丹参多酚酸盐对实验性小鼠草酸钙结晶生成的影响

目的 观察中药丹参多酚酸盐对小鼠肾脏草酸钙结晶生成的干预效果,并探讨其可能的作用机制.方法 24只8周龄雄性C56BL/6小鼠根据丹参多酚酸盐干预与否以及干预浓度（80mg/kg、160 mg/kg）进行分组,每组8只.各组小鼠均给予腹腔注射乙醛酸盐（100 mg/kg）造模,丹参多酚酸盐干预组在乙醛酸盐诱导结晶肾损伤基础上加用不同浓度的丹参多酚酸盐注射液,均为1次/d,连续给药7d后,收集肾脏组织标本.光镜下观察各组小鼠肾组织中草酸钙结晶生成情况;检测肾组织中钙含量、脂质过氧化丙二醛（malondialdehyde,MDA）、谷胱甘肽（glutathione,GSH）、过氧化氢酶（catalase,CAT）及超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性.结果 与模型组相比,给予丹参多酚酸盐注射液后的小鼠肾组织SOD、GSH和CAT显著升高,而MDA和肾组织钙含量显著下降（P＜0.05）,但丹参多酚酸盐两种浓度间未见明显的量效关系.结论 丹参多酚酸盐能有效的抑制由乙醛酸盐诱导的小鼠草酸钙结晶的生成.     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂减轻草酸钙结晶肾损伤的实验研究

目的：观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂辛二酰苯胺异羟肟酸（suberoylanilide hydroxamic acid,SAHA）对草酸钙结晶模型小鼠肾结晶沉积的作用,初步探讨 SAHA 对减轻草酸钙结晶肾损伤的机制。方法：24只 ICR 雄性小鼠随机分为4组,即空白对照组（A 组）和实验组（B、C、D 组）;B 组：50 mg/ kg 的生理盐水（NS）＋100 mg/ kg 乙醛酸盐,C 组：50 mg/ kg 的DMSO ＋100 mg/ kg 乙醛酸盐,D 组：50 mg/ kg 的 SAHA ＋100 mg/ kg 乙醛酸盐;实验组给予乙醛酸盐6 h 前分别予以 NS、DMSO、SAHA 50 mg/ kg 等量腹腔注射,7 d 后处死全部小鼠。检测各组小鼠肾组织钙含量水平,丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽还原酶（GSH）的含量或活力,并且在光镜下观察各组小鼠肾组织切片中草酸钙结晶的分布,免疫组化及其半定量分析比较骨桥蛋白（OPN）、CD44分子在肾脏中的表达情况。结果：与 B、C 组相比,D 组小鼠的肾组织钙含量和MDA 含量显著下降（P 均〈0．05）,肾组织切片冯库萨染色显示草酸钙结晶沉积明显减少（P 〈0．05）,OPN 与 CD44表达水平也明显下降（P 〈0．05）。而 B 组与 C 组肾结晶形成的差异无统计学意义。结论：研究结果首次证实 SAHA 对减少小鼠草酸钙肾结晶形成有预防作用,而且其机制可能与抑制氧化应激和降低 OPN、CD44表达水平有关。     

复方金钱草减轻小鼠草酸钙结晶肾损伤的实验研究

目的：探讨复方金钱草对小鼠草酸钙结晶肾损伤的作用及可能的作用机制.方法：24只C57 BL/6小鼠按随机数字表法随机分为对照组（A组）、单纯结晶组（B组）、复方金钱草干预组（C组）,每组8只.B组：给予100 mg/kg乙醛酸盐;C组：给予100 mg/kg乙醛酸盐＋20 ml/kg复方金钱草浸膏;A组：给予100 mg/kg的生理盐水,在连续给药7 d后,检测各组小鼠血生化指标,肾组织钙含量水平,光镜下观察各组小鼠肾组织切片中草酸钙结晶体分布及组织病理改变,免疫组化及免疫荧光染色对TRPV5、Calbindin-D28进行定位分析,Western Blot法检测各组肾组织中TRPV5、Calbindin-D28k的含量.结果：与单纯结晶组相比,复方金钱草干预组小鼠血清尿素氮（BUN）及肌酐（Scr）水平、肾组织钙含量显著下降（P〈0.05）,肾组织草酸钙结晶沉积及肾脏病理组织损伤均显著减轻（P〈0.05）,但肾脏TRPV5及Calbindin-D28k表达量均强于单纯结晶组（P〈0.05）.结论：复方金钱草可能通过上调肾脏TRPV5及Calbindin-D28k表达量从而减少了肾小管内钙盐结晶体的形成,起到了保护肾脏的作用.     

SAHA对草酸钙肾结晶小鼠肾功能的影响

目的:建立草酸钙肾结晶小鼠模型,探讨辛二酰苯胺异羟肟酸(suberoylanilide hydroxamic acid,SAHA)对模型小鼠肾功能的影响。方法:将24只C57BL/6雄性小鼠随机分为4组:空白对照组(无任何处理)、模型组(NS组)和干预组(DMSO、SAHA/DMSO组);NS组:50 mg/kg的生理盐水(NS)+100 mg/kg乙醛酸盐;DMSO组:50 mg/kg的DMSO+100 mg/kg乙醛酸盐;SAHA组:50 mg/kg的SAHA/DMSO+100 mg/kg乙醛酸盐;实验组分别预先予以NS、DMSO、SAHA 50 mg/kg等量腹腔注射,6 h后三组均给予100 mg/kg的乙醛酸盐腹腔注射,连续给药7 d后处死全部小鼠。在光镜下观察各组小鼠肾组织切片中草酸钙结晶的分布,比较钙盐沉积百分比;检测各组小鼠的血肌酐(血Scr)、血尿素氮(BUN),尿损伤因子1(尿KIM-1),尿钙/尿肌酐比值;检测肾组织的过氧化氢酶(CAT)、维生素E(VE)的含量或活力;并且对肾组织切片TUNEL染色及其半定量分析,比较肾小管凋亡细胞的表达情况。结果:(1)SAHA减少草酸钙肾结晶的形成;(2)SAHA减少模型小鼠的血肌酐、血尿素氮生成,降低尿KIM-1水平;(3)SAHA调节氧化应激水平;(4)SAHA组小鼠的肾小管细胞凋亡减少。结论:本项研究结果证实SAHA可改善草酸钙结晶小鼠的肾功能,减少肾小管细胞凋亡。     

姜黄素缓解草酸钙结晶肾损伤的机制研究

目的:观察姜黄素在草酸钙结晶性肾损伤过程中的作用,并初步探讨其可能的机制。方法:在乙醛酸盐腹腔注射诱导C57BL/6J小鼠和一水草酸钙(COM)刺激人肾小管上皮细胞(HK-2)的体内外草酸钙结晶肾损伤模型上,分别加用姜黄素进行干预,应用冯库萨染色观察肾组织草酸钙结晶沉积情况,应用qRT-PCR及Western-blot、免疫组化检测上皮细胞间充质转分化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)标志物E-cadherin、N-cadherin和Vimentin在mRNA和蛋白质水平的表达情况。结果:(1)冯库萨染色显示姜黄素显著减少小鼠模型肾草酸钙结晶的沉积。(2)肾组织免疫组化和HK-2细胞qRT-PCR和Western-blot结果显示草酸钙结晶显著降低肾小管上皮细胞的上皮标志物E-cadherin表达和上调间质标志物N-cadherin及Vimentin表达,应用姜黄素干预后明显抑制以上改变。结论:姜黄素可能通过抑制草酸钙结晶所致肾小管上皮细胞EMT改变,从而缓解草酸钙结晶所致肾损伤。     

草酸钙结晶肾损伤模型小鼠肾小管上皮细胞转分化的实验研究

目的:研究乙醛酸盐诱导所致草酸钙结晶肾损伤模型小鼠中肾小管上皮细胞转分化的发生情况。方法:选择C57BL/6J小鼠连续腹腔注射乙醛酸盐建立草酸钙结晶肾损伤模型,应用HE染色及冯库萨染色分别观察肾组织结构变化及钙盐沉积情况,并应用免疫荧光双染、Western-blot观察肾小管上皮细胞间充质转分化(epithelial mesenchymal transtion,EMT)的情况。结果:随着连续腹腔注射乙醛酸盐时间的延长,小鼠肾组织HE染色结果显示,近端肾小管管腔逐渐扩张,且肾小管上皮细胞逐渐出现肿胀及变形,基底膜逐渐裸露;冯库萨染色结果显示近端小管腔内黑色钙盐沉积逐渐增加;免疫荧光双染、Western blot结果均显示肾小管上皮标志E-cadherin及Pan-ck逐渐丢失,而间质标志α-SMA及Vimentin的表达则逐渐增加,Western blot检测结果显示随着乙醛酸盐干预的增强,Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(rho associated coiled coil forming protein kinase,ROCKI)表达也逐渐增加,且在干预第3天即达高峰。结论:乙醛酸盐诱导所致草酸钙结晶肾损伤模型早期即出现EMT,启动了肾间质纤维化的进程。     

碘海醇对实验性大鼠草酸钙结石形成的影响

目的探讨造影剂碘海醇对大鼠草酸钙结石形成的影响。方法将40只Wister大鼠随机分为成4组：空白对照组（A）、单纯诱石组（B）、单纯碘海醇组（C）、诱石＋碘海醇组（D）。用乙二醇法诱导建立大鼠草酸钙结石模型,C、D组尾静脉注射碘海醇。实验第4周末检测肾组织中丙二醛（MDA）含量及超氧化物歧化酶（SOD）活力,镜下观察肾内草酸钙晶体沉积情况。结果A、B、C、D4组肾脏组织MDA含量（nmol／mg蛋白）分别为2．74±0．48、4．51±1．47、6．92±2．18、8．87±2．31,SOD活力（U／mg蛋白）分别195．21±11．01、170．24±13．59、140．86±25．91、121．54±25．50,各组间差异有统计学意义（P〈0．05）。B、D组结晶等级评分高于A组,D组结晶等级评分高于B组（P〈1．05）。培论碘海醇促进了大鼠肾小管内草酸结晶量的增加,其机制与碘海醇诱导的肾小管上皮氧化应激损伤有关。     

白藜芦醇介导Nrf2/ARE信号通路对大鼠草酸钙肾结石模型的抗氧化损伤作用

目的探讨白藜芦醇(Res)在大鼠草酸钙肾结石模型中的抗氧化作用。方法将24只SD大鼠随机分为对照组、结石模型组和结石模型+Res干预组,每组8只。结石组给予自由饮水并用乙二醇+氯化铵溶液灌胃(2mL/d)法制备草酸钙结石模型,干预组在结石模型基础上加用Res灌胃(每日200mg/kg)。28d造模完成后采集肾组织标本,用HE染色法比较各组肾脏病理改变及草酸钙结晶的沉积情况并检测肾组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽(GSH)含量;RT-PCR法检测核因子E2相关因子2(Nrf2)mRNA表达水平;Western blot法检测Nrf2蛋白表达水平。结果 (1)肾组织病理结果:肾组织与对照组比较,结石模型组大鼠肾组织HE染色切片中可见肾小管的病理性改变并大量结晶形成(P0.05);与结石模型组比较,结石模型+Res干预组肾小管扩张不明显,炎细胞浸润以及管腔内草酸钙晶体明显减少(P0.05)。(2)肾组织氧化应激物水平:与对照组比较,结石模型组SOD、CAT和GSH含量降低,MDA含量升高(P0.05);与结石模型组比较,结石模型+Res干预组SOD、CAT和GSH含量显著升高,MDA含量显著降低(P0.05)。(3)肾组织Nrf2蛋白水平:与对照组比较,结石模型组Nrf2mRNA和Nrf2蛋白表达量降低(P0.05);与结石模型组比较,结石模型组+Res干预组Nrf2mRNA和蛋白表达量明显升高(P0.05)。结论 Res通过其抗氧化作用抑制/延缓了草酸钙晶体对大鼠肾小管上皮细胞的损伤及粘附,此作用可能与Nrf2/ARE信号通路有关。     

抗纤灵冲剂对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织氧化应激反应的影响

目的：研究抗纤灵冲剂对单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠肾组织氧化应激的影响。方法：SD雄性大鼠120只,随机分为正常组、假手术组、模型组、抗纤灵组和科素亚组,各组分别观察28d。于造模后每周各组随机选取6只检测肾组织匀浆超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）。结果：与正常组、假手术比较,模型组肾组织SOD、GSH明显降低（P〈0.01）,MDA明显升高（P〈0.01）。在UUO模型中,SOD、GSH、逐渐下降,MDA逐渐升高。抗纤灵组与模型组比较,肾组织SOD、GSH明显升高（P〈0.01）,MDA明显下降（P〈0.01）。结论：在肾间质纤维化的起始和发展过程中,都有氧化应激的参与。抗纤灵冲剂能有效缓解在大鼠UUO模型中肾组织氧化应激的反应,进而可能延缓肾间质纤维化的进程。     

N-乙酰半胱氨酸抑制大鼠肾草酸钙结石形成机制的研究

目的：探讨N一乙酰半胱氨酸（NAc）对大鼠肾草酸钙结石形成的影响及机制,为临床预防尿路结石提供理论依据。方法：将30只健康清洁成年雄性Wistar大鼠先在相同环境下适应性喂养1周,然后随机分为3组：A组（空白对照组）、B组（单纯诱石组）、C组（诱石＋NAC干预组）。A组饮去离子水,B组饮1％乙二醇的去离子水,C组饮1％乙二醇去离子水,并给予NAC100mg／（kg·d）灌胃。第4周处死大鼠,取出双肾,左肾纵向剖开,用10％甲醛固定,HE染色石蜡切片,在100、400倍光镜下观察肾组织草酸钙结晶沉积情况,并进行分级及评分。右肾皮质制成10％的匀浆,检测丙二醛（MDA）及超氧化物歧化酶（SOD）。全部实验数据通过SPSS17．0统计软件分析处理。结果：①肾脏结晶沉积情况分级及评分结果：与B组相比,C组的肾脏结晶沉积评分明显降低（P〈0．05）。②MDA检测结果：与B组相比,C组的MDA含量降低,差异有统计学意义（P〈0．05）。③SOD检测结果：与B组相比,C组的SOD含量增高,差异有统计学意义（P〈0．05）。④A、B、C三组肾组织结晶等级评分与s0D含量的相关系数为-0．499（P〈0．01）,结晶评分与MDA含量的相关系数为0．592（P〈0．01）。结论：NAc可以通过其抗氧化作用抑制大鼠肾草酸钙结石的形成。     

尿钙水平对草酸钙结石患者尿液MCP-1和MDA生成的影响

目的：探讨尿钙水平在结石形成过程中的作用。方法：选择草酸钙结石住院患者110例,按尿钙水平分为两组,24小时尿钙≥240mg／d的35例纳入高尿钙结石组,24小时尿钙％240mg／d的75例纳入低尿钙结石组;同时随机挑选30例无泌尿系结石的健康者作对照组。收集三组尿液,分别运用ELLISA和TBA法检测尿液中细胞因子MCP—1、TGF—β和脂质过氧化产物丙二醛（MDA）的含量。结果：MCPl在高尿钙组、低钙尿组和健康对照组问的含量分别为36．7（23．71,50．22）pg／ml、29．22（20．40,40．29）pg／ml、26．98（13．59,38．60）pg／ml;与其他两组比较,高尿钙组尿液中MCP1生成增多（P〈0．05）。TGF-β在三组间含量无差别（P〉0．05）。MDA在高尿钙组、低钙尿组和健康对照组问的含量分别为2．02（1．05,2．95）nmol／ml、1．70（1．00,2．18）nmol／ml、1.19（0．73,1．41）nmol／ml;与健康对照组比较．高尿钙结石组和低尿钙结石组尿中MDA生成增加（P〈0．05）;高尿钙结石组和低尿钙结石组尿巾MDA则无明显差异（P〉0．05）。相关性分析,尿钙水平与尿MCP—1水平存在iESH关关系,r=0．226,P〈0．05;尿钙水平与MDA水平无明显相天关系（P〉0．05）。结论：高尿钙可促进草酸钙结石患者尿液MCP-1生成增多,TGF-β的生成无明显变化。草酸钙结石患者尿液MDA水平升高,提示肾脏氧化应激水平增加,但高尿钙并未影响患者尿MDA的生成水平,提示高尿钙在草酸钙结石患者肾脏氧化应激损伤中不越丰耍的作用．     

4种大鼠肾草酸钙结石模型的比较

目的筛选简便、快捷、成石效果好的SD大鼠肾草酸钙结石的造模方法。方法分别采用目前普遍使用的2种大鼠肾草酸钙结石的模型复制方法和2种改良的造模方法进行造模,并设立空白对照组,造模结束后采集每组大鼠24h尿量及血清,比较大鼠24h尿量、尿Ca2＋、尿Mg2＋、尿pH、尿草酸（0x）及血尿素氮（BUN）、肌酐（cr）、P、Ca2＋、Mg2＋,肾脏病理切片HE染色后光学显微镜下观察和比较各组大鼠肾脏病理改变及草酸钙结晶的沉积情况。结果E组[1％乙二醇＋2％氯化铵＋10％葡萄糖（48d）]在光学显微镜下草酸钙结晶沉积较传统组C组明显增多（P〈0．05）,但有30％大鼠死亡,血肌酐在5组大鼠中最高。D组[1％乙二醇＋2％氯化铵＋10％葡萄糖（28d）]较传统组C组草酸钙结晶沉积明显增多（P〈0．05）,并且造模时间短,大鼠存活率高（80％）,E组与D组相比结晶形成量无统计学意义（P〉0．05）,B组[1％乙二醇（28d）3肾脏中无肾结晶形成,仅有轻微的肾脏病理学改变,大鼠无死亡,肌酐不高。空白对照组无结晶形成,无病理改变。结论用1％乙二醇＋2％氯化铵＋10％葡萄糖诱导28天复制肾草酸钙结石模型的效果好,并且花费时间短,大鼠存活率高,建议选用。     

白藜芦醇对衰老小鼠GSH和抗超氧阴离子自由基含量变化的影响

目的：研究白藜芦醇对皮肤的抗衰老作用。方法：健康4月龄昆明种小鼠12只,作为青年对照组（A）;健康18月龄昆明种小鼠60只,随机分成5组：老年空白对照组（B）、老年阳性对照组（C）、老年绞股蓝皂苷对照组（D）、老年白藜芦醇高剂量组（E）、老年白藜芦醇低剂量组（F）。每日灌胃给药,以生化分析方法测定GSH及抗超氧阴离子自由基含量。结果：与青年对照组对比其余五个老年组的GSH和抗超氧阴离子自由基含量在药物的作用下明显提高。结论：白藜芦醇能够延缓小鼠的衰老。     

圣地红景天对糖尿病大鼠尿微白蛋白排泄率及肾脏TGF-β1表达的影响

目的：观察圣地红景天对1型糖尿病大鼠尿微白蛋白排泄率及肾脏TGF-β1表达的影响并探索其机制。方法：SD雄性大鼠45只,单侧肾切除后随机分为：对照组15只（NC组）,模型组30只,后者按55mg/kg体重单次腹腔注射1%链脲佐菌素（STZ）制作糖尿病模型。待造模成功后随机分为糖尿病模型组（DC组）、糖尿病治疗组（DR组）各15只。分别于第4、8、12周时检测各组血尿素氮、肌酐及尿肌酐、尿微白蛋白排泄率,同时测肾组织中丙二醛（MDA）含量,铜锌超氧化物歧化酶（Cu-Zn-SOD）及谷胱甘肽过氧化酶（GSH-Px）活性,留取肾脏组织分别作光镜、电镜检查及免疫组化检查TGF-β1的表达。结果：与NC组相比,DR组24h尿微白蛋白排泄率下降,肾组织中NDA含量下降,Cu-Zn-SOD及GSH-Px活性升高;与DC组相比,DR组尿蛋白排泄率减少,早期肾小球高滤过减轻,病理检查示系膜增生明显减轻,电镜示肾小球毛细血管基底膜增厚轻于DC组,免疫组化分析示DR组TGF-β1表达较DC组明显减少。结论：圣地红景天可以有效减轻糖尿病大鼠的肾脏损害,其对糖尿病肾脏的保护作用可能与其抗氧化应激及降低肾组织TGF-β1的表达有关。