 7外显子基因突变率为 19% (7/ 37) ,7例发生突变的标本 ,其p53蛋白表达亦呈阳性 ,低分化腺癌突变率高于高、中分化腺癌 (P =0 0 0 0 6 ) ,发生淋巴结转移组突变率高于未发生淋巴结转移组 (P =0 0 0 0 3)。结论 :临床检测胃腺癌原发灶中是否存在p53第 7外显子基因突变 ,有助于识别高度恶性的胃腺癌。     

宫颈癌P27kip1基因突变、缺失及表达

目的　探讨p2 7蛋白在宫颈癌中表达的意义及p2 7基因缺失、突变在宫颈癌发生中的作用。方法　采用链霉菌抗生素蛋白 -过氧化酶 (S -P)免疫组化法及聚合酶链反应 -单链构象多态性 (PCR -SSCP)分析法分别检测宫颈癌中p2 7基因的蛋白表达及其两个外显子的缺失、突变。结果　p2 7蛋白表达 ,18例正常宫颈上皮组织均为高表达 ,48例宫颈癌组织中 ,19% ( 9/48)高表达 ,81% ( 39/48)低表达 ,宫颈癌中高表达率明显低于正常宫颈组织 (P <0 .0 5 ) ;宫颈癌的分化程度中 ,Ⅰ级高表达 5 0 % ( 5 /10 )明显高于Ⅱ级 13% ( 3/2 4)及Ⅲ级 7% ( 1/14 ) (P <0 .0 5 ) ;伴有淋巴结转移的高表达4% ( 1/2 3) ,不伴淋巴结转移的高表达 32 % ( 8/2 5 ) ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;p2 7基因缺失、突变分析 ,17例宫颈癌及 8例正常宫颈组织均未发现一例外显子Ⅰa、Ⅰb及外显子Ⅱ缺失、突变。结论　p2 7与宫颈癌的发生发展、分化程度及淋巴结转移有关 ;宫颈癌中未发现p2 7基因缺失与突变 ;对p2 7蛋白进行检测为诊断宫颈癌及临床综合治疗提供参考。     

人胃癌组织中DNA聚合酶β基因突变的研究

目的研究胃癌组织中DNA聚合酶β基因(polβ)的突变情况。方法利用RT-PCR、SSCP和序列分析对32例胃癌及癌旁组织标本中polβ基因进行检测。结果32例胃癌组织标本中有7例SSCP异常,突变率为21.9%;而对应的32例癌旁组织PCR-SSCP结果中未见异常。在低分化胃癌中的突变率高达50.0%(6/12),而在中、高度分化胃癌中的突变率却仅为5.0%(1/20),经统计学分析,差异有显著性(P<0.05)。测序分析了7例SSCP异常中的3例,其突变分别为196位A→G,268位A→G,790位A→T;测序分析了1例PCR-SSCP无异常的癌旁组织标本,其序列无突变。结论胃癌组织存在polβ基因突变;该基因突变可能与胃癌的发生、发展相关。     

肝硬化及肝癌p53基因突变的实验研究

目的 :研究肝硬化及肝癌p53基因的突变情况。方法 :选择 80例肝硬化、肝癌标本 ,分别以PCR SSCP法 ,双链DNA序列测定法研究其p53基因外显子的突变情况及突变位点。结果 :62例肝癌标本p53总突变率为 19 4 % ,其中 ,早、中、晚期突变率分别为 10 5%、15 0 %、35 0 % ;18例肝硬化标本p53总突变率为 5 6% ;第 7外显子的突变发生在 2 4 9位密码子第 3号碱基上 ,为G :C→T :A的颠换突变 ;第 8外显子的突变发生在 2 73位密码子第 1号碱基上 ,为C :G→T :A的转换突变。结论 :p53基因突变发生在肝细胞发生形态学改变之初 ,随着肝癌的进展逐渐积累 ,突变率呈上升趋势 ,故p53基因突变很可能是启动癌变过程的重要因素之一。     

子宫内膜癌组织中抑癌基因PTEN突变分析

目的了解子宫内膜癌组织中磷酸酶基因PTEN突变情况及其与临床病理特征的关系.方法采用聚合酶链反应-单链构象多态性方法(PCR-SSCP)对70例子宫内膜癌组织进行PTEN基因9个外显子的突变检测.结果70例子宫内膜癌组织中PTEN基因突变率为38.57%(27/70),突变较多地分布在第5、7、8号外显子上;子宫内膜样癌突变率(44.8%)明显高于浆液性和粘液性腺癌(8.3%),P＜0.05,G1级、G2级、G3级的突变率分别为53.3%、45.5%、18.2%(P＜0.05),Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ～Ⅳ期的突变率分别为52.4%、28.6%、14.3%(P＜0.05),肌层浸润程度越深,突变率越低(P＜0.05).结论PTEN基因突变是子宫内膜癌发生的早期事件,并与预后良好的临床病理特点相关.     

DHPLC检测林州市高龄组和低龄组居民食管癌p53基因外显子突变谱的比较研究

目的:研究我国食管癌高发区林州市居民高龄食管癌患者与低龄食管癌患者中抑癌基因p53全部编码外显子基因突变谱的情况,比较两组患者中p53基因突变的差异。方法:留取林州市>70岁和<40岁、低年龄组食管癌患者食管癌新鲜标本51例,提取DNA,PCR扩增p53第2～11外显子。DHPLC进行突变的筛查。突变样本进行DNA纯化测序分析。结果:51例患者中,p53至少有1个外显子基因突变的36例,突变率为70.6%。高年龄组突变率为63.3%(19/30),低年龄组突变率为80.9%(17/21),两者比较无统计学意义(P>0.05)。p53有2个外显子基因突变的10例,突变率为17.6%。高年龄组突变率为26.7%(8/30),低年龄组突变率为9.5%,两者比较无统计学意义,P>0.05。结论:p53基因突变是林州市居民食管癌发生过程中的一个发生频率很高的事件。林州市居民的p53外显子突变谱中,共有15种突变类型,共计59个突变位点,其中最多的突变类型是插入碱基C。在p53基因第2～8外显子与内含子交界的非编码区有大量的基因突变。     

聚合酶链式反应—单链构象多态性分析法检测大肠腺瘤及大肠癌APC …

目的 对１５例散发性大肠腺瘤组织和４５例大肠癌组织及各自的正常肠粘膜组织,进行家族性腺瘤肉病基因（ａｄｅｎｏｍａｔｏｕｓｐｏｌｙｐｏｓｉｓ,ｃｏｌｉ,ＡＰＣ第１５外显子ＭＣＲ区域的基因突变检测。方法 应用聚合酶链反应－单链构象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）技术进行检测。结果 在散发性大肠腺瘤组织中检出突变率为２０．０％（３／１５）在大肠癌组织中的突变率为２２．２％（１０／４５）。实验结果表明,ＡＰ     

Mutations of the adenomatous polyposis coli gene in the mutation cluster region: Comparison of human pancreatic and colorectal cancers

We analyzed the adenomatous polyposis coli (APC) tumorsuppressor gene as one of the possible genes mutated in human pancreatic carcinomas. DNAs from 39 surgical specimens were subjected to single-strand conformation polymorphism analysis of polymerase chain reaction products and the mutation cluster region (MCR) of the gene was examined. We also examined the same region of DNAs from 27 surgical specimens of sporadic colon carcinomas and detected mutations in 11 carcinomas (41%). This mutation frequency in colon carcinomas was similar to those reported previously. Using this system, we detected a mutated APC gene in one of 39 pancreatic carcinomas. The results indicated that mutation of the MCR in the APC gene is involved in genesis of some of human pancreatic carcinomas, but its frequency is much lower than in colorectal carcinomas.     

胃癌E-cadherin基因启动子CpG岛甲基化的研究

背景与目的:目前认为CpG岛甲基化导致转录抑制是恶性肿瘤发生的重要机制之一。E-cadherin能抑制肿瘤细胞的浸润和转移,被公认为是浸润、转移抑制基因。低分化胃癌常表现有E-cadherin基因失活。我们通过检测胃癌及癌旁组织中E-cadherin基因启动子CpG岛甲基化水平,初步探讨胃癌的发病机制。方法:采用特异性甲基化PCR(MSP)法检测51例胃癌组织及37例癌旁组织中的E-cadherin基因启动子CpG岛甲基化水平,采用免疫组织化学染色法检测E-cadherin表达。结果:健康对照组织中未检测到CpG岛甲基化,4例(10.8%)癌旁组织检测到CpG岛甲基化,32例(62.7%)胃癌组织中检测到CpG岛甲基化。低分化腺癌(72.2%,26/36)CpG岛甲基化显著高于高分化腺癌(33.3%,6/15)(P<0.01),T1/T2期(55.6%,10/18)与T3/T4期胃癌(66.7%,22/33)的CpG岛甲基化率无显著性差异(P>0.05)。32例CpG岛甲基化胃癌中27例(84.5%)E-cadherin表达下调,19例非甲基化胃癌中5例(26.3%)E-cadherin表达下调。未发现E-cadherin基因CpG岛甲基化与幽门螺杆菌感染有关。结论:胃癌、尤其是低分化腺癌广泛存在E-cadherin基因启动子CpG岛甲基化,启动子CpG岛甲基化可能参与胃癌的早期过程,E-cadherin基因CpG岛甲基化与幽门螺杆菌感染无相关关系。     

上消化道恶性肿瘤中p16基因突变的研究

目的　研究p16基因突变与食管癌和胃癌发生的关系。方法　采用PCR、多重PCR、PCR SSCP和DNA测序等技术分析了 2 5例食管癌和 40例胃癌组织标本。结果　 1.食管癌中p16基因突变频率为 16 % ,并且突变频率与肿瘤的大小、位置、分化程度和有无淋巴结转移无关 (P >0 .0 5 )。 2 .胃癌中p16基因突变频率为 7.5 % ,并且突变与肿瘤的大小、位置、分化程度和有无淋巴结转移无关 (P >0 .0 5 )。结论　 1.P16基因点突变可能是食管癌和胃癌发生发展过程中的影响因素之一 ,错义突变是其失活的主要原因。 2 .P16基因点突变的检测对食管癌和胃癌早期诊断有一定帮助。     

胃癌端粒酶活性及ras基因突变的研究

目的 检测胃癌及癌前病变组织、胃炎组织端粒酶活性及ras基因变异,了解胃癌发生的生物学特性。方法 应用TRAP法对32例胃癌、16例异形增生、13例肠上皮化生、8例萎缩性胃炎、12例浅表性胃炎进行端粒酶活性及ras基因变异的测定。结果 胃癌组织28例(87.5％)端粒酶表达阳性,ras基因变异27例(84.4％)阳性;异形增生阳性分别为4例(25.0％)和5例(31.3％);肠上皮化生阳性分别为4例(30.8％)和4例(30.8％);萎缩性胃炎阳性分别为1例(8.4％)和2例(16.7％);胃炎组织阳性分别为0和1例(8.3％)。端粒酶及ras基因阳性表达与胃癌的部位、分化度、是否有淋巴转移无关。端粒酶活化与ras基因密切相关。结论 端粒酶活化及ras基因变异均与胃癌发生有关,可为胃癌的诊断提供可靠的指标。     

Immunohistochemical detection of c-myc oncogene product in human gastric carcinomas: expression in tumor cells and stromal cells

c-myc protein p62 in human gastric carcinomas was studied by immunohistochemistry using an antiserum raised against the C-terminal portion of the human c-myc gene protein. No immunoreactivity of c-myc p62 was detected in tumor cells of 27 early carcinomas, while c-myc p62-positive tumor cells were observed in 51 (36.4%) of the 140 advanced carcinomas. Many stromal cells including macrophages and fibroblasts around the tumors showed various degrees of c-myc p62 immunoreactivity. Localization of c-myc p62 was predominant in the cytoplasm of tumor cells and stromal cells. The prognosis of patients with p62-positive stromal cells was significantly better than that of patients with p62-negative stromal cells.     

抑癌基因p16在胃癌及胃癌前病变组织中的表达

目的探讨p16基因表达与胃癌发生及胃癌生物学行为的关系。方法应用抗p16蛋白单克隆抗体,采用免疫组化ABE方法对10例正常胃粘膜、16例胃粘膜轻度异型增生、12例中度异型增生、14例重度异型增生、16例早期胃癌及52例进展期胃癌进行了标记分析。结果正常胃粘膜全部表达p16蛋白,随着胃粘膜病变的进展,p16蛋白的阳性率逐渐下降。轻、中、重度异型增生阳性率分别为87.5％、75％、50％,早期胃癌及进展期胃癌的阳性率分别为43.8％和38.5％。p16蛋白在轻度异型增生中的阳性率分别与重度异型增生、早期胃癌及进展期胃癌相比,差异均有显著性(P<0.05);中度异型增生的阳性率显著高于进展期胃癌(P<0.05);而淋巴结转移组的阳性率明显低于淋巴结未转移组(22.2％vs 51.2％,P<0.05)。结论胃粘膜的癌变过程与抑癌基因p16表达缺失密切相关,p16蛋白可作为判断胃癌生物学行为的一个有用指标。     

Alterations of oncogenes in metastatic tumours of human gastric carcinomas

To determine whether alterations in oncogenes are associated with tumour progression and metastasis, DNAs from 32 metastatic tumour samples of different sites in 12 autopsy cases of gastric carcinomas were analysed for alterations of ERBB, ERBB2, HST1, INT2 and LMYC genes by Southern blot hybridisation. DNAs from 89 primary gastric carcinomas including 69 advanced carcinomas and 20 early carcinomas were also examined. In primary tumours, no amplification was detected in early carcinomas, while amplification of ERBB and ERBB2 genes was detected in one (1.4%) and four (5.8%) out of 69 advanced carcinomas, respectively. In metastatic tumours, amplification of ERBB gene was detected in three metastatic tumours (9.4%), and all of them had allelic deletion of the LMYC gene. Regardless of histological type, amplification of ERBB2 gene was detected in 8 metastatic tumours (25.0%), out of which three tumours had coamplification of HST1 and INT2 genes. The incidence of ERBB2 amplification in metastatic tumours was significantly higher than that in primary tumours. These results indicate that multi-alterations in oncogenes might occur during tumour progression and metastasis of human gastric carcinomas.