siRNA靶向Notch 1对U 251人脑胶质瘤细胞系生长抑制作用的体内研究

目的 研究siRNA靶向敲低Notch 1活性对裸鼠皮下U 251胶质母细胞瘤的生长抑制作用.方法 建立U 251胶质瘤细胞裸鼠皮下模型,分为:对照组、无义组siRNA转染组、Notch 1 siRNA转染组,每4 d给予siRNA、Notch1 siRNA与oligofectamin混合物瘤内治疗,直至观察期结束.处死后取出肿瘤标本,应用免疫组化检查Notch 1、PCNA、MMP9、GFAP和cyclinD1的表达水平;TuNEL法分析细胞凋亡. 结果 转染靶向Notch 1 siRNA组肿瘤生长受抑.肿瘤细胞Notch1、MMP9、cyclinD1、PCNA及表达明显下调,GFAP表达上调,细胞增殖、侵袭能力受到抑制,并诱发细胞凋亡.结论 Notch 1可作为基因治疗胶质瘤优选靶之一,RNA干涉Notch 1治疗恶性胶质瘤具有潜在的临床应用前景.     

血管内皮生长因子基因沉默抑制人胶质瘤裸鼠移植瘤生长及血管生成的研究

目的 观察靶向血管内皮生长因子(VEGF)的短发夹RNA(shRNA)对裸鼠人脑胶质瘤中VEGF基因表达的抑制作用.方法 体外培养人脑胶质瘤U251细胞株,建立人脑胶质瘤裸鼠皮下接种模型.将成功造模的30只裸鼠随机分为A、B、C 3组(每组10只),分别给予不同处理.观察肿瘤生长.免疫组织化学检测瘤组织中VEGF蛋白表达及组织内的微血管密度(MVD)改变.结果 治疗5周后,VEGF shRNA组(A组)的肿瘤体积为654.0 mm~3、抑瘤率达65.2%,与空质粒组(B组)1790.4 mm~3、4.7%或PBS组(C组)1880.3 mm~3、0%比较,差异有统计学意义(P<0.05).A组荷瘤组织中VEGF和MVD分别为9.52、22.02,与B组17.18、43.58或C组17.82、45.32比较,差异有统计学意义(P<0.05).VEGF蛋白表达与MVD间存在正相关性(r=0.721,P<0.01).结论 应用RNAi技术沉默VEGF基因能明显抑制人脑胶质瘤细胞株U251裸小鼠移植瘤的生长.     

靶向存活素基因短发卡RNA对人脑胶质母细胞瘤U251细胞在裸鼠体内生长的影响

目的观察靶向存活素基因的特异性短发卡RNA（shRNA）对人脑胶质母细胞瘤U251细胞裸鼠体内肿瘤生长和血管形成的影响。方法将U251细胞、稳定转染存活素基因shRNA真核表达载体pWH1-SR的U251细胞（U251-SR细胞）、稳定转染空载体pWH1的U251细胞（U251-P细胞）,分别接种于15只裸鼠背部皮下,每组5只,观测肿瘤生长情况。采用免疫组化SABC方法检测存活素、增殖细胞核抗原（PCNA）以及第八因子相关抗原（FⅧRAg）在各组肿瘤标本中的表达;采用TUNEL方法检测凋亡细胞,分别计算各组肿瘤标本的增殖指数（PI）、凋亡指数（AI）以及微血管密度（MVD）。结果与U251、U251-P组相比,U251-SR组裸鼠肿瘤形成时间延迟,肿瘤生长缓慢,肿瘤体积及重量均明显减小（P均〈0.01）;肿瘤标本存活素蛋白表达明显下调;PI和MVD明显减少,AI明显升高（P均〈0．01）。结论靶向存活素基因的shRNA能够在裸鼠体内明显抑制U251细胞的肿瘤生长和血管形成。     

反义表皮生长因子受体RNA对U251胶质瘤细胞生长的抑制作用

目的探讨反义靶向表皮生长因子受体（EGFR）在体内外对U251细胞生长抑制作用。方法构建反义EGFR的pcDNA3表达质粒并进行了脂质体介导的U251人脑恶性胶质瘤细胞系基因转染。应用RT-PCR检测EGFR表达水平，应用MTT法、流式细胞术、Matrigel基质生长实验和Transwell方法评价肿瘤细胞转染前后的生物学行为。进一步应用裸鼠皮下荷瘤模型观察脂质体介导反义EGFR基因治疗对U251细胞生长抑制作用。对肿瘤组织应用免疫组织化学的方法进行EGFR、PCNA和GFAP表达比较。结果脂质体介导反义EGFR可显著抑制U251细胞ECFR表达，MTT法分析显示反义EGFR转染组胞生长抑制率为68％；与对照组和pcDNA3转染组比较，细胞周期分析结果表明p-anti-hEGFR转染组G0～G1期细胞数没有明显变化，进入S期的细胞数较对照组减少了，而进入G2期细胞则增加。Matrigel基质生长实验显示对照组和peDNA3转染组细胞呈正常形态贴壁生长。而p-anti-hEGFR转染组细胞不能贴壁生长，呈团块状簇集生长。Transwell方法显示肿瘤细胞的体外侵袭能力显著下降。裸鼠皮下荷瘤模型实验显示反义EGFR RNA可以显著抑制皮下肿瘤生长，组织病理学分析显示治疗组EGFR表达下降而GFAP表达上调。结论反义EGFR可以显著抑制U251细胞的EGFR表达，在体内外对U251细胞生长均产生明显抑制作用。     

隔蛋白7抑制胶质瘤生长的体内研究

目的检测隔蛋白7（SEPT7）对U251细胞来源的胶质瘤的治疗效果并初步探讨其机制。方法建立SEPT7表达下调的人胶质瘤细胞系U251细胞来源的裸鼠皮下移植瘤模型，观察SEPT7构建体治疗后对肿瘤生长的影响，并应用免疫组化法检测SEPT7对肿瘤细胞的SEPT7、细胞周期因子、增殖相关蛋白PCNA以及抑制凋亡蛋白Bcl-2、促凋亡蛋白Caspase-3、侵袭相关蛋白MMP2／9和GFAP表达水平的改变以及TUNEL法检测肿瘤细胞闶亡。结果接受SEPT7治疗的裸鼠肿瘤的生长速度明显减慢，肿瘤体积小于对照组和空载体组，差异具有统计学意义（P〈0．01）。SEPT7治疗后肿瘤标本SEPT7、GFAP表达明显上调，Cyclin D1、Cyclin E、CDK2、CDK4表达下降或消失，p21、p16表达上调。PCNA、MMP2／9的表达均下降，Caspase-3表达增加，Bcl-2表达下降。SEPT 7可诱导肿瘤细胞出现凋亡，而对照组和空载体组几乎没有凋亡细胞。结论SEPT 7可造成肿瘤细胞G0／G1期阻滞从而显著抑制肿瘤生长、增殖，同时可抑制肿瘤的侵袭能力，并诱导肿瘤细胞出现分化和凋亡，由此可初步认定SEPT7为抑癌基因。     

胶质瘤中miR-383与其靶向circ_001634相互调控机制及作用研究

目的研究脑胶质瘤中circ_001634的表达以及与miR-383的相互调控关系及在胶质瘤发生发展中的作用。方法实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测脑胶质瘤组织中circ_001634的表达情况,及分别过表达circ_001634与miR-383后对相互的影响,非锚定依赖性生长实验检测转染circ_001634后胶质瘤U251细胞生长情况,Western blot检测miR-383下游基因CCND1蛋白表达情况。结果 circ_001634在胶质瘤中的表达显著升高;过表达circ_001634能抑制胶质瘤细胞生长,且能下调miR-383表达,并抑制CCND1表达;同时过表达miR-383,也能够抑制circ_001634表达。结论胶质瘤特异性circ_001634表达升高是miR-383表达下调和功能受抑制重要调控机制,circ_001634与miR-383的相互调控很可能是胶质瘤发生发展的重要原因。     

莪术醇对人脑胶质瘤U251细胞增生与凋亡影响的实验研究

目的 本研究观察中药活性成分莪术醇对人脑胶质瘤细胞株U251增生与凋亡的影响,检测其对胶质瘤细胞凋亡相关基因表达的影响,初步探讨其抗胶质瘤的可能机制,为脑胶质瘤的中草药治疗积累实验数据.方法 以体外培养的人脑胶质瘤细胞株U251为模型,以培养基稀释莪术醇成不同浓度,观察与检测以下内容:MTT法检测不同时间、不同浓度莪术醇对U251细胞增生的影响;显微镜观察不同浓度莪术醇对U251细胞形态学的影响;流式细胞仪检测不同浓度莪术醇对U251细胞凋亡的影响;RT-PCR法检测不同浓度莪术醇对U251细胞中凋亡相关基因bcl-2与COX-2表达水平的影响.结果 莪术醇对人脑胶质瘤U251细胞增生有抑制效应,且表现出浓度依赖性与时间依赖性(P＜0.05).结论 莪术醇对人脑胶质瘤U251细胞有明确的增生抑制作用.诱导凋亡、抑制增生可能为莪术醇抑制胶质瘤增生效应的重要机制.莪术醇下调人脑胶质瘤U251细胞中bcl-2与COX-2的基因表达水平可能为其诱导凋亡、抑制增生的重要机制之一.     

miR-21靶向PTEN调节PI3K/AKT通路对狼疮性肾炎患者肾小球系膜细胞增殖及炎性因子分泌的影响

目的:探讨miR-21靶向磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)调节磷酸肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路对人肾小球系膜细胞(human mesangial cells, HMCs)增殖及炎性因子分泌的影响。方法:选取在我院经肾穿刺活检诊断为LN的30例患者的肾组织标本,qRT-PCR和western blot检测狼疮性肾炎肾组织中miR-21和PTEN的表达水平;HMCs随机分为5组:NC mimics组、miR-21 mimics组、pcDNA3.1-NC组、pcDNA3.1-PTEN组和miR-21 mimics+pcDNA3.1-PTEN组;TargetScan预测miR-21与PTEN的结合位点;双荧光素酶报告基因验证miR-21与PTEN的靶向关系;细胞克隆形成实验检测miR-21靶向PTEN对HMCs增殖能力的影响;细胞流式术检测miR-21靶向PTEN对HMCs凋亡率的影响;ELISA检测miR-21靶向PTEN对HMCs炎性因子生成的影响;Western blot检测miR-21靶向PTEN调节PI3K/AKT通路相关蛋白的表达。结果:miR-21在狼疮性肾炎肾组织中高表达(P=0.043),PTEN在狼疮性肾炎肾组织中低表达(P=0.037);miR-21与PTEN存在靶向关系,且miR-21靶向下调PTEN的表达(P=0.003);与NC mimics组比较,miR-21 mimics组细胞集落数目增加(P=0.003),凋亡率下降(P=0.003),TNF-α、IL-1β和IL-6的含量增加(均P=0.000),PTEN蛋白表达水平下调(P=0.003)、PI3K和AKT蛋白表达水平上调(P=0.025,P=0.004);与pcDNA3.1-NC组比较,pcDNA3.1-PTEN组细胞集落数目减少(P=0.032),凋亡率上升(P=0.035),TNF-α、IL-1β和IL-6的含量减少(P=0.003,P=0.037,P=0.029),PTEN蛋白表达水平上调(P=0.002)、PI3K和AKT蛋白表达水平明显下调(均P=0.003);与miR-21 mimics组比较,miR-21 mimics+pcDNA3.1-PTEN组细胞集落数目减少(P=0.003),凋亡率上升(P=0.000),TNF-α、IL-1β和IL-6的含量减少(P=0.003,P=0.004,P=0.004),PTEN蛋白表达水平上调(P=0.003)、PI3K和AKT蛋白表达水平下调(P=0.031,P=0.039);与pcDNA3.1-PTEN组比较,miR-21 mimics+pcDNA3.1-PTEN组细胞集落数目增加(P=0.029),凋亡率下降(P=0.031),TNF-α、IL-1β和IL-6的含量增加(P=0.000,P=0.003,P=0.003),PTEN蛋白表达水平下调(P=0.003),PI3K和AKT蛋白表达水平上调(P=0.002,P=0.003)。结论:miR-21靶向PTEN对人肾小球系膜细胞的增殖、凋亡及炎性因子的分泌有一定影响,可能与PI3K/AKT通路有关。     

RNA干扰抑制Cyr61表达对人脑胶质瘤细胞生物学行为的影响

目的 观察RNA干扰技术沉默Cyr61基因表达对人脑胶质瘤U251细胞生物学行为的影响.方法 针对Cyr61 mRNA的序列设计合成小干扰RNA(siRNA)的DNA模板,构建pRNAT-Cyr61重组质粒,转染人脑胶质瘤U251细胞;RT-PCR和Western blot检测其对U251细胞内源性Cyr61表达的影响;用噻唑蓝(MTT)比色法观察U251细胞体外增殖活性的变化;用Transwell 小室法检测U251细胞体外侵袭能力的改变;流式细胞仪检测U251细胞凋亡并用透射电镜观察凋亡后的细胞形态学变化.结果 pRNAT-Cyr61重组质粒在mRNA及蛋白水平分别显著抑制Cyi61基因表达,抑制率分别最高达到74.87%和78.23%;U251细胞的体外生长抑制率最高达68.15%,侵袭细胞数下降至(46.00±2.82)个;U251细胞凋亡率最高达53.16%.结论 pRNAT-Cyt61可抑制Cyr61在人脑胶质瘤U251细胞中的表达,并抑制细胞的增殖活性和侵袭能力,促进细胞凋亡.     

miR-21调控PTEN/PI3K/Akt通路抑制增生性瘢痕形成的机制研究

目的:探讨miR-21对增生性瘢痕中PTEN表达和成纤维细胞增殖的影响,以期为增生性瘢痕的临床诊断和治疗提供新靶点。方法:分别用qPCR和Westernblot检测增生性瘢痕(HTS)组织和细胞中miR-21及PTEN的表达;双荧光素酶报告基因检测验证miR-21与PTEN的调控关系;Westernblot检测miR-21对增生性瘢痕成纤维细胞(HSF)中PTEN蛋白表达影响;MTT检测细胞增殖能力变化。结果:HTS组织中miR-21高表达,PTEN低表达;双荧光素酶报告实验和Westernblot证实了miR-21对PTEN的靶向调控作用;下调miR-21可增加PTEN的表达,从而可抑制PI3K/Akt通路活性,抑制HSF细胞增殖。结论:本研究证实了miR-21具有诊断和治疗HTS的潜能,并为临床提供可能的新靶点。     

反义抑制微小RNA-21对程序性细胞坏死因子4和张力蛋白同源物基因在鳞状细胞癌A431细胞株中表达及细胞凋亡的研究

目的 观察转染反义抑制微小RNA-21(miR-21)对A431细胞株中程序性细胞坏死因子4(PDCD4)和磷酸酶和张力蛋白同源物基因(PTEN)表达及细胞凋亡的影响.方法 对A431细胞转染反义miR-21(Anti-miR-21),采用免疫细胞化学法检测转染前后A431细胞株中PDCD4和PTEN的表达,采用原位末端转移酶标记(TUNEL)检测转染前后A431细胞株中细胞凋亡.结果 细胞组、转染无关序列组和转染miR-21反义寡核苷酸组PDCD4表达平均吸光度(IA)值分别为62 340.03 ±2157.52、55 871.36±7281.27和175 302.34±14 571.90,差异有统计学意义(F =50.12,P＜0.05)；细胞组、转染无关序列组和转染miR-21反义寡核苷酸组PTEN表达IA值分别为19 206.26 ±655.01、19 149.26±1058.29和135 572.92±4685.05,差异有统计学意义(F=576.54,P ＜0.05)；细胞组、转染无关序列组和转染miR-21反义寡核苷酸组凋亡细胞比例分别为9.90％、12.95％和31.63％,差异有统计学意义(F=201.79,P＜0.05).结论 转染Anti-miR-21后A431细胞株中miR-21表达下降,这种抑制可以上调A431细胞株中PDCD4和PTEN的表达,加速肿瘤细胞凋亡.     

反义miR-30a-5p对人脑胶质瘤细胞U251生长的抑制作用

目的 观察敲低microRNA(miR)-30a-5p表达对人脑胶质瘤U251细胞生物学特征的影响.方法 用脂质体介导转染寡聚核苷酸抑制物(miR-30a-5p inhibitor)于人脑胶质瘤U251细胞.采用实时聚合酶链反应(real-time PCR)检测转染后U251细胞的miR-30a-5p表达水平以鉴定抑制效果;噻唑蓝(MTT)比色法评价miR-30a-5p inhibitor抑制U251细胞生长的作用;Transwell实验检测细胞侵袭能力变化;流式细胞术检测细胞周期变化;Annexin V法检测细胞早期凋亡.结果 real-time PCR检测结果 显示转染miR-30a-5p inhibitor后,肿瘤细胞miR-30a-5p表达下降,细胞增殖活性降低,细胞侵袭能力明显受到抑制,细胞周期阻滞在G0/G1期及早期凋亡增加.结论 miR-30a-5p可能是癌微RNA(oncomiR)之一,有望成为人脑胶质瘤基因治疗的候选靶点.

Abstract：

Objective To investigate the effect of knock-down of miR-30a-5p on the biological characteristics of U251 glioblastoma cells. Methods miR-30a-5p inhibitor, mediated by Lipofectamine 2000, was transfected to U251 cells for knocking down miR-30a-5p. Real-time polymerase chain reaction (PCR) was conducted to detect the expression of miR-30a-5p in transfected cells. The cell proliferation rate was detected by methyl thiazol tetrazolium (MTT) assay, and cell cycle kinetics was examined by flow cytometry. The cell invasive ability was evaluated by Transwell assay and apoptosis detected by Annexin V assay. Results The expression of miR-30a-5p in the miR-30a-5p inhibitor group was significantly down-regulated. The cell proliferation activity and invasive ability were reduced. Cells were arrested in G0/G1 phase, and apoptosis was induced in cells transfected with miR-30a-5p inhibitor as compared to those of the cells transfected with scramble siRNA and control cells, so suppression of miR-30a-5p expression rendered the glioma cells harboring less aggressive phenotype. Conclusion miR-30a-5p is one of oncomiRs. It may be a candidate target miRNA for gene therapy of gliomas.     

下调G蛋白信号调控因子2表达对胰腺癌细胞化疗敏感性的影响

目的:探讨下调G蛋白信号调控因子2(GPSM2)表达对胰腺癌细胞化疗敏感性的影响。方法:构建GPSM2低表达的胰腺癌MIA-PaCa-2细胞并鉴定;将16只裸鼠随机均分为两组,分别皮下接种GPSM2低表达与自然表达的MIA-PaCa-2细胞构建荷瘤模型,两组中分别一半注射吉西他滨(100 mg/kg),一半注射等体积生理盐水(腹腔注射,3次/周,共注射4周),绘制瘤体生长曲线,并于末次注射后第3天处死裸鼠,测量肿瘤体积。结果:成功构建GPSM2表达下调的MIA-PaCa-2细胞。移植瘤的生长速度与体积大小的趋势均表现为GPSM2自然表达+生理盐水组GPSM2自然表达+吉西他滨组GPSM2低表达+生理盐水组GPSM2低表达+吉西他滨组。析因设计分析结果显示,单独吉西他滨或单独下调GPSM2基因表达对于抑制裸鼠瘤体生长的主效应均具有统计学意义(均P=0.000);吉西他滨联合下调GPSM2基因表达对于抑制裸鼠瘤体生长的交互效应尚未达到统计学意义(P=0.073);但吉西他滨联合下调GPSM2基因表达对于肿瘤生长的抑制作用相对于单独吉西他滨或单独下调GPSM2基因表达的单独效应均有统计学意义(P=0.000、0.003)。结论:下调GPSM2基因表达是否有增强胰腺癌细胞化疗敏感性的作用尚不确定,但下调GPSM2基因表达的同时予以化疗对胰腺癌生长的抑制效果明显强于两者单独作用。     

NEDD4-1对脑胶质瘤U251细胞迁移和侵袭的作用

PTEN是最易突变的肿瘤抑制基因之一,其突变缺失与胶质瘤形成发展及其侵袭性有密切的关系~[1-4].故调节PTEN活性可影响肿瘤侵袭性.泛素连接酶神经前体细胞表达的进行性下调基因4-1(NEDD4-1)可促进PTEN降解,在PTEN缺失致肿瘤过程中扮演复杂角色~[5].本实验将NEDD4-1及其shRNA转染入U251细胞,观察对细胞迁移和侵袭的影响.     

人脑胶质瘤U251细胞中hMLH1、hMSH2基因启动子区的甲基化状态研究

目的观察人脑胶质瘤U251细胞系中hMLHl、hMSH2基因启动子区的甲基化状态及其在肿瘤发生中的作用。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）法对人脑胶质瘤U251细胞系的hMLHl、hMSH2基因启动子CpG岛甲基化进行检测；培养人脑胶质瘤U251细胞系，MSP法检测加入5-aza-2’-deoxycytidine前后hMSH2基因在人脑胶质瘤U251细胞中的甲基化状态改变；逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）法检测加入5-aga-2’-deoxycytidine前后hMSH2在人脑胶质瘤U251细胞中的mRNA表达改变。结果人脑胶质瘤U251细胞中未发生hMLHl启动子甲基化，而发生了hMSH2启动子甲基化；5-aza-2’-deoxycytidine处理细胞株后，可逆转hMSH2启动子甲基化，细胞株的mRNA表达增加，加药前后的平均灰度比值分别为（0．40±0．18；0．85±0．32，P〈0．01），差异有统计学意义。结论人脑胶质瘤U251细胞系中hMSH2基因启动子CpG岛高甲基化，5-aza．2’-deoxycytidine能完全逆转hMSH2基因高甲基化状态，可为临床诊断人脑胶质瘤提供新的检测指标和治疗靶点。     

反义MDM2联合紫杉醇对胶质瘤细胞U251的作用及其机制

目的探讨MDM2反义寡核苷酸联合紫杉醇对U251人胶质瘤细胞株的作用。方法以Lipofectamine介导的MDM2反义寡核苷酸转染U251人胶质瘤细胞株，免疫组织化学法检测胶质瘤细胞株MDM2蛋白的改变，噻唑蓝（MTT）检测细胞增殖，流式细胞仪检测凋亡，Western blot检测野型生p53（wild typ p53，wtp53）的表达，构建荷胶质瘤裸鼠模型，采用瘤内注射和腹腔给药方式，以MDM2反义寡核苷酸联合紫杉醇治疗，研究其联合抗肿瘤作用。结果脂质体介导反义MDM2 ODN转染U251人胶质瘤细胞株后，MDM2表达减少，与紫杉醇联合使用可增加细胞的凋亡率，野型生p53的表达量增加，裸鼠动物试验联合治疗组瘤重显著小于单独用药组及对照组。结论MDM2反义寡核苷酸可显著降低MDM2在U25I中的表达，引起细胞凋亡，MDM2反义寡核苷酸与紫杉醇联合作用U251人胶质瘤细胞株具有协同作用。     

miR-21在肝癌中的表达及其与PTEN的关系

目的:探讨miR-21在肝癌中的表达及其与PTEN的关系。方法:用RT-PCR检测119例肝癌组织与癌旁组织中miR-21与PTEN的表达情况;双报告基因实验检测肝癌细胞中miR-21对PTEN转录水平的影响;分析miR-21表达与肝癌患者临床病理因素的关系;在肝癌细胞中分别过表达及抑制miR-21的表达之后,检测细胞增殖与PTEN及其下游通路蛋白的表达。结果:肝癌组织中miR-21表达明显高于癌旁组织,而PTEN则相反(均P0.05);miR-21与PTEN的表达具有一定相关性(r2=0.6767,P0.05);miR-21可并抑制PTEN转录活性;miR-21的表达与肝癌患者AFP水平及TNM分期有关(均P0.05);肝癌细胞过表达miR-21后,肝癌细胞增殖明显增强,PTEN表达明显调,并影响其下游蛋白的表达,而抑制miR-21则相反(均P0.05)。结论:miR-21在肝癌中表达升高,且miR-21可以通过下调PTEN表达进一步促进肝癌细胞的增殖。     

肝细胞生长因子受体反义寡核苷酸影响胶质瘤细胞对丝裂霉素C敏感性的研究

目的探讨肝细胞生长因子受体(c-Met)反义寡核苷酸(ASODN)增强胶质瘤细胞系 U251细胞对丝裂霉素C(MMC)敏感性的作用。方法用5 μmol／L c-Met ASODN封闭U251细胞 c-Met mRNA,将50μg/L的MMC与其共培养,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测c- Met mRNA表达,噻唑蓝(MTT)试验检测U251细胞的生长情况,免疫组织化学法检测细胞PCNA 蛋白的表达,体外检测细胞黏附率。以无义寡核苷酸处理及未处理U251细胞为对照。结果经 c-Met ASODN处理的U251细胞 ,c-Met mRNA的表达(吸光度值为62±21)明显低于经无义寡核苷酸处理U251细胞(吸光度值为150±25,P<0．05);对MMC的敏感性,细胞生长抑制率、细胞黏附率及PCNA指数分别为(53．84±12．21)％、(14．61±3．82)％和(0．35±0．02)％,明显高于相应的无义[(9．86±3．42)％、(24．84±5．90)％和(0．55±0．04)％,P<0．05]。结论 c-Met ASODN能增强胶质瘤细胞系U251细胞对MMC的敏感性,其分子机制可能与c-Met反义寡核苷酸下调了c- Met基因和PCNA蛋白的表达有关。     

脑肿瘤

锁孔入路显微手术治疗颅内肿瘤；人脑胶质瘤中p57KIP2蛋白和PTEN蛋白的表达及意义；伽玛刀治疗多发性脑转移瘤临床分析；C6胶质瘤血管通透性改变与MMP-9、iNOS表达的相关性研究；雷公藤红素抑制可移植性人脑胶质瘤生长相关分子     

下调MicroRNA-21对胃癌细胞生物学行为及PTEN表达的影响

目的:探讨抑制MicroRNA 21(miR-21)的表达对胃癌细胞的生物学行为及PTEN表达的影响,并分析miR-21参与肿瘤发生、发展的可能机制。方法:应用细胞瞬转的方法将miR-21 inhibitor转染课题组前期试验证实的miR-21高表达胃癌细胞株,应用细胞增殖试验(CCK8方法)、流式细胞技术(Annexin-Ⅴ标记)、Transwell试验检测抑制胃癌细胞株中miR-21表达后,对其细胞增殖、凋亡、周期、迁移的影响;并用Western印迹技术和双荧光素酶报告载体技术检测下调miR-21后,胃癌细胞株PTEN表达的变化。结果:体外增殖试验显示,下调miR-21后对胃癌细胞株的增殖抑制作用明显(P<0.05);体外凋亡试验显示,下调miR-21能增加胃癌细胞株的凋亡(P<0.05);Western印迹试验显示,抑制miR-21表达后胃癌细胞株PTEN蛋白表达明显增加,荧光素酶相对活性明显增加(P<0.05)。结论:下调miR-21的表达对胃癌细胞株的增殖有明显的抑制作用,且促进其凋亡,能降低其体外迁移能力;下调miR-21后,PTEN活性明显增加;PTEN可能是miR-21参与胃癌发生、发展的靶标之一。