褪黑素对老化卵母细胞体外发育能力的改善效果评价

目的探讨体外培养阶段(IVC)添加褪黑素(MT)对卵母细胞老化引起发育受损的改善效果。方法采用不同浓度的过氧化氢(H_2O_2)处理小鼠MII期卵母细胞诱导老化,浓度分别为0(对照组)、10、50、100、150μmol/L,体外受精(IVF)后统计各组二细胞率、囊胚形成率,检测老化卵母细胞的线粒体活性及丰度(Mitotracker Red、JC-1)、活性氧(ROS)水平、线粒体拷贝数等指标;在100μmol/L H_2O_2处理条件下,老化卵母细胞在IVF后的培养阶段分别添加不同浓度褪黑素(10-5、10-7、10-9 mol/L),统计二细胞率、囊胚率,并且分别检测各组获得囊胚的细胞数及凋亡率。结果不同浓度H_2O_2诱导卵母细胞老化后,囊胚发育率随H_2O_2浓度的升高而降低,50μmol/L和100μmol/L H_2O_2组囊胚形成率分别为(26.27±0.06)%和(28.46±3.45)%,相比对照组的(34.90±1.77)%显著降低,差异有统计学意义(P0.05);在H_2O_2诱导老化卵母细胞中,100μmol/L、150μmol/L H_2O_2浓度时,ROS水平相比对照组显著升高,差异具有统计学意义(P0.05);而活性线粒体的丰度及拷贝数呈现下降趋势,膜电位呈上升趋势,但相比对照组无显著性差异(P0.05);100μmol/L H_2O_2处理诱导卵母细胞老化后,在培养液中添加10-9 mol/L褪黑素组与老化对照组相比,囊胚率[(29.42±2.39)%vs.(20.87±4.12)%]、囊胚细胞数(39.36±9.78vs.37.91±4.25)均显著升高,凋亡率显著下降(2.57%vs.3.18%),差异均有统计学意义(P0.05);并且这些指标均达到与未经老化处理组的相似发育水平。结论老化卵母细胞体外受精后发育率和发育质量偏低的现象,可以通过在受精后体外培养阶段添加褪黑素得到改善。     

靶向中期因子反义寡核苷酸的体内抗肿瘤双应

目的 观察靶向中期因子反义寡核苷酸的体内抗肿瘤效应.方法 构建人肝癌裸鼠原位移植瘤模型48只,随机分6组,生理盐水对照组,MK-AS(每日25、50、100mg/kg)组,MK-Sen(每日50mg/kg)组和5-Fu(每日10 mg/kg)组,放免法检测血清AFP浓度,Western blot检测组织MK、p53、bax、bcl-2和Caspase-3蛋白水平.结果 (1)与生理盐水对照组比较,MK-AS治疗组的肿瘤体积明显减小,[(807.75±195.19)mm3比(552.75±84.38)、(532.00±121.57)、(294.50±70.66)mm3],差异有统计学意义(P<0.01);(2)MK.AS治疗组的肿瘤瘤重与生理盐水对照组比较显著降低,[(1.29±0.13)g比(0.70±0.14)、(0.64±0.18)和(0.44±0.18)g],差异有统计学意义(P<0.01);(3)MK-AS明显下调肿瘤组织MK和bcl-2蛋白的表达,而p53、bax、Caspase-3表达上调.结论 MK-AS具有明显的体内抗肿瘤效应;MK-AS的抗肿瘤效应可能与凋亡相关蛋白p53、bax、Caspase-3表达水平的上调和bcl-2的下调有关.     

直肠癌组织中嘌呤能离子通道型受体7表达的意义及其与肿瘤细胞特性的关系

目的:探讨直肠癌组织中嘌呤能离子通道型受体7(P2X7R)表达与肿瘤病理分期、脉管浸润及肿瘤细胞增殖、侵袭能力的关系。方法:收集2019年10月—2020年10月在我院就诊的直肠癌患者的癌组织标本120例,同时选取癌旁组织作为对照,采用免疫组化染色法检测P2X7R表达;购买人结直肠癌细胞株HCT116及正常结直肠上皮细胞NCM460,将HCT116细胞随机分为对照组、P2X7R激动剂低剂量组(0.01 mmol/L)、P2X7R激动剂高剂量组(0.1 mmol/L),其中P2X7R激动剂组给予苯甲酰-4-苯甲酰-三硝基苯磺酸(BzATP),采用CCK法检测细胞增殖情况,侵袭实验检测细胞侵袭能力,Western blotting检查p-STAT3、PWX7R蛋白相对表达量。结果:直肠癌组织P2X7R阳性表达率为37.50%,明显低于癌旁组织(91.67%),差异有统计学意义(P<0.05);TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、有脉管浸润直肠癌组织P2X7R阳性表达率为18.60%和16.67%,明显低于Ⅰ~Ⅱ期、无脉管浸润直肠癌组织(P<0.05);HCT116细胞PWX7R蛋白相对表达量为(0.233±0.082),明显低于NCM460(0.982±0.102)细胞,差异有统计学意义(P<0.05);0.01 mmol/L激动剂组、0.1 mmol/L激动剂组细胞培养12 h、24 h和48 h时OD值明显低于对照组,0.1 mmol/L激动剂组细胞培养12 h、24 h和48 h时OD值分别为(0.300±0.096)、(0.446±0.106)和(0.570±0.110),明显低于0.01 mmol/L激动剂组,差异有统计学意义(P<0.05);0.01 mmol/L激动剂组、0.1 mmol/L激动剂组细胞侵袭数低于对照组,0.1 mmol/L激动剂组细胞侵袭数为(68.38±20.11)个,明显低于0.01 mmol/L激动剂组,差异有统计学意义(P<0.05);0.01 mmol/L激动剂组、0.1 mmol/L激动剂组p-STAT3、PWX7R蛋白相对表达量高于对照组,0.1 mmol/L激动剂组p-STAT3、PWX7R蛋白相对表达量分别为(1.322±0.143)和(1.011±0.132),明显低于0.01 mmol/L激动剂组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:直肠癌P2X7R表达下调,与肿瘤分期及脉管浸润有关,促进P2X7R表达可抑制直肠癌细胞增殖及侵袭能力。     

内毒素/脂多糖对烫伤大鼠休克期肝脏脂肪代谢的影响

目的观察内毒素/脂多糖(LPS)对烫伤大鼠休克期肝脏脂肪代谢的影响。方法采用30%TBSAⅢ度烫伤大鼠模型,随机分为单纯烫伤组(烫伤组)和烫伤后LPS攻击组(攻击组),另设假烫对照组(对照组),每组20只。攻击组大鼠于烫伤后2h腹腔注射LPS,3.0mg/kg.伤后24、48h分别检测3组大鼠血浆LPS、肿瘤坏死因子(TNF)α、游离脂肪酸(FFA)含量和肝组织内腺苷三磷酸(ATP)、甘油三酯(TG)及丙二醛(MDA)含量,并进行肝组织形态学观察。结果对照组大鼠假烫后24、48h,血浆FFA水平分别为(0.4±0.3)、(0.5±0.3)mmol/L,烫伤组分别为(0.9±0.3)、(1.2±0.5)mmol/L,攻击组大鼠伤后增加至(2.3±0.3)、(2.5±0.4)mmol/L,后两组之间比较差异有统计学意义(P<0.01).伤后48h,烫伤组和攻击组的肝组织TG含量分别为(242±27)mmol/g和(530±30)mmol/g,ATP含量分别为(6.0±2.4)μmol/g和(1.7±0.5)μmol/g,组间比较差异有统计学意义(P<0.01).组织形态学检查见,烫伤组大鼠肝细胞脂肪变性和线粒体损伤程度明显轻于攻击组,对照组肝细胞形态正常。结论烧伤后早期LPS打击可引发脂源性能量利用障碍,并加剧肝脏脂肪变性。     

高糖诱导前列腺上皮细胞微小RNA的差异表达及miR-301a的促增殖作用

目的 检测高糖刺激下微小RNA(miRNA)在前列腺组织及细胞中的差异表达,探讨高血糖对前列腺影响的分子机制.方法 将成年雄性SD大鼠随机分为对照组和高血糖组(＞300 mg/dl),应用miRNA芯片技术检测两组间miRNA表达谱的差异,并通过实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)方法验证;以qRT-PCR检测差异表达的miRNAs在高糖(50 mmol/L)培养的RWPE-1细胞中的表达;噻唑蓝(MTT)比色法检测转染miRNAs和/或高糖(25～50 mmol/L)培养的RWPE-1的增殖.结果 高血糖组大鼠前列腺组织中4个miRNA 上调(miR-186 2.405倍、miR-30la 2.202倍、miR-3652.093倍、miR-193 2.317倍),2个miRNA下调(miR-434 0.298倍、miR-361 0.386倍),差异均有统计学意义(P＜0.05);高糖培养下,RWPE-1细胞中各miRNAs的表达趋势与之一致.MTT实验中25 mmol/L组、50 mmoL/L组、miR-30la转染组的细胞吸光度(A)值分别为起始的175％、197％、188％,与对照组(122％)比较差异有统计学意义(p＜0.05);50 mmol/L高糖联合miR-301a抑制物转染组的A值为起始的143％,与50 mmol/L组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 体内外高糖条件均可引起前列腺miRNA表达谱变化,高糖通过miR-301a对前列腺上皮细胞的增殖有明显促进作用.     

尿α1和β2-微球蛋白含量变化在草酸钙结石形成中的作用

目的 探讨α1微球蛋白(α1-MG)、β2微球蛋白(β2-MG)含量变化在草酸钙结石形成中的作用. 方法 2010年7月至2010年9月收治结石患者66例.男45例,女21例.年龄13 ～78岁,平均(51.2±15.2)岁.单侧肾结石30例,双肾结石14例,单侧输尿管结石17例,膀胱结石5例.按照红外光谱仪对结石成分的分析结果分为草酸钙组和非草酸钙组.对照组34例,男22例,女12例.年龄12～80岁,平均(47.2±14.7)岁.对3组患者血液生化及24 h尿液生化,α1 -MG及β2-MG含量进行统计学比较分析. 结果 3组年龄、性别比差异无统计学意义.草酸钙组SCr值为(81.9±19.2)μmol/L,BUN为(6.3±2.9) mmol/L,非草酸钙组分别为(82.2±19.4) μmol/L,(6.4±2.3) mmol/L,与对照组(62.3±15.5) μmol/L、(5.0±1.4)mmol/L比较,差异有统计学意义(P＜0.05).草酸钙组尿α1 -MG为(7.6±8.3) mg/L,β2-MG为(514.5±630.5) mg/L,高于非草酸钙组的(3.0±1.7) mg/L和(170.0±117.2)mg/L及对照组的(3.6±2.6) mg/L,(179.7±159.3)mg/L,差异有统计学意义(P＜0.05).非草酸钙组尿尿酸含量(3604.8±1291.5) μmol/24 h,与草酸钙组( 2643.3±693.6) μmol/24 h及对照组(2678.3±948.2) μmol/24 h比较差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 血α1 -MG、β2-MG含量变化可能在草酸钙结石的形成中有重要的影响作用.     

柠檬酸钠对胃癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的 探讨柠檬酸盐对胃癌细胞的影响及其机制.方法 将胃癌细胞株BGC-823和SGC-7901各分成对照组、5mmol/L组、10 mmol/L组,分别用0、5、10 mmol/L柠檬酸钠处理.24、48h后,荧光显微镜下观察细胞增殖变化、进行活细胞计数、计算细胞增殖抑制率；应用4’,6-二.脒基-2-苯基吲哚(DAPI)细胞核染色和流式细胞仪检测细胞凋亡；24h后蛋白免疫印迹法(Western blot)检测凋亡相关蛋白表达.结果 5、10 mmol/L组活细胞计数均低于对照组,细胞增殖抑制率均高于对照组(P＜0.05)；DAPI染色显示凋亡细胞核变化特点.流式细胞仪凋亡检测显示,BGC-823/SGC-7901对照组、5、10 mmol/L组,24h后凋亡率分别为(10.68±1.20)％/(11.86±0.20)％,(46.36±0.60)％/(50.72±1.90)％,(58.41±3.50)％/(59.92±2.60)％；48 h后分别为(8.20±1.60)％/(4.99±0.90)％,(76.34±2.70)％/(82.92±2.80)％,(87.18±3.10)％/(95.65±1.30)％.5、10 mmol/L组与对照组比较细胞凋亡率增高(P＜0.05),并有浓度和时间依赖性.Western blot法显示两株细胞中多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)、活化Caspase-9(cleaved Caspase-9)、活化Caspase-3(cleaved Caspase-3)表达增高,髓细胞白血病基因-1(Mcl-1)表达降低,在SGC-7901中突变型p53( Mtp53)表达降低.结论 柠檬酸钠能有效抑制胃癌细胞增殖,并经线粒体通路诱导凋亡,其作用随浓度和作用时间增加而增强.其机制可能与Mcl-1表达降低有关.     

腐胺提高高龄小鼠卵母细胞质量及其机制的研究

目的本研究探讨腐胺是否通过抗氧化应激的机制提高体外培养的高龄卵母细胞的质量。方法从9月龄C56/B6J雌鼠获取GV期卵丘-卵母复合体(COC),分为对照组、0.5mmol/L腐胺处理组、0.5mmol/Lα-二氟甲基鸟氨酸(DFMO,腐胺抑制剂)组。三组COC体外培养液16～18h,收集MⅡ期卵母细胞。计算各组高龄卵母细胞成熟率,检测卵母细胞mtDNA拷贝数,JC-1荧光分析染色线粒体膜电位,并分析卵母细胞内氧自由基和超氧化物歧化酶1(SOD_1)的表达。结果腐胺组卵母细胞成熟率显著高于对照组[(87.57±1.70)%vs.(66.02±4.05)%,P0.01]。DFMO处理组线粒体DNA拷贝数显著高于对照组(P0.05)。与对照组相比,腐胺组卵母细胞内氧化应激水平显著下降(P0.01);DFMO组氧化应激水平显著升高(P0.01)。与对照组比较,腐胺组卵母细胞线粒体膜电位显著升高(P0.01),而DFMO组显著下降(P0.05)。与对照组比较,腐胺组卵母细胞内SOD_1蛋白表达显著增高(P0.05),DFMO组显著下降(P0.05)。结论体外培养的高龄卵母细胞,腐胺通过抗氧化应激、改善线粒体功能提高卵母细胞质量和胚胎发育潜能,具有潜在的临床应用价值。     

补肾健脾、益气通络方加减配合缬沙坦治疗糖尿病肾病蛋白尿的临床疗效观察

目的:探讨补肾健脾、益气通络方加减配合缬沙坦治疗糖尿病肾病的临床疗效,及对蛋白尿的影响。方法:选取我院肾病科2015年02月~2017年02月DN患者100例,采用随机数字表法分为治疗组和对照组各50例,两组均给予基础降压、降糖、降脂等治疗,治疗组给予补肾健脾、益气通络方+缬沙坦治疗,对照组给予雷公藤多甙片+缬沙坦治疗,8周为1疗程,1疗程后分别观察中医证候分级量化评分;血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、空腹血糖(FBG)、血脂(TC、TG)含量变化;血浆白蛋白(Alb)、24 h尿蛋白定量(24 h Upr)、24 h尿微量蛋白排泄率(UAER)变化及有效率,并进行对比分析。结果:治疗后治疗组腰膝酸软[(1.33±0.64)分比(1.92±0.73)分,t=-2.321]、气短懒言[(1.28±0.71)分比(2.01±0.82)分,t=-2.543]、疲倦乏力[(1.03±0.54)分比(1.84±0.63)分,t=-1.972]、食少纳呆[(0.92±0.73)分比(1.36±0.25)分,t=-1.883]、面色昏暗[(0.85±0.21)分比(1.30±0.22)分,t=-1.702]、浮肿[(1.17±0.76)分比(1.83±0.82)分,t=-2.003]均低于对照组(P0.05);治疗后两组在大便溏、夜尿多、肢体麻木等方面比较差异无统计学意义(P0.05);两组前TC、TG、Scr、BUN、FBG无显著性差异(P0.05);两组组内治疗后与治疗前比较差异均有统计学意义(P0.05);治疗后治疗组TC[(2.09±0.55)mmol/L比(2.87±0.74)mmol/L,t=-1.889]、BUN[(5.01±0.74)mmol/L比(5.88±0.63)mmol/L,t=-2.231]、FBG[(6.04±1.03)mmol/L比(7.15±1.20)mmol/L,t=-2.012]均低于对照组(P0.05);治疗后TG、Scr含量与对照组比较,差异无明显统计学意义(P0.05);两组前Alb、24 h Upr、UAER比较无显著性差异(P0.05);两组组内治疗后与治疗前比较差异均有统计学意义(P0.05);治疗后治疗组Alb[(36.22±3.10)g/L比(35.12±3.08)g/L,t=2.013]高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)、治疗后治疗组24 h Upr[(1.62±0.18)g/d比(1.97±0.22)g/d,t=2.341]、UAER[(462.71±40.86)g/d比(502.67±44.38)mg/d,t=4.220]均低于对照组(P0.05);治疗组总有效率为90.0%(45/50),对照组为78.0%(39/50),两组比较差异有统计学意义(Z=-2.089,P=0.037)。结论:在常规西药治疗的基础上给予补肾健脾、益气通络方加减治疗糖尿病肾病能够改善患者脾肾气虚的临床症候,可能作用机制与降低血清TC、TG、Scr、BUN、FBG和尿中24 h Upr、UAER相关,为临床治疗提供治疗依据。     

AAPH体外诱导小鼠睾丸间质细胞氧化应激模型建立与评价

目的:利用偶氮二异丁脒盐酸盐(AAPH)作为刺激源,建立体外小鼠睾丸间质细胞(LCs)氧化应激损伤模型,并进行生理功能评价。方法:实验一将小鼠睾丸间质细胞(TM3)随机分为6组,分别加入0、1、5、10、50和100mmol/L AAPH,分别作用4、8、24 h。测定TM3细胞活性(MTS法)、衰老情况(β-半乳糖苷染色法)、线粒体膜电位(JC-1荧光法)、线粒体DNA拷贝数(QPCR法)。实验二在实验一筛选得出AAPH作用浓度区间(≤10 mmol/L)基础上,将TM3细胞随机分为9组,分别加入0、0.1、0.5、1、2、4、6、8和10 mmol/L AAPH,分别作用24、48、72 h。测定TM3细胞活性、ROS水平、衰老情况。筛选出AAPH诱导TM3细胞氧化应激损伤的最佳作用浓度和作用时间。结果:实验一表明,4 h 50 mmol/L、8 h 10 mmol/L、24 h 5 mmol/L AAPH组TM3细胞存活率均≥50%,AAPH初步浓度应≤10mmol/L,作用时间可≥24 h。实验二表明,24 h 6 mmol/L AAPH组TM3细胞存活率≥70%、ROS阳性率为56.88%、线粒体膜电位正常、mtDNA拷贝数上升、未出现衰老,可以作为诱导TM3细胞氧化损伤模型的适宜条件。结论:AAPH浓度6 mmol/L,作用时间24 h,可作为诱导TM3细胞氧化损伤模型的适宜条件。     

脓毒症患者血小板下降与感染性休克发生的相关性

目的：分析脓毒症患者血小板下降情况及其与感染性休克发生的相关性。方法回顾性分析45例脓毒症患者血小板正常范围内下降（同时测同一时间点的TPO水平）与感染性休克发生前后的变化,以及发生感染性休克与未发生休克的脓毒症患者血小板计数变化（同一时间TPO水平）并同APACHEⅢ（急性生理学及慢性健康状况评分系统Ⅲ）评分对比分析得出。结果脓毒症患者诊断前PLT水平为（187.7＆#177;51.73）＆#215;109/L;脓毒症诊断后PLT水平为（126.1＆#177;38.71）＆#215;109/L,二者差异具有统计学意义（t=5.743,P＜0.001）;24例脓毒症未发生休克患者PLT下降,为（49.44＆#177;49.50）＆#215;109/L;21例感染休克患者PLT水平下降,为（90.19＆#177;44.86）＆#215;109/L;二者差异具有统计学意义（t=-2.896,P＜0.001）。脓毒症患者诊断前后血小板计数下降和感染休克发生后血小板计数下降与APACHEⅢ评分均呈正相关关系（r=0.449、0.978,P＜0.001）。结论血小板计数下降作为脓毒症患者病情变化的单独风险依据,可观察抗炎与促炎平衡状态的指标,无论血小板计数在否正常范围,下降的趋势更为重要。     

TNF-α抑制剂对重症急性胰腺炎大鼠肾损伤的影响

目的：探讨肿瘤坏死因子α（TNF-α）抑制剂对重症急性胰腺炎（SAP）大鼠肾损伤的影响。方法：60只SD大鼠随机分成假手术组,SAP组,TNF-α抑制剂治疗组,每组20只。各组建模48 h后处死动物并收集标本,测血清淀粉酶,TNF-α,尿素氮和肌酐;应用TUNEL法检测肾细胞凋亡,计算凋亡指数（AI）;并用免疫组化法检测肾脏组织NF-κB的表达,RT-PCR检测ET-1 mRNA的表达。结果：假手术组的各项指标均低于SAP组和治疗组（P＜0.05）。SAP组TNF-α,血清淀粉酶,尿素氮,肌酐和NF-κB IOD水平分别为（185.36±10.95）ng/L,（7 257.30±361.20）U/L,（17.28±0.87）mmol/L,（78.83±3.02）μmol/L和316.25±20.90,治疗组以上指标分别为（124.32±15.11）ng/L,（6182.60±291.63）U/L,（13.66±0.88）mmol/L,（68.68±3.38）μmol/L和241.90±19.04,两组间比较差异有统计学意义（P＜0.05）。SAP组AI为3.33±0.49,明显低于治疗组的7.04±0.41（P＜0.05）。SAP组中ET-1 mRNA水平明显高于治疗组和假手术组（P＜0.05）。结论：TNF-α抑制剂可促进大鼠肾脏细胞凋亡,减轻炎症反应对肾的损伤,改善肾脏功能。     

维持性血液透析患者血浆同型半胱氨酸和血清脑钠肽检测的临床意义

目的：探讨维持性血液透析（maintenance hemodialysis,MHD）患者血浆同型半胱氨酸（homocysteine,Hcy）和血清脑钠肽（brain natriuretic peptide,BNP）水平与心血管疾病（cardiovascular disease,CVD）之间的关系。方法将95例 MHD患者分为心血管疾病组（CVD组）55例和无心血管疾病组（NCVD组）40例;另选30名健康对照者（健康对照组）,检测各组血浆 Hcy、血清BNP、血肌酐（SCr）、血糖（glucose,GLU）、血白蛋白（albumin,Alb）、血脂并进行比较。结果 MHD患者血浆 Hcy [（26.89＆#177;10.12）μmol/L]明显高于健康对照组[（8.05＆#177;2.53）μmol/L]（P〈0.01）;血清 BNP [（1275.02＆#177;1123.94）pg/ml]显著高于对照组[（57.82＆#177;34.61）pg/ml]（P〈0.01）;其中 CVD 组血浆 Hcy[（31.73＆#177;10.18）μmol/L]高于 NCVD 组[（20.24＆#177;5.01）μmol/L]（P〈0.01）;血清 BNP [（1957.49＆#177;1001.83）pg/ml]高于 NCVD组[（336.61＆#177;308.22）pg/ml]（P〈0.01）。以健康对照组血浆 Hcy 均数＋2倍标准差（x＋2s）（13.11μmol/L）为95%可信度上限,超过此值确定为高同型半胱氨酸血症（Hyperhomocysteinemia,HHcy）。95例 MHD患者 HHcy发生率为87.37%（83/95）;其中CVD组 HHcy占94.55%（52/55）,NCVD 组占77.50%（31/40）,均明显高于正常对照组6.67%（2/30）（均 P〈0.01）。CVD 组和 NCVD 组 SCr、GLU、Alb 及血脂比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。CVD组血浆 Hcy与 SCr、Alb呈正相关（r=0.380、0.354,P〈0.01）,NCVD组血浆 HcyA与BNP、SCr、Alb呈正相关（r=0.341、0.337、0.389,P〈0.05）,血清 BNP 与 Hcy、SCr 呈正相关（r=0.341、0.389,P〈0.05）;血浆 Hcy、血清BNP与其余各血生化指标间无相关性（P〉0.05）。结论血浆 Hcy、血清BNP水平可作为 MHD患者CVD危险因素的预测指标。     

HCV核心蛋白通过LXRα核受体介导HepG2细胞甘油三酯合成增加

目的：观察丙型肝炎病毒（HCV）的核心蛋白（core）对肝细胞甘油三酯（TG）合成的影响。方法将HCV 1b基因型core表达载体pcDNA3.1-myc/his（-）-core1b和HCV 3a基因型core表达载体pcDNA3.1-myc/his（-）-core3a分别转染至HepG2细胞,利用定量测定法检测细胞内TG含量,用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应法（real time qPCR）、蛋白免疫印迹（Western blot）方法观察脂质合成相关基因肝X受体α（LXRα）、甾醇调节元件结合蛋白1c（SREBP1c）和脂肪酸合酶（FASN）的mRNA和蛋白的表达变化,并进行比较分析。结果 HepG2细胞转染两个基因型HCV core表达载体之后均能显著增加细胞内的TG含量（P＜0.05）,尤以基因型core3a组为差异更显著（P＜0.001）。Real-time PCR结果显示,两个基因型core均上调LXRα的mRNA水平（P＜0.05）,基因型core3a组差异更为显著（P＜0.01）;FASN的mRNA水平只在仅在基因型core3a组上调（P＜0.05）,而基因型core1b组差异无统计学意义。Western blot结果显示,HCV core表达可以明显上调表达可以显著上调SREBP1c的蛋白水平,尤其基因型core3a组更为显著。对FASN蛋白水平,基因型core3a上调其表达,但基因型core1b组无明显变化。结论 HCV可能通过LXRα介导肝细胞内的脂质合成诱导肝脂肪变,有待进一步研究。     

富血小板血浆治疗症状性宫颈内膜移位的研究

目的：评价自体富血小板血浆注射对症状性宫颈内膜移位的治疗疗效。方法收集128例诊断为Ⅲ度症状性宫颈内膜移位患者,随机分为自体富血小板血浆（PRP）注射组（实验组）和微波组（对照组）,阴道镜评估宫颈糜烂区愈合情况,应用Kirby-Baue抑菌圈试验评价PRP的抗菌性能,采用LIVE/DEAD BacLight死活菌试剂盒检测生物膜中细菌活力。结果 PRP体外具备良好的抗菌性能,临床随访表明PRP组和微波组6周后总有效率为96.8%（60/62）和80.0%（48/60）,差异具有统计学意义（χ2=9.206,P＜0.05）,富血小板血浆组宫颈创面愈合速度（5.3＆#177;2.1周）较微波组（7.9＆#177;2.8周）显著加快（χ2=7.206,P＜0.01）;PRP组治疗相关的不良反应（阴道分泌物及出血等）显著低于微波组,提示PRP具有很好的耐受性和安全性。结论自体PRP对治疗症状性宫颈内膜移位具有良好的应用前景。     

痰热清注射液辅助治疗慢性阻塞性肺病急性加重期的疗效观察

目的：观察头孢呋辛针联合痰热清注射液治疗慢性阻塞性肺病急性加重期的临床疗效及不良反应。方法选取2010年1月至2013年1月本院收治的100例不合并呼吸衰竭的慢性阻塞性肺病急性加重期患者,随机分为治疗组与对照组,两组患者各50例,对照组应用头孢呋辛针治疗,治疗组在此治疗的基础上加用痰热清注射液治疗,数据采用统计软件包SPSS 13.0进行处理,分析两组患者的临床疗效。结果治疗1个疗程后,治疗组患者有效率为96.0%,高于对照组（84.0%）,差异有统计学意义（χ2=4.000,P=0.046）。两组患者治疗前的炎症指标（白细胞总数及分类、CRP、PCT）差异均无统计学意义（均P＞0.05）;治疗1周后,两组患者炎症指标均较治疗前显著下降（均P ＜0.05）,治疗后痰热清治疗组患者的炎症指标（白细胞总数及分类、CRP、PCT）分别为（0.55±0.36×10^9/L、（52.15±7.27）%、（25.16±15.34）mg/L和（0.23±0.19）ng/ml）均较对照组[（0.76±0.28）×10^9/L、（68.92±9.56）%、（32.58±20.50）mg/L和（0.86±0.37）ng/ml]显著降低,差异均具有统计学意义（均P＜0.05）。结论头孢呋辛针联合痰热清注射液治疗轻度慢性阻塞性肺病急性加重期疗效确切肯定,优于单用头孢呋辛针的治疗模式。     

脂联素对高糖环境下大鼠肾小管上皮细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的探讨脂联素（adiponectin,ADPN）对高糖环境下大鼠肾小管上皮细胞（NRK-52E）血管内皮生长因子（vascular endothelialgrowthfactor,VEGF）表达的影响。方法用含不同浓度葡萄糖的DMEM培养基体外培养NRK-52E细胞,随机分6组（每组5个样本,重复5次）：A组,含5．5mmol／L葡萄糖培养基对照组;B组,含5．5mmol／L葡萄糖＋甘露醇19．5mmol／L培养基组;C组,含25mmol／L葡萄糖培养基组;D组,含25mmol／L葡萄糖培养基＋脂联素1mg／L组：E组,含25mmol／L葡萄糖培养基＋脂联素2．5mg／L组;F组,含25mmol／L葡萄糖培养基＋脂联素5mc／L组,培养24h。以逆转录一聚合酶链反应（RT-PCR）检测VEGF的表达,免疫荧光检测不同浓度干预组VEGF蛋白的表达影响。结果A组细胞VEGFmRNA表达量为（0．367±0．028）;B组为（0．346±0．045）,与A组比较无统计学差异（P〉0．05）;C组为（0．692±0．053）,显著高于A组（P〈0．01）;D组为（0．562±0．049）,低于C组（P〈0．05）。E组为（0．381±0．035）,与A组相近,但无统计学差异（P〉0．05）;F组为（0．295±0．031）,低于A组（P〈0．01）。不同浓度脂联素各组间比较,有统计学差异（P〈0．05）。免疫荧光检测VEGF表达情况;B组与A组无差异;C组显著高于A组（P〈0．01）;D组低于C组（P〈0．05）。E组与A组相近,但无统计学差异（P〉0．05）;F组低于A组（P〈0．05）。不同浓度脂联素各组间比较有统计学差异（P〈0．05）。结论ADPN能通过减少肾小管上皮细胞VEGF的表达对肾小管间质起保护作用。     

糖肾平通过TGF-β1-Smad2/3-ILK信号通路干预高糖＋LPS诱导足细胞上皮间质转分化的分子机制研究

也页目的：探讨糖肾平对高糖环境下脂多糖（ lipopolysaccharide,LPS）刺激足细胞上皮间质转分化的影响,并探讨其作用机制。方法：以体外培养大鼠肾小球足细胞为研究对象,以高糖（25 mmol/L）、LPS（1μg/mL）刺激足细胞建立模型,分为正常组、高糖组、高糖＋LPS组、厄贝沙坦组、抑制剂组、糖肾平小、中、大剂量组。采用Western blotting及RT-PCR方法检测足细胞中转化生长因子-β1（ transforming growth factor-β1,TGF-β1）、Smad2/3、整合素连接激酶（ integrin-linked kinase, ILK）、CD2相关蛋白（CD2AP）、α-平滑肌肌动蛋白（α-Smooth muscle actin,α-SMA）的表达水平。结果：与正常组比较,高糖组和高糖＋LPS组足细胞TGF-β1、ILK、α-SMA蛋白及其mRNA表达明显增加（P〈0.01）,P-Smad2/3蛋白及Smad2/3 mRNA表达明显增加（P〈0.01）,CD2AP蛋白及其mRNA表达明显减少（P〈0.01）;与高糖＋LPS组比较,厄贝沙坦组足细胞P-Smad2/3、α-SMA蛋白表达明显减少（P〈0.01）,TGF-β1蛋白表达减少（P〈0.05）,TGF-β1,Smad2/3,α-SMAmRNA表达明显减少（P〈0.01）,ILK mRNA表达减少（P〈0.05）,CD2AP蛋白及其mRNA表达明显增加（P〈0.01）;糖肾平大、中、小各剂量组足细胞TGF-β1蛋白表达明显减少（P〈0.01）,糖肾平大剂量组足细胞TGF-β1 mRNA表达减少（P〈0.05）,小、中剂量组表达明显减少（P〈0.01）;糖肾平小、中、大各剂量组足细胞P-Smad2/3蛋白及Smad2/3mRNA表达均明显减少（P〈0.01）;糖肾平小、大剂量组足细胞ILK mRNA表达减少（P〈0.05）,中剂量组表达明显减少（P〈0.01）;糖肾平大剂量组足细胞α-SMA蛋白及其mRNA表达减少（P〈0.05）;糖肾平小、中、大各剂量组足细胞CD2AP蛋白及其mRNA表达均明显增加（P〈0.01）。结论：糖肾平能够降低足细胞TGF-β1、ILK蛋白及mRNA表达,降低P-Smad2/3蛋白及Smad2/3 mRNA表达,升高足细胞标志物CD2AP蛋白及mRNA表达,降低间充质细胞标志物α-SMA蛋白及mRNA表达,通过抑制TGF-β1-Smad2/3-ILK信号通路的激活减少足细胞转分化,保护足细胞,可能是其防治糖尿病肾病的作用机制之一。     

锁定重建接骨板治疗髋臼横行骨折的生物力学研究

背景：髋臼横形骨折治疗较为困难,常采用内固定的治疗方法。近年来有学者尝试采用锁定重建接骨板,但对其的研究报道较少。 目的：比较4种不同锁定重建接骨板后方入路内固定方式治疗髋臼横行骨折的生物力学稳定性。 方法：采用成人防腐标本10具,制成髋臼横行骨折模型20个,随机分为4组,每组5个标本。A组：重建接骨板两端各固定3枚螺钉。B组：重建接骨板两端各固定3枚螺钉及距骨折线最近的两侧螺孔各1枚螺钉。C组：锁定重建接骨板两端各3枚单皮质螺钉。D组：锁定重建接骨板两端各3枚单皮质螺钉及距骨折线最近的两侧螺孔各1枚单皮质螺钉。行轴向的加载实验,记录内固定失效时最大负载和轴向刚度。 结果：A、B、C、D组所能承受的最大负载分别为（180.60±11.781）N、（240.80±7.981）N、（243.80±11.755）N和（438.00±23.227）N;轴向刚度分别为（95.21±6.32）N/mm、（123.47±23.95）N/mm、（126.39±18.52）N/mm和（227.35±13.74）N/mm。除B、C两组数据比较无统计学差异（P〉0.05）,其余各组的最大负载和轴向刚度差异均有统计学意义（〈0.05）。 结论：髋臼横形骨折采用接骨板后方入路内固定时,锁定重建接骨板固定的稳定性优于重建接骨板,而且距骨折线最近的两侧螺孔给予螺钉固定能增强内固定的稳定性。     

高糖对大鼠肾成纤维细胞VEGF和PEDF表达的影响

目的探讨高糖对体外培养的大鼠肾成纤维细胞（NRK）血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）和色素上皮衍生因子（pigment epithelium derived factor，PEDF）表达的影响。方法采用RT-PCR分析方法，测定在不同浓度高糖、不同时间点NRK细胞VEGF与PEDF mRNA的表达。设5．6mmol／L葡萄糖组为正常对照组。结果与正常组相比，加入不同浓度高糖的各组NRK细胞VEGF mRNA的表达明显升高（P〈0．05），PEDF mRNA的表达明显下降（P〈0．05），呈剂量依赖性改变；随着各组作用时间的延长，VEGF mRNA的表达呈上升趋势（P〈0．05），PEDF mRNA的表达呈下降趋势（P〈0．05），呈时间依赖性改变；VEGF与PEDF之间呈明显负相关（r=-0．811，P〈0．05）。结论在高糖环境中，体外培养的NRK细胞VEGF和PEDF表达失衡，PEDF表达下降的同时VEGF表达增加，两者的表达失衡可能在糖尿病肾病（DN）的发生发展中起一定的作用。