IgA肾病血瘀证血清蛋白组学的初步研究

目的：应用表面增强激光解吸/电离飞行时间质谱技术（SELDI-TOF-MS技术）检测IgA肾病患者的血清蛋白质指纹图谱,试图寻找IgA肾病血瘀证相关的差异蛋白质,从蛋白质水平探索IgA肾病血瘀证血清的标志物.方法：采集于2011年10月～2013年2月肾内科住院的IgA肾病患者的血液样本共30例（血瘀证14例,非血瘀证16例）,同时采集健康人血液样本15例.研究各组病例血清蛋白质指纹图谱,所有蛋白质质谱采用Biomarker Wizard分析之后用Biomarker Patterns Software软件识别IgA肾病血瘀证特异表达的蛋白质,并建立证候决策模型.结果：（1）IgA肾病血瘀证患者与正常人血清蛋白质指纹图谱数据比较,经分析检测到30个蛋白质峰差异具有统计学意义（P＆lt;0.05）.（2）IgA肾病血瘀证患者与非血瘀证患者血清蛋白质指纹图谱数据比较,经分析检测到42个蛋白质峰差异具有统计学意义（P＆lt;0.05）.（3）IgA肾病血瘀证差异表达蛋白峰的筛选及证候决策模型的建立.经筛选质荷比为1 092.71（低表达）、1 972.32（低表达）、2 687.74（低表达）、3 196.19（高表达）、3 249.02（高表达）、8 567.20（高表达）、8 713.48（高表达）的7个蛋白峰组成的证候决策模型能很好区分IgA肾病血瘀证,该模型的敏感性为92.85%,特异性为93.75%,进一步对决策模型进行盲法验证,此模型对血瘀证的诊断敏感性为85.71%,特异性为81.25%.结论：M/Z为1 092.71、1 972.32、2 687.74、3 196.19、3 249.02、8 567.20、8 713.48的7个蛋白峰可能是区分IgA肾病血瘀证与非血瘀证的血清蛋白标志物.     

胆管癌患者血清肿瘤标志物的筛查和鉴定

目的 通过双向凝胶电泳-质谱技术寻找胆管癌患者血清肿瘤标志物.方法 收集8例胆管癌和8例胆管结石患者血清,应用Albumin and IsG Removal kit去除其中的高丰度蛋白等成分,双向凝胶电泳技术分离血清蛋白样本,蛋白分离凝胶采用考马斯亮蓝染色,GPS Explorer~(TM)software凝胶图像分析软件对图像进行数据分析,通过基质辅助激光解析电离飞行时间串联质谱技术进行鉴定.结果 胆管癌和胆管结石患者血清双向凝胶电泳图谱中发现25个差异蛋白质点,20个差异蛋白质点获得成功鉴定,去除相同重复蛋白质后,有8种差异蛋白在胆管结石患者血清中高表达和7种差异蛋白在胆管癌患者血清中高表达.结论 胆管癌与胆管结石患者的血清蛋白中存在较多差异表达的蛋白质,利用双向凝胶电泳技术有望筛选出与胆管癌相关的肿瘤标志物.     

SELDI-TOF-MS技术在胰腺癌诊断中的应用

目的 应用表面增强激光解析/离子化飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)从胰腺癌患者血清中筛选标志蛋白,找出最佳的标志蛋白组合模式作为临床诊断指标.方法 收集29例胰腺癌患者血清标本和57例年龄、性别相匹配的非癌人群血清标本作为对照.采用SELDI技术检测其蛋白质指纹图谱表达,所得到的结果采用Biomarker Wizard及Biomarker Patterns system软件分析,筛选最终可能用于胰腺癌诊断的蛋白标志物并优化组合建立胰腺癌诊断模型.结果 发现胰腺癌患者和对照组血清蛋白质指纹图谱之间有26个差异表达特异性蛋白,分析系统筛选出一组包含4个标志蛋白(5705、4935、5318和3243 Da)建立起一个胰腺癌的诊断模型,对胰腺癌诊断的敏感性为100%,特异性97.4%.盲法验证此模型敏感性88.9%、特异性89.5%.结论 SELDI-TOF-MS技术的特异性及敏感性远远高于目前所采用的某一单独标志物的血清学诊断,其结果对进一步研究胰腺癌的蛋白质组学改变及其临床诊断应用可能具有重要意义.     

下咽鳞癌患者血清比较蛋白质组学研究

目的 从蛋白质组学角度探讨下咽癌血清蛋白质组指纹图谱.方法 采集58例下咽癌患者和41正常对照者血清,应用CM10芯片和PBSⅡ-C型蛋白质芯片阅读机检测,对下咽癌组和正常组及下咽癌组内不同亚组间的血清蛋白质指纹图谱比较,寻找相关差异蛋白,初步建立分类树诊断模型和放疗敏感性预测模型.结果 下咽癌组与正常对照组间有9个差异蛋白质峰(P<0.05);建立的下咽癌决策分类树诊断模型诊断符合率为90.10%;下咽癌颈淋巴结转移组和无转移组差异无统计学意义(P>0.05);分化较差组和分化较好组有1个蛋白差异有统计学意义(P<0.05);化疗敏感组和不敏感组差异无统计学意义(P>0.05);放疗敏感组和不敏感组比较,P≤0.05时有5个差异蛋白峰,均在放疗敏感组高表达.Biomarker Pattern软件建立的下咽癌放疗敏感性分类树预测模型,灵敏度100.00%,特异度83.33%.结论 下咽癌和正常对照比较血清中存在特异性的差异表达蛋白,下咽癌放疗敏感组患者血清中m/z为6115.75的蛋白较放疗不敏感组高表达(P<0.01).     

血清蛋白质指纹图谱模型在肾癌诊断中的应用

目的 探讨肾癌早期诊断的新方法。方法 血清标本66份，其中肾癌患者34份，健康对照组32份，应用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱（SELDI—TOF—MS）技术获得WCX2蛋白芯片表达图谱，采用Biomarker Patterns^TM软件分析差异蛋白并初步建立肾癌血清标志物诊断模型。结果 在相对分子质量1000～50000范围内共检测到101个蛋白峰，其中7个有统计学意义（P〈0．01）。所建立肾癌诊断模型敏感性为88％（30／34），特异性为91％（29／32）。采用此模型盲法分析42份未知血清标本，敏感性为80％（16／20），特异性为82％（18／22）。结论 用SELDI—TOF—MS技术平台和生物信息学技术建立的诊断模型为肾癌早期诊断提供了新途径。     

创伤性股骨头坏死血清差异蛋白质组学的研究

[目的]探讨创伤性股骨头坏死(TONFH)的血清蛋白质组学差异质,寻找并鉴定TONFH的潜在血清生物学标志物。[方法]分别采集TONFH患者(实验组)、正常体检者(对照组)血清各5例,采用TMT联合2DLC-MS/MS技术进行蛋白组学分析,寻找并鉴定差异表达的蛋白质。[结果]质谱共筛选出有意义差异蛋白344个,并鉴定出15种显著性差异蛋白(P0.05),其中与正常组对比,实验组中抗粘蛋白1轻链可变区、补体C5(C5)、冷凝集蛋白FS-2 H链、纤维连接蛋白(FN1)、妊娠区带蛋白(PZP)、β肌动蛋白(ACTB)、甘露糖结合蛋白C(MBL2)等7种蛋白表达上调,Igλ链V区4A、多巴胺β-羟化酶(DBH)、免疫球蛋白重链可变区、CD5抗原(CD5L)、免疫球蛋白J链(JCHAIN)、补充C1r子组件(C1R)、抗凝血酶III (Antithrombin-III)、凝溶胶蛋白(GSN)等8种蛋白表达下调。[结论]采用同位素相对标记与绝对定量技术(TMT)联合二维液相色谱-串联质谱(2D-LC-MS/MS),成功筛选出了TONFH的血清差异表达蛋白质,为寻找TONFH特异性标志物及进一步阐明TONFH的发病机制提供了依据。     

胆囊癌血清标志物的蛋白质组学研究

目的 分析胆囊癌患者和健康人血清蛋白质组的差异,筛选胆囊癌血清分子标志物.方法 以6例健康人和6例早胆囊癌患者的血清为样本,图像分析两组血清图谱寻找差异蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱对差异蛋白点进行鉴定.Western blot和免疫组织化学方法检测差异蛋白质S100A10和结合珠蛋白在胆囊癌患者和健康人血清中的表达.结果 建立了健康人和胆囊癌患者血清样品的二维凝胶电泳图谱,质谱鉴定出24种非冗余的血清蛋白质.Westernblot证实了S100A10蛋白和结合珠蛋白在胆囊癌患者和健康人血清中的差异表达.免疫组织化学证实胆囊癌组织中S100A10及结合珠蛋白高表达.结论 24种血清差异蛋白质为筛选胆囊癌的血清分子标志物提供了实验依据.     

血清CEA阴性结直肠癌患者血清差异蛋白质的初步筛选

目的分析血清CEA阴性结直肠癌患者、血清CEA阳性结直肠癌患者与正常人血清中差异表达蛋白,筛选潜在的与血清CEA阴性结直肠癌患者诊断及预后密切相关的血清蛋白质。方法血清CEA阴性结直肠癌患者、血清CEA阳性结直肠癌患者与正常人空腹血清标本各11例分别等量混合成3组样本,利用双向凝胶电泳（2-DE）及基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI_TOF-MS／MS）技术筛选及鉴定差异表达的蛋白点,并对其部分蛋白进行生物学分析。结果筛选出3组间表达量差异2倍以上差异蛋白点共13个,进行MALDI-TOF-MS／MS分析,鉴定出：①血清CEA阴性结直肠癌患者与正常人血清比较,表达下调的蛋白有纤维胶凝蛋白2前体,纤维胶凝蛋白3,载脂蛋白L1,间a胰蛋白酶抑制剂轻链H4,转甲状腺素蛋白,表达上调的蛋白为免疫球蛋白lambda轻链。②血清CEA阳性结直肠癌患者与正常人血清比较,表达下调的蛋白有纤维胶凝蛋白2前体,纤维胶凝蛋白3,载脂蛋白L1,间a胰蛋白酶抑制剂轻链H4,转甲状腺素蛋白,表达上调的蛋白为：载脂蛋白E,结合珠蛋白。③血清CEA阴性结直肠癌患者与血清CEA阳性结直肠癌患者的1个差异点,经鉴定为免疫球蛋白lambda轻链。结论血清CEA阴性结直肠癌患者与血清CEA阳性结直肠癌患者、正常人血清的蛋白质表达谱表现出一定差异,这些差异蛋白有可能成为血清CEA阴性结直肠癌患者诊断与判定预后的血清标志物。     

尿毒症患者血清蛋白质组份的双向凝胶电泳-飞行时间串联质谱分析研究

目的建立和比较尿毒症患者及正常人的血清蛋白质双向电泳图谱，寻找和鉴定尿毒症患者差异表达的血清蛋白质谱。方法以固相pH梯度（IPG）等电聚焦（IEF）为第一向和垂直十二烷基硫酸钠．聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）为第二向，分别对尿毒症患者和正常者血清蛋白质样品进行二维双向电泳，经银染显色和ImageMaster2D5、0软件分析凝胶图像，对有差异性表达的尿毒症者的蛋白质用基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱进行鉴定。结果成功获得了重复性较好的双向电泳银染图谱。尿毒症患者血清蛋白质表达谱发生了改变。将其中26个明显差异性表达的蛋白质点进行肽质指纹图谱和串联质谱分析，在International Protein Index（IPI）human数据库中检索，鉴定出其中20个蛋白。结论固相pH梯度双向凝胶电泳分离尿毒症患者血清总蛋白获得重复性较好的结果。尿毒症患者血清蛋白质表达谱发生了明显改变，基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱分析鉴定的结果为尿毒症蛋白质毒素的研究提供了依据。     

食管癌血清差异表达蛋白的研究

目的 探讨食管癌患者和健康人群蛋白表达的差异,筛选用于早期诊断的肿瘤标志物并建立诊断模型.方法 回顾性分析2008年1月至8月新疆医科大学第一附属医院收治的127例原发性食管癌患者(食管癌组)和63例健康体检者(健康对照组)的临床资料.采用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术,应用弱阳离子交换蛋白芯片检测和分析两组受试者的血清蛋白表达谱,筛选可以用于临床食管癌早期诊断新的肿瘤标志物,建立蛋白质指纹图诊断模型.采用秩和检验分析数据.结果 食管癌组与健康对照组血清蛋白质荷比(M/Z)峰值图谱明显不同.得到差异性较大的10个蛋白中,有6个在食管癌组呈高表达,M/Z为4488、5495、15964、3948、8154、8166;4个呈低表达,M/Z为8789、6682、8714、6650.建立由6个蛋白组成的蛋白质指纹图诊断模型,食管癌组患者中124例判定正确,3例误判;健康对照组患者中60例判定正确,3例误判,其准确度为96.8%(184/190),敏感度为97.6%(124/127),特异度为95.2%(60/63).结论 应用SELDI-TOF-MS技术筛选食管癌肿瘤标志物建立的蛋白质指纹图诊断模型灵敏度高、特异性强.     

Clinical evaluation of serum basic fetoprotein--comparative study of serum immunosuppressive acid protein

The clinical significance of serum basic fetoprotein (BFP) in renal cell carcinoma was investigated in comparison with serum immunosuppressive acid protein (IAP). Investigated in this study were 46 patients with renal cell carcinoma, 31 males and 15 females ranging in age from 40 to 85 years (mean age: 56 years). According to Robson's system of staging, 10 cases (22%) had a stage I disease, 14 cases (30%) a stage II disease, and 18 (39%) a stage IV disease. The positivity rate for and levels of serum BFP were found higher as disease stage advanced, with 54% of the entire cases and 72% of stage IV cases being positive for serum BFP. On the other hand, 76% of 34 cases for whom assay of serum IAP was feasible and 79% of stage IV cases were positive for serum IAP, thus here again the positivity rate for and serum levels of the marker became increasingly higher with advancing disease stage. Simultaneous assay of serum BFP and IAP demonstrated that 85% of stage IV renal cell carcinoma cases were positive for at least one of the two markers. A study of changes in these tumor markers before and after curative resection of the tumor showed that BFP decreased below the preoperative level within 1 week postoperatively in 92% and even returned to normal in 75% of cases who were positive for the tumor markers preoperatively, while serum IAP reduced below the preoperative level in 82% and returned to normal in 27% of the cases preoperatively.     

Estimation of glomerular filtration rate by serum creatinine and serum beta 2-microglobulin

51Cr-EDTA clearance, serum beta 2-microglobulin and serum creatinine were measured simultaneously on 271 occasions in 114 patients. Serum beta 2-microglobulin was more sensitive than serum creatinine for detection of changes of glomerular filtration rate (GFR) and for detection of a moderately reduced GFR. However, serum beta 2-microglobulin also had severe limitations when used to estimate GFR. The serum levels of the protein varied considerably in patients with similar GFR, probably due to different rates of synthesis of beta 2-microglobulin.