强骨宝方含药血清对糖尿病模型鼠体外培养成骨细胞的影响

目的：探讨糖尿病模型鼠强骨宝方含药血清促进体外培养成骨细胞分化、矿化的最佳时相与量效。方法：采用胰蛋白酶-Ⅱ型胶原酶消化法从1-2日龄SD大鼠颅盖骨中分离出成骨细胞，鉴定细胞后，用不灭活的不同时效（灌胃3、5d，末次灌胃后1、3h）、不同浓度（5％、10％、20％）的强骨宝方糖尿病模型鼠含药血清加入成骨细胞培养体系，培养7、18d，分别观察各组ALP活性及矿化结节形成量。结果：各浓度的糖尿病模型鼠强骨宝方含药血清对成骨细胞分泌ALP及矿化结节形成的作用均优于模型对照组，并接近于正常对照组水平，其中以20％添加浓度的作用最明显。在时相方面，两指标均以灌药3d或5d、末次灌胃后1h取得血清作用最明显。结论：糖尿病模型大鼠强骨宝方含药血清对体外培养成骨细胞（OB）的分化及矿化功能有促进作用。考虑到实验的时间与成本，以灌胃3d、末次灌胃后1h、20％不灭活的强骨宝方糖尿病模型鼠含药血清对成骨细胞分化与矿化作用最适宜。     

老年大鼠含淫羊藿血清对成骨细胞的增殖与分化的影响

目的：观察老年雄性大鼠淫羊藿血清对新生大鼠颅骨成骨细胞增殖和分化的影响。方法：雌性，19月龄SD大鼠24只，随机分为3组，分别为生理盐水组、淫羊藿低剂量组（1g/ml)、淫羊藿高剂量组（2g/ml），按0．5mg/100g的量，每日两次，连续灌胃1个月，处死前1h，再灌胃一次，取血清（灭活，过滤），最终稀释成1：20、1：40、1：80加入新生大鼠颅骨成骨细胞体系，用MTT法检测细胞增殖，另外，分别在第2天、第3天、第4天动态观察细胞生长过程，做生长曲线和检测分化指标ALP。结果：老年大鼠含药血清在1：80稀释比，MTT测得的OD值给药组高于对照组（P＜0．05）且以高剂量组高于低剂量组（P＜0．05），生长曲线表现为，在第2天各组无明显差别，从第3天开始，含药血清增殖速度加快，仍以高剂量组最快。ALP检测结果，含药血清OD值高于对照组（P＜0．05），但不同剂量之间没有差异（P＞0．05）。结论：老年雄性SD大鼠连续服用淫羊藿水提液1个月，其血清对新生大鼠颅骨成骨细胞有促进增殖和分化的作用。     

15种中西药物含药血清对大鼠成骨细胞增殖成熟的影响

目的：用含药血清体外观察15种中，西药物对大鼠新生鼠颅骨成骨细胞增殖成熟的影响。比较它们的作用，方法：将所试药物口饲大鼠，每日2次，连续5次，于末次给药后1h采血，分离获得含药血清，加入成骨细胞培养液中，培养3d,以MTT法和金氏法测定光密度值，探讨对成骨细胞增殖和细胞外液中碱性磷酸酶活性的影响。结果：所试15例药物的含药血清对成骨细胞增殖均无显作用；3种西药，4种中成药能显增强碱性磷酸酶活性，其作用强度分别依次为安雄、特乐定，福善美以及泰格，骨疏康，鹿茸健骨，仙灵骨葆。6种中医古方对碱性磷酸酶活性无显增强作用，结论：安雄胶囊（雄激素制剂）、特定乐片（氟制剂）、福善美片（双膦酸盐制剂）和中药泰格胶囊，骨疏康颗粒，鹿茸健骨胶囊，仙骨葆胶囊的含药血清在体外能促进成骨细胞化成熟。     

补肾活血中药对体外培养成骨细胞增殖的影响

目的：探讨补肾活血中药对胎鼠颅盖骨来源成骨细胞增殖的影响，以进一步了解补肾活血中药改善骨代谢的作用机制。方法：取二次酶消化法培养的胎鼠颅骨第3代成骨细胞，随机分为5组：细胞对照组、空白血清组、含药血清组、原药组、阳性对照药(a D3)组，分别加入普通细胞培养液、含空白血清及不同浓度补肾活血中药含药血清、补肾活血中药原药液、阳性对照药(a D3)的条件培养液，在培养第3、6天用MTT比色法观察补肾活血中药含药血清及原药液对成骨细胞增殖率的影响。结果：补肾活血中药含药血清组成骨细胞增殖率较空白血清组、培养液组、a D3组显著增强，且存在剂量依赖关系，随培养期延长，促进作用持续存在。补肾活血中药原药液在一般浓度对成骨细胞增殖无显著影响，而过高浓度对成骨细胞增殖有抑制作用。结论：补肾活血中药含药血清能够直接作用于体外培养的成骨细胞，促进其增殖。     

强骨宝方对体外培养成骨细胞影响的实验研究

目的:探讨不同浓度强骨宝方提取液直接添加对体外培养成骨细胞增殖、分化与矿化功能的影响。方法:采用胰蛋白酶-Ⅱ型胶原酶消化法从2只1~2日龄SD乳鼠颅盖骨中分离出成骨细胞,鉴定细胞并传代培养后,分为对照组与4个实验组,实验组分别用终浓度为100、50、10、5μg/ml的强骨宝方提取液加入成骨细胞培养体系,对照组用不含强骨宝方提取液的培养基培养,应用MTT比色法、ALP含量测定、矿化结节形成等分别观察其对成骨细胞增殖、分化及矿化能力的影响。结果:100、50及10μg/ml浓度的强骨宝方提取液均具有促进体外成骨细胞增殖、分化与矿化的作用,以100μg/ml与50μg/ml促进作用最强。结论:每毫升含生药2g的强骨宝方提取液,pH=7.0,50μg/ml的添加浓度可能最适合于体外培养成骨细胞的增殖、分化及矿化成骨能力。     

阿胶强骨口服液含药血清对胎鼠成骨细胞护骨素及护骨素配体mRNA表达的影响

目的研究阿胶强骨口服液含药血清对胎鼠成骨细胞中OPG、RANKL表达的影响,探讨阿胶强骨口服液治疗骨质疏松的分子机制。方法 3月龄Wistar大鼠(雌雄各半)30只,随机分为阿胶强骨口服液,雌激素,及生理盐水对照组,灌胃7d后,制备实验组和对照组的含药血清。将新生SD大鼠分离的颅骨成骨细胞,制成单细胞悬液,消化传代,取二代培养的成骨细胞,制成细胞悬液。培养细胞被分为5组,分别加同体积药液,对照组仅加培养液,继续培养。采用MTT比色分析、3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)渗入法测定成骨细胞增殖,用放免法测定细胞内BGP含量,RT-PCR测定胎鼠成骨细胞中OPG、RANKL mRNA的表达。结果阿胶强骨口服液含药血清以剂量依赖方式促进成骨细胞的增殖,与对照组相比,差异显著(P<0．05)。成骨细胞OPG基因mRNA表达在阿胶强骨口服液含药血清100ml／L时最强,与雌激素组比较无显著性差异(P>0 05),且明显高于对照组(P<0．05)。成骨细胞RANKL基因mRNA表达在1000ml／L阿胶强骨口服液含药血清与雌激素组比较无显著性差异(P<0 05),且明显低于对照组(P<0．05)。结论阿胶强骨口服液可在细胞水平上促进骨的合成代谢及前成骨细胞的有丝分裂,分子水平上调节 OPG／RANKL表达而治疗骨质疏松。     

股密葆含药血清对高浓度地塞米松干预后成骨细胞增殖分化作用的影响

目的：观察股密葆含药血清对高浓度地塞米松干预后成骨细胞增殖分化的影响.方法：用多次酶消化法分离出生24 h内新生SD大鼠颅盖骨成骨细胞,P1代细胞进行实验.将不同浓度地塞米松（0、10-8、10-7、10-6、10-5、10-4 mol/L）干预成骨细胞,1周后进行碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）染色,3周后进行矿化结节染色.根据上述实验结果,进一步选择10-5 mol/L地塞米松干预成骨细胞1周,继而改换空白鼠血清及高、中、低浓度股密葆含药血清培养基,培养1周后进行ALP染色,Western-blot检测Ⅰ型胶原及增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）表达,培养2周后进行矿化结节染色.结果：生理浓度地塞米松（10-8 moL/L）可促进成骨细胞ALP的表达及矿化结节产生,而高浓度地塞米松（10-7～10-4 mol/L）可抑制上述结果,股密葆含药血清可逆转高浓度地塞米松对成骨细胞ALP、矿化结节、Ⅰ型胶原及PCNA的抑制作用.结论：高浓度地塞米松可抑制成骨细胞增殖分化,而这种抑制作用可被股密葆含药血清逆转.     

含药血清对体外培养成骨细胞的影响

目的 研究中药骨康吸收后不同浓度血清对离体大鼠成骨细胞增殖的影响及其对成骨细胞分泌IL-6的影响。方法 采用胶原-胰蛋白酶消化法获得新生大鼠的成骨细胞，然后以中药骨康吸收后血清，加入体外培养成骨细胞中进行培养，MTT法测成骨细胞增殖，ELISA法测培养上清中IL-6含量。结果 发现中药吸收后血清能促进成骨细胞的增殖和分化，各种浓度中以正常剂量药物灌胃后5h取血清含10％药物浓度最佳。同时，新生大鼠体外培养成骨细胞能够分泌IL-6，体外培养成骨细胞在培养后9d左右，IL-6的分泌达到高峰值，随后分泌IL-6的能力逐步下降，中药骨康含药血清可作用于成骨细胞，使其分泌IL-6的能力下降。结论 中药骨康含药血清能够促进成骨细胞的增殖与分化，从而促进骨形成同时可抑制成骨细胞分泌IL-6，这可能是中药骨康抑理骨吸收的机制之一。     

骨宝液在去卵巢大鼠骨质疏松症中抑制骨转换作用的实验研究

目的：探讨骨宝液对去卵巢大鼠骨质疏松症中抑制骨转换作用。方法：60只大鼠去卵巢诱导骨质疏松症，随机分为正常对照组、模型组、尼尔雌醇组、骨宝液低、中、高剂量组。正常对照组、模型组以0．9％生理盐水每天10ml／kg，尼尔雌醇组以尼尔雌醇每2周1mg／kg，其他三组每天分别以骨宝液5、10、15ml／kg的剂量灌胃给药3个月后，以比色法测定其血清钙（s-Ca）、骨碱性磷酸酶（b-AKP）和血清抗酒石酸酸性磷酸酶（s-TRAP）的活性，竞争放射免疫法测定血清中骨钙素（s-BGP）的含量；双能x线骨密度仪（DEXA）测定股骨及腰椎的骨密度；三点弯曲试验法测定骨生物力学；扫描电镜进行骨小梁形态计量学分析。结果：骨宝液组与其他组比较，s-TRAP水平降低，腰椎骨密度增加，股骨抗弯抗拉能力改善，骨小梁形态改善，骨小梁平均宽度（MTT）与骨小梁面积百分比（TS％）显著增加。结论：骨宝液对去卵巢大鼠骨质疏松症具有防治作用，其机制可能与抑制骨转换有关。     

骨康含药血清对成骨细胞PDGF-AA表达影响的实验研究

目的 观察中药骨康含药血清对新生大鼠成骨细胞血小板衍生生长因子-AA（PDGF—AA）基因表达的调控作用。方法 将实验动物随机分成中药组、罗盖全组和蒸馏水组3组，通过体外分离和培养成骨细胞体系，运用逆转录法测定含药血清对成骨细胞PDGF-AA mRNA表达的影响。结果 用10％的血清培养成骨细胞第7d时，与空白血清组相比，骨康含药血清组和罗盖全含药血清组对成骨细胞PDGF—AA mRNA表达的平均影响率分别为149．4％和177．7％。结论 中药骨康含药血清能明显增强成骨细胞PDGF—AA mRNA的表达。     

常用非甾体抗炎药对成骨细胞增殖和骨形成蛋白的影响

目的观察几种临床常用非甾体抗炎药含药血清对人成骨细胞增殖和骨形成蛋白表达的影响,为临床用药提供实验依据。方法选取临床常用的非甾体抗炎药(阿司匹林、布洛芬、双氯芬酸钠、美洛昔康、尼美舒利、塞来昔布)及生理盐水,按照人-动物体表面积换算剂量,予大鼠连续灌胃5次,第5次结束后1h采集大鼠血液制备含药血清。以强直性脊柱炎患者全髋置换术中股骨松质骨分离得到的成骨细胞为研究对象,实验分为含药血清组和空白血清组。采用碱性磷酸酶染色和茜素红染色来鉴定细胞,采用CCK-8法检测各组血清对人成骨细胞增殖的影响及酶联免疫法检测对骨形成蛋白2的表达。结果浓度为20%的含药血清可能会抑制成骨细胞的增殖,10%的含药血清相对来说细胞的效应最稳定;对细胞骨形态发生蛋白2生成的影响方面,双氯芬酸钠组、美洛昔康片组、塞来昔布胶囊组较对照组平均值低,其中双氯芬酸钠组与对照组相比差异有统计学意义。结论几种非甾体抗炎药对成骨细胞的增殖和骨形成蛋白表达的影响不一,其中双氯芬酸钠的抑制效果较明显,其治疗强直性脊柱炎的机制可能与影响了骨形成蛋白有关。     

骨碎补含药血清对成骨细胞增殖、成骨的影响

目的研究骨碎补含药血清对成骨细胞的增殖、成骨的影响。方法取乳鼠颅骨,利用二型胶原酶反复消化,离心,提取成骨细胞。利用骨碎补含药血清干预,分别测定细胞增殖率、ALP活性、钙盐沉积量、骨钙素分泌量等,研究骨碎补含药血清对成骨细胞的增殖、成骨分化及其抗氧化性的影响;结果用含药血清干预,测定增殖率、ALP活性、钙盐沉积量、骨钙素分泌量、钙化结节量均高于空白对照组。结论骨碎补含药血清可以促进成骨细胞的增殖、成骨分化及其增强其抗氧化性。     

巴戟天含药血清对成骨-破骨细胞共育体系 OPGmRNA、RANKLmRNA 表达的影响

目的探讨不同浓度巴戟天含药血清对体外成骨-破骨细胞共育体系OPG、RANKLmRNA表达的影响方法取健康5 周龄SD大鼠12只，体重165 -172 g。随机分4组，分别予生理盐水及低中髙三种浓度巴戟天溶液灌胃，分离血清。取健康5 周龄SD大鼠6只，体重165 - 172 g，取四肢长骨骨髓基质细胞，诱导培养破骨细胞;用24 h内新生SD乳鼠4只，体重5 ~6 g， 头盖骨分离体外培养成骨细胞。将成骨细胞加人含有培养5 d的破骨细胞中，共育2 d后分别改用不同浓度巴戟天含药血清 与不含药血清的培养基培养，设低、中、髙浓度组及对照组，培养3d后提取各组总RNA，应用RT-PCR检测各组OPGmRNA、 RANKLmRNA表达。结果RT-PCR结果示，中、髙浓度组RANKLmRNA表达量均低于对照组（P < 0. 05)，而OPGmRNA表达 量显著髙于对照组(P <0. 001)。结论巴戟天含药血清可上调共育体系中OPGmRNA表达，并下调RANKLmRNA表达，从而 降低破骨细胞分化成熟及骨吸收活性。     

用含药血清方法观察补肾益精方对破骨细胞功能的影响

目的探讨补肾益精方含药血清的制备条件及其对体外培养破骨细胞骨吸收功能的影响。方法取体重270±20g的SD大鼠,雌雄各半,每组10只,同等条件下制备补肾益精方含药血清和对照血清,分别观察不同采血时间、不同喂药时间、不同灌胃剂量和血清添加量对骨吸收陷窝数量的影响。结果末次灌胃后1h采血组的骨吸收陷窝数明显少于其他各组(P<0.05);灌胃1d和3d、7d组比较其含药血清的药效无差异,而与对照血清差异显著;随着灌胃剂量和含药血清添加量的提高,其骨吸收陷窝数明显减少。结论补肾益精方含药血清对破骨细胞骨吸收功能具有明显的抑制作用;补肾益精方用于破骨细胞药效观察的大鼠含药血清制备条件为等效剂量连续两次(间隔2h)灌胃,末次灌胃后1h采血,其血清添加浓度为30%。     

老年大鼠松质骨骨重建的组织形态计量学研究

目的：研究老年大鼠及在促骨合成药前列腺素E2（PGE2）作用下松质骨骨重建和骨建造的形态计量学改变，探讨动物骨重建形态学新参数测量方法及其意义。方法：50只20月龄雄性Wistar大鼠随机分成5组，年龄对照组（基础组、10d和30d年龄对照组），PGE2给药组（分别10d和30d给予3mg/kg/d处理组）。用体内双荧光标记，不脱钙组织切片，粘合线（cement line）染色，骨组织形态计量学方法，测定骨重建和骨建造参数。结果：20月龄雄性大鼠胫骨近端松质骨的形成表面大多数为骨重建单位（占63．3％），少部分为骨建造单位（占26．7％）；PGE2用药后骨重建单位增加1．5倍，骨建造单位增加4倍，比值倒置，成骨细胞10d时明显增多。说明PGE2通过刺激成骨细胞骨合成而介民导骨建造性骨增加和骨重建性骨量增加，并以前为主。结论：老年雄性大鼠 松质骨以骨重建活动为主，仍有骨建造活动。PGE2主要通过刺激成骨细胞骨建造而增加骨量。     

右归饮对激素性股骨头坏死患者股骨近端骨髓骨活性影响的实验研究

目的：观察右归饮含药血清对激素性股骨头坏死患者股骨近端骨髓体外分化为成骨细胞的影响。方法：将右归饮含药血清加入人骨髓间充质细胞诱导分化成骨细胞的培养体系,采用观察细胞学形态、MTT法、细胞内ALP含量及矿化结节形成,并与普通血清组进行比较。结果：与普通血清组相比,形态学观察及MTT法表明,右归饮舍药血清对激素性股骨头坏死患者股骨近端骨髓体外分化成骨细胞的增殖起促进作用（P〈0．01）;矿化结节染色及细胞内ALP含量测定表明右归饮对成骨细胞的活性有促进作用（P〈0．01）。结论：右归饮对激素性股骨头坏死患者股骨近端骨髓间充质干细胞诱导分化的成骨细胞的增殖和活性起促进作用。     

杜仲叶通过激活ERK及AKT磷酸化促进 大鼠成骨细胞增殖的研究

目的研究杜仲叶提取物对大鼠成骨细胞的增殖作用及其分子机制。方法选取新生SD大 鼠的乳鼠颅骨通过消化法分离出乳鼠成骨细胞,并用碱性磷酸酶染色进行细胞鉴定;先用杜仲叶提取 物分别以0 mg/ml,5 mg/ml,20 mg/ml,40 mg/ml,60 mg/ml五种不同浓度梯度对大鼠成骨细胞干预,2 d后用MTT方法检测细胞增殖情况;用无血清无酚红的培养基饥饿大鼠成骨细胞2 h后,分别以0 mg/ml,5 mg/ml,20 mg/ml,40 mg/ml,60 mg/ml五种不同浓度杜仲叶提取物干预大鼠成骨细胞,2 h后 Western blot检测ERK和AKT的活化情况。结果碱性磷酸酶染色后的成骨细胞呈紫红色（特异性 染色）,MTT法结果显示杜仲叶提取物促进大鼠成骨细胞的增殖,并具有浓度依赖性;Western blot结 果显示杜仲叶提取物可使ERK及AKT磷酸化水平提高,并具有浓度依赖性。结论杜仲叶提取物 通过ERK通路及AKT通路促进大鼠成骨细胞的增殖。     

辛伐他汀对大鼠骨量及骨髓基质干细胞增殖、分化的影响

目的观察辛伐他汀体内给药对大鼠骨量和骨髓基质干细胞增殖、分化的影响。方法16只9周龄雌性SD大鼠按体重随机分成2组,每组8只：第1组（G1）,对照组,每天蒸馏水灌胃（N）;第2组（G2）,实验组,辛伐他汀灌胃20mg·kg^-1·d^-1（S20）,持续3周,于最后1次灌胃的第2天处死所有大鼠,取右侧股骨行骨密度和骨组织形态计量学测定;取左侧股骨和胫骨骨髓细胞分别向成骨、成脂方向诱导培养,并作如下检测：（1）成骨组：采用Cell Counting Kit-8（CCK-8）法检测定向成骨分化中的骨髓基质干细胞的增殖能力;细胞培养第16d和28d分别检测碱性磷酸酶（ALP）比活性、ALP染色和von Kossa染色;细胞培养第16d,提取总RNA,采用Real-time RT-PCR检测骨形态发生蛋白-2（bone morphogenetic protein-2,BMP-2）、碱性磷酸酶（ALP）、破骨细胞分化因子（RANKL） mRNA的表达;（2）成脂组：采用CCK-8法检测定向成脂分化中的骨髓基质干细胞的增殖能力;细胞培养第18d,检测LPL比活性,并提取总RNA,采用Real-time RT-PCR检测脂蛋白脂酶（LPL） mRNA的表达。结果辛伐他汀体内给药干扰21d后大鼠骨量和骨密度无显著变化。体外培养骨髓基质干细胞所有检测基因 mRNA水平、细胞增殖能力、矿化能力（von Kossa染色）、ALP比活性、ALP染色、LPL比活性两组间差异均无显著性。结论辛伐他汀体内给药3周对大鼠骨量及骨髓基质干细胞的增殖和分化无显著作用。     

补骨脂盐炙前后对去卵巢大鼠的骨保护作用及其机制

目的 比较补骨脂盐炙前后对去卵巢（OVX）大鼠骨质疏松的治疗作用，并探讨其炮制机理。方法 制备大鼠骨质疏松模型，分别用补骨脂生、盐品灌胃，给药12周后称重，取子宫，测血清中钙（Ca）、磷（P）、碱性磷酸酶（ALP）、骨钙素（OC）以及雌二醇（E2）含量，测骨生物力学强度和骨密度（BMD），观察骨小梁微结构。制备补骨脂生、盐品含药血清，检测含药血清对成骨细胞增殖和分化影响。检测补骨脂生、盐品水煎液和含药血清中主要有效成分含量。结果 补骨脂生、盐品均能有效抑制去卵巢所致的大鼠体重增加和子宫萎缩，升高血清Ca、P含量，降低ALP、OC和E2含量，显著提高BMD、骨生物力学强度，改善骨小梁结构的完整性。补骨脂生、盐品对成骨细胞的增殖和分化均有明显的促进作用，且盐品效果优于生品。此外，补骨脂盐炙后有效成分的煎出和入血成分的含量存在明显差异。结论 补骨脂生、盐品对OVX所致的大鼠骨质疏松症有良好的治疗效果，并且补骨脂盐品的抗骨质疏松作用更强，这与补骨脂盐炙促进补骨脂苷、异补骨脂苷等有效成分煎出和盐炙后补骨脂素、异补骨脂素等入血有效成分增加有关。     

辛伐他汀部分阻止尾悬吊大鼠股骨近端骨量的丢失

目的：观察辛伐他汀体内给药对尾悬吊大鼠骨量和骨髓基质干细胞增殖﹑分化的影响。方法18只9周龄雄性SD大鼠被随机分成3组,每组6只：第一组（G1）,正常对照组,每天蒸馏水灌胃;第二组（G2）,尾悬吊组,每天蒸馏水灌胃;第三组（G3）,尾悬吊大鼠每天20 mg/kg辛伐他汀灌胃。实验持续3周,所有大鼠在最后一次灌胃的第二天被处死,取大鼠右侧股骨用双能X线骨密度仪测量骨密度。取大鼠左侧股骨和胫骨骨髓细胞向成骨细胞定向培养,并作如下检测：碱性磷酸酶活性和von Kossa染色分别在细胞培养第16天和25天检测。在细胞培养第21天,采用Real-time RT-PCR检测BMP-2、RANKL mRNA的表达。结果尾悬吊组大鼠骨量低于对照组。全长骨密度（ tBMD）及远端骨密度（ dBMD） G1组显著高于G2、G3组,近端骨密度（ pBMD） G1组显著高于G2组,但与G3组没有区别, G3组高于G2组但没有显著差别。细胞外基质矿化能力（ von Kossa染色）、ALP比活性以及RANKL、BMP-2 mRNA水平各组间均没有显著差别。结论尾悬吊3周可致大鼠骨骨质疏松,辛伐他汀体内给药可部分阻止股骨近端骨量丢失,但不能显著促进骨髓基质干细胞向成骨细胞分化。