人肺癌组织3p和9p丢失的研究

目的：探讨间期核荧光原位杂交检测肺癌和癌旁支气管上皮细胞中3p,9p丢失以及将其应用肺癌早期诊断的可行性。方法：选取DNA特异的3p,9p探针，以荧光原位杂交方法对21例短期培养的肺癌和癌旁支气管上皮细胞中3p,9p丢失进行分析。结果：3p,9p丢失在癌旁支气管上皮细胞中为14.29%(3/21)，28.57%(6/21)；在肺癌细胞中为66.67%(14/21）。80.95%(17/21),3p,9p均丢失者在肺癌细胞中占57.14%(12/21)，在癌旁支气管上皮细胞中为0。结论：（1）间期核荧光原位杂交可以检测肺癌及癌旁上皮细胞中3p,9p的丢失；（2）3p,9p的丢失在肺癌细胞中是频发事件，明显高于癌旁支气管上皮细胞；（3）检测3p,9p的丢失可为肺癌的早期诊断提供新的途径。     

细胞周期调控因子p27kipl和CDK4在非小细胞肺癌中的表达

目的 :探讨非小细胞肺癌 (NSCLC)中细胞周期调控因子p2 7kipl和CDK4的表达及其意义。方法 :采用免疫组化S P法检测63例NSCLC组织中p2 7kipl和CDK4的表达情况。结果 :63例NSCLC中p2 7kipl和CDK4阳性表达率分别是 5 4 0 % ( 3 4/63 )和 49 2 %( 3 1/63 ) ,与正常支气管黏膜相比差异均有统计学意义 ,P <0 0 5。淋巴结转移阳性组p2 7kipl的表达率为 3 8 5 % ( 15 /3 9) ,显著低于阴性组为 79 2 % ( 19/2 4) ,P <0 0 1。淋巴结转移阳性组CDK4的表达率为 71 8% ( 2 8/3 9) ,显著高于阴性组为 12 5 % ( 3 /2 4) ,P <0 0 1。p2 7kipl和CDK4的表达呈明显负相关 ,P <0 0 1。结论 :p2 7kipl的表达缺失和CDK4高表达与肺癌的侵袭和转移有密切关系 ,可作为判断肺癌淋巴结转移和估计预后的重要指标     

肺癌组织中MDM2蛋白的表达

目的 :检测肺癌组织中小鼠双微粒体 (murinedoubleminute 2 ,MDM2 )蛋白的表达。方法 :用Westernblot方法对 3 1例肺癌组织及相应癌旁组织MDM2蛋白表达情况进行测定。结果 :肺癌组织中MDM2蛋白表达量 ( 3 812 3 5± 1115 3 0 )高于癌旁组织 ( 2 90 3 7 0± 14 2 67 4) ,其增高表达率为 77 4%( 2 4/ 3 1) ,差异有统计学意义 ,P =0 0 0 9;肺鳞癌组织中MDM2蛋白表达增高率为77 3 % ( 17/ 2 2 ) ,肺腺癌组织中为 7/ 7;1例小细胞肺癌和 1例大细胞肺癌组织中MDM2蛋白表达均降低。结论 :MDM2在肺癌的发生过程中有一定作用。     

染色体3p21.3缺失区域11个相关基因在非小细胞肺癌中的表达

背景与目的50%-80%的非小细胞肺癌存在染色体短臂3p21.3上等位基因的丢失,提示可能存在多个潜在的抑瘤基因。本研究通过大规模筛选3p21.3区相关基因在肺癌中的表达,以期找到数个肺癌相关抑瘤基因。方法应用生物信息学方法,选择出11个位于该区与肿瘤密切相关的基因,RT-PCR检测16例非小细胞肺癌及配对组织标本中11个基因的表达,并进行相关统计分析。结果在11个基因中,5个基因[RASSF1A43.8%(7/16),GNAT137.5%(6/16),SEMA3B62.5%(10/16),SEMA3F50%(8/16),Blu56.3%(9/16)]在非小细胞肺癌组织中表达下调或缺失(P<0.05);其余6个基因ZNF35、NPRL2、LTF、AXUD1、BAP1和FUS1的表达,在非小细胞肺癌及配对组织标本的表达无统计学差异。结论肺癌组织中3p21.3区有多个基因参与了肺癌的发生发展。     

肺癌纤维支气管镜刷落细胞检测染色体 3p杂合性丢失的研究

目的研究肺癌纤维支气管镜(纤支镜)刷落细胞标本中第3号染色体上三个区域--3p14,3p21和3p25等位基因的杂合性丢失(loss of heterozygosity,LOH),并探讨以纤支镜刷落细胞为标本检测3p LOH,应用于临床肺癌早期诊断的可能性.方法采用聚合酶链反应(PCR)方法,分析24例肺癌纤支镜刷落细胞标本和18例肺部良性疾病(对照组)刷落细胞标本三区域3p LOH情况.结果24例肺癌刷落细胞中有14例(58.3%)出现3pLOH,18例肺良性疾病标本中仅有1例存在3p LOH,两组比较差异有显著性(P＜0.001).肺癌Ⅲ期(66.7%,6/9)和Ⅳ期患者(75.0%,6/8)的3p LOH率高于Ⅱ期患者(28.6%,2/7).吸烟肺癌患者3p LOH率显著高于非吸烟患者(P＜0.05).结论染色体3p LOH与肺癌的发生发展存在一定的关系纤支镜刷落细胞标本检测3p LOH可能成为肺癌早期诊断的手段之一;染色体3p可能是烟草致癌物攻击的分子靶位之一.     

p63和p53及PCNA在肺癌中的表达及意义

目的 检测蛋白p63、p53和PCNA在肺癌组织中的表达情况,并研究三者之间及其与临床病理参数的关系,以探讨三者在肺癌的发生、发展中的生物学作用和临床意义.方法 选取183例肺癌组织(其中54例有癌旁组织),应用组织芯片技术和免疫组织化学方法观察三种蛋白的表达情况.结果 p63在肺癌中的阳性率分别为鳞状细胞癌82.1%(55/67)、腺癌8.8%(7/80)、细支气管肺泡癌4.2%(1/24)、小细胞癌0%(0/12),鳞状细胞癌中的p63表达率显著高于其他类型(P＜0.01),而其他类型间差异无显著性(P＞0.05);p53在肺癌中的阳性率分别为鳞状细胞癌67.2%(45/67)、腺癌48.8%(39/80)、细支气管肺泡癌54.2%(13/24)、小细胞癌41.7%(5/12),鳞状细胞癌显著高于其他类型(P＜0.05),其他类型间差异无显著性(P＞0.05);PCNA在肺癌中3.8%(7/183)呈阴性,31.1%(57/183)呈弱阳性,37.7%(69/183)呈阳性,27.3%(50/183)呈强阳性,小细胞癌PCNA阳性率显著低于其他类型(P＜0.05).统计结果显示,p63在鳞状细胞癌中的表达率显著高于其他类型(P＜0.01),但与p53、PCNA的表达及临床病理参数不相关(P＞0.05),尽管p53和PCNA与肿瘤分化程度相关(P＜0.01).结论 p63基因在不同类型的肺癌中作用不同,其在肺鳞状细胞癌的发生发展中起着重要的作用,机理有待研究,这一结果可为进一步探讨p63在肿瘤中的作用提供依据;另外,p63可作为鉴别肺鳞状细胞癌与其他类型癌的重要参考指标,为临床病理诊断提供有效依据.     

p53基因在人食管诱发癌中的突变

目的 :了解抑癌基因p5 3在人食管癌及其癌旁组织中的突变和致癌作用。方法 :采用PCR SSCP和DNA序列分析等方法对 2 4例人食管鳞状细胞癌术后标本和 2 1例移植到重度完全性免疫缺陷 (severecombinedimmunodefi cient,SCID)小鼠并用或不用N -戊基 -N -甲基亚硝基胺 (N amyl N methylnitrosamine ,AMN)处理的人食管正常组织标本 ,进行了p5 3基因外显子 4～ 8的突变研究分析。结果 :在食管癌组织及癌旁组织均检测出p5 3基因突变 ,其中食管癌组织标本中有 18个突变 ,癌旁组织标本中有 10个 ( 10 /17,5 8 8% )突变 ,主要的突变为G A转换。在 14例用AMN处理的人食管正常组织标本中出现 6个 ( 4 2 9% )突变 ;其中密码子 2 83的突变为G A转换。在人食管癌及其癌旁组织中p5 3基因的突变概率差异无统计学意义。结论 :环境因素或内源性AMN可能是河南林县食管癌高发的主要原因之一     

大鼠肺鳞癌中p16INK4a和p19ARF基因的缺失研究

目的研究p16INK4a和p19ARF基因的缺失与大鼠肺鳞癌发生发展的关系.方法利用显微切割和聚合酶链反应(PCR)技术,在10例正常大鼠支气管黏膜上皮细胞、16例癌前病变细胞和34例肺鳞癌组织分别检测p16INK4aE1α和p19ARFE1β的缺失.结果10例大鼠正常支气管黏膜上皮细胞均未发现有p16INK4aE1α和p19ARFE1β的缺失.在16例癌前病变中发现p16INK4aE1α和p19ARFE1β缺失的检出率分别为12.50%(2/16)和6.25%(1/16);p16INK4aE1α或(和)p19ARFE1β总缺失率为18.75%(3/16).34例大鼠肺鳞癌中p16INK4aE1α和p19ARFE1β缺失的检出率分别为32.35%(11/34)和41.18%(14/34),其中有9例两者同时缺失,p16INK4aE1α或(和)p19ARFE1β总缺失率为47.06%(16/34).肺鳞癌的p19ARFE1β的缺失率显著高于癌前病变,P=0.012.结论在诱发性大鼠肺鳞癌的发生发展中,p16INK4a基因的缺失可能在早期已起作用,p19ARF的生物学活性可能强于p16INK4a.p16INK4a和p19ARF基因的同时缺失损伤了Rb和p53 2条肿瘤抑制途径,这可能有助于大鼠肺鳞癌的恶性进展.     

p53蛋白在肺癌的表达及临床意义

目的　研究 p5 3蛋白在肺癌的表达情况及临床意义。方法　应用 SABC免疫组化技术 ,研究 6 9例各型肺癌组织 p5 3蛋白表达。结果　p5 3蛋白表达的总阳性率为 5 9.4% ,其中鳞癌5 6 .7% ,腺癌 73.7% ,小细胞癌 6 1.5 % ,大细胞癌 40 %。支气管粘膜上皮异型增生和鳞癌有相同的p5 3蛋白表达 ,而正常组织细胞中未见 p5 3蛋白表达。结论　提示 p5 3蛋白表达可能是支气管粘膜上皮密变的早期改变 ,p5 3蛋白是肺癌细胞的重要标志物。     

原发性肺癌与食管癌组织中端粒酶活性表达的临床研究

目的 :探讨端粒酶作为一种新的生物学标志物用于常见胸部恶性肿瘤诊断和预后评价等方面的临床应用价值。方法 :采用端粒重复序列扩增法对原发性肺癌、食管癌手术切除组织及相应的癌旁组织进行端粒酶活性分析 ,并以相应的良性病变作为对照。结果 :3 2例肺癌组织中端粒酶阳性率为 84 4%( 2 7/3 2 ) ,癌旁组织为 9 4% ( 3 /3 2 ) ,良性组织中未检出端粒酶阳性。端粒酶活性随肺癌临床分期有升高趋势 ,伴淋巴结转移标本组阳性率 94 7% ( 18/19)明显高于非淋巴结转移组69 2 % ( 9/13 ) ,P <0 0 5 ;但与肿瘤病理组织学类型、分化程度等差异无统计学意义 ,P >0 0 5。 3 7例食管癌端粒酶阳性率为 86 5 % ( 3 2 /3 7) ,癌旁组织为 18 9% ( 7/3 7) ,正常食管组织未检出端粒酶阳性。当癌侵及肌层及外侵后 ,其阳性表达率 10 0 % ( 2 3 /2 3 )高于局限于黏膜及黏膜下层者 71 4% ( 10 /14 ) ,P <0 0 1。伴淋巴结转移标本阳性率 10 0 % ( 2 1/2 1)高于非淋巴结转移者 75 % ( 12 /16) ,P <0 0 5。结论 :端粒酶有可能成为肺癌、食管癌早期诊断和判断预后的重要生物标志物和治疗新靶点。     

人非小细胞肺癌组织p63和p73的表达及意义

目的 :探讨p5 3家族新成员p6 3和p73在非小细胞肺癌 (NSCLC)中的表达及其临床意义。方法 :利用免疫组化S P法对 6 0例NSCLC和 7例正常肺组织检测p6 3和p73基因的蛋白表达。结果 :在NSCLC中 ,p6 3和p73蛋白表达的阳性率分别为 80 0 % (4 8/ 6 0 )、73 3% (4 4/ 6 0 ) ;与正常肺组织相比 ,p6 3和p73蛋白阳性表达的差异均有显著意义 ,P <0 0 5。p6 3蛋白表达与肺癌组织学类型 (P =0 0 0 0 3)和淋巴结转移有关 ,P =0 0 2 8;而与分化程度和临床分期无关 ,P >0 0 5。p73蛋白表达与肺癌组织学类型、淋巴结转移、分化程度和临床分期均无关 ,P >0 0 5。在肺癌中 ,p6 3蛋白和p73蛋白表达之间呈显著正相关 ,P =0 0 0 0 1。结论 :p6 3和p73高水平的表达协同促进肺癌的形成 ,p6 3是肺鳞癌恶性进展的一个标志物。     

肺鳞癌组织中p27kip1的表达及其与临床预后因素的相关性

目的探讨p27kip1在肺鳞状细胞癌组织中的表达,及其与临床独立预后因素和生存率的关系,寻找基因治疗的依据。方法通过免疫组化检测48例肺鳞状细胞癌组织中p27kip1的表达水平,及其与年龄、肿瘤大小、淋巴结转移、分期、病理分级及生存率的相关性。结果p27kip1在肺鳞癌组织中高表达率为42%(20/48)。p27kip1的表达与肺鳞状细胞癌的分化程度呈正相关,P<0.01;而与患者的年龄、肿瘤大小、淋巴结转移及肿瘤分期无关。结论p27kip1的表达与肺鳞癌的病理分化程度呈显著正相关,对判断预后和指导治疗具有一定的意义。     

肺癌组织中p53和VEGF的表达及其临床意义

目的:了解 p53 和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)表达水平与肺癌临床病理特征之间的关系。方法: 采用免疫组化方法(二步法)检测 170 例肺癌组织中 p53 和 VEGF 的表达水平。结果:p53和 VEGF的阳性表达率分别为 48. 8%和47 .6%。p53和VEGF的表达水平与肺癌患者年龄、性别和组织学类型无相关性,P> 0 .05,与淋巴结转移、浸润和 pTNM 分期有关,P<0 .05(P值分别为0 026、0. 002和0 .012), p53与原发肿瘤大小和癌细胞分化程度有关,P<0 .05(P值分别为 0. 003 和 0 .037), VEGF则与原发肿瘤大小和癌细胞分化程度无关,P>0. 05(P值分别为0. 871和0. 677)。结论: p53和VEGF参与了肺癌的发生和发展过程,可以作为肺癌生物学水平的检测指标。     

nm23和p53基因与肺腺癌生物学特性的关系

目的：检测肺腺癌组织中nm23表达和p53基因外显子突变情况，寻找有助于准确预测局部肿瘤进展、分型和预后情况的临床参照指标。方法：应用PCR技术检测31例肺腺癌术后存档蜡块组织中nm23表达及p53基因外显子突变情况，并与肺腺癌的病理及临床指标进行相关性分析。结果：nm23表达及p53基因突变率分别为38．7％（12／31）及48．4％（15／31）。nm23表达和p53基因突变与临床分期相关，P值分别为0．005、0．037。结论：nm23表达和p53基因突变与肺癌临床分期和生存相关，在判断肺腺癌细胞增殖、分化程度、恶性程度及预后转归方面有一定价值，可作为判断肺腺癌预后的参考指标，指导高危患者的进一步治疗。     

p21^WAF1／CIP1在原发性肺癌中的表达

目的：探讨p21^WAF1/CIP1在肺癌中的生物学功能,方法：用免疫组化法检测62例肺癌和14例正常肺组织石蜡切片p21^WAF1/CIP1的染色强度。结果：1．p21^WAF1/CIP1定位于细胞核或细胞浆。2．小细胞肺癌是与非小细胞肺中核p21^WAF1/CIP1表达存在显著性差异（P＜0．005）,浆p21^WAF1/CIP1则不存在显著性差异（P＜0．005）。核与浆p21^WAF1/CIP1表达的对比在高,低分化肺癌中具有显著性差异P＜0．05）。结论：肺癌细胞p21^WAF1/CIP1的生物学功能可能依其定位、量表达的高低及组织学类型的不同而存在差异。     

X射线对肺癌细胞系p57kip2转录表达的影响

目的:研究X射线对肺癌细胞系NCI-H226和A549的印记基因p57kip2转录表达的影响。方法:对数生长期的肺癌细胞系NCI-H226和A549,分别予以2、4、8和12GyX射线照射,并于照射前和照射后6、12、24、36和48h分别提取RNA,采用RT-PCR技术检测各时相p57kip2mRNA的含量,分析不同剂量X射线照射后对其转录水平的影响。结果:两组肺癌细胞p57的转录表达在不同照射剂量和不同时间水平间差异有统计学意义,P<0·05,A549经过X射线照射后,p57kip2的mRNA含量明显升高,且与照射剂量呈线性依赖关系;NCI-H226虽然未见明显规律,但在X射线照射后的峰值mR-NA含量均明显升高。结论:X射线照射后能够上调肺癌细胞p57kip2的mRNA的表达,预示着p57可能参与了放射线所致细胞周期重新分布和细胞凋亡的过程,并且可能预测肺癌细胞的放射敏感性,但其表达与时间剂量的关系尚需要进一步研究。     

非小细胞肺癌pl6/CDKN2基因失活的研究

目的：分析中国人非小细胞肺癌中ｐ１６／ＣＤＫＮ２基因失活的情况,探讨该基因在肺癌发生中的作用。方法：选取与ｐ１６基因紧密连锁的Ｄ９Ｓ１７４８位点,对１７例临床切除的原发性肺癌标本进行微卫星不稳定性分析,用甲基化特异性ＰＣＲ（ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ＰＣＲ, ＭＳＰ）检测 ｐｌ６基因启动子区 ＣｐＧ岛甲基化状况,用免疫组织化学法检测Ｐ１６蛋白表达情况。结果：微卫星不稳定性分析结果表明,在１３例Ｄ９Ｓ１７４８位点存在多态性的肿瘤ＤＮＡ中有 ９例（６９ ．２％）发生了杂合性缺失（ｌｏｓｓ ｏｆ ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｓｉｔｙ, ＬＯＨ）。 ＭＳＰ的结果显示,有 ７０． ６％（１２／１７）的肿瘤组织存在ｐ１６启动子区的异常高甲基化。在本研究中,８２．４％（１４／１７）的肿瘤组织可以检测出一种或两种ｐ１６基因的异常改变。对此１７例肿瘤标本进行的免疫组织化学分析显示,有 １３例 Ｐ１６蛋白表达阴性,其中 ９２ ３％（１２／１３）存在一种或两种ｐ１６基因的异常改变。免疫组化结果与ｐ１６基因分子遗传学改变情况基本吻合。结论：作为一种抑癌基因,ｐ１６在多种肿瘤组织中都有异常改变。我们的研究表明,ｐ１６基因失表达是非小细胞肺癌