circNEIL3 通过靶向miR-4784 调控乳腺癌MDA-MB-231 细胞的增殖、迁移和侵袭

目的：研究环状RNA nei 样DNA糖化酶3（circNEIL3）和微小RNA（miR）-4784 对乳腺癌细胞MDA-MB-231 的增殖、迁移和侵袭的影响。方法：收集2018 年1月至2019 年12月在济南市中西医结合医院经组织病理诊断为乳腺癌并行手术切除的45 例乳腺癌患者的癌组织和配对癌旁组织，qPCR 法检测乳腺癌组织、癌旁组织中circNEIL3 和miR-4784 的相对水平。将circNEIL3 的小干扰RNA（si-circNEIL3）、miR-4784 模拟物、si-circNEIL3+miR-4784 抑制物分别转染MDA-MB-231 细胞，采用CCK-8法、平板克隆实验、划痕愈合实验、Transwell 实验检测circNEIL3和miR-4784 表达对细胞活力、克隆形成、迁移和侵袭的影响。双荧光素酶报告基因实验、RNA免疫沉淀（RIP）和RNA pull-down 实验检测circNEIL3和miR-4784 之间相互作用。结果：乳腺癌组织中circNEIL3呈高表达（P<0.05），miR-4784 呈低表达（P<0.05）。干扰circNEIL3显著降低MDA-MB-231 细胞活力、克隆形成数、划痕愈合率以及侵袭数（均P<0.05）。过表达miR-4784 显著降低MDA-MB-231 细胞活力、克隆形成数、划痕愈合率以及侵袭数（均P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验、RIP 和 RNA pull-down 实验均证实circNEIL3 与miR-4784 可直接结合，干扰circNEIL3 能明显上调miR-4784表达（P<0.05），过表达circNEIL3 能明显下调 miR-4784 表达（P<0.05）。抑制miR-4784 表达部分逆转干扰circNEIL3对MDA-MB-231 细胞活力、克隆形成、迁移和侵袭的抑制作用（P<0.05）。结论：干扰circNEIL3通过靶向上调miR-4784表达抑制MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭。     

Tspan29在乳腺癌组织中的表达及其对MCF-7和MDA-MB-231细胞恶性生物学行为的影响

目的：检测4次穿膜蛋白29（tetraspanins-29，Tspan29）在乳腺癌组织和细胞系中的表达水平，探讨敲低Tspan29对乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞增殖、迁移、侵袭及上皮间质转化（epithelieal-mesenchymal transition，EMT）的影响。方法：收 集2017年6月至2018年2月复旦大学附属肿瘤医院闵行分院手术切除的20例乳腺癌患者的癌组织和相应的癌旁组织标本，以及乳腺癌细胞系 MCF-7、MDA-MB-231 和人乳腺上皮细胞 MDA-kb2，用 qPCR 和 Western blotting 检测乳腺癌组织和细胞系中Tspan29 的表达水平。通过 siTspan29 对 MCF-7、MDA-MB-231 细胞中 Tspan29 进行干扰，用 qPCR 法检测转染细胞中 Tspan29mRNA 和蛋白的表达水平，PCR 芯片法检测 MCF-7 细胞中 EMT 相关基因的表达，用 CCK-8 法、Transwell 实验检测 MCF-7 和MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结果：乳腺癌组织中Tspan29 mRNA和蛋白的表达水平显著高于癌旁组织（均 P<0.01），MCF-7和MDA-MB-231细胞中Tspan29 mRNA和蛋白的表达水平显著高于MDA-kb2细胞（均P<0.01）。siTspan29干扰后，MCF-7细胞中Tspan29 mRNA和蛋白的表达水平显著下降（均P<0.05）；MCF-7细胞中EMT相关基因中有2个基因显著上调， 有7个基因显著下调；MCF-7和MDA-MB-231细胞的增殖、迁移及侵袭能力显著下降（均P<0.05）。结论：Tspan29在乳腺癌组织及细胞系中表达水平显著上调，敲低Tspan29对乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭有显著的抑制作用。     

miR-21通过靶向PDCD4调控三阴性乳腺癌细胞的迁移和侵袭

目的： 研究miR-21在三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231中的表达，以及其是否通过调控PDCD4影响MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭。方法： 采用实时定量PCR（qPCR）法检测MDA-MB-231细胞和正常乳腺细胞MCF-10A中miR-21和PDCD4 mRNA的表达。将MDA-MB-231细胞随机分为5组：空白对照组，转染miR-21模拟物组，模拟物对照组，转染miR-21抑制物组和抑制物对照组。采用Western blot法检测MDA-MB-231细胞PDCD4蛋白的表达；采用荧光素酶报告基因试剂盒检测转染不同载体后荧光强度的变化来判断miR-21的靶标；采用Transwell实验检测各组细胞的迁移和侵袭数目。结果： miR-21和PDCD4 mRNA在MDAMB-231细胞中的表达水平分别明显高于和低于MCF-10A细胞（P均 < 0.01）。过表达或抑制miR-21可调节PDCD4的表达水平。荧光素酶报告基因试剂盒检测结果显示miR-21可直接靶向调控PDCD4的表达。Transwell实验结果表明过表达miR-21表达能增强MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭能力。结论： 在MDA-MB-231细胞中，miR-21通过靶向调控PDCD4表达影响细胞的迁移和侵袭。miR-21可能成为抑制三阴性乳腺癌迁移和侵袭的靶点。     

miR-21通过靶向PDCD4调控三阴性乳腺癌细胞的迁移和侵袭

目的： 研究miR-21在三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231中的表达，以及其是否通过调控PDCD4影响MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭。方法： 采用实时定量PCR（qPCR）法检测MDA-MB-231细胞和正常乳腺细胞MCF-10A中miR-21和PDCD4 mRNA的表达。将MDA-MB-231细胞随机分为5组：空白对照组，转染miR-21模拟物组，模拟物对照组，转染miR-21抑制物组和抑制物对照组。采用Western blot法检测MDA-MB-231细胞PDCD4蛋白的表达；采用荧光素酶报告基因试剂盒检测转染不同载体后荧光强度的变化来判断miR-21的靶标；采用Transwell实验检测各组细胞的迁移和侵袭数目。结果： miR-21和PDCD4 mRNA在MDAMB-231细胞中的表达水平分别明显高于和低于MCF-10A细胞（P均 < 0.01）。过表达或抑制miR-21可调节PDCD4的表达水平。荧光素酶报告基因试剂盒检测结果显示miR-21可直接靶向调控PDCD4的表达。Transwell实验结果表明过表达miR-21表达能增强MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭能力。结论： 在MDA-MB-231细胞中，miR-21通过靶向调控PDCD4表达影响细胞的迁移和侵袭。miR-21可能成为抑制三阴性乳腺癌迁移和侵袭的靶点。     

人乳腺癌组织中miR-34a的表达及其在乳腺癌细胞系中的功能研究

目的 探讨miR-34a在人乳腺癌组织和细胞中的表达情况及对乳腺癌细胞系MDA-MB-231增殖、迁移侵袭和凋亡等生物学行为的影响,为研究乳腺癌组织中miR-34a的作用及深入了解乳腺癌发生发展的分子机制奠定理论基础。方法 通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测miR-34a在20例人乳腺癌组织和癌旁正常组织中表达量的差异并比较其在人乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MCF-7和正常乳腺上皮细胞MCF-10A中的表达差异;体外利用脂质体转染技术,转染miR-34a的模拟物（miR-34a mimic）和标记FAM（绿色荧光）的阴性对照(negative control ,miR-NC)进入MDA-MB-231细胞,研究miR-34a对细胞增殖活性、迁移和侵袭能力以及凋亡和周期分布的影响。结果 miR-34a在乳腺癌组织中的表达量较正常癌旁组织下调(P＜0.01);在MDA-MB-231、MCF-7和MCF-10A中的表达呈依次增高的趋势(P＜0.01);转染miR-34a mimic与转染miR-NC的MDA-MB-231相比,其增殖活力、迁移和侵袭能力均下降(P＜0.01),凋亡增加(P＜0.01),细胞周期被阻滞在G1/G0期（P＜0.01）。结论 miR-34a在乳腺癌组织和细胞系MDA-MB-231及MCF-7中的表达较正常组织和MCF-10A中都明显下调;miR-34a能够抑制肿瘤细胞MDA-MB-231的增殖、侵袭迁移,增加细胞凋亡率,使细胞周期阻滞在G0/G1;miR-34a可能起到抑癌作用,其表达水平与乳腺癌的发生发展密切相关。     

沉默CD44表达对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖与侵袭的影响

目的:探索乳腺癌细胞MDA-MB-231及MCF-7中CD44分子的表达水平差异及沉默CD44对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、侵袭和迁移的影响。方法:利用qRT-PCR及Western blot技术检测细胞中CD44基因表达水平;设计并合成CD44的siRNA片段(CD44-siRNA)转染乳腺癌细胞,利用qRT-PCR、Western blot技术检测细胞中CD44基因表达水平的变化;MTT检测MDA-MB-231细胞增殖;Transwell侵袭实验检测MDA-MB-231细胞的迁移与侵袭能力变化。结果:CD44在侵袭性乳腺癌细胞MDA-MB-231中的表达高于非侵袭性乳腺癌细胞MCF-7,CD44-siRNA下调了 MDA-MB-231细胞中CD44 mRNA与蛋白水平的表达,并抑制了细胞的增殖和侵袭转移能力。结论:CD44-siRNA能够下调CD44的表达,并有效抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖及其侵袭迁移力。     

紫甘薯花色苷通过 circ_0003998/miR-145 轴调控乳腺癌 MDA-MB-231 细胞的增殖、迁移和侵袭

目的：探讨紫甘薯花色苷（purple sweet potato anthocyanin, PSPA）是否通过 circ_0003998/miR-145 轴调控乳腺癌 MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭。方法：选用乳腺癌MDA-MB-231细胞,将其分为对照组,200、400和800 μg/ml PSPA 组,pcDNA 组、pcDNA-circ_0003998 组、si-NC 组、si-circ_0003998 组、si-circ_0003998+anti-miR-145 组、PSPA+pcDNA 组、PSPA+ pcDNA-circ_0003998 组和 PSPA+anti-miR-145 组。用 qPCR 法检测细胞中 circ_0003998 和 miR-145 的表达,CCK-8 法、Transwell 小室法分别检测转染前后细胞的增殖、迁移和侵袭能力,WB法检测细胞中Ki-67、MMP-2 和 MMP-9 蛋白的表达。用双荧光素 酶报告基因实验验证circ_0003998与miR-145 的靶向关系。结果：与对照组比较,各剂量PSPA组 MDA-MB-231细胞的增殖抑 制率、miR-145表达水平均显著升高（均P<0.01）Ki-67、MMP-2、MMP-9蛋白和circ_0003998的表达水平、细胞迁移和侵袭细胞数 均显著降低（均P<0.01）,并呈现浓度依赖性。circ_0003998可以靶向负调控miR-145的表达。敲减circ_0003998后,MDA-MB-231细 胞的增殖抑制率、miR-145表达水平显著升高,Ki-67、MMP-2 和 MMP-9 蛋白表达水平、细胞迁移和侵袭细胞数均显著减少（均P<0.01）。共转染si-circ_0003998和anti-miR-145则可逆转敲减circ_0003998表达对MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭的抑制 作用,过表达circ_0003998或抑制miR-145表达可逆转PSPA对MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论：PSPA通 过circ_0003998/miR-145轴抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭。     

miRNA-210对人乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的： 探讨miRNA-210（miR-210）在人乳腺癌组织中的表达及其对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、迁移和侵袭的影响。 方法： 收集2011年10月至2012年6月期间昆明医科大学第一附属医院20例乳腺癌患者组织标本,real-time PCR检测乳腺癌组织和癌旁组织以及乳腺癌细胞MDA-MB-231和正常乳腺细胞MCF-10a中miR-210的表达。采用LipofectamineTM 2000将miR-210 inhibitor转染至MDA-MB-231细胞中,通过荧光显微镜检测miR-210的转染效率,MTT和软琼脂克隆形成实验检测MDA-MB-231细胞的增殖,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Transwell法检测细胞的迁移、侵袭能力。 结果： miR-210在乳腺癌组织和MDA-MB-231细胞中的表达水平均显著高于癌旁组织和正常乳腺细胞（P<0.01）。miR-210 inhibitor成功转染MDA-MB-231细胞,转染效率为（88.29±2.98）%,转染miR-210 inhibitor后MDA-MB-231细胞的增殖和克隆形成能力明显减弱（P<0.05）,被阻滞于G0/G1期的细胞数明显增多\[（64.23±3.12）% vs （55.53±0.96）%,P<0.01\],凋亡细胞比例也显著增加\[（31.90±3.05）% vs （15.98±0.63）%,P<0.01\],细胞的迁移\[（291.00±43.12） vs （1137.38±83.49）个,P<001\]、侵袭\[（131.63±32.01） vs （647.88±31.20）个,P<0.01\]均受到明显抑制。 结论： miR-210在乳腺癌组织和细胞中过表达,转染miR-210 inhibitor后乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖、迁移和侵袭能力明显减弱。     

miR-124 在乳腺癌中的表达及其作用机制研究

目的:探讨m iR- 124 表达与乳腺癌发生、发展的相关性及机制。方法:运用实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测乳腺癌细胞系以及52例患者乳腺癌癌组织和对应的癌旁正常组织样本中miR-124 的表达水平。在乳腺癌细胞株MDA-MB-231和T-47D 中过表达miR-124 后,测定细胞增殖活性以及侵袭转移能力。构建荧光素酶报告载体pMIR- 特异性蛋白1（specificityprotein 1,SP1）的3'UTR,利用荧光素酶活性检测鉴定miR-124 的预测靶基因SP1。qRT-PCR和Westernblot法分别检测SP1 的mRNA 和蛋白质的表达水平。结果:miR-124 在乳腺癌细胞系和癌组织中表达量下调,差异具有统计学意义（P < 0.01）,并与肿瘤的转移、分期、分级和预后相关。在乳腺癌细胞株MDA-MB-231 和T-47D 中过表达miR-124 后抑制乳腺癌细胞系的增殖、侵袭以及迁移（P < 0.01）。 转染miR-124 模拟物显著抑制荧光素酶的活性（P < 0.05）。 转染miR-124 模拟物显著下调MDA-MB-231 和T-47D 细胞中SP1 的mRNA（P < 0.05）和蛋白质的表达水平。结论:miR-124 在乳腺癌癌组织中低表达,miR-124 低表达与乳腺癌不良预后有关,且miR-124 可通过调控转录因子SP1 抑制乳腺癌癌细胞的增殖、侵袭和转移。miR-124 表达异常减少可能是乳腺癌发生、发展的重要因素。      

外泌体介导的Let-7a 通过下调MYC表达抑制三阴性乳腺癌细胞的恶性生物学行为

[摘要] 目的：探讨外泌体(EXO)传输Let-7a 调控MYC基因在三阴性乳腺癌（TNBC）细胞恶性生物学行为中的作用及其机制。方法：TNBC细胞MDA-MB-231 培养完成后,qPCR实验检测TNBC组织和细胞中MYC与Let-7a mRNA的表达水平,WB实验检测MYC与Let-7a 蛋白的表达水平。携Let-7a 重组慢病毒和敲除MYC的Crisper/Cas-9 系统分别转染MDA-MB-231 细胞,MTT、Transwell、划痕愈合实验检测MDA-MB-231 细胞增殖、侵袭和迁移能力。荧光素酶活性实验验证MYC和Let-7a 的作用靶点。分别在野生型和过表达Let-7a 的MDA-MB-231 细胞中分离EXO,并以透射电镜和WB实验鉴定。qPCR、WB、MTT、Transwell等实验检测两种EXO分别和MDA-MB-231 细胞共孵育后Let-7a 通过EXO影响MDA-MB-231 细胞的生物学功能。结果：Let-7a 与MYC在TNBC组织和细胞系中表达呈负相关（P<0.05）;MYC促进MDA-MB-231 细胞的增殖、迁移与侵袭,Let-7a 可以抑制MDA-MB-231 细胞的增殖、迁移与侵袭（均P<0.01）。Let-7a 通过作用于MYC基因的3''UTR 使其沉默,从而减少MYC蛋白的表达（P＜0.05）。Let-7a 由EXO包裹运输至肿瘤细胞,进而抑制MDA-MB-231 细胞的增殖、迁移与侵袭能力（P<0.05）。结论：EXO介导的Let-7a通过作用于MYC基因3’UTR区使得MYC基因沉默,从而抑制MDA-MB-231 细胞的增殖、迁移与侵袭。     

miR-130a-3p通过HGF/MET信号通路抑制乳腺癌细胞MCF-7 侵袭

目的：探究miR-130a-3p 通过HGF/MET信号通路调控上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）影响乳腺癌细胞侵袭转移的分子机制。方法：收集承德医学院附属医院2018 年1 月至10 月收治的22 例乳腺癌患者癌组织和配对癌旁组织标本,乳腺癌细胞系（MCF-7、MDA-MB-231 和MDA-MB-453）和正常乳腺上皮细胞MCF10A来自承德医学院基础研究所,然后采用qPCR检测组织和细胞系中miR-130a-3p 的表达情况;将实验分为对照组、miR-130a-3p mimics 组、miR-130a-3p inhibitor组、PHA665752（MET小分子抑制剂）转染组及共转PHA665752+miR-130a-3p inhibitor 组,然后采用CCK-8 法和Transwell 实验分别检测MCF-7 细胞增殖活力、侵袭和迁移能力;WB实验检测MCF-7 细胞EMT和HGF/MET信号通路相关蛋白的表达情况;此外,采用双荧光素酶报告基因检测miR-130a-3p 与MET之间的靶向关系。结果：miR-130a-3p 在乳腺癌组织和细胞系中呈低表达;过表达miR-130a-3p 可抑制MCF-7 细胞增殖、侵袭、迁移和EMT;而抑制miR-130a-3p 出现相反的结果。双荧光素酶报告基因结果证实miR-130a-3p 靶向下调MET的表达水平,且miR-130a-3p 负调控HGF/MET信号通路的表达;进一步实验证明,miR-130a-3p 通过阻断HGF/MET信号通路抑制MCF-7 细胞增殖、侵袭、迁移和EMT。结论：miR-130a-3p 通过阻断HGF/MET信号通路抑制MCF-7 细胞EMT过程,进而抑制MCF-7 细胞侵袭转移。     

LINC02163靶向miR-338-3p影响乳腺癌细胞增殖、侵袭及迁移

背景与目的： 长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）已被发现在乳腺癌中失调,与肿瘤恶性行为密切相关。本研究旨在探究LINC02163靶向miR-338-3p对乳腺癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响。方法： 收集郑州人民医院2020年1月—2021年9月收治的9例乳腺癌患者的乳腺癌组织及距其2 cm外的癌旁组织样本,通过实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR）检测组织样本、人正常乳腺上皮细胞系（MCF-10A）和乳腺癌细胞系（MCF-7、BT-20、MDA-MB-231、T47D）中LINC02163的表达。将MDA-MB-231分为control组、sh-NC组、sh-LINC02163组、sh-LINC02163+inhibitor-NC组和sh-LINC02163+miR-338-3p inhibitor组。采用MTT法、transwell实验及划痕实验分别检测MDA-MB-231细胞活力、侵袭及迁移能力。采用蛋白质印迹法（Western blot）检测MDA-MB-231细胞c-Myc、基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP）2、MMP9、E-钙粘素（E-cadherin）及N-钙粘素（N-cadherin）蛋白的表达。通过双荧光素酶报告基因实验分析LINC02163与miR-338-3p的靶向关系。采用体内成瘤实验检测BALB/c裸鼠肿瘤体积及重量。采用免疫组织化学法检测裸小鼠移植瘤组织的Ki-67增殖指数。结果： 与癌旁组织相比,LINC02163在乳腺癌组织中的表达显著升高（P<0.05）。与MCF-10A细胞相比,LINC02163在MCF-7、BT-20、MDA-MB-231及T47D细胞中的表达均显著升高,并且其在MDA-MB-231细胞中升高最为显著（P<0.05）。与control组比,sh-LINC02163组LINC02163表达、细胞存活率、侵袭细胞数及迁移率、c-Myc、MMP2、MMP9、N-cadherin表达、肿瘤体积及重量、Ki-67增殖指数显著降低,miR-338-3p、E-cadherin表达显著升高（P<0.05）。与sh-LINC02163组相比,sh-LINC02163+miR-338-3p inhibitor组LINC02163表达无显著变化（P>0.05）,细胞存活率、侵袭细胞数及迁移率、c-Myc、MMP2、MMP9、N-cadherin表达、肿瘤体积及重量、Ki-67增殖指数显著增加,miR-338-3p、E-cadherin表达显著降低（P<0.05）。在乳腺癌中LINC02163与miR-338-3p存在潜在的靶向关系。结论： 沉默LINC02163表达通过促进miR-338-3p表达来抑制乳腺癌细胞增殖、侵袭及迁 移。     

miR-21通过靶基因ZNF326调控乳腺癌细胞侵袭、迁移的分子机制研究

目的:探讨微小RNA-21（miR-21）靶向锌指蛋白326(ZNF326)对乳腺癌细胞侵袭、迁移的影响及其分子机制。方法:采用qRT-PCR与Western blot法检测乳腺癌细胞株HCC70、MDA-MB-231、BT549、MDA-MB-468与正常细胞株HBL-100中miR-21与ZNF326的表达。以miR-21表达量最高的乳腺癌HCC70细胞为研究对象，分为NC组、anti-miR-con组、anti-miR-21组、pcDNA-control组、pcDNA-ZNF326组；共转染分组为anti-miR-21+si-con组、anti-miR-21+si-ZNF326组。MTT法检测细胞增殖能力，Transwell迁移及侵袭实验检测细胞迁移及侵袭能力。双荧光素酶报告基因系统验证miR-21与ZNF326的靶向调控关系。Western blot法检测CDK1、MMP-2蛋白的表达。结果:与正常细胞株HBL-100相比，乳腺癌细胞株HCC70、MDA-MB-231、BT549、MDA-MB-468中miR-21高表达，ZNF326 mRNA及蛋白表达水平均显著下降；分别与anti-miR-con组、pcDNA-control组比较，anti-miR-21组与pcDNA-ZNF326组HCC70细胞增殖能力显著下降，细胞迁移及侵袭能力明显降低，CDK1、MMP-2的表达水平明显降低；双荧光素酶实验结果表明miR-21能靶向结合ZNF326的3' UTR并调控其表达；与anti-miR-21+si-con组相比，anti-miR-21+si-ZNF326组HCC70细胞增殖、迁移及侵袭能力均明显增强，促进CDK1、MMP-2表达。结论:miR-21可靶向抑制ZNF326基因的表达，进而促进乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭。     

环加氧酶-2 通过调控EMT促进乳腺癌MDA-MB-231 细胞的迁移和侵袭

[摘要] 目的：探讨环加氧酶-2（COX-2）在乳腺癌转移中的作用及其可能的机制。方法：收集从2015 年10 月至2018 年4 月在云南省肿瘤医院接受乳腺切除术的患者中获得的原发乳腺癌组织和脑转移乳腺癌组织临床病理样本共45 例,其中原发30 例、脑转移15 例。采用qPCR检测COX-2 在原位乳腺癌和脑转移乳腺癌组织中的表达。将COX-2 过表达重组病毒（LV6-COX2）或敲减COX-2 重组病毒（LV3-COX2 shRNA1、LV3-COX2 shRNA2）感染人乳腺癌MDA-MB-231 细胞并获得稳转细胞株后,CCK-8法检测COX-2 表达对MDA-MB-231 细胞增殖的影响,划痕实验和Transwell 法检测对MDA-MB-231 细胞迁移和侵袭的影响。qPCR和WB实验分析各组细胞中COX-2 mRNA和蛋白的表达水平,qPCR检测COX-2 表达对MDA-MB-231 细胞内EMT相关基因表达的影响。结果：COX-2 表达水平在脑转移乳腺癌患者组织中显著高于原位乳腺癌组织（P<0.01）;并且与乳腺癌患者肿瘤TMN分期有关。成功构建稳定过表达/敲减COX-2 的MDA-MB-231 细胞株。过表达COX-2 促进MDA-MB-231 细胞的迁移和侵袭（均P<0.01）,同时显著提高MMP2、MMP1、N-cadherin 和vimentin 的表达（均P<0.01）,但对细胞增殖无明显影响;而沉默COX-2 则有相反的作用,且可促进细胞增殖（P<0.05）。结论：COX-2 在脑转移乳腺癌组织中高表达,其可能通过调控EMT过程促进乳腺癌MDA-MB-231 细胞的迁移和侵袭。     

LncRNA NBAT1通过调控miR-3664-5p/Caspase 9分子轴对人乳腺癌细胞增殖的影响

目的 探究lncRNA NBAT1通过调控miR-3664-5p/Caspase 9分子轴对人乳腺癌细胞增殖的影响。方法 通过在线生物软件分析TCGA(The Cancer Genome Atlas)数据库比较lncRNA NBAT1在乳腺癌和正常乳腺组织中的表达量。RT-qPCR方法比较正常细胞株MCF-10A和乳腺癌细胞株MCF-7、MDA-MB-231及MDA-MB-453中lncRNA NBAT1的表达水平。生物信息学预测lncRNA NBAT1、miR-3664-5p、Caspase 9三者之间关系,并进一步通过荧光素酶报告系统进行验证;lncRNA NBAT1过表达载体转染乳腺癌MCF-7细胞株,RT-qPCR检测转染后lncRNA NBAT1的表达,qPCR检测miR-3664-5的表达,Western blot检测Caspase 9的蛋白表达水平;CCK-8和克隆形成实验检测细胞的增殖能力;同时将lncRNA NBAT1过表达载体和mimics miR-3664-5p转染MCF-7细胞,观察mimics miR-3664-5p对lncRNA NBAT1抑制细胞增殖能力产生的缓解效应。结果 TCGA数据库分析发现,lncRNA NBAT1在乳腺癌组织中的表达量显著低于正常组织(P＜0.001);qPCR检测发现lncRNA NBAT1在正常细胞株MCF-10A细胞中表达量最高(P＜0.001),MDA-MB-231和MDA-MB-453细胞中表达量比MCF-10A细胞低(P＜0.001),MCF-7细胞表达量最低(P＜0.001);通过生物信息学预测lncRNA NBAT1可以吸附miR-3664-5p,Caspase 9是miR-3664-5p的靶基因,并进一步通过荧光素酶报告系统进行验证;lncRNA NBAT1过表达载体转染乳腺癌细胞株MCF-7,qRT-PCR检测发现pc-NBAT1组比pc-NC组LncRNA NBAT1的表达增高(P＜0.001),miR-3664-5的表达降低(P＜0.001),Western blot检测发现pc-NBAT1组比pc-NC组Caspase 9的表达增高(P＜0.001)。CCK-8和克隆形成实验发现pc-NBAT1组比pc-NC组细胞的增殖能力降低(P＜0.001);同时将lncRNA NBAT1过表达载体和mimics miR-3664-5p转染MCF-7细胞,发现mimics miR-3664-5p能够对lncRNA NBAT1抑制细胞增殖能力产生缓解效应(P＜0.001)。结论 lncRNA NBAT1通过调控miR-3664-5p/Caspase 9分子轴抑制乳腺癌细胞的增殖,为乳腺癌治疗提供新的潜在靶点。     

miR-26b-3p对乳腺癌细胞生物学行为的影响及作用机制研究

背景与目的：miRNA是一类长度为21~23个核苷酸的单链非编码RNA分子，其作用机制主要为靶向于mRNA的3’非翻译区（3’ untranslated region，3’UTR）从而抑制其靶基因的表达。miRNA在肿瘤的发生、发展过程中发挥着关键作用，探讨miR-26b-3p对乳腺癌生物学行为的影响及作用机制。方法：通过实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction，RTFQ-PCR）检测miR-26b-3p在三种乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231和MDA-MB-453中的表达，选取miR-26b-3p表达水平最低的乳腺癌细胞转染miR-26b-3p mimics后，采用细胞计数试剂盒（cell counting kit-8，CCK-8）法检测细胞的增殖，采用transwell迁移和侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力，通过小动物活体成像及裸鼠移植瘤模型检测miR-26b-3p对乳腺癌细胞裸鼠移植瘤生长和转移的影响，采用双荧光素酶报告基因分析检测miR-26b-3p与锌指E盒结合同源盒基因1（zinc finger E-box binding homeobox 1，ZEB1）的相互作用，采用RTFQ-PCR和蛋白质印迹法（Western blot）检测ZEB1的表达。结果：乳腺癌细胞系MDA-MB-453中miR-26b-3p表达最低，在MDA-MB-453细胞中转染miR-26b-3p mimics后，miR-26b-3p的表达水平显著升高（P<0.05），细胞的增殖能力显著降低（P<0.05），细胞的迁移（P<0.001）和侵袭能力（P<0.01）显著降低。过表达miR-26b-3p可抑制裸鼠体内乳腺癌移植瘤的生长和转移。miR-26b-3p可与ZEB1的3’UTR结合，抑制ZEB1的表达。结论：miR-26b-3p可靶向于ZEB1，抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭，抑制乳腺癌的生长和转移。     

miR-26a通过调控E2F7、Myc抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖和迁移能力

目的:研究miR-26a对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和迁移能力的影响,并分析miR-26a 调控增殖与迁移的可能机制。方法:应用实时荧光定量PCR法(QPCR)检测乳腺癌细胞系和正常乳腺上皮细胞中miR-26a的表达水平,并检测三阴型乳腺癌组织及相应正常乳腺组织中miR-26a与E2F7 mRNA的表达水平。应用脂质体介导的方法,以miR-26a mimics与E2F7 siRNA瞬时转染MDA-MB-231细胞,实时荧光定量PCR法检测miR-26a表达水平,Western blot法检测E2F7、Myc蛋白的表达水平。MTT法检测MDA-MB-231细胞的增殖能力,划痕实验检测MDA-MB-231细胞迁移能力。结果:乳腺癌细胞中miR-26a的表达水平均低于正常乳腺细胞MCF-10A,且三阴型乳腺癌细胞表达水平降低最明显。三阴型乳腺癌组织中miR-26a相对于正常乳腺组织表达减低,而E2F7 mRNA表达则显著升高。miR-26a mimics转染后miR-26a表达水平显著升高,miR-26a过表达可抑制E2F7、Myc蛋白的表达;E2F7 siRNA转染后E2F7表达水平减低,Myc蛋白表达亦减低。MTT实验结果示miR-26a过表达可抑制MDA-MB-231细胞增殖,划痕实验示miR-26a过表达可抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移能力。结论:miR-26a可能通过抑制E2F7、Myc调控乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖与迁移能力。