波形蛋白对前列腺癌细胞侵袭与转移的影响

背景与目的:波形蛋白(vimentin)是一种细胞骨架蛋白,参与调节细胞的运动和增殖。本研究通过检测波形蛋白在前列腺癌细胞系中的表达,探讨其对前列腺癌细胞侵袭与转移的影响。方法:应用二维电泳-质谱分析(two-dimensionalgel electrophoresis matrix-assisted laser desorption/time of flight mass spectrometry,2-DE MALDI TOF-MS)检测波形蛋白在前列腺癌配对细胞系中的差异表达,用基因干预技术结合体外侵袭实验探讨波形蛋白对细胞侵袭能力的影响。结果:波形蛋白在前列腺癌高转移细胞系PC-3M-1E8中的表达高于低转移细胞系PC-3M-2B4中的表达。成功构建波形蛋白反义真核表达载体和正义真核表达载体,分别转染PC-3M-1E8和PC-3M-2B4细胞,转染波形蛋白反义真核表达载体的细胞(PC-3M-1E8/vas)的穿膜细胞数为99.3±4.8,明显低于空质粒对照组细胞[PC-3M-1E8/3.1(-)]的319.4±6.5(P<0.01);转染波形蛋白正义真核表达载体的细胞(PC-3M-2B4/vs)的穿膜细胞数为330.5±5.8,明显高于空质粒对照组细胞[PC-3M-2B4/3.1( )]的98.6±7.5(P<0.01)。结论:波形蛋白高表达可促进前列腺癌细胞的侵袭与转移。     

MT1-MMP反义核酸抑制高转移人卵巢癌SW626细胞的侵袭效应

背景与目的:MT1-MMP(MMP-14)是新发现的一种膜型基质金属蛋白酶,研究表明MT1-MMP在肿瘤转移中发挥关键性作用。本研究应用反义核酸技术,观察了MT1-MMP反义核酸对高转移人卵巢癌SW626细胞体外生长和侵袭的抑制效应。方法:应用自行设计的引物,借助RT-PCR技术获得两端含不同限制酶位点的MT1-MMPcDNA片段,反向插入pcDNA3.1中,并应用脂质体介导的基因转染技术,将重组质粒导入SW626细胞中,应用MTT、Westernblot、明胶酶谱和体外侵袭实验等方法观察了SW626细胞转染前后,细胞生长、MT1-MMP蛋白表达、MMP-2和MMP-9酶活性及细胞体外侵袭能力等指标的变化。结果:成功构建了反义MT1-MMP真核表达载体(pMMP14as),将其转染入SW626细胞后,与空质粒转染组相比,MT1-MMP反义核酸转染组细胞MT1-MMP表达显著降低,抑制率为65.8%;MMP-2酶原的活化受到明显抑制;pMMP14as转染组的穿膜细胞百分数为(63.3±5.8)%,明显低于空质粒转染组(97.6±7.5)(P<0.05)%。结论:MT1-MMP反义核酸可明显抑制高转移SW626细胞体外生长和侵袭效应,提示MT1-MMP可作为人卵巢癌抗侵袭治疗的分子靶点。     

HPV18 E6E7 反义荧光真核表达载体的构建及其在宫颈癌HeLa 细胞中的表达

 目的 构建HPV18型E6E7反义荧光真核表达载体,并观察其对宫颈癌HeLa细胞中HPV18 E6和E7基因表达的影响,探索反义技术用于治疗临床HPV感染及宫颈癌的可能性。方法 以HPV18型全基因质粒为模板,PCR法扩增HPV18型E6E7区716bp片段,利用基因重组技术将目的片段反向插入荧光真核表达载体pEGFP-C1,EcoR I酶切并测序鉴定;采用脂转法将重组质粒pEGFP-HPV18 E6E7as（EGFP-18AS）转染宫颈癌HeLa细胞株,通过RT-PCR及western blot检测细胞中E6、E7 mRNA和蛋白的表达。结果 成功构建HPV18E6E7反义荧光真核表达载体EGFP-18AS,经脂质体转染HeLa细胞,48h后在荧光倒置显微镜下可见明显的绿色荧光,且细胞中E6、E7 mRNA及蛋白表达水平均明显下调。结论 反义荧光真核表达载体可以有效的抑制HPV18E6、E7癌基因的表达,为治疗HPV感染和宫颈癌提供了一种新的方法。     

NF-kB反义核酸对胰腺癌细胞ICAM-1表达及侵袭转移能力的影响

目的研究核因子-KB（NF-KB）亚单位p65反义寡核苷酸（ASODN）对人胰腺癌细胞细胞间粘附分子-1（ICAM-1）表达及侵袭转移能力的影响。方法设计合成p65ASODN，体外转染人胰腺癌细胞株PANC-1，用流式细胞仪和荧光显微镜检测转染效率，用RT-PCR检测p65及ICAM-1mRNA的表达，用四甲基偶氮唑盐（MTT）法和细胞侵袭实验分析细胞增殖能力和侵袭转移能力的改变。结果p65ASODN可成功转染PANC-1细胞；转染后，p65及ICAM-1mRNA表达明显减弱（P〈0．01）；细胞增殖活性和侵袭转移能力明显下降（P〈0．01）。结论脂质体介导的p65ASODN能有效抑制p65基因的表达，从而降低细胞的侵袭转移能力，p65ASODN可能主要通过下调ICAM-1基因的表达发挥抗侵袭转移的作用。     

NF-κB 反义核酸对胰腺癌细胞ICAM-1表达及侵袭转移能力的影响

 目的 研究核因子-KB（NF-KB）亚单位p65反义寡核苷酸（ASODN）对人胰腺癌细胞细胞间粘附分子-1（ICAM-1）表达及侵袭转移能力的影响。方法 设计合成p65ASODN，体外转染人胰腺癌细胞株PANC-1，用流式细胞仪和荧光显微镜检测转染效率，用RT-PCR检测p65及ICAM-1mRNA的表达，用四甲基偶氮唑盐（MTT）法和细胞侵袭实验分析细胞增殖能力和侵袭转移能力的改变。结果 p65ASODN可成功转染PANC-1细胞；转染后，p65及ICAM-1mRNA表达明显减弱（P〈0．01）；细胞增殖活性和侵袭转移能力明显下降（P〈0．01）。结论 脂质体介导的p65ASODN能有效抑制p65基因的表达，从而降低细胞的侵袭转移能力，p65ASODN可能主要通过下调ICAM-1基因的表达发挥抗侵袭转移的作用。     

EIF4E基因下调对胃癌细胞的侵袭转移能力的影响及机制研究

目的:探讨特异性下调真核起始因子EIF4E对胃癌细胞侵袭转移能力的影响及可能的作用机制。方法:采用siRNA技术下调EIF4E的表达,Western blot检测转染前后EIF4E和MMP9蛋白质表达,通过Traswell小室实验检测转染前后侵袭迁移能力的差异。结果:Western blot证实,与阴性对照相比,转染EIF4E siRNA组细胞EIF4E表达明显下调,同时与阴性对照相比,转染EIF4E siRNA组细胞MMP9蛋白表达同样明显下调,Traswell小室实验证实,下调EIF4E后,MKN28细胞的体外侵袭迁移能力显著降低。结论:在胃癌MKN28细胞中存在EIF4E基因对MMP9的调控作用,EIF4E基因可能通过调控MMP9的表达参与胃癌的侵袭迁移行为,EIF4E有望成为肿瘤基因治疗的新靶点。     

Stathmin蛋白的研究进展

目的: 探讨趋化因子受体CXCR4表达水平对人肺癌细胞转移潜能的影响.方法: 采用RT-PCR,FACS检测趋化因子受体CXCR4在肺癌细胞株95C,95D细胞的表达.构建CXCR4正义和反义真核表达质粒,用脂质体法转染至95C和95D细胞内,通过G418筛选出稳定转染株.通过趋化和趋化侵袭实验测定转染前后细胞对基质衍生因子(SDF-1α)的迁移能力,通过明胶酶谱法检测MMP-2活性,通过FACS检测细胞对血管内皮细胞的黏附能力.结果: CXCR4正义和反义真核表达质粒pcDNA3-X4和pcDNA3-ASX4能明显上调或下调肺癌细胞表面CXCR4的表达,上调95C细胞表面CXCR4的表达可以增强其对SDF-1α的趋化反应性、MMP-2活性及其对血管内皮细胞的黏附能力.相反,下调95D细胞表面CXCR4的表达抑制了其对SDF-1α的趋化反应性、MMP-2活性及其对血管内皮细胞的黏附能力.结论: 上调或下调肺癌细胞表面CXCR4表达可以显著增强或抑制其转移潜能,提示CXCR4表达水平与肺癌细胞转移潜能有关.     

骨唾液酸蛋白的表达对骨肉瘤细胞侵袭转移特性的影响

 目的 构建人骨唾液酸蛋白（BSP）正反义真核表达载体，研究其对骨肉瘤细胞侵袭转移特性的影响。方法 以PCR的方法扩增人BSP的开放阅读框序列，与载体pIRES2-EGFP相连构成重组正反义表达质粒。以脂质体介导转染入MG-63细胞，通过Western blot检测细胞中蛋白的表达。以重组基底膜侵袭实验和划痕实验测定对骨肉瘤细胞侵袭力的影响。结果 成功构建了人BSP正反义核酸真核表达载体，转染后有效表达hBSP，与对照组相比，正义载体转染后使MG-63细胞中hBSP蛋白表达水平升高，侵袭力增强；反义载体转染后使MG-63细胞中hBSP蛋白表达水平降低，侵袭力受到抑制。结论 BSP表达的改变可能在骨肉瘤的浸润转移过程中起重要作用，BSP表达下调可以抑制骨肉瘤的侵袭能力。     

肿瘤转移抑制基因1抑制前列腺癌细胞的增殖和侵袭能力

目的 研究肿瘤转移抑制基因1(TMSG-1)转染对高转移人前列腺癌细胞体外增殖能力和侵袭能力的影响.方法 将TMSG-1全长真核表达载体稳定转染人前列腺癌细胞高转移亚系PC-3M-1E8,G418筛选,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法选取TMSG-1过表达阳性克隆.通过活细胞计数、二苯基溴化四氮唑蓝(MTF)比色实验、软琼脂集落形成实验检测体外细胞生长能力;Matrigel穿膜实验检测肿瘤细胞体外侵袭能力.结果 在稳定转染TMSG-1基因的PC-3M-1E8细胞系中,筛选出3株TMSG-1转录活性及蛋白表达水平均明显升高的细胞用于后续生物学行为实验.活细胞计数和MTT比色实验结果显示,从计数第3天起,与空载体对照组和空白对照组相比,3株正义转染组细胞生长速度均明显减慢(P<0.05).软琼脂集落形成实验结果显示,3株正义转染组的细胞软琼脂集落形成数与空载体对照组、空白对照组相比,均明显减少(P<0.05),分别为26.00±3.21、13.33±1.45和32.83±2.18.Matrigel穿膜实验结果显示,正义转染的各组细胞与空载体对照组及空白对照组相比,穿膜细胞数均明显减少(P<0.05),分别为45.33±4.16、54.00±2.83和26.33±3.79.结论 TMSG-1表达上调可使高转移人前列腺癌细胞体外增殖速度、锚着不依赖性生长能力及侵袭能力明显降低,TMSG-1可能通过抑制肿瘤细胞生长和侵袭抑制肿瘤转移潜能.     

靶向GPR48的shRNA抑制人宫颈癌HeLa细胞的侵袭转移

背景与目的：GPR48受体偶联Gs蛋白介导细胞内信号转导通路,通过调节做管聚合状态和基质金属蛋白酶活性,影响肿瘤细胞的侵袭转移。本研究探讨靶向GPR48的短发夹RNA（shorthairpinRNA,shRNA）对人宫颈癌细胞株HeLa体外侵袭能力及存体转移能力的影响。方法：以人GPR48mRNA编码区中两条不同序列作为RNA十扰靶点,构建靶向GPR48的shRNA真核表达质粒,同时构建不针对任何已知mRNA的阴性shRNA真核表达质粒,分别转染至HeLa细胞,新霉素抗性筛选稳定表达siRNA的转化克隆。采用RT-PCR和Westernblot检测GPR48的表达变化。通过Boyden小室实验以穿过人工基底膜的细胞数量评估HeLa细胞体外侵袭能力的变化：分别将转染和未转染GPR48shRNA的HeLa细胞接种于裸鼠皮下,观察肿瘤生长情况及怖部转移情况。结果：RNA干扰使HeLa细胞GPR48表达下捌80％：与阴性对照组比较,转染靶向GPR48重组质粒的实验组穿膜细胞数显著减少（28．3±1．5和17．6±1．5VS．94．4±15．7,P〈0．01）。裸鼠在体肺转移实验中,与阴性对照组比较,转染靶向GPR48重组质粒的实验组肺转移结节数显著减少（1．3±0．2和1．5±0．4VS．7．8±1．8,P〈0．01）。结论：shRNA真核表达载体能明显抑制HeLa细胞的GPR48表达．有效抑制HeLa细胞的体外侵袭和在体转移。     

抑制STAT3基因表达对人宫颈癌HeLa细胞定植和侵袭的影响

目的 采用RNA干扰(RNAi)技术抑制人宫颈癌HeLa细胞信号转导及转录活化因子3(STAT3)基因的表达,观察其对HeLa细胞定植和侵袭能力的影响.方法 针对STAT3基因设计并合成编码小干扰RNA(siRNA)的寡核苷酸,克隆入pSilencer2.1-U6-neo质粒中,从而构建针对STAT3基因的短发夹状siRNA真核表达质粒,用脂质体法将其转染人人宫颈癌HeLa细胞.利用RT-PCR技术和Western blot方法分别检测STAT3 mRNA和蛋白表达水平;通过软琼脂克隆形成实验和体外侵袭实验检测HeLa细胞的定植和侵袭能力.结果 针对STAT3基因的短发夹状siRNA真核表达质粒成功转染人宫颈癌HeLa细胞;转染成功的HeLa细胞的STAT3基因mRNA及蛋白表达均下降;HeLa细胞在软琼脂中形成的克隆数和穿透Matrigel膜的细胞数均明显减少.结论 针对STAT3基因的短发夹状siRNA真核表达质粒通过下调STAT3基因表达,抑制宫颈癌细胞的定植和侵袭能力.     

Tiam-1反义基因抗肿瘤侵袭转移作用的研究

目的：从基因—蛋白—细胞效应多层次水平，观察Tiam1反义基因下调肿瘤细胞内转移相关基因Tiam1 mRNA和调节细胞骨架结构的Rho蛋白表达水平,探讨遏制肿瘤侵袭转移的作用和机制。方法： 采用反义核酸技术合成Tiam1反义寡核苷酸，硫代化修饰与脂质体形成复合物（Tiam1 ASODNSLf）,转导入人高转移巨细胞肺腺癌 PG细胞。采用 RTPCR技术检测Tiam1的表达水平，流式细胞术检测Rho蛋白表达水平，Matrigel体外转移模型检测PG细胞的侵袭转移力。结果： Tiam1ASODNSLf抑制PG细胞Tiam1 mRNA表达水平，其相对表达值从0.86下降为0.38；显著抑制PG细胞内Tiam1介导的信号传递相关Rho蛋白表达水平，其表达率从27.96%降至16.86%(P<0.001)。显著抑制穿过人工基底膜的侵袭转移PG细胞数，从945±40下降为649±35(P<0.05)。结论：Tiam1反义基因下调PG细胞中侵袭诱导基因mRNA表达及其介导的信号传递蛋白Rho的表达，从而遏制其侵袭和转移能力     

IL-18促进肺癌细胞转移的功能鉴定

目的 探讨IL-18是否具有促进肺癌细胞转移的功能以及通过何种途径发挥作用。方法 以人肺巨细胞癌高、低转移株为肿瘤转移的研究模型,采用Western blot和半定量RT-PCR结合Northern blot法检测IL-18蛋白或mRNA在肺臣细胞癌高、低转移株的差异表达;随后采用基因转染技术将IL-18的正义或反义表达质粒分别转染肺巨细胞癌低或高转移株,比较IL-18稳定转染细胞转移表型的改变。采用：MICS系统检测稳定转染细胞体外迁移和侵袭能力的改变,采用Western blot法检测稳定转染细胞转移表型相关指标的改变,从而确定IL-18通过何种途径促进肺癌细胞转移。结果 由于IL-18蛋白和mRNA仅在肺巨细胞癌高转移株检测到,因此,将IL-18正义表达质粒转染肺巨细胞癌低转移株后,可检测到IL-18融合蛋白的表达,且稳定转染细胞出现了细胞体外迁移能力的显著上调和上皮细胞间黏附分子E-cadherin蛋白的显著下调;相反,将IL-18反义表达质粒转染肺巨细胞癌高转移株后,可检测到内源性IL-18蛋白和mRNA水平的下调,且稳定转染细胞出现了细胞体外侵袭能力的显著下调和E-cadherin蛋白的显著上调。结论 IL-18可能通过抑制上皮细胞问黏附分子E-cadherin蛋白的表达来促进肺癌细胞的转移。     

MALAT-1基因种属同源序列重组质粒的构建及其与人鼻咽癌细胞株C666-1侵袭转移的关系

目的:运用基因重组技术构建人MAL-AT-1基因种属同源序列(Species homologous frag-ments/shf)重组真核荧光表达载体,并探讨其在MALAT-1高表达的人鼻咽癌细胞株C666-1中的表达和对其侵袭转移的影响。方法:应用RT-touchdown PCR的方法,从鼻咽癌患者正常切缘组织中扩增出MALAT-1基因的种属同源序列,将所得的cDNA序列定向克隆至真核表达载体pEGFP-C1质粒中,构建出重组真核荧光表达载体;采用脂质体Lipofectamine 2000介导重组质粒pEGFP-C1-MALAT-1/shf瞬时转染MALAT-1高表达的人鼻咽癌细胞株C666-1;通过实时荧光定量PCR方法检测MALAT-1基因种属同源序列转染组和空载体转染组细胞中MALAT-1/shf的表达水平;细胞基质胶侵袭实验研究转染组细胞侵袭能力的变化。结果:经酶切鉴定及测序分析,证实成功构建人MALAT-1/shf重组真核荧光表达载体。pEGFP-C1-MALAT-1/shf(6 918~8 441 bp)转染组平均侵袭细胞数(51.20±5.933)显著高于MALAT-1/mock组(13.40±3.847),差异具有统计学意义(P=0.000)。这说明转染pEGFP-C1-MALAT-1/shf(6 918~8 441 bp)重组质粒后,细胞的侵袭能力明显增强。结论:成功构建了人MALAT-1基因种属同源序列真核荧光表达载体pEGFP-C1-MALAT-1/shf,并成功在MALAT-1高表达的人鼻咽癌细胞株C666-1中表达,MALAT-1/shf(6 918~8 441 bp)与人鼻咽癌C666-1细胞株的侵袭转移密切相关。     

蛇毒cystatin基因转染抗人胃腺癌细胞体外侵袭作用的研究

目的:探讨蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂(sv-cystatin)对人胃腺癌细胞SGC7901侵袭转移的抑制作用.方法:采用人工拼接方法合成蛇毒cystatin cDNA,构建pcDNA3.1/sv-cystatin真核表达质粒,经脂质体转染将pcDNA3.1/sv-cystatin质粒和pcDNA3.1质粒分别导入胃腺癌细胞系SGC7901:利用RT-PCR和Western blot检测SGC7901细胞中sv-cystatin基因的表达;应用细胞-基质粘附实验、细胞运动实验及重建基底膜侵袭实验分析svcystatin表达对SGC7901细胞粘附、运动和侵袭能力的影响.结果:转染sv-cystatin基因后,SGC/sv-cystatin细胞克隆中可检测到sv-cystatin的明显表达,SGC/sv-cystatin细胞的运动能力和体外穿越重建基底膜的能力明显低于转染空载体细胞和未转染的SGC7901细胞,但其体外粘附能力未见明显变化.结论:sv-cystatin基因的表达可使胃癌SGC7901细胞体外运动能力及侵袭能力明显减弱,提示sv-cystatin具有抑制胃癌细胞侵袭转移的作用.     

逆转录病毒介导重组CXCR4对前列腺癌细胞侵袭力的影响

目的：构建CXCR4基因重组逆转录病毒表达载体pLEGFP—CXCR4,并转染PC-3细胞,探讨趋化因子受体CXCR4对人前列腺癌细胞体外侵袭能力的影响。方法：分离健康人外周血单个核细胞,提取总RNA,以其为模板,RT—PCR法扩增CXCR4,获取CXCR4基因全长序列,装入带有绿色荧光蛋白（GFP）的逆转录病毒质粒pLEGFP—N1,用脂质体法转染PC-3细胞,采用实时定量PCR和Western blotting观察CXCR4表达情况,并通过体外细胞一基质粘附试验和Transwells小室检测肿瘤细胞体外侵袭能力的变化。结果：成功构建pLEGFP—CXCR4载体,转染人前列腺癌细胞72h后,CXCR4mRNA及蛋白质水平明显上调,细胞的体外侵袭力明显增强,增殖活性增强。结论：CXCR4转染能够明显提高CXCR4基因mRNA及蛋白水平,提高人前列腺癌细胞体外侵袭能力。     

趋化性细胞因子受体CXCR4基因沉默对乳腺癌细胞体外侵袭和定向肺转移的影响

目的 利用RNA干扰技术下调趋化性细胞因子受体CXCR4基因的表达,探讨其沉默对乳腺癌细胞体外侵袭及肺转移潜能的影响.方法 设计合成CXCR4的特异性短发卡状RNA(shRNA),将其插入至pSilencer载体中,并将重组后的pSilencer质粒载体经脂质体包裹转染乳腺癌MDA-MB-231细胞株,抗性筛选稳定抑制CXCR4表达的永久细胞克隆.应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法,检测shRNA对细胞内CXCR4基因表达的影响.利用Boyden小室模型检测细胞体外侵袭能力.二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖状况.通过裸鼠尾静脉瘤细胞注射方法,构建肺转移模型,检测CXCR4基因沉默对乳腺癌细胞肺转移能力的影响.结果 成功构建和筛选出CXCR4特异性的shRNA质粒载体,稳定转染CXCR4-shRNA的乳腺癌细胞的CXCR4 mRNA和蛋白的表达较空白对照组明显下调(29.5%±3.8%比69.7%±2.6%,15.4%±1.1%比39.0%±2.4%;均P<0.01),体外侵袭能力减弱,增殖速度减慢,肺转移能力下降.结论 以CXCR4为靶向的shRNA能够有效下调CXCR4基因的表达,降低人乳腺癌细胞体外侵袭、增殖以及肺转移的能力.CXCR4是乳腺癌侵袭和转移过程中的重要调控因子.     

siRNA沉默人组织因子基因对大肠癌侵袭转移能力影响的观察

目的:应用RNA干扰(RNA interference,RNAi)的手段抑制人类结肠癌细胞内组织因子(tissue factor,TF)基因表达,从而探讨对其侵袭转移能力的影响.方法:首先构建携带有针对TF基因有效的siRNA序列的真核细胞表达质粒pSU-PER-TF,用此质粒转染人类结肠转移癌细胞系LoVo,应用RT-PCR和蛋白质印迹法从RNA及蛋白质水平检测证实细胞内源性TF基因被敲减后的表达水平变化,通过Matrigel体外侵袭实验进一步考证对细胞侵袭转移能力所造成的影响.结果:RT-PCR及蛋白质印迹法结果显示,与转染pSUPER质粒的LoVo细胞相比,转染重组干扰质粒pSUPER-TF-1的细胞其内源性TF基因的表达水平被显著敲减.Matrigel体外侵袭实验证实,转染pSUPER质粒的LoVo穿膜细胞均数为(220±7.0)个,而转染pSUPER-TF-1质粒的LoVo穿膜细胞均数为(102±4.0)个,两组差异有统计学意义,t=25.293,P=0.008.结果表明,转染pSU-PER-TF-1质粒的LoVo细胞侵袭转移能力显著下降.结论:以TF基因作为靶点应用RNA干扰技术敲减其表达可以明显降低LoVo细胞体外侵袭转移能力,为结肠癌的临床治疗提出新的思路,可以作为结肠癌治疗的一个新靶点.     

逆转录病毒介导重组CXCR4对前列腺癌细胞侵袭力的影响

目的:构建CXCR4基因重组逆转录病毒表达载体pLEGFP-CXCR4,并转染PC-3细胞,探讨趋化因子受体CXCR4对人前列腺癌细胞体外侵袭能力的影响.方法: 分离健康人外周血单个核细胞,提取总RNA,以其为模板, RT-PCR法扩增CXCR4,获取CXCR4基因全长序列,装入带有绿色荧光蛋白(GFP)的逆转录病毒质粒pLEGFP-N1,用脂质体法转染PC-3细胞,采用实时定量PCR和Western blotting观察CXCR4表达情况,并通过体外细胞-基质粘附试验和Transwells小室检测肿瘤细胞体外侵袭能力的变化.结果: 成功构建pLEGFP-CXCR4载体,转染人前列腺癌细胞 72h后,CXCR4 mRNA及蛋白质水平明显上调,细胞的体外侵袭力明显增强,增殖活性增强.结论: CXCR4转染能够明显提高CXCR4基因mRNA及蛋白水平,提高人前列腺癌细胞体外侵袭能力.     

人COX-2基因反义真核表达载体对胃癌转移的影响

目的：在成功构建人COX-2基因反义真核表达载体的基础上,研究COX-2基因对人胃癌细胞株SGC-7901转移能力的影响。方法：实验分为COX-2基因反义真核表达载体转染的人胃癌细胞株SGC-7901转染组、COX-2抑制剂SC236处理组（SGC-7901细胞培养基内含100μmol/L SC236）和对照组（SGC-7901细胞）,并分别采用细胞体外侵袭实验,内皮细胞体外迁移实验,观察各组细胞体外转移的情况。采用裸鼠皮下移植瘤抑制实验,用转染和未转染的SGC-7901细胞按每毫升5×10~7个的细胞悬液分别注射于BALB/C-nu/nu无胸腺裸鼠背部皮下,SC236处理组按3mg/（kg·d）剂量于接种SCC-7901细胞10min后,由尾静脉注射,隔日1次。各组6周后处死动物,观察皮下移植瘤的生长情况。并用Western blot法检测各组细胞VEGF及MMP-2蛋白的表达。结果：体外侵袭实验、促内皮细胞体外迁移实验结果显示,与对照组相比,转染组和SC236处理组迁移的肿瘤细胞和内皮细胞均减少（P〈0.01）;裸鼠皮下移植抑制实验结果显示,转染组和SC236处理组荷瘤鼠移植瘤的生长受到抑制;Western blot结果显示,转染组和SC236处理组细胞VEGF及MMP-2蛋白的表达下降。结论：反义COX-2基因能抑制SCG-7901细胞的转移能力,其机制可能与其抑制肿瘤的血管生成、减少MMP-2的表达有关。