缺氧对胃癌细胞 BMPR -1A 表达及其侵袭和迁移能力的影响

目的：检测胃癌细胞中BMPR-1A在常氧和缺氧条件下的表达;探讨两种不同条件下BMPR-1A的不同表达对胃癌细胞侵袭和迁移的影响.方法：常氧条件下（氧气浓度20%）常规培养胃癌细胞SGC7901和MKN28;缺氧条件下（氧气浓度1%）用二氧化碳/氧气/氮气三气培养箱培养胃癌细胞SGC7901和MKN28 24小时.分别用蛋白质免疫印迹（Western blot）和实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）的方法在蛋白水平和mRNA水平测定BMPR-1A的表达,以明确BMPR-1A在常氧与缺氧两种不同条件下的差异性表达;同时以Transwell实验检测在常氧和缺氧条件下由于BMPR-1A的差异性表达对胃癌细胞SGC7901和MKN28侵袭和迁移的影响.结果：缺氧条件下刺激胃癌细胞24h后,无论是在蛋白水平还是mRNA水平,BMPR-1A表达明显下降;Transwell实验结果也显示胃癌细胞接受缺氧刺激后其侵袭和迁移能力显著增强.结论：缺氧有增加胃癌细胞侵袭和迁移的能力,该作用机制可能与缺氧导致BMPR-1A的表达下降有关.     

LncRNA-AK058003在缺氧诱导胃癌侵袭转移中的作用

目的:探讨lncRNA-AK058003在缺氧诱导胃癌侵袭和转移中的作用。方法:SGC7901、MKN45、MKN28三个胃癌细胞系,分别经常氧/缺氧孵育24h后,Trizol法提取3例配对的胃癌细胞总RNA,利用高通量lncRNA芯片比较它们之间的表达谱差异。通过差异倍数、邻近编码基因信息分析、长度特征分析等策略初步筛选与缺氧诱导胃癌侵袭转移相关的关键分子。RT-PCR法检测lncRNA-AK058003在缺氧诱导的胃癌细胞中相对于常氧条件下的表达水平,进一步检测其在20例胃癌临床标本中相对于癌旁组织的表达水平。构建小干扰RNA慢病毒,稳定下调AK058003在SGC7901及MKN45中的表达。Transwell、划痕实验、裸鼠尾静脉注入不同胃癌细胞等体外和体内实验检测抑制AK058003后对常氧和缺氧条件下胃癌侵袭转移的影响。结果:高通量lncRNA 芯片比较发现:缺氧诱导的胃癌细胞SGC7901、MKN45和MKN28与常氧条件下的细胞相比,有84个分子的表达在缺氧诱导的胃癌细胞中显著上调(P<0.05),其中差异倍数在3倍以上的共有5个。多重筛选策略提示AK058003可能是缺氧诱导胃癌侵袭转移的关键lncRNA分子之一。RT-PCR结果显示: AK058003在缺氧诱导的胃癌细胞中显著上调,其分别在SGC7901缺氧16h,MKN45缺氧24h,MKN28缺氧48h时达到峰值。进一步RT-PCR结果发现,AK058003在胃癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织。缺氧条件下的Transwell实验结果显示缺氧能够显著增加SGC7901和MKN45的侵袭转移力,而抑制AK058003的表达后,胃癌细胞侵袭转移力明显下降。结论:通过高通量 lncRNA芯片比较,首次发现了一系列胃癌细胞中缺氧相关的lncRNAs 分子。通过临床标本验证以及功能缺失试验证实lnc-AK058003是系列分子中影响缺氧诱导胃癌侵袭转移的关键lncRNAs分子之一。     

lncRNA-uc003uxs在缺氧诱导胃癌侵袭转移中的作用

目的:探讨长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）-uc003uxs在缺氧诱导胃癌侵袭和转移中的作用。方法:三个胃癌细胞系SGC7901、MKN45、MKN28分别经常氧和缺氧孵育 24 h ,提取3例配对的胃癌细胞总RNA,利用高通量lncRNA芯片比较它们之间的表达谱差异,初步筛选与缺氧诱导胃癌侵袭转移相关的关键分子。RT-PCR法检测 lncRNA-uc003uxs在缺氧诱导的胃癌细胞（相对于常氧诱导的胃癌细胞）以及20对胃癌组织（相对于癌旁组织）中的表达水平。通过慢病毒转染,稳定下调SGC7901和MKN28细胞中lncRNA-uc003uxs的表达。通过Transwell迁移和侵袭实验以及裸鼠尾静脉注射内脏转移实验检测lncRNA-uc003uxs下调后对胃癌细胞侵袭和转移能力的影响。结果:高通量芯片分析结果显示:与常氧诱导的胃癌细胞相比,缺氧诱导的胃癌细胞 SGC7901、MKN45和MKN28中有84个共同上调的lncRNA分子以及70个共同下调的lncRNA分子,而多重筛选策略则提示:lncRNA-uc003uxs可能是缺氧诱导胃癌侵袭转移的关键lncRNA分子之一。RT-PCR结果表明:lncRNA-uc003uxs在缺氧诱导的胃癌细胞SGC7901、MKN45和MKN28中显著上调,其在胃癌组织中的表达水平也显著高于癌旁组织。Transwell实验结果显示:缺氧能够显著增加SGC7901和MKN28细胞的迁移和侵袭能力,而下调lncRNA-uc003uxs的表达后,两种细胞的迁移和侵袭能力明显下降。此外,裸鼠尾静脉内脏转移实验也证实lncRNA-uc003uxs的下调抑制了胃癌细胞SGC7901的体内肝肺转移能力。结论:利用高通量芯片筛选,在胃癌细胞中发现了一系列缺氧相关的lncRNA分子。临床标本分析及功能缺失试验证实:lncRNA-uc003uxs是一个缺氧诱导胃癌侵袭转移的关键lncRNA分子。     

LncRNA-MALAT1在缺氧诱导胃癌侵袭转移中的作用

目的:探讨LncRNA-MALAT1对缺氧诱导胃癌侵袭转移的影响。方法:RT-PCR检测胃癌组织标本和胃癌细胞株中MALAT1的表达;通过基因重组方法构建MALAT1的siRNA载体,并感染人SGC7901及MKN45胃癌细胞,RT-PCR验证siRNA干扰有效;Transwell实验研究其对胃癌细胞SGC7901及MKN45侵袭转移能力的影响。结果:MALAT1在胃癌组织和胃癌细胞株中的表达高于癌旁组织和胃正常上皮细胞;缺氧能够促进SGC7901及MKN45细胞的侵袭转移能力,而下调MALAT1能够明显抑制缺氧条件下SGC7901及MKN45细胞的侵袭转移能力。结论:MALAT1在促进胃癌细胞的侵袭转移中发挥重要作用,为胃癌靶向治疗提供理论依据。     

Gli-1信号通路对TGF-β1诱导的人胃癌细胞上皮间质转化和侵袭的影响

目的:探讨核转录因子神经胶质瘤关联癌基因同源物1（glioma associated oncogene homolog 1,Gli-1）对转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的人胃癌SGC-7901细胞发生上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）的作用机制。方法:体外采用10 ng/ml TGF-β1对胃癌SGC-7901细胞进行处理,使用倒置显微镜观察细胞形态变化,RT-PCR和Western blot检测EMT上皮表型蛋白E-cadherin和间质表型蛋白Vimentin的表达水平;Transwell细胞侵袭实验检测细胞侵袭能力变化,检测TGF-β1 对SGC-7901细胞发生EMT 的影响;同时采用RT-PCR和Western blot检测Gli-1的mRNA和蛋白表达水平。随后进一步采用Gli-1基因特异性阻断剂GANT 61阻断Gli-1表达,并使用TGF-β1（10 ng/ml）对SGC-7901细胞进行处理,RT-PCR 和Western blot检测Gli-1、E-cadherin和Vimentin mRNA 及其蛋白表达水平的改变,并使用Transwell细胞侵袭实验检测阻断Gli-1对SGC-7901细胞侵袭能力的影响。结果:TGF-β1可以诱导人胃癌SGC-7901细胞发生上皮间质转化并促进细胞侵袭。TGF-β1可以在mRNA和蛋白水平下调上皮表型蛋白E-cadherin的表达、提高Gli-1和间质表型蛋白Vimentin的表达。TGF-β1可以明显提高SGC-7901细胞侵袭,而阻断Gli-1后可以抑制TGF-β1诱导的人胃癌SGC-7901细胞上皮间质转化和细胞侵袭。结论:胃癌SGC-7901细胞中Gli-1 可能参与TGF-β1 介导的EMT 的发生,Gli-1 可能作为胃癌基因治疗中的有效靶点发挥作用。     

沉默MTA1表达对胃癌SGC7901细胞增殖和侵袭能力的影响

目的:观察转移相关基因1（MTA1）基因沉默对人胃癌细胞SGC7901增殖和迁移侵袭能力的影响,探讨 MTA1基因在胃癌发生发展中的作用。方法:利用脂质体法将靶向MTA1的小分子干扰 RNA（siRNA） 转染到胃癌细胞株 SGC7901中。运用Real time PCR 和Western blot 技术检测SGC7901细胞内MTA1的 mRNA和蛋白表达水平。CCK-8法检测细胞增殖能力,Transwell小室实验观察细胞迁移和侵袭能力。结果:MTA1 siRNA 可有效抑制SGC7901细胞MTA1基因在 mRNA 和蛋白水平上的表达（P﹤0.01）。CCK-8实验表明MTA1 siRNA 转染后细胞增殖不受影响;Transwell小室实验表明细胞迁移和侵袭能力明显下降。结论:沉默MTA1表达可抑制胃癌细胞株 SGC7901迁移和侵袭,而不影响细胞增殖。MTA1在胃癌侵袭转移过程中可能发挥重要作用。     

β-catenin在膀胱癌上皮-间质转化中的作用及相关机制

目的:探讨β-catenin在膀胱癌上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程中的作用以及相关分子机制。方法:利用siRNA靶向沉默膀胱癌细胞系T24细胞的β-catenin基因,并利用Real-time quantitative PCR和Western blot实验验证siRNA敲减效率。通过Transwell实验检测β-catenin敲减后T24细胞的侵袭能力,进一步使用Real-time quantitative PCR和Western blot实验检测β-catenin敲减后T24细胞的EMT相关标志物的变化。最后,通过下载TCGA数据库,并分析β-catenin与EMT相关标志物的相关性。结果:我们成功在mRNA和蛋白水平上沉默了β-catenin。通过Transwell实验发现,与对照组相比,β-catenin敲减组细胞的侵袭能力下调。与对照组相比,β-catenin敲减组的Slug蛋白、Vimentin蛋白和mRNA下调,E-cadherin蛋白和mRNA上调。通过分析TCGA数据库发现,β-catenin与Slug（r=0.183 5,P=0.000 2）和Vimentin (r=0.190 3,P=0.000 1)均呈正相关。结论:β-catenin通过调控Slug的表达从而调控膀胱癌细胞的EMT。     

TGF-β1通过诱导自噬促进胃癌SGC7901细胞侵袭

目的:探讨转化生长因子(TGF-β1)诱导人胃癌SGC7901细胞发生自噬的作用及其对细胞侵袭能力的影响.方法:将体外培养的人胃癌SGC7901细胞用不同浓度TGF-β1处理24 h,采用Western blot 法检测细胞中自噬标记蛋白LC3和Beclin1的表达水平.Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力变化.结果:TGF-β1可显著诱导人胃癌SGC7901细胞发生自噬,且随着浓度增加自噬表达水平逐渐升高.自噬抑制剂3-MA能够阻断TGF-β1诱导的自噬.此外,TGF-β1可显著增强人胃癌SGC7901细胞的迁移和侵袭能力,而自噬抑制剂3-MA能够逆转这一过程.结论:TGF-β1通过诱导自噬发生从而促进人胃癌SGC7901细胞的侵袭.     

HER-2对胃癌细胞生物学行为及EMT、Wnt通路的影响

目的 探讨人表皮生长因子受体-2(HER-2)的表达对胃癌细胞粘附、迁移等生物学行为的影响，并探讨其表达与上皮间质转化(EMT)及Wnt/β-catenin信号通路的关系。方法 利用小干扰RNA技术，在SGC-7901胃癌细胞中沉默HER-2表达；采用实时荧光定量PCR (qPCR)及Western blotting法验证HER-2的沉默效果，并将实验分为空白组、空载体组和HER-2沉默组；采用MTT比色法检测细胞粘附能力，Transwell小室法检测细胞迁移及侵袭能力；qPCR和Western blotting法检测EMT相关蛋白E-cadherin、Vimentin、Snail及Wnt/β-catenin信号通路GSK-3β、β-catenin、c-Myc的mRNA和蛋白表达情况。结果 HER-2沉默组中HER-2 mRNA和蛋白表达水平低于空白组和空载体组(P<0.001),而空白组和空载体组的差异无统计学意义(P>0.05)。与空白组和空载体组比较，HER-2沉默组胃癌细胞的粘附能力、迁移能力和侵袭能力均显著下降(P<0.001)。HER-2沉默组胃癌细胞Vi...     

肿瘤坏死因子-β1通过诱导上皮-间质转化促进人膀胱癌T24细胞株的侵袭

目的:体外实验研究TGF-β1诱导人膀胱癌细胞T24发生上皮-间质转化（EMT）的作用及其机制。方法:以人膀胱癌细胞T24作为研究对象,使用不同浓度TGF-β1干预24 h,光镜下观察T24细胞形态学变化;分别采用Real time-PCR（RT-PCR）和Western blot 法检测细胞中上皮表型蛋白E-cadherin和间质表型蛋白Vimentin mRNA 和总蛋白的表达。Transwell小室实验检测细胞的侵袭与迁移潜能。结果:TGF-β1可激活T24细胞的EMT程序,并上调Vimentin mRNA 和蛋白的表达水平和下调E-cadherin mRNA 和蛋白的表达水平。此外,TGF-β1可促进T24细胞体外侵袭潜能,而TGF-β1拮抗剂LY2109761可阻断这一过程。结论:EMT过程的激活参与了TGF-β1介导的人膀胱癌T24细胞的侵袭。     

沉默PD-L1基因表达抑制胃癌细胞黏附、迁移、侵袭及上皮间质转化

目的:初步探讨程序性死亡受体配体（programmed death-ligand 1,PD-L1）对胃癌细胞SGC7901侵袭、迁移的影响及PD-L1表达对上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）的影响。方法:采用siRNA干扰技术,下调SGC7901细胞株中PD-L1的表达,采用RT-PCR法及Western blot法验证PD-L1的沉默,并将后续实验分为空白对照组、空载体组（siRNA-NC组）及PD-L1沉默组（siRNA-PD-L1组）。采用RT-PCR法及Western blot法分别对各组细胞EMT相关指标（E-cadherin、Vimentin、Snail）的mRNA和蛋白表达情况进行检测。利用MTT实验比较各组细胞的黏附能力,Transwell小室实验比较各组细胞的迁移能力及侵袭能力。结果:下调PD-L1表达后,siRNA-PD-L1组Vimentin及Snail 两项指标的mRNA和蛋白表达量,细胞的黏附能力、迁移能力及侵袭能力均低于空白对照组和siRNA-NC组,E-cadherin mRNA和蛋白表达量高于其他两组,差异均具有统计学意义（P＜0.001）,而空白对照组和siRNA-NC组之间上述指标的差异无统计学意义。结论:PD-L1的表达影响胃癌细胞黏附、迁移、侵袭等生物学行为,促进胃癌细胞的上皮间质转化,与胃癌的预后可能存在相关性。     

CDKL1对胃癌细胞迁移及侵袭的作用

目的:探讨细胞周期素依赖激酶样蛋白1(CDKL1)对胃癌细胞系SGC7901迁移及侵袭的作用.方法:将胃癌细胞系SGC7901分为实验组及对照组,采用慢病毒转染siRNA至胃癌细胞构成实验组,转染无意义序列作为对照组.通过细胞划痕实验检测胃癌SGC7901细胞的迁移能力;Transwell小室实验检测其侵袭能力;Western blot检测CDKL1低表达后对胃癌细胞中AEG-1和MMP-9蛋白表达的影响.结果:与对照组相比,CDKL1低表达后实验组细胞迁移及侵袭能力明显降低(P＜0.05),实验组胃癌细胞中AEG-1和MMP-9蛋白的表达水平明显下降(P＜0.05).结论:特异性下调CDKL1基因可抑制胃癌细胞的迁移及侵袭能力,表明CDKL1基因可促进胃癌细胞的侵袭以及转移,并且与AEG-1和MMP-9密切相关.     

Bmi-1基因RNAi对胃癌细胞SGC7901及AGS作用的初步研究

目的:构建Bmi-1基因的RNAi表达载体,观察其对胃癌细胞SGC7901与AGS增殖、侵袭能力的影响.方法:利用慢病毒表达体系pHelper1.0/pHelper2.0/pGCL-GFP,构建Bmi-1基因的RNAi重组质粒vshRNA-Bmi-1.适时定量PCR和蛋白质印迹法分别检测稳定转染vshRNA-Bmi-1后胃癌细胞中Bmi-1 mRNA及蛋白的表达;MTT法及小室侵袭实验检测胃癌细胞增殖和侵袭能力的变化.结果:稳定转染vshRNA-Bmi-1后SGC7901及AGS细胞Bmi-1 mRNA表达均明显下降,抑制率分别为85%及80%.SGC7901细胞中Bmi-1蛋白表达无明显变化,而在AGS细胞中明显下降.Bmi-1干扰后SGC7901细胞的生长及侵袭能力无明显变化,而AGS细胞增殖减慢、侵袭能力减弱.结论:成功构建Bmi-1基因的RNAi表达载体,vshRNA-Bmi-1重组质粒明显下调Bmi-1 mRNA 在胃癌细胞SGC7901和AGS中的表达.Bmi-1基因的RNAi能抑制胃癌细胞AGS的增殖和侵袭能力.     

干扰FBXO2表达对胃癌细胞增殖、侵袭、迁移及EMT的影响

目的：探讨F框蛋白2（F-box only protein 2,FBXO2）基因在人胃癌细胞系中表达及其对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭和EMT 的影响。方法：选择胃癌细胞系 MGC-803、AGS、SGC-7901、MKN-28以及正常胃黏膜上皮细胞株 GES-1,qPCR 法检测细胞中FBXO2 mRNA表达水平。设计靶向抑制FBXO2表达的特异siRNA,并瞬时转染MGC-803细胞,转染siRNA无义序列的为阴性对照。qPCR法检测转染48 h后MGC-803细胞中FBXO2 mRNA表达水平;用MTT法、细胞划痕愈合法、Transwell小室法检测降低 FBXO2表达对细胞增殖、迁移和侵袭的影响,WB 法检测细胞中 EMT 相关蛋白 E-cadherin、N-cadherin、vimentin的表达。结果：4种胃癌细胞中FBXO2 mRNA表达水平显著高于胃黏膜上皮细胞GES-1（P<0.05或P<0.01）。与阴性对照组相比,siRNA[1]FBXO2组MGC-803细胞中FBXO2 mRNA表达下调（P<0.01）,该细胞的增殖、迁移和侵袭能力受到显著抑制（P<0.05或P<0.01）,E-cadherin蛋白表达明显升高（P<0.01）,N-cadherin、vimentin蛋白表达显著降低（均 P<0.01）。结论：低表达的 FBXO2可抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,该抑制作用可能与EMT过程有关。     

缺氧诱导宫颈癌Siha细胞发生上皮-间叶转化的研究

目的 探讨宫颈癌Siha细胞在二氯化钴(CoCl₂)诱导的化学缺氧环境中能否发生上皮-间叶转化(EMT),从而获得侵袭性表型,并初步分析其分子机制。方法 划痕实验及Transwell体外侵袭实验检测化学缺氧对细胞迁移、侵袭及转移能力的影响;Western blot印迹法、细胞免疫化学及免疫荧光检测缺氧对Siha细胞缺氧诱导因子1α（HIF-lα）、上皮细胞标记分子E-cadherin、间叶细胞标记分子vimentin表达的影响;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测缺氧对EMT诱导因子snail、zeb、twist mRNA表达的影响。结果 缺氧可促进人宫颈SCC Siha细胞的迁移、侵袭和转移能力;宫颈癌Siha细胞在常氧、缺氧12 h、缺氧24 h、缺氧48 h条件下E-cadherin蛋白的相对表达逐渐减少,vimentin蛋白的相对表达逐渐增加,缺氧组与常氧组比较差异有统计学意义(P<0.05);缺氧状态下HIF-1α在Siha细胞中聚集,发现Siha细胞形态发生明显变化、且伴有上皮性标记蛋白E-cadherin的表达减弱;Siha细胞twist及snail mRNA的表达与HIF-lα mRNA表达成正相关,且在缺氧12h后差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 缺氧微环境可能通过活化HIF-lα,调节twist、snail等转录因子的表达,促进宫颈癌细胞发生上皮-间叶转化,产生侵袭性表型。     

miR-153-3p通过靶向FZD3调控胃癌SGC7901细胞的增殖、侵袭与迁移

目的：探讨miR-153-3p对胃癌SGC7901细胞增殖、侵袭和迁移的作用及其机制。方法：收集2018年5月至2020年6 月宁夏医科大学总医院收治的60例胃癌患者的癌和配对癌旁组织标本,以及人胃癌细胞系NCI-N87、AGS、SNU-5、SGC7901和胃上 皮细胞 GES-1,qPCR 法检测 miR-153-3p 在胃癌组织与细胞中的表达水平。将 miR-153-3p mimic 及 mimic 对照序列转染至 SGC7901细胞,用CCK-8、克隆形成、流式细胞术、TUNEL、Transwell和划痕愈合实验分别检测上调miR-153-3p对SGC7901细胞 增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。构建裸鼠SGC7901细胞移植瘤模型,观察miR-153-3p对肿瘤生长的影响。通过生物信息学数 据库和双荧光素酶报告基因实验预测并验证miR-153-3p与FZD3靶向关系,WB法检测miR-153-3p对FZD3蛋白及Wnt/β-catenin 通路相关蛋白表达的影响。结果：miR-153-3p在胃癌组织和细胞中表达水平分别显著低于癌旁组织和GES-1细胞（均P<0.01）,以SGC7901细胞中表达水平最低。上调 miR-153-3p 显著抑制 SGC7901 细胞的增殖、侵袭和迁移能力,并提高细胞凋亡率 （均P<0.01）,同时上调细胞中E-cadherin表达而下调N-cadherin、MMP2和MMP9表达（均P<0.01）。在体内实验表明,静脉注射 miR-153-3p mimic显著降低移植瘤体积和瘤组织中Ki-67表达而上调P57表达（均P<0.01）。机制分析表明 ,miR-153-3p 靶向 结合FZD3基因的3′UTR区域,上调 miR-153-3p 会抑制FZD3表达并上调β-catenin、TCF-4和cyclin D1水平（均P<0.01）。结论： miR-153-3p靶向FZD3并通过Wnt/β-catenin信号通路调控胃癌SGC7901细胞的增殖、侵袭和迁移。     

miR-205对胃癌细胞侵袭迁移的调控作用及其潜在机制

目的 探讨miR-205对胃癌HGC27细胞侵袭、迁移的作用及其机制。方法 实时荧光定量PCR法测定4种不同胃癌细胞（AGS、MKN74、HGC27、SGC7901）中miR-205的表达情况。体外培养的HGC27细胞通过转染miR-205 mimic上调细胞中miR-205的表达,划痕实验和Transwell实验观察其侵袭和迁移能力;Western blot检测上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）进程及相关信号通路的活性。结果 miR-205在4种胃癌细胞中均呈低表达（均P<0.05）。过表达miR-205后,HGC27细胞的迁移率由（54.7±4.1）%降低至（34.1±4.5）% （P=0.005）;细胞的侵袭率由（52.8±6.3）%降低至（32.2±4.9）%（P=0.001）。此外,过表达miR-205之后,胃癌细胞中上皮细胞标志物E-cadherin、β-catenin蛋白表达显著上升（P=0.002, P=0.003）,而间质细胞标志物N-cadherin、vimentin的蛋白表达显著下降（P=0.005, P=0.004）,Notch和snail的蛋白表达水平也显著降低（P=0.002, P=0.003）。结论 miR-205在胃癌细胞中低表达,且与胃癌细胞的侵袭和迁移密切相关;其分子机制可能与抑制EMT及Notch/snail信号通路有关。     

敲低PRMT5基因表达对胃癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及其机制

目的 观察蛋白质精氨酸甲基转移酶5（PRMT5）在胃癌细胞中的表达,探讨敲低PRMT5表达水平后对胃癌细胞生物学行为的影响。方法 Western blot检测胃癌细胞系MGC803、SGC7901、MKN45和人胃黏膜上皮细胞GES-1中PRMT5蛋白表达水平,转染siRNA1和siRNA2质粒敲低PRMT5的表达水平,细胞增殖和凋亡实验、Transwell实验分别检测细胞增殖能力、凋亡率和细胞的侵袭能力,Western blot检测β-catenin、Cyclin D1和Bax蛋白表达水平。结果 与GES-1细胞比较,MGC803、SGC7901和MKN45细胞中PRMT5蛋白表达水平增加（P<0.001）。敲低PRMT5表达后细胞的增殖和侵袭能力减弱,凋亡率增加（P<0.05）,β-catenin和Cyclin D1蛋白的表达降低,Bax蛋白的表达增加（P<0.001）。结论 PRMT5在胃癌细胞中表达水平升高,敲低其表达水平后可通过减弱Wnt/β-catenin信号通路转导抑制细胞的增殖和侵袭并促进细胞凋亡。     

Gab2通过调节EMT促进胃癌的侵袭转移

目的 探讨Gab2在胃癌组织中的表达情况及其对胃癌细胞侵袭转移能力的影响与机制。方法 采用免疫组织化学SP法检测胃癌组织中Gab2、E-cadherin、N-cadherin及MMP-9的表达并分析其与淋巴结转移的关系。应用小RNA干扰技术,转染SGC7901细胞株,RT-PCR法检测瞬时转染后Gab2基因表达情况,体外侵袭实验检测细胞转染后侵袭能力的变化,Western blot法检测各蛋白的表达。结果 胃癌组织中Gab2的表达水平与淋巴结转移显著相关（P=0.002）,与E-cadherin的表达负相关（r=-0.693, P=0.000）,而与N-cadherin和MMP-9的表达水平正相关（r=0.407, P=0.021; r=0.335, P=0.017）。小RNA干扰技术降低Gab2蛋白的表达后SGC7901细胞侵袭转移能力降低,同时E-cadherin表达增多,N-cadherin和MMP-9蛋白表达降低。结论 Gab2可能通过调节EMT在胃癌侵袭转移中发挥重要作用。     

缺氧微环境下HIF-1α对胰腺癌细胞上皮间质转化及侵袭迁移的影响

目的:探讨缺氧微环境下缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α）对胰腺癌细胞上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）及侵袭迁移的影响。方法:首先比较缺氧和常氧培养的胰腺癌细胞形态和体外侵袭迁移能力,以及HIF-1α和EMT相关因子的表达水平。然后通过HIF-1α抑制剂YC-1和siRNA基因沉默分别从蛋白和mRNA水平抑制HIF-1α的表达,检测缺氧培养的胰腺癌细胞体外侵袭迁移能力,以及EMT相关基因的表达水平。结果:形态学和分子水平证实缺氧诱导人胰腺癌细胞株AsPC-1、Capan-2、Panc-1的EMT改变,增强其体外侵袭和迁移能力。缺氧上调HIF-1α、Snail、N-cadherin的表达,下调E-cadherin的表达。抑制HIF-1α的表达后,Snail和N-cadherin表达下调,E-cadherin表达上调,并且体外侵袭迁移能力降低。结论:HIF-1α介导EMT在缺氧促进胰腺癌细胞侵袭迁移中发挥重要作用。